生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠下丘脑区生物钟基因Bmal1及海马IL-6，TNF-α的影响

目的:通过观察生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠学习记忆、下丘脑区生物钟基因Bmal1及海马白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探索生慧汤改善学习记忆和睡眠障碍的可能机制。方法:将实验小鼠随机分为模型组、正常组、褪黑素组、生慧汤高剂量组和生慧汤低剂量组。采用自主活动分析系统检测各组小鼠自主活动;采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习能力及空间记忆能力;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠下丘脑区钟基因Bmal1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠Bmal1蛋白表达;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠海马区IL-6,TNF-α含量;采用皮尔森(Pearson)分析方法分析IL-6,TNF-α与Bmal1的相关性。结果:自主活动结果显示,与正常组比较,模型组小鼠活动次数和活动路程显著减少(P 0. 01);与模型组比较,各给药组小鼠活动次数和活动路程均明显增加(P 0. 05,P 0. 01),生慧汤低剂量组无显著性差异。Morris水迷宫结果显示,与正常组比较,模型组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程显著延长(P 0. 01),穿越平台次数与目标象限时间显著减少(P 0. 01),第1次抵原平台时间明显增加(P 0. 05);与模型组比较,各给药组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程明显减少(P 0. 05,P 0. 01),穿越平台次数与目标象限时间明显增加(P 0. 05,P 0. 01),第1次抵原平台时间明显减少(P 0. 05,P 0. 01)。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组小鼠Bmal1 mRNA表达上调;与模型组比较,各给药组小鼠Bmal1 mRNA表达下调。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠Bmal1蛋白表达显著升高(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组、生慧汤高、低剂量组Bmal1蛋白表达显著降低(P 0. 01)。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组小鼠IL-6,TNF-α含量显著升高(P 0. 01);与模型组比较,各给药组IL-6,TNF-α含量显著降低(P 0. 01)。Pearson分析结果显示,IL-6,TNF-α与Bmal1具有相关性,且呈负相关关系。结论:生慧汤可能通过上调下丘脑区Bmal1基因的表达来降低海马区炎症因子IL-6,TNF-α蛋白含量,从而改善阿尔兹海默症(AD)和昼夜节律紊乱。     

固本健脑液对APP/PS1小鼠肠道菌群与肠道ZO-1、occludin及海马Aβ与形态学的影响

目的 基于“肠-脑轴”途径探讨固本健脑液调控Aβ沉积防治AD的作用机制。方法 6月龄APP/PS1小鼠70只,其中40只APP/PS1小鼠与C57BL/6J小鼠10只随机分为5组,每组10只,分别给予各药物干预组相应的固本健脑液灌胃,Control组和Model组给予等容积的纯水灌胃,持续12周,同时制备每组粪菌混悬液;另取30只APP/PS1小鼠先进行肠道脱菌处理(GF组),C57BL/6J为空白对照组(Control组),10只,后进行粪菌移植,给予GF组实验第一部分的粪菌混悬液灌胃,Control组给予等容积的纯水灌胃,持续8周。行Morris水迷宫评价各组小鼠学习记忆能力;16SrRNA技术检测各组小鼠肠道菌群差异;HE染色观察各组小鼠海马组织形态;Western Blot检测Zo-1、occludin、Aβ_1-42的表达。结果 与空白对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期与游泳总路程以及首次抵达平台时间显著增加,穿越原平台次数和在目标象限停留时间都明显减少;与模型组比较,各治疗组小鼠逃避潜伏期与游泳总路程以及首次抵达平台时间显著减少,穿越原平台次数和在目标象限...     

温针灸对骨关节炎大鼠软骨组织Clock、Bmal1蛋白的影响

目的探讨温针灸对骨关节炎(OA)大鼠软骨组织Clock、Bmal1蛋白表达的影响。方法 60只3月龄SPF级雄性SD大鼠,按随机数字表法分为对照组、模型组、针刺组、温针灸组,每组15只。以手术方法制备OA大鼠,温针灸组于造模第1天取足三里、犊鼻和内膝眼穴温针灸治疗,采用手针及悬灸法,15 min/次,1次/天,共21天。针刺组采用针刺方法同温针灸组,不用艾灸。对照组大鼠自由饮水,正常饲养。所有大鼠于相应处理结束后,采用排水法测大鼠膝关节部体积,HE染色观察软骨组织病理结构,Western Blot检测软骨组织Clock、Bmal1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠右膝关节肿胀明显(P0.01);模型组大鼠软骨组织Clock、Bmal1蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,针刺和温针灸均能显著改善大鼠右膝关节肿胀程度(P0.05),提高OA大鼠软骨组织中Clock、Bmal1蛋白表达水平(P0.05),温针灸组较针刺组改善更为明显(P0.05)。结论相对于针刺,温针灸更能有效调节OA大鼠关节炎性损伤状况,促进OA大鼠软骨组织中Clock、Bmal1蛋白表达,从而调节软骨细胞生物钟,抑制了软骨细胞骨架破坏的进程,减缓膝关节的关节退变。     

地黄对失眠小鼠视交叉上核生物钟基因Clock及Bmal1表达的影响

目的:通过观察地黄对小鼠学习记忆、生物钟基因Clock及Bmal1表达的影响,探索地黄改善失眠及学习记忆的机制.方法:将60只昆明小鼠随机分为4组:正常组、模型组、阳性药组、生地黄组.除正常组外,其他各组腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)以制备睡眠剥夺模型.采用翻正反射实验检测小鼠的睡眠潜伏期及睡眠时间;尾动脉无创血压测...     

固本健脑法对老年健忘大鼠模型海马组织中Aβ/RAGE信号通路的影响

目的:比较固本健脑法、补脾健脑法、补肾健脑法对健忘大鼠海马组织中Aβ/RAGE信号通路的影响,初步揭示固本健脑法改善记忆的部分分子机制。方法:腹腔注射D-半乳糖及Na NO2建立老年健忘大鼠模型,分别灌胃固本健脑方、归脾丸、六味地黄丸和石杉碱甲;并设空白组和模型组,灌以生理盐水。给药结束后,取大鼠海马组织,采用Western blot检测晚期糖化终产物受体(RAGE)、核转录因子p65(NF-κB p65)的表达,ELISA检测β-淀粉样肽1-42(Aβ1-42)、白介素-1β(IL-1β)的含量。结果:与空白组比较,模型组、西药组、补脾组、补肾组上述指标的表达均上调,固本组RAGE、NF-κBp65、IL-1β的表达上调,Aβ1-42则差异无统计学意义。西药组、补脾组、补肾组与模型组比较,上述指标的表达均下调,与固本组比较则上调;补脾组、补肾组、西药组组间比较,差异无统计学意义。结论:固本健脑法、补脾健脑法、补肾健脑法均能在一定程度上改善记忆功能,但固本健脑法作用最佳,固本健脑法改善记忆功能的分子机制与Aβ/RAGE信号通路密切相关。     

清心开窍方对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及海马CA1区Akt、GSK3α、βAPP、Aβ表达的影响

目的:探讨清心开窍方对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力、海马CA1区神经元形态学的改变,以及对Akt、GSK3α、βAPP、Aβ蛋白表达的影响。方法:选取50只3月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠,随机分为模型组、多奈哌齐组(1.67 mg·kg^-1)、清心开窍方高、中、低剂量组(每日给药剂量分别为19、9.5、4.75 g·kg^-1),另取10只同背景同性别同月龄的C57BL/6J小鼠作为对照组,对照组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续灌胃12周。采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,透射电镜观察小鼠海马CA1区神经元超微结构,尼氏染色法观察小鼠海马CA1区神经元损伤情况,免疫组织化学染色法检测海马CA1区Akt、GSK3α、βAPP、Aβ蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,模型组APP/PS1双转基因小鼠逃避潜伏期延长(P<0.01),穿台次数减少,其海马CA1区神经元超微结构出现严重损伤,锥体细胞数量减少,排列紊乱,尼氏体着色变浅,Akt蛋白表达减少(P<0.01),GSK3α、βAPP、Aβ表达增加(P<0.01);与模型组比较,清心开窍方干预组逃避潜伏期均明显缩短(P<0.01),穿台次数增多,同时比较小鼠在原平台停留的时间和路程百分比均明显增加(P<0.05;P<0.01),其神经元结构较完整,核膜清晰,胞浆内核糖体丰富,线粒体数量增多,且嵴结构完整,锥体细胞数量增多,排列紧密,尼氏体着色较深,同时Akt蛋白表达增加(P<0.01;P<0.05),GSK3α、βAPP、Aβ表达减少(P<0.01;P<0.05)。结论:清心开窍方能够改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力,其机制可能与Akt/GSK3α介导的信号通路相关,它能够激活Akt,抑制GSK3α,降低βAPP、Aβ的生成,减少神经元损伤。     

不同经穴组合针刺对失眠大鼠下丘脑生物钟基因Clock和Bmal 1表达的影响

目的:观察不同经穴组合针刺对失眠大鼠下丘脑生物钟基因Clock和Bmal 1表达的影响,探索循经选穴对腧穴配伍效应的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为空白组(n=12)、模型组(n=8)、百会+神门组(n=12)、百会+三阴交组(n=11)、百会+非经非穴组(n=10)。连续2d腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)混悬液(500mg/kg)建立失眠模型。百会+神门组、百会+三阴交组、百会+非经非穴组每日针刺1次,每次30min,连续7d。治疗后比较各组大鼠睡眠潜伏期及睡眠时间;实时荧光定量PCR法检测下丘脑腹外侧视前区(VLPO)与视交叉上核(SCN)的Clock及Bmal 1mRNA的表达水平。结果:与空白组比较,模型组睡眠潜伏期延长、睡眠时间减少(P0.05),VLPO区与SCN内的Clock及Bmal 1mRNA表达水平均降低(P0.01)。与模型组比较,百会+神门组睡眠时间延长(P0.05);3个治疗组睡眠潜伏期均缩短(P0.05),VLPO区与SCN内Bmal 1mRNA表达水平均升高(P0.05);百会+神门组和百会+三阴交组VLPO区与SCN内Clock mRNA表达水平均升高(P0.01)。与百会+神门组比较,百会+三阴交组和百会+非经非穴组睡眠时间减少(P0.05)。与百会+三阴交组比较,百会+神门组VLPO区与SCN内Clock及Bmal 1mRNA表达水平均升高(P0.01,P0.05);百会+非经非穴组VLPO区与SCN内Clock及Bmal1mRNA表达水平均降低(P0.01,P0.05)。结论:针刺"百会"配伍"神门"穴可延长失眠大鼠的睡眠时间并缩短潜伏期,提高VLPO区与SCN内生物钟基因Clock及Bmal 1表达水平,循经选穴可以提高腧穴配伍效应。     

固本健脑法对老年性痴呆模型大鼠SorLA、VPS35的影响

目的:探讨固本健脑法干预老年性痴呆即阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用及机制。方法:12月龄衰老大鼠行脑立体定位手术于双侧海马注射Aβ_(1-42)制备复合AD大鼠模型,并用固本健脑液灌胃干预,以安理申组为对照。4周后,Morris水迷宫实验检测大鼠的空间学习记忆能力,Westen Blot检测SorlA、VPS35、APP的表达,ELISA法检测Aβ_(1-42)的表达。结果:通过大鼠双侧海马注射Aβ_(1-42),可诱导出大鼠AD样学习记忆能力减退模型。水迷宫检测显示固本健脑液中剂量能改善大鼠学习记忆能力。Westen Blot显示固本健脑液高剂量能提高海马区SorlA的表达量。ELISA显示给药后各给药组Aβ_(1-42)含量降低,固本健脑液高剂量Aβ_(1-42)含量最低。结论:固本健脑法可通过影响SorLA、VPS35的表达,影响APP的转运,减少Aβ_(1-42)的生成,加速Aβ_(1-42)的清除。     

固本健脑法对Alzheimer病模型大鼠海马区树突棘及P-tau的影响

目的：本课题在成功建立AD大鼠模型基础上,观察固本健脑法治疗AD的作用及机制。方法：12月龄衰老大鼠行脑立体定位手术于双侧海马注射Aβ1-42,制备复合AD大鼠模型,并用固本健脑液灌胃干预,以安理申组为对照。4周后,高尔基染色法观察大鼠海马区神经元树突棘形态及密度;Western Blot法检测大鼠海马区Caveolin-1、P-tau（Thr231、Ser396位点）蛋白表达改变。结果：高尔基染色法结果显示：固本健脑液高、低剂量组神经元细胞及树突棘形态明显改善,数目及密度显著增加（P<0.01）。Western Blot法检测结果显示：固本健脑液高、低剂量组可使Caveolin-1的表达不同程度的升高,而tau磷酸化水平下降,差异有显著性（P<0.01）。结论：固本健脑法能显著改善AD大鼠海马神经元树突棘形态及密度,显著提高AD模型大鼠海马区Caveolin-1的表达,抑制tau蛋白过度磷酸化。     

脑益康对高胆固醇血症致Aβ增高大鼠的作用研究

目的观察脑益康对高胆固醇血症致Aβ增高大鼠的作用并分析其作用机制。方法高胆固醇饲料喂饲大鼠建立高胆固醇血症模型,脑益康灌胃,Y电迷宫测试,测定血脂、血流变及脑海马区Aβ表达。结果与模型对照组相比,脑益康高剂量组大鼠电刺激尝试次数显著减少(P<0.01),血清总胆固醇显著降低(P<0.01),大鼠脑海马区Aβ表达积分光密度显著降低(P<0.01)。结论脑益康可改善大鼠学习、记忆,其机制与降低血脂水平、改善血液流变学、减少脑Aβ生成有关。     

苓桂术甘汤对阿尔茨海默病血脑屏障损伤的影响

目的:通过观察苓桂术甘汤(LG)对体外阿尔茨海默病(AD)病理状态下血脑屏障模型的影响,探讨其对AD血脑屏障损伤后修复的具体机制.方法:将50只雄性SPF级大鼠,随机分为5组,分别灌胃7 d,2次/d,LG高、中、低剂量组以4.8,2.4,1.2 g·kg-1,西药组以盐酸多奈哌齐0.5 mg·kg-1,正常组以等体积...     

黄连素对阿尔兹海默症大鼠学习记忆功能及海马组织GSK3β、p-Tau蛋白表达的影响

目的探究不同剂量黄连素对阿尔兹海默症大鼠学习和认知功能的影响,以及黄连素对丝氨酸蛋白激酶3β(serine protein kinase 3β,GSK3β)、p-Tau蛋白表达的影响。方法大鼠分为假手术组、模型组、黄连素低中高剂量组,除假手术组外,其余各组采用腹腔注射D-半乳糖联合Aβ25-35脑注射的方法建立阿尔兹海默症模型大鼠,药物干预4周后,检测Morris水迷宫实验、海马组织GSK3β、p-Tau蛋白表达量。结果与模型组相比,黄连素治疗组大鼠逃避潜伏期、游泳总路程不同程度降低,穿越目标区域次数增加,其中黄连素高剂量组降低最显著(P<0.01,P<0.05)。黄连素组海马GSK3β、p-Tau蛋白表达较模型组显著降低,高剂量组降低最显著(P<0.01)。结论黄连素能改善阿尔兹海默症大鼠学习和记忆能力,其中150 mg/kg黄连素对善阿尔兹海默症大鼠治疗效果优于50 mg/kg及100 mg/kg,其机制与黄连素降低大鼠海马组织GSK3β、p-Tau蛋白表达有关。     

早期老年痴呆患者血p-tau、Aβ1-42与尿AD7c-NTP含量比较研究

目的:研究早期阿尔兹海默病(AD)和血管性痴呆(VD)患者血p-tau、Aβ1-42和尿AD7c-NTP含量的变化,为诊断早期AD、VD提供理论依据。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA),检测AD组25例,VD组25例,对照组20例血中p-tau;Aβ1-42含量及尿中AD7c-NTP含量。结果:早期AD组血p-tau、Aβ1-42蛋白含量和尿中AD7c-NTP含量明显高于VD组和对照组,具有显著性差异(P<0.05),而VD组与对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论:联合检测血p-tau、Aβ1-42含量和尿AD7c-NTP含量可提高早期AD与VD的诊断与鉴别诊断。     

清心开窍方有效成分对AD大鼠海马区IL-1β、GFAP及Aβ表达的影响

目的:探讨清心开窍方有效成分对AD大鼠海马区IL-1β、GFAP及Aβ表达的影响。方法:动物实验采用对照观察法。雄性SD大鼠112只,称体质量后按随机数字表分为7组:正常组、假手术组,模型组、安理申组,皂苷组、挥发油组、多糖组,每组16只。采用双侧海马注射Aβ1-40制造AD大鼠模型,造模后第2天开始灌胃,连续灌胃2周(每天上午10点开始),清心开窍方皂苷组、清心开窍方挥发油组、清心开窍方多糖组剂量分别是9、3.33、8.33 m L/(kg·d),安理申组给药剂量为1.67 mg/(kg·d),予对照组和模型组等体积生理盐水。2周后,采用免疫组化、实时定量荧光PCR及WB法检测AD大鼠海马区IL-1β、GFAP及Aβ表达。结果:清心开窍方各有效成分组大鼠海马区IL-1β、GFAP及Aβ表达水平降低,与对照组比较差异非常显著(P0.01,P0.05)。结论:清心开窍方有效成分可能是通过降低海马区IL-1β、GFAP及Aβ的表达发挥抗AD的作用。     

阿魏酸对Aβ25-35诱导PC12细胞的保护机制研究

目的:观察阿魏酸对β-淀粉样蛋白25-35(βamyloid peptide25-35,Aβ25-35)诱导的阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)模型细胞的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,以不同浓度阿魏酸对抗干预,以MTT比色法观测阿魏酸对AD模型细胞增殖的保护作用,以比色法检测阿魏酸对AD模型细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的影响。用RT-PCR法检测Apbb1,乙酰胆碱酯酶(Ache)基因的表达。结果:阿魏酸对损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,阿魏酸在2 mmol/L时可明显降低模型细胞培养液中MDA、LDH含量,提高SOD活力,差异有统计学意义(P<0.01)。阿魏酸可下调Apbb1和Ache的mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:阿魏酸对Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能与提高细胞抗氧化能力相关,与下调Apbb1、Ache的mRNA表达量相关。     

固本健脑法对老年健忘模型动物海马脑区NR2A基因表达的影响

1材料与方法1．1实验动物清洁级健康雄性Wistar大鼠,雌雄各半,3月龄,体重200±20g,由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供,批号：0016152。适应性饲养1周后,用跳台法初筛,选成绩相似者,完全随机法分为正常对照组（15只）,模型组（60只）。参考文献¨‘稍加改变。模型组大鼠腹腔注射D-半乳糖120mg·kg·d-1。（生理盐水配制成240mg·ml-1）和NaN0290mg·kg-1·d-1。（双蒸水配制成180mg·m1-1,连续40天,正常组大鼠腹腔注射2ml的生理盐水溶液。     

绞股蓝正丁醇提取物对快速老化小鼠Aβ蛋白的影响

目的探讨壮药绞股蓝Gynostemma pentaphyllum正丁醇提取物对快速老化SAMP8小鼠淀粉样蛋白(Aβ蛋白)的影响。方法 50只快速老化SAMP8小鼠随机分为模型组、石杉碱甲组[0.15 mg/(kg·d)]和绞股蓝正丁醇提取物高、中、低剂量组[500、250、125 mg/(kg·d)],10只正常老化SAMR1小鼠为正常对照组。灌胃给药8周后,取小鼠血清和脑匀浆,以ELISA法检测其Aβ蛋白的水平,RT-PCR和免疫组织化学法检测App基因和APP蛋白的表达。结果与模型组比较,绞股蓝正丁醇提取物给药组小鼠脑组织中的APP基因表达和蛋白表达明显下调,血清和脑组织中的Aβ蛋白水平显著降低。结论绞股蓝正丁醇提取物可通过抑制APP蛋白的生成,使Aβ蛋白的表达减少,从而起到防治阿尔茨海默症(AD)的作用。     

电针结合维药外敷对腰椎间盘突出症模型大鼠血清白介素-1β（IL-1β）及降钙素基因相关肽（CGRP）的影响

本文旨在探讨电针和维药外敷在治疗腰椎间盘突出症大鼠模型中对大鼠血清IL-1和CGRP的影响及两种疗法是否具有协同作用。     

清开灵对AD小鼠学习记忆及脑组织 β-淀粉样蛋白水平的影响

目的:研究清开灵对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)水平的影响。方法:选用雄性KM小鼠60只,随机分成6组:正常对照组、模型对照组、清开灵低、中、高剂量(20,40,80 g·kg-1)组和阳性对照药尼莫地平0.3 g·kg-1组,每组10只。ig给予等体积药物或生理盐水,每日给药1次,连续给药30 d。末次给药30 min后,东莨菪碱造模,用Morris水迷宫测试行为学指标,采用双抗体夹心法测定脑组织β-淀粉样蛋白水平。结果:Morris水迷宫测试表明,清开灵能明显缩短模型小鼠游泳时间及游泳路程;脑组织Aβ含量测定显示清开灵能显著降低脑组织Aβ水平。结论:清开灵能改善造模小鼠的学习记忆功能,其机制可能与降低脑组织Aβ水平有关。     

固本健脑液对MCI大鼠血清胆固醇水平和IL-6含量的影响

以腹腔注射D-半乳糖和NaNO2的方法建立MCI大鼠模型,予固本健脑液于模型动物,并设立正常对照组、脑复康对照组,观察固本健脑液对MCI大鼠行为学、血清胆固醇水平、血清IL-6含量等的影响。结果表明固本健脑液能降低血脂水平和血清中IL-6水平、较好改善脑微环境从而显著改善MCI大鼠的学习记忆功能障碍,促进其学习记忆能力。