多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及ompK36膜孔蛋白基因突变研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKPN)所携带的β-内酰胺类药物耐药基因的状况。方法对20株MDRKPN进行了22种耐药基因的PCR法检测,包括A类β-内酰胺酶基因TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-8群、CTX-M-9群、CTX-M-25群、PER、GES、VEB、CARB、LAP、KPC;B类β-内酰胺酶基因IMP、VIM、NDM;C类β-内酰胺酶基因LEN、OKP、DHA群;D类β-内酰胺酶基因OXA-10群、OXA-48群和膜孔蛋白基因ompK36。结果 20株MDRKPN检出4种β-内酰胺酶基因,分别为A类TEM、CTX-M-1、LAP和C类DHA,其ompK36膜孔蛋白基因检测出4株为基因缺失和16株为基因突变。结论 20株MDRKPN除1株外均检出1~3种β-内酰胺酶基因;ompK36膜孔蛋白基因检测结果显示,该蛋白均有缺陷;提示该组MDR-KPN耐β-内酰胺类药物为产β-内酰胺酶和ompK36膜孔蛋白缺陷的双重作用。     

1株携带6种β-内酰胺酶基因的肺炎克雷伯菌

目的了解对亚胺培南敏感的肺炎克雷伯菌（KPN）β-内酰胺酶产生状况。方法对1株KPN用PCR法进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、LEN、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1）检测。结果检测显示TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种阳性。结论该株KPN同时携带6种β-内酰胺酶基因。     

肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的:了解20株肺炎克雷伯菌(KPN)耐药性及β-内酰胺酶产生状况.方法:对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1)检测.结果:20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为85%、25%、25%、20%、25%、70%.20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,最多同时检出6种β-内酰胺酶基因.并在国内首次发现CTX-M-55型.结论:该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关.     

耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因及KPC-ISKpn6连锁检测

目的研究和分析18株耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶基因表达及KPC型阳性菌株与插入序列ISKpn6的关联。方法采用微生物鉴定仪鉴定并通过gyrA、parC基因测序和比对确认了18株肺炎克雷伯菌,对抗菌药物的药敏试验采用K-B纸片扩散法;40种β-内酰胺酶基因和KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列(KPCISKpn6)连锁检测均采用PCR法,β-内酰胺酶编码基因的亚型通过测序和比对进行确认。结果 18株耐药肺炎克雷伯菌除对四环素、米诺环素的敏感率>83.3%外,对其余抗菌药物的敏感率均<50.0%,有的甚至100.0%耐药;40种β-内酰胺酶基因中共检出TEM-1 17株、CTX-M-3 4株、LAP-2 1株、KPC-2 14株、IMP-4 2株、DHA-1 4株、OXA-1 1株共7种耐药基因亚型,且基因检出与其细菌耐药表型相符合;14株KPC-2型阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论耐药肺炎克雷伯菌每一株均有阳性基因检出,且检出的7种耐药基因亚型分布于β-内酰胺酶4个类别中,显示耐药株携带的β-内酰胺酶编码基因多种性;14株携带KPC-2型基因的阳性株其KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性,提示KPC-2型β-内酰胺酶编码基因与插入序列ISKpn6高度关联。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶与Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶和Ⅰ类整合酶(intⅠ1)基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、GES、PER、VEB、OXA-10、ACT-1、LEN、DHAi、ntⅠ1基因。结果35株肺炎克雷伯菌中检出β-内酰胺酶基因22株,阳性率62.9%;intⅠ1阳性21株,阳性率60.0%。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因和intⅠ1基因携带率高。     

肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的：了解20株肺炎克雷伯菌（KPN）耐药性及β-内酰胺酶产生状况。方法：对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、CTX—M—1群、CTX—M-2群、CTX—M-9群、OXA—1群、OXA-2群、OXA—10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT—1）检测。结果：20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M—1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因，阳性率分别为85％、25％、25％、20％、25％、70％。20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因，最多同时检出6种β-内酰胺酶基因。并在国内首次发现CTX-M-55型。结论：该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因研究

目的探讨多耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)β-内酰胺酶基因存在状况及其膜孔蛋白编码基因ompK36在其耐药中的作用。方法应用PCR检测20种β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白编码基因ompK36,并用MEGA4.1对ompK36进行分子进化分析。结果 15株MDR-KPN共检出TEM、SHV、CTX-M-1群、LAP、KPC、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为66.7%、60.0%、6.7%、13.3%、13.3%、20.0%;而膜孔蛋白编码基因ompK36均检测到,经测序比对均存在突变。结论 15株MDR-KPN耐β-内酰胺类药物至少与产β-内酰胺酶和同时伴有膜孔蛋白ompK36突变相关。     

4种β-内酰胺酶基因在一组耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中的流行分析

目的调查一组耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)β-内酰胺酶基因的存在状况。方法收集分离自2016年某医院ICU的20株CRKP菌;采用K-B纸片扩散法进行17种药物敏感性判断,采用聚合酶链反应(PCR)法检测A、B、C、D四类36种β-内酰胺酶基因,PCR法连锁检测KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列(KPC-ISKpn6)。结果 20株CRKP菌每株均检出blaTEM、blaSHV、blaKPC和blaNDM型β-内酰胺酶基因,阳性率分别为100.00%、100.00%、75.00%、100.00%;15株KPC阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论 blaTEM、blaSHV、blaKPC、blaNDM等4种基因的菌株在该组CRKP菌中流行;KPC型β-内酰胺酶编码基因由插入序列ISKpn6介导。     

大肠埃希菌老年患者分离株β-内酰胺酶基因与毒力基因研究

目的 了解大肠埃希菌(ECO)老年患者分离株β-内酰胺酶基因与毒力基因产生状况.方法 对20株ECO进行15种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB/CEF、CARB、DHA、ACT/MIR、LAT/CMY)及毒力基因(CNF-1、CNF-2)检验.结果 20株ECO检出TEM基因14株、SHV基因3株、CTX-M-1群基因1株,20株ECO中至少检出1种β-内酰胺酶基因,7株同时检出>2种β-内酰胺酶基因.结论 该20株ECO β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关.     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因研究

目的 了解医院多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因分布.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法检测20株MDRKP 28种β-内酰胺酶基因与膜孔蛋白编码基因ompK36,并对ompK36-PCR产物进行全自动荧光法测序分析比对.结果 20株MDRKP中17株均检出β-内酰胺酶基因,分别为A类β内酰胺酶中的TEM、CTX-M-1群和LAP基因,阳性率分别为55.0％、20.0％、15.0％,C类β-内酰胺酶中的LEN、DHA基因,阳性率分别为20.0％ 、30.0％;20株MDRKP均存在突变,4株为缺失性突变,16株检测到膜孔蛋白编码基因ompK36,序列比对分析该16株与敏感株序列均有差异.结论 TEM、CTX-M-1、LAP、LEN、DHA基因是MDRKP主要的β-内酰胺酶基因,医院MDRKP耐β-内酰胺类药物与产β-内酰胺酶和同时伴有膜孔蛋白ompK36基因突变均相关.     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶表型及β-内酰胺酶基因型检测

目的 了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)产超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)及β-内酰胺酶(BLA)基因型存在状况.方法 在2005年9月-2006年4月从住院患者中分离25株KPN,采用美国CLSI推荐的表型确证试验方法检测ESBLs,用PCR及序列分析的方法分析21种(群、簇)BLA基因bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(LEN)、bla_(OKP)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(CTX-M-2)群、bla(CTX_M_9)群、bla_(OXA-1)群、bla_(OXA-2)群、bla_(CARB)、bla_(PER)、bla_(VEB)、bla_(GES)、bla_(LAP)、bla_(DHA)、bla_(ACT/MIR)、bla_(CMY/MOX)、bla_(FOX)、bla_(CMY/LAT)、bla_(ACC).结果 25株KPN中,ESBLs阳性14株(56.0%)、阴性5株(20.0%)、"不确定"6株(24.0%);bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(OXA-10)群、bla_(LAP)和bla_(DHA)基因阳性株数(%)分别为20株(80.0%)、1株(4.0%)、1株(4.0%)、20株(80.0%)、1株(4.0%)、8株(32.0%),而其余15种(群、簇)基因均阴性;21种(群、簇)BLA基因总阳性率为92.0%;其中HZ12593号菌株bla_(LAP-2)基因序列已登录GenBank,注册号为EU529981.结论 临床分离的KPN产ESBIs比例较高,至少存在6种BLA基因,BLA基因型以bla_(TEM)和bla_(OXA-10)群为主,KPN携带bla_(DHA)基因可以影响ESBLs表型确证试验结果.     

69株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因检测分析

目的了解耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌耐药基因的携带情况。方法收集69株浙江省人民医院住院病人耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌株,改良Hodge试验进行KPC型碳青霉烯酶初筛检测,PCR法进行HSV、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、GES、VEB、IMP、VIM、SME、KPC、IMI/NMC、NDM基因检测,并对部分阳性基因进行测序。结果 69株肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阳性48株,阳性率63.8%。PCR检测结果为56株(81.2%)携带KPC基因,60株(87%)携带HSV,20株(29.0%)携带OXA-3基因;3株(4.35%)肺炎克雷伯菌携带OXA-1基因。对KPC基因测序结果为KPC-2亚型。结论本次检测的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌携带KPC-2基因为主,应加强院感监测和预防。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌相关耐药基因研究

目的 了解常州地区大肠埃希菌耐药状况及β-内酰胺类耐药基因.方法 用琼脂稀释法检测氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头抱噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和亚胺培南对大肠埃希菌的最低抑菌浓度,用聚合酶链反应(PCR)检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌TEM、SHV等17种耐药基因,并用DNA测序仪测序.结果 80株大肠埃希菌ESBLs检出率为46.3%,37株大肠埃希菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、OXA-1群和DHA 5种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为81.1%、78.4%、21.6%、10.8%、5.4%;37株菌中有36株至少检出1种β-内酰胺酶基因,24株同时检出>2种β-内酰胺酶基因,1株菌最多同时检出4种β-内酰胺酶基因,只有1株未检出β-内酰胺酶基因.结论 大肠埃希菌已携带多种β-内酰胺酶耐药基因,成为对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因之一.     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白突变检测

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因的表达,为临床治疗肺炎克雷伯菌致呼吸机相关性肺炎(VAP)提供理论依据和指导。方法收集医院2011年7月-2012年6月入住儿童重症监护病房(PICU)20例呼吸机相关性肺炎患儿下呼吸道痰液标本,通过药敏试验检测耐药率,PCR法及基因测序检测β-内酰胺酶和膜孔蛋白的表达。结果共20株肺炎克雷伯菌对头孢类抗菌药物均存在耐药,对头孢唑林、头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢西丁耐药率分别为100.0%、95.0%、70.0%、70.0%、55.0%、30.0%;共检出6种β-内酰胺酶基因,分别为A类SHV、TEM、CTX-M-1、LAP,C类DHA-1和D类OXA-1,ompK35膜孔蛋白基因检测10株为基因缺失和8株为基因突变,ompK36膜孔蛋白基因7株缺失和2株突变;6株非产ESBLs株均同时存在ompK35/36的突变或缺失,且伴有β-内酰胺酶基因的表达。结论 20株肺炎克雷伯菌均检出1³种β-内酰胺酶基因;ompK35/36膜孔蛋白基因检测结果显示,该蛋白几乎均有缺陷;提示该组耐β-内酰胺类药物为产β-内酰胺酶和ompK膜孔蛋白缺陷的双重作用,特别是非产ESBLs菌株。     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因与插入序列连锁检测分析

目的调查肺炎克雷伯菌的耐药性以及插入序列与β-内酰胺酶基因可能存在的关系。方法收集医院2011年1月-2012年3月19株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,采用16SrDNA扩增与测序后确认菌种,采用聚合酶链反应(PCR)法分析A^D类等4类共22种β-内酰胺酶基因与插入序列(ISKpn6、ISKpn7),并作了β-内酰胺酶基因与插入序列连锁检测。结果 19株肺炎克雷伯菌均检出blaTEM和blaKPC型β-内酰胺酶基因,并且blaKPC与ISKpn6连锁检测均呈阳性。结论检出blaKPC型β-内酰胺酶基因并有可能高表达,是该组菌株对β-内酰胺类药物耐药的主要原因。     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性。方法收集产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床菌株30株,应用PCR基因扩增技术及DNA测序方法,分别对其TEM、SHV、CTX-M、VEB、PER编码基因进行分析。结果在30株菌株中有26株为CTX-M型,占86.67%;其中CTX-M-9型共计16株占61.5%,CTX-M-1型8株占30.8%,CTX-M-2型7株占26.9%;同时产CTX-M-1型及CTX-M-2型共4株占15.4%,产CTX-M-2型及CTX-M-9型1株占3.8%,产CTX-M-1型及CTX-M-9型1株占3.8%。结论产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要临床流行基因型是CTX-M-9型。     

泛耐药肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药机制研究

目的 通过检测一株泛耐药肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗菌药物耐药相关基因表达状况,分析该菌泛耐药的原因及其机制,为临床资料提供参考依据。方法 回顾性分析2012年1月住院患者经API 20E系统初步鉴定菌种并经基因扩增与测序进一步确认的一株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)法分别检测β-内酰胺酶编码基因与膜孔蛋白编码基因、氨基糖苷类修饰酶编码基因和16SrRNA甲基化酶编码基因、拓普异构酶Ⅱ(DNA旋转酶)A亚单位和拓普异构酶ⅣC亚单位编码基因(gyrA、parC)突变分析以及可移动遗传元件标记基因。结果 在该泛耐药肺炎克雷伯菌株中分别检出TEM、SHV、CTX-M-1群、KPC、DHA等5种β-内酰胺酶编码基因、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ等3种氨基糖苷类修饰酶编码基因、intⅠ1、tnpU、tnp513、IS26、IS903、ISEcp1、ISKpn6、trbC等8种可移动遗传元件标记基因,并发现gyrA和parC基因存在突变,但膜孔蛋白编码基因检测呈阴性。结论 借助于可移动遗传元件而获得广泛耐药基因并表达5种β-内酰胺酶编码基因和3种氨基糖苷类修饰酶编码基因、且存在gyrA基因与parC基因的有义突变,是该菌株泛耐药的主要原因与机制。     

鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解临床分离的鲍氏不动杆菌中β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因存在状况。方法自临床分离39株鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因(TEM、SHV、PER、VEB、GES、CARB、CTX-M-1群、OXA-23群、OXA-24群、IMP、VIM、DHA、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ)。结果39株中TEM阳性13株(33.3%)、OXA-23群阳性20株(51.3%)、aac(3)-Ⅰ阳性25株(64.1%)、aac(6′)-Ⅰ阳性25株(64.1%)、ant(3″)-Ⅰ阳性29株(74.4%),其余基因均阴性。结论在绍兴临床分离的鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因携带率高。     

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌相关耐药基因监测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌中常见的β-内酰胺酶基因的分布情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测了77株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中TEM、SHV和CTX-M等三种β-内酰胺酶基因,并进行了DNA测序。结果 50株产ESBLs的大肠埃希菌中,41株TEM基因阳性(82.0%),7株SHV基因阳性(14.0%),16株CTX-M基因阳性(32.0%),21株菌两种以上基因型同时阳性。27株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中,21株TEM基因阳性(77.8%),24株SHV基因阳性(88.9%),3株CTX-M基因阳性(11.1%),16株菌两种以上基因型同时阳性。结论产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中携带多种β-内酰胺酶基因,且以TEM和SHV型较为流行。     

新生儿产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药性和基因型分析研究

目的:分析了解新疆地区新生儿科分离的产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase,ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因分布情况。方法:采用K-B法测定病原菌对19种抗菌药物的耐药率,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、CTXM-1、CTXM-9等4种β-内酰胺酶基因,并对部分产物进行测序分析。结果:100株产ESBLs菌对亚胺培南全部敏感,对喹诺酮类耐药率在10%以下;但对大多β-内酰胺类抗生素全部耐药。基因型分析显示有72株携带TEM基因,79株携带SHV基因,58株携带CTX-M-1基因,42株携带CTX-M-9基因;91%的菌株同时携带两种及两种以上ESBLs基因型。结论:新生儿产ESBLs的肺炎克雷伯菌耐药严重,新疆地区新生儿以同时携带多种ESBLs基因型为主。