鲨鱼软骨多糖抑制肿瘤生长的实验研究

目的:研究鲨鱼软骨多糖对血管内皮细胞生长、新生血管形成及小鼠实体瘤生长的影响作用.方法:以MTT法测定鲨鱼软骨多糖体外对内皮细胞增殖的影响;用鸡胚绒毛尿囊膜实验测定对血管生成的影响;建立荷瘤小鼠,并观察该提取物对小鼠抑制瘤的影响.结果:鲨鱼软骨多糖能显著抑制血管内皮细胞的生长,MTT法抑制率为(45 615±0 084)%;并可抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的形成,PBS对照组血管数目为18.750根,鲨鱼软骨多糖组血管数目为(7 750±1 545)根,差异有统计学意义,P＜0 05.鲨鱼软骨多糖能抑制荷Lewis小鼠肿瘤生长,鲨鱼软骨多糖组肿瘤抑制率与生理盐水组相比差异有统计学意义,P<0 01;鲨鱼软骨多糖+环磷酰胺组则明显高于环磷酰胺组,差异有统计学意义,P<0 05.结论:鲨鱼软骨多糖可以抑制内皮细胞生长及新生血管的形成,进而发挥抗肿瘤作用.     

去甲斑蝥素对人乳腺癌血管生成的抑制作用

背景与目的:去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)具有抑瘤作用,本文研究它对血管生成的作用,以及对人乳腺癌MCF-7细胞鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoci membrane,CAM)移植肿瘤血管生成的影响。方法:①建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,将明胶海绵载体置于两条前卵黄静脉间血管的CAM上,将不同剂量的NCTD加在载体上,以生理盐水对照,观察记录载体周围血管分支点数,计算血管生成抑制率。②建立人乳腺癌MCF-7细胞鸡胚移植模型。给予不同剂量的NCTD20μl[72、36、18μg/(胚.d)],以生理盐水对照,计算血管生成抑制率。结果:NCTD对以明胶海绵为载体的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成具抑制作用,72、36、18、9μg NCTD组血管生成抑制率分别为77.7%、62.9%、50.6%及33.0%,并且呈剂量依赖性。移植肿瘤可诱发血管生成,NCTD能明显抑制MCF-7鸡胚移植肿瘤血管生成,72、36、18μg NCTD对移植瘤诱导的血管抑制率分别为66.2%、39.3%和22.8%。结论:NCTD能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成,同时能抑制人乳腺癌MCF-7细胞鸡胚移植肿瘤的血管生成。其抗肿瘤作用与抑制肿瘤血管生成有关。     

桑黄灵芝UE-1对肿瘤生长及血管新生的抑制作用

目的观察桑黄灵芝UE-1对Lewis肺癌生长及血管新生的抑制作用。方法建立Lewis肺癌实体瘤模型,观察其抗肿瘤作用;通过免疫组织化学染色,检测肿瘤微血管密度;采用新生血管计数实验检测UE-1对肿瘤组织血管生成的影响;通过鸡胚尿囊膜血管新生实验观察UE-1多糖的抗血管新生作用。结果实体瘤模型中,UE-1组移植瘤重量和体积明显低于对照组（P<0.05）,且微血管密度值也低于对照组（P<0.05）;肿瘤诱导新生血管中UE-1组肿瘤周围的血管数明显少于对照组（P<0.05）;鸡胚尿囊膜血管新生实验显示UE-1多糖具有抑制血管新生作用。结论桑黄灵芝UE-1可抑制Lewis肺癌的生长,可能是通过抑制肿瘤血管新生来发挥其抑瘤作用。     

从随机肽库中筛选血管内皮生长因子的抑制剂

目的：从随机噬菌体肽库中筛选血管内皮生长因子（VEGF165）的抑制剂,研究治疗实体瘤生长的小分子药物。方法：以VEGF165分子的受体KDR为靶分子,筛选随机噬菌体环7肽库,通过竞争性洗脱得到能特异结合KDR的阳性噬菌体,以ELISA、细胞免疫组化、细胞ELISA、鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和MTT法,鉴定其结合活性和抑制活性。结果：得到5个能特异结合靶分子的阳性噬菌体克隆,它们均可以与表面有KDR表达的细胞结合,其中噬菌体克隆3和13还能抑制VEGF165诱导鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成的活性。但MTT法结果显示,这两种噬菌体小肽对高表达KDR的阳性细胞生长没有明显的抑制活性。结论：从随机噬菌体肽库筛选到了能抑制VEGF165生物活性的克隆,为进一步研究小分子抑瘤药物提供了一定基础。     

人血管抑制因子Vasostatin短片段(120-180 aa)的克隆、表达及功能研究

目的:利用基因工程技术,克隆并表达人血管抑制因子Vasostatin120-180aa功能区片段,探讨其对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管抑制的作用.方法:采用PCR技术扩增人血管抑制因子Vasostatin120-180aa功能区基因,并利用pQE30原核表达系统诱导表达Vasostatin120-180aa,经镍金属螯合层析法纯化,通过鸡胚绒毛尿囊膜实验验证其抑制新生血管生成的作用.结果:PCR扩增出了长度为180 bp的Vasostatin120-180aa功能区基因,后经pQE30原核表达系统表达并纯化出Vasostatin120-180aa,SDS-PAGE显现一条约8 kD的阳性条带,Vasostatin120-180aa可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成.结论:原核表达的Vasosta-tin120-180aa功能区片段具有生物学活性,可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成,在一定范围内呈量效依赖性.     

软骨抗血管生成组份的分离纯化及性质研究

目的从鲨鱼软骨中分离纯化血管生成抑制剂（CDAI）并对其性质加以研究。方法2MNaCl抽提;CM－SephadexC－50离子交换层析;DEAE－SephadexA－50离子交换层析;SephadexG－50凝胶层析。SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度鉴定。MTT法测定CDAI对1H11内皮细胞的作用。鸡胚绒毛尿囊膜试验（CAM）观察CDAI对血管生成的作用。结果得到电泳纯的CDAI,分子量为36280,CDAI对内皮细胞产生强的抑制作用,0．65mg／L时对1H11内皮细胞的增殖抑制率为50％。鸡胚绒毛尿囊膜试验显示CDAI对血管形成有显著的抑制作用。结论鲨鱼软骨中含有血管生成抑制剂,能抑制血管生长,对具有病态血管形成的疾病具有潜在治疗价值。     

人血管抑制因子Vasostatin短片段（120 180 aa）的克隆、表达及功能研究

目的：利用基因工程技术，克隆并表达人血管抑制因子Vasostatin120180 aa功能区片段，探讨其对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管抑制的作用。方法：采用PCR技术扩增人血管抑制因子Vasostatin120180 aa功能区基因，并利用pQE30原核表达系统诱导表达Vasostatin120180aa，经镍金属螯合层析法纯化，通过鸡胚绒毛尿囊膜实验验证其抑制新生血管生成的作用。结果：PCR扩增出了长度为180 bp的Vasostatin120180 aa功能区基因，后经pQE30原核表达系统表达并纯化出Vasostatin120180 aa，SDSPAGE显现一条约8 kD的阳性条带，Vasostatin120180aa可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成。结论：原核表达的Vasostatin120180 aa功能区片段具有生物学活性，可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成，在一定范围内呈量效依赖性。     

奥沙利铂联合复方苦参注射液抗血管生成作用的实验研究

背景与目的:肿瘤的生长、转移、复发和预后均与肿瘤血管生成密切相关.以肿瘤血管生成为靶点,开发血管生成抑制剂在抗肿瘤研究中是一个十分活跃的研究领域.近年来,研究发现某些化疗药物,在小剂量、高频率的给药方式下可以选择性地显著抑制肿瘤组织内新生血管内皮细胞的生长,使肿瘤细胞因为血供不足而生长受阻.这称为小剂量化疗或抗血管生成化疗.中医药治疗肿瘤具有独到的疗效,近年来发现许多中药制剂及中药来源的药物有抗血管新生作用.本研究旨在在国内外现有的研究基础上探讨奥沙利铂联合复方苦参注射液对体内外血管生成的抑制作用.方法:采用MTT法观察奥沙利铂(L-OHP)联合复方苦参注射液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人结肠癌LoVo细胞增殖的影响;采用transwell板,观察L-OHP联合复方苦参注射液对HUVEC迁移的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察L-OHP联合复方苦参注射液对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用.结果:HUVEC和LoVo细胞对不同浓度两种药物进行联合的敏感性不同.2 μg/ml奥沙利铂和25 μl/ml复方苦参注射液对HUVEC增殖的抑制率分别为31.6%、32.1%,联合应用后的抑制率为54.4%,具有协同作用;0.5 μg/ml奥沙利铂和6.25 μl/ml复方苦参注射液具有抑制HUVEC迁移的作用,联合应用具有协同效应.奥沙利铂联合应用复方苦参注射液具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用.结论:小剂量L-OHP和复方苦参注射液在体外有抑制细胞生长,在体内具有抑制血管生成作用,两者联合具有协同效应.     

华蟾素联合三氧化二砷抑制鸡胚尿囊膜血管生成的实验研究

目的:观察和比较华蟾素注射液、三氧化二砷注射液单药以及联合用药后对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法:100只七日龄鸡胚随机分为4组(每组25只):生理盐水(NS)对照组、华蟾素组、As2O3组和华蟾素联合As2O3组。CAM上植入甲基纤维素碟,加入各组药物,观察对血管生长的影响。结果:华蟾素、As2O3以及两药联合对鸡胚尿囊膜新生血管均有抑制作用,以两药联合后抑制血管的作用最强。结论:华蟾素、As2O3以及两药联合均具有抗血管生成作用,两药联用后且具有协同作用。     

雷公藤红素抑制血管生成的实验研究

目的：探讨雷公藤红素对血管生成的抑制作用。方法：采用MTT法测定雷公藤红素对血管内皮细胞株(ECV)增殖的影响,观察雷公藤红素对ECV迁移实验和小管形成实验的作用,以及对鸡胚尿囊膜血管生成的影响。体内实验采用Matrigel plug方法。结果：雷公藤红素可明显抑制ECV的体外增殖,IC50为1．33μg／ml;可抑制ECV的迁移和小管形成,并且呈明显的剂量依赖性;同时具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成和Matrigel plug中的血管新生的作用。结论：雷公藤红素具有明显抑制血管生成的作用,有可能成为有效的血管生成抑制剂。     

骨涎蛋白单克隆抗体抑制亲骨转移人乳腺癌细胞血管侵袭机制的探讨

目的:探讨骨涎蛋白(BSP)单克隆抗体对亲骨转移人乳腺癌细胞株MDA-MB-23180血管侵袭能力的影响.方法:MTT法检测BSP抗体对MDA-MB-231BO细胞的增殖作用;鸡胚尿囊绒膜(CAM)实验检测BSP抗体对MDA-MB-231BO细胞血管侵袭能力的影响.结果:BSP抗体对MDA-MB-231BO细胞的生长具有特异抑制作用,其抑制率和剂量呈正相关,BSP抗体浓度为100 μg/mL时,抑制率为35.18%.BSP抗体能特异性抑制MDA-MB-231BO细胞穿透鸡胚血管内皮细胞和基底膜,抑制效应与抗体浓度呈正相关.100μg/mL的BSP抗体可以明显抑制MDA-MB-231BO细胞侵入鸡胚血管.结论:BSP抗体对MDA-MB-231BO细胞的血管侵袭能力具有特异抑制作用,提示BSP抗体可抑制乳腺癌靶向骨转移的进程.     

紫杉醇抗血管生成作用的实验研究

 目的　探讨紫杉醇的抗血管生成作用。方法　以人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)原代培养模型 ,MTT法测定紫杉醇对HUVEC增殖的影响 ;采用鸡胚尿囊膜血管形成模型 (CAM模型 ) ,观察紫杉醇对鸡胚尿囊膜新生血管的抑制作用。结果　紫杉醇在非细胞毒浓度下可在体外抑制HUVEC的增殖 ,在体内抑制鸡胚尿囊膜新生血管形成。结论　紫杉醇在非细胞毒浓度下具有抗血管生成作用。     

和厚朴酚抗血管生成作用的实验研究

目的：本研究通过检测和厚朴酚在体内对鸡胚尿囊膜（chicken chorilallantoic membranes，CAM）血管生成的抑制作用及体外对肿瘤血管生成的影响，探讨和厚朴酚的抗血管生成作用及其初步机制。方法：（1）用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测和厚朴酚对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）、人成纤维细胞及人结肠癌RKO细胞增殖的抑制作用；（2）采用鸡胚绒毛尿囊膜模型，观测和厚朴酚对CAM新生血管生成的抑制作用；（3）逆转录聚合酶链反应（RT-RCR）方法检测和厚朴酚对RKO细胞血管内皮生长因子A（VEGF-A）mRNA表达及细胞培养上清液VEGF蛋白分泌的影响。结果：和厚朴酚对血管内皮细胞具有优先抑制作用，对HUVEC的半数抑制剂量（inhibitory concentration 50％，IC50）为14．5μmol/L，而对原代培养的人成纤维细胞的IC50高达150μmol/L，对人结肠癌RKO细胞的IC50为42μmol/L；和厚朴酚0．1μg／只和0．2μg／只剂量时显著抑制CAM新生血管形成，抑制率分别为58％和86％；和厚朴酚在10μmol/L和20μmol/L剂量时显著抑制RKO细胞的VEGF-A mRNA表达及细胞培养上清液中VEGF蛋白的分泌，具有显著性差异。结论：和厚朴酚在非凋亡剂量时具有抗血管形成作用，其机制与抑制血管内皮细胞增殖以及抑制肿瘤细胞表达VEGF有关。     

刺梨和金荞麦提取物抑制内皮细胞生长和血管生成

[目的]探讨刺梨提取物（CL）、金荞麦提取物（FR）对人脐静脉内皮细胞ECV-304增殖及凋亡的影响以及对鸡胚尿囊膜血管新生的影响。[方法]IC30浓度CL/FR单独或两药的1/2IC30浓度联合作用于ECV-304细胞,MTT法检测ECV-304细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测ECV-304细胞早期凋亡细胞比例;RT-PCR和Western blot法分析Ki-67及Bax、Bcl-2 mRNA/蛋白表达的变化。计算经100μg/mlCL、100μg/mlFR、CL50μg/ml＋FR50μg/ml联合作用后的7日龄鸡胚尿囊膜血管抑制率。[结果]IC30CL、IC30FR和1/2（IC30CL＋IC30FR）对ECV-304细胞的抑制率分别为30.87%±1.2%,32.93%±1.4%和43.67%±1.5%。CL、FR单独应用或联合使用均可明显抑制ECV-304细胞生长,呈剂量依赖性,且诱导凋亡。与单独用药组比较,联合用药组Ki-67、Bcl-2 mRNA/蛋白表达率均有显著降低,而Bax mRNA/蛋白表达均显著增高。CL、FR单独或联合应用均可抑制鸡胚尿囊膜新生血管的生长,以CL作用更明显。[结论]CL和FR单药及联合应用都具有抑制ECV-304细胞增殖和诱导凋亡的效用,两药联合比单药更明显。两药单用和联合都可明显抑制鸡胚尿囊膜血管生成。     

软骨细胞培养液对鸡胚绒毛尿囊膜血管抑制效应的研究

目的检测软骨细胞培养液中是否存在抑制血管生长的因子。方法用酶消化、分离鸡胚关节软骨细胞,体外单层培养,收集细胞培养液。采用鸡胚绒毛尿囊膜实验检测该培养液对血管的抑制效应。结果加软骨细胞培养液的实验组血管数为2.75±0.99且血管较细、分支少;不加样的对照组血管数为4.5±1.08且血管较粗、分支多。两组有显著差异(P＜0.05)结论软骨细胞培养液具有抑制血管生长的作用。     

重组人血管内皮抑制素抑制内皮细胞血管生成的实验研究

目的:观察国产重组人血管内皮抑制素(Endostar,恩度)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗血管生成作用,并对其机制进行初步探讨.方法:采用MTS/PMS系统测定不同浓度恩度对HUVECs和人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用;流式细胞术检测恩度在相同时间内诱导HUVECs和HepG2细胞早期凋亡和晚期凋亡情况;通过迁移/侵袭实验、体外管腔形成实验和鸡胚尿囊膜(CAM)实验观察恩度对HUVECs迁移/侵袭和体内外管腔形成及功能的影响.结果:不同浓度的恩度持续作用72h,对HUVECs具有抑制增殖,且在50～200ng/ml的剂量范围内呈现浓度依赖关系;而对HepG2细胞未见明显作用.药物处理方式的不同,恩度对HUVECs诱导凋亡和迁移/侵袭作用差异显著;对HepG2细胞的迁移/侵袭未见明显影响.高剂量的恩度对HUVECs体外管腔形成和鸡胚尿囊膜的血管发生及成熟具有显著影响.结论:重组人血管内皮抑制素(恩度)能够有效地抑制血管内皮细胞形成复杂的管腔,并显著影响血管的成熟;对人肝癌细胞系HepG2生长及迁移/侵袭未见明显影响.     

可溶性VEGF受体基因sflt-1与反义VEGF核苷酸对新生血管形成的影响

背景与目的:肿瘤组织中新生血管提供的大量营养物质和生长因子是肿瘤快速生长的关键,因此如何抑制肿瘤组织中新生血管的形成、促使肿瘤组织坏死也是肿瘤治疗中的一条值得探讨的途径。本文拟研究和观察可溶性血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)受体基因sflt-1与反义VEGF对新生血管形成的影响。方法:用Ad-反义VEGF感染肝癌细胞株MM45T.Li后,观察反义VEGF对MM45T.Li分泌VEGF的影响;将人工重组的3'ΔFlt-1蛋白(C末端缺失的Flt-1蛋白)加入条件培养液中,观察3'ΔFlt-1对VEGF刺激的脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalvascularendotheliumcell,HUVEC)增殖的影响;并将Ad-反义VEGF、Ad-sflt-1注射于鸡胚尿囊绒毛膜中,观察sflt-1、反义VEGF对鸡胚新生血管形成的影响。结果:反义VEGF重组腺病毒感染MM45T.Li细胞后,细胞培养上清中VEGF浓度仅为对照组中VEGF浓度的15%(P<0.01);在含有3'ΔFlt-1蛋白的调价培养液中,HUVEC的增殖明显减慢,在一定的范围内与剂量呈负相关;两者都能有效地抑制鸡胚新生血管的形成。结论:sflt-1与反义VEGF均能有效抑制新生血管的形成,两者联合能增强抑制效果,但其作用机制不同。     

重组金属蛋白酶抑制因子-3抗肿瘤作用的实验研究

目的观察组织金属蛋白酶抑制因子３（ＴＩＭＰ３）对实验性肿瘤的抑制作用,并探讨其作用机理。方法利用重组ＴＩＭＰ３（ｒＴＩＭＰ３）进行抗实验性肿瘤生长、转移及抑制鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）血管生成的研究。结果ｒＴＩＭＰ３对小鼠实验性Ｓ１８０肉瘤、肝癌Ｈ２２有显著的抑制作用,并呈明显的剂量依赖关系。当ｒＴＩＭＰ３剂量为每只２０ｍｇ／ｋｇ给药１０天后,对Ｓ１８０肉瘤、肝癌Ｈ２２的抑制率分别为６３．２％和７３．４％;同样上述剂量的ｒＴＩＭＰ３对小鼠ＬＬＣ实验性肺转移的抑制率为５９．８％。ＣＡＭ血管生成抑制实验表明,ｒＴＩＭＰ３具有显著的抑制血管生成作用。结论ｒＴＩＭＰ３可能通过抑制细胞外基质的降解及抑制血管的生成来发挥其抗肿瘤作用。     

罗勒多糖对肿瘤转移行为的影响

目的:研究腺病毒介导的鼠内皮抑素基因对胃癌的治疗作用.方法:利用病毒重组技术将内皮抑素克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中,观察体外转染表达后的生物学活性.通过建立荷人胃癌的裸鼠动物模型,分析基因转导后动物肿瘤细胞中内皮抑素的表达情况及对肿瘤的抑制作用.结果:构建了表达内皮抑素的重组腺病毒载体pCA13-mEndo;检测到内皮抑素在体外的mRNA水平和蛋白质水平均有表达;鸡胚绒毛尿囊膜实验表明其对血管生长起抑制作用;荷瘤裸鼠体内肿瘤生长抑制明显.结论:所构建的pCA13-mEndo重组腺病毒载体可有效表达具有生物学活性的内皮抑素,使得肿瘤内微血管生成减少,肿瘤细胞增殖减慢,为抗血管生成方法治疗实体瘤的临床应用奠定基础.     

人骨肉瘤细胞系OS—732 CAM移植瘤中VEGF、bFGF的表达及意义

目的：研究人骨肉瘤细胞系OS－732血管生成相关作用。方法：应用鸡胚绒毛尿囊膜模型,通过解剖显微镜及透射电镜观察该细胞系促血管生成特点,并以免疫组化方法检测人骨肉瘤细胞系OS－732鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF),碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达。结果：该细胞系具较强的诱导血管生成能力,解剖显微镜下可见血管辐辏现象,透射电镜下可见新生血管壁由单层内皮细胞构成,内皮细胞裂隙增宽,基底膜不完整,缺乏平滑肌成分,移植瘤组织发VEGF和bFGF均呈阳性表达,其中VEGF呈高表达。结论：肿瘤诱导的新生血管在病理,生理及形态功能方面都具有特征性,其诱导血管生成过程中可能有多种血管生长因子的共同参与,针对血管生长因子为靶点进行抗血管生成治疗对改善骨肉瘤预后可能具有重要意义。