香草扶正合剂对非小细胞肺癌放化疗中医证候评分和免疫功能影响

<正>肺癌是全世界恶性肿瘤相关性死亡的首要原因,据全球癌症流行病学数据库(GLOBOCAN)统计,2020年全球新发肺癌病例约220万,死亡病例约180万,而我国肺癌发病率和死亡率分别占37.0%和39.8%^[1],其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占85%左右,     

细梗香草总皂苷诱导肺癌细胞H460凋亡及其机制的研究

目的：观察细梗香草总皂苷（LC）对非小细胞肺癌H460细胞增殖和凋亡的影响。方法在H460肺癌细胞培养时加入不同浓度的LC,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖活性,AnnexinⅤ/PI（FCM）法观察LC对肺癌细胞凋亡的诱导作用和周期分布的影响。DCFH- DA荧光探针FCM检测细胞内活性氧生成,Western blot法检测NF-κB、I-κB、Bax、Bcl-2、Capase-3的蛋白表达。结果 LC可抑制H460细胞生长,具有剂量、时间依赖性;LC作用H460细胞后克隆形成率明显下降。LC可引起H460细胞凋亡,并可将H460生长阻滞在S期。LC以浓度依赖方式增高H460细胞内活性氧水平,还可使H460细胞I-κB、Bax和Capase-3表达增加,而使NF-κB和Bcl-2表达降低。结论 LC可以抑制H460细胞增殖,可能是通过增加细胞内活性氧表达,激活了肺癌细胞线粒体凋亡途径。     

外源性硫化氢对肝癌细胞系HepG2自噬的影响

目的探讨外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝癌细胞系Hep G2细胞自噬的影响及其机制。方法应用外源性H2S供体——硫氢化钠(sodium hydrosulfide,Na HS)处理Hep G2细胞,采用Western blotting方法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达变化,Real-time PCR方法检测自噬相关基因beclin1和atg5的mRNA表达浓度,免疫荧光方法观察Hep G2细胞自噬颗粒变化、凋亡相关蛋白M30及凋亡小体变化,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果瞬时转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)-LC3质粒后,发现Na HS处理组Hep G2细胞内GFP-LC3Ⅱ绿色荧光斑点明显增加,M30阳性细胞率[(8.37±1.03)%],与对照组[(2.14±0.69)%]比较差异有统计学意义(P<0.05);同时,高倍镜下观察结果显示,Na HS处理后细胞核异染色质明显增加,凋亡小体形成。Annexin V-FITC/PI双染结果显示Na HS处理组细胞凋亡率高于对照组[(16.32±0.28)%vs(0.67±0.09)%],差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR显示Na HS可增加Hep G2细胞beclin1和atg5 mRNA表达水平,LC3-Ⅱ表达明显增加。且自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)可降低Na HS所致的beclin1和atg5的mRNA表达。结论外源性硫化氢能够上调自噬相关基因beclin1和atg5表达,进而促进Hep G2细胞发生自噬,并诱导细胞凋亡。     

石斛合剂对糖尿病大鼠肾脏自噬表达的影响

糖尿病是常见病,近年来患病率呈上升趋势。既往研究表明石斛合剂具有降低糖尿病实验动物血糖水平,调节胰岛素分泌等代谢方面的功效[1-2],但其与自噬的关系尚未见报道。我们利用制作较为成熟的糖尿病大鼠模型,运用免疫组化技术,     

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡与自噬的研究

目的 探讨顺铂对Hela细胞凋亡和自噬的影响.方法 用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察顺铂对HeLa细胞生长抑制情况;Hoechst 33342荧光染色检测细胞凋亡;间接免疫荧光法检测自噬标志蛋白LC3和P62的变化;免疫印记法检测细胞凋亡蛋白Bax/Bcl-2、Caspase-3和自噬标志蛋白LC3和P62的变化.结果 顺铂对Hela细胞生长抑制作用表现为时间剂量依赖关系;顺铂作用Hela细胞导致Bax/Bcl-2比值和Caspase-3表达增加,同时自噬标志蛋白LC3和P62活化.结论 顺铂诱导Hela细胞发生凋亡,伴有自噬发生.     

芪加合剂对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的　研究芪加合剂对小鼠 Ｌｅｗｉｓ 肺癌的影响。方法　观察 Ｌｅｗｉｓ 肺癌小鼠的生存时间和瘤重。结果　芪加合剂（１３７５ ～２７５０ ｇ·ｋｇ － １） 治疗或预防给药均能延长 Ｌｅｗｉｓ肺癌小鼠平均生存时间；对小鼠 Ｌｅｗｉｓ 肺癌瘤重增长有明显抑制作用，并可抑制其自发性肺转移。结论　芪加合剂对肺癌可能具有明显抑制作用。     

顺铂诱导骨肉瘤细胞自噬及其与凋亡关系的体外研究

目的研究顺铂(DDP)诱导的骨肉瘤细胞自噬性活化,并探讨自噬与凋亡的关系。方法利用免疫荧光染色和电镜观察DDP对骨肉瘤细胞自噬的影响;应用3-甲基腺嘌呤(3MA)下调自噬,采用MTT比色法,测定DDP对骨肉瘤细胞增殖抑制率的影响;MDC荧光染色和流式细胞术定量检测骨肉瘤细胞自噬的表达;应用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的凋亡情况。结果 DDP给药后可见LC3-Ⅱ绿色荧光呈点状散在分布于细胞膜附近。电镜下观察到DDP给药后骨肉瘤细胞内自噬体的形成。DDP能诱导自噬和凋亡的发生。3MA能抑制自噬的发生,对凋亡无明显影响。与单独DDP作用相比,3MA提前给药细胞的凋亡率增加,其细胞增殖抑制率也增高;3MA迟后给药细胞的凋亡率略有下降,其细胞增殖抑制率也下降。结论 DDP能诱导MG63细胞发生自噬性活化。DDP作用早期,自噬能延缓凋亡的发生,发挥保护细胞的作用;在DDP作用后期,自噬则作为另一种死亡形式出现,和凋亡一起促进细胞死亡。     

红景天苷对MPTP-帕金森病小鼠模型自噬通路影响的实验研究

目的:探讨红景天苷(Sal)对帕金森病(PD)小鼠黑质纹状体(SNpc)自噬通路相关蛋白表达的影响及其可能机制。方法:爬杆实验检测小鼠的行为学变化;免疫荧光组织化学法检测黑质纹状体TH阳性神经元数目的变化; Western blot检测自噬相关蛋白的表达情况。结果:模型组小鼠T_turn及T_LA时间明显延长(P<0.01),与模型组比较,治疗组T_turn及T_LA时间明显缩短(P<0.05);模型组黑质纹状体中TH阳性神经元的数目明显减少(P<0.01),Sal干预后小鼠TH阳性神经元有所恢复(P<0.05);1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)处理后黑质纹状体中LC-3β、Beclin1表达增多,PINK1、Parkin表达减少,而Sal预处理可以明显改善这些变化(P<0.05)。结论:Sal对PD小鼠DA能神经元具有保护作用,而其机制可能与抑制黑质纹状体中自噬通路相关蛋白的表达有关。     

参芪扶正注射液对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸相关细胞因子的影响

目的:观察参芪扶正注射液及其配合化疗对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸相关细胞因子的调控作用。方法:观察参芪扶正注射液及其配合化疗对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用,同时观察其对小鼠体重的影响。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各实验组小鼠血清中的IL-2、IL-10、TGF-β1及γ-IFN等细胞因子的含量。结果:参芪扶正注射液及化疗对Lewis肺癌移植瘤的抑制率总体趋势为中药加化疗组单纯化疗组纯中药组,中药加化疗组抑瘤率最高,而单独参芪扶正注射液抑瘤作用并不明显。荷瘤小鼠体内IL-2、γ-IFN均不同程度的低于阴性对照组,而IL-10及TGF-β1均不同程度的高于阴性对照组。单纯扶正中药可增加荷瘤小鼠IL-2、γ-IFN的含量,但降低IL-10、TGF-β1的作用并不明显。化疗可降低IL-2、γ-IFN、IL-10、TGF-β1的含量,而中药加化疗组降低IL-10和TGF-β1的作用优于单纯化疗及单纯中药组。结论:此结果初步证明了参芪扶正注射液可改善荷瘤小鼠体内存在的Th1/Th2细胞因子失衡的现象,一定程度上阐释了中医扶正培本治则调控机体免疫功能的分子机理。     

未折叠蛋白反应通过自噬抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡

目的：研究未折叠蛋白反应对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法：在采用二硫苏糖醇和衣霉素诱导未折叠蛋白反应的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析未折叠蛋白反应对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响及其机制。结果：二硫苏糖醇和衣霉素预处理促进顺铂诱导的自噬反应并抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡,抑制自噬反应明显削弱二硫苏糖醇和衣霉素预处理对顺铂作用下肝癌细胞的保护作用。结论：未折叠蛋白反应能够通过促进自噬抵抗顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。     

抗癌扶正方不同提取液对小鼠荷Lewis肺癌抑制作用研究

目的:观察抗癌扶正方水提液与醇提液对荷Lewis肺癌小鼠的干预作用。方法:C57BL/6小鼠(雌雄各半)随机分为正常组(10只)、造模组(50只),将制得的Lewis肺癌细胞接种至C57BL/6小鼠右侧腋窝皮下,随机分为:模型组、顺铂组、水提组、醇提组,每组10只。顺铂组:隔日腹腔注射0.2mg/mL顺铂,0.2mL/只;水提组:灌服抗癌扶正方水提液(1g生药量/mL),0.2mL/只;醇提组:灌服抗癌扶正方水醇提液(1g生药量/mL),0.2mL/只;对照组与模型组灌服同等体积的生理盐水,连续给药24d。给药期间观察各组小鼠的一般反应,每4天称量一次体重。处死小鼠取血及脾脏,计算脾脏指数,检测白细胞含量,测量肿瘤体积和瘤重,观察肺组织病理变化情况。结果:抗癌扶正方不同提取液干预24天后,与模型组小鼠相比,水提组小鼠精神萎靡、反应迟钝等现象明显改善;肿瘤体积、瘤重及脾脏指数明显减小(P0.05);白细胞明显升高(P0.05);体重无明显变化;肺组织病理显示瘤细胞出现灶状坏死区及核碎裂象,并有炎性细胞浸润,瘤组织内及其周围微血管减少;与顺铂组相比,水提组小鼠的白细胞和脾脏指数都有显著提高(P0.05),醇提组小鼠上述各项指标均无明显变化。结论:抗癌扶正方水提液对荷Lewis肺癌有抑制作用,醇提液则无抑制作用。     

参芪扶正注射液对肺癌小鼠顺铂化疗后免疫功能的影响

目的 探讨参芪扶正注射液对肺癌小鼠顺铂化疗后免疫功能的影响。方法 采用顺铂（DDP）3m/（kg·d）连续7d腹腔注射建立肺癌小鼠化疗后动物模型。然后随机分为对照组和治疗组，治疗组给予参芪扶正注射液40，80ml／（kg·d）分别腹腔注射给药，连续7d；对照组予生理盐水40ml／（kg·d）。末次给药后24h采用免疫器官重量法检测胸腺指数、脾脏指数；同时采用放射免疫法测定小鼠血清中IL-2和TNF-α的含量。结果 治疗组小鼠胸腺指数、脾脏指数均高于对照组（P〈0．05）；治疗组小鼠血清IL-2水平显著高于对照组，而治疗组TNF-α低于对照组（P〈0．05）。结论 参芪扶正注射液可提高肺癌小鼠顺铂化疗后的免疫功能，临床上可试用参芪扶正注射液对肺癌化疗后免疫功能低下患者进行治疗．     

吲哚美辛、组胺- 吲哚美辛对鼠Lewis 肺癌凋亡诱导作用的实验研究

 目的探讨吲哚美辛（IN）、组胺-吲哚美辛（his-IN）对Lewis肺癌荷瘤小鼠的肺癌生长的抑制及凋亡的效果。方法处死
Lewis 肺癌荷瘤小鼠后,制成肿瘤细胞悬液,接种于昆明小鼠的左腋下,待肿瘤长至1.0 cm 左右,将其分为5 组,具体为吲哚美
辛（IN 组）3.0 mg/kg 组和3.5 mg/kg 组,组胺-吲哚美辛（his-IN 组）3.0 mg/kg 组和3.5 mg/kg 组及生理盐水对照组,用药治疗10 d
结束后,以抑瘤率、流式细胞仪测定肿瘤细胞凋亡峰及凋亡率、放免法测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）评价疗效。结果his-IN 组
与IN组的TNF-α含量、抑瘤率及凋亡率明显高于对照组,而且3.5 mg/kg his-IN 组要明显好于其他各组;通过流式细胞仪发现
不同治疗组都在G0/G1峰前出现“亚二倍体峰”,并且his-IN 组出现要比IN 组早,且凋亡细胞数多,其中3.5 mg/kg his-IN 治疗组
更明显。结论IN、his-IN 可以抑制肿瘤的增长及促进肿瘤细胞的凋亡,其中3.5 mg/kg his-IN 组抑制肿瘤及促进肿瘤细胞凋亡
作用更强。     

白花蛇舌草多糖对Lewis肺癌小鼠肿瘤抑制作用及机制研究

目的:白花蛇舌草多糖对Lewis肺癌小鼠肿瘤抑制作用及机制研究.方法:选取C57BL/6J小鼠,建立Lewis肺癌模型,随机分为空白组、模型组、顺铂组(6 mg.kg -1 )、白花蛇舌草多糖高、中、低剂量(200 mg ? kg-1、100 mg ? kg-1、50 mg ? kg-1)组,各组小鼠给予相应药物灌胃,...     

自拟扶正固本汤联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌临床观察

[目的]观察扶正固本方治疗非小细胞肺癌的临床疗效。[方法]60例患者随机分为中药＋化疗组（治疗组）、化疗组（对照组）,对照组选用NP方案,治疗组在化疗同时加服扶正固本方。[结果]治疗组在缓解肺癌相关症状、提高生存质量、提高细胞免疫功能方面与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。[结论]扶正固本方能延长患者的生存期,缓解稳定病灶,提高肺癌患者的生活质量,提高机体免疫功能,减轻化疗对机体的不良反应。     

消瘤冲剂对lewis肺癌小鼠免疫功能影响的实验研究

目的:观察消瘤冲剂对lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。方法:取C57BL/6J小鼠分别皮下接种lewis肺癌细胞悬液,给予消瘤冲剂按7.5g/kg、15.0g/kg、30.0g/kg三个剂量连续灌胃10天,分别观察抑瘤率、T淋巴细胞转化功能及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果:消瘤冲剂能明显提高lewis肺癌小鼠T淋巴细胞转化功能(P0.05,P0.01)和巨噬细胞吞噬功能(P0.05)。结论:消瘤冲剂具有提高lewis肺癌小鼠免疫功能的作用。     

半枝莲多糖对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的：探讨半枝莲多糖（SBPS）对Lewis 肺癌荷瘤鼠的抑瘤作用。方法建立Lewis 肺癌荷瘤鼠实验模型,随机的分为5组：分别为模型组（生理盐水）、环磷酰胺（CTX）组（30 mg· kg－1· d－1）、SBPS高剂量组（200 mg· kg－1· d－1）、中剂量组（100 mg· kg－1· d－1）和低剂量组（50 mg· kg－1· d－1）。测定抑瘤率、脾指数、胸腺指数、肺／体比。结果 SBPS 抑制Lewis肺癌荷瘤鼠肿瘤与模型组相比有显著差异（ P ＜0.01）。100 mg· kg－1 SBPS对Lewis 肺癌荷瘤鼠肿瘤的抑制作用最好,抑瘤率为49.68％。 SBPS中剂量组和低剂量组可有效提高脾指数和胸腺指数、降低肺／体比。结论 SBPS对Lewis 肺癌荷瘤鼠具有明显的抑瘤作用。     

细梗香草皂苷联合吉西他滨对胰腺癌细胞BxPC-3抑制作用的研究

目的观察细梗香草皂苷（LC）和吉西他滨(GEM）单药及联合用药对人胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响,探究LC抗胰腺癌的作用机制。方法培养人胰腺癌BxPC-3细胞时加入不同浓度梯度的LC与GEM,采用MTS法检测细胞增殖抑制率,计算两种药物的半抑制浓度（IC50）和联合作用指数（CI）。将细胞分为4组,A组（对照空白）、B组（GEM1滋mol/L）、C组（LC15滋g/ml）和D组（GEM1滋mol/L+LC15滋g/ml联合用药）,培养后采用AnnexinⅤ-FITC/PI法观察LC与GEM对BxPC-3细胞的诱导凋亡作用;Westernblot法检测抗多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）、抗半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。结果8~64滋g/ml的LC及1.25~20滋mol/L的GEM均对BxPC-3细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度依赖性,其IC50分别为16.55滋g/ml和1.27滋mol/L。15滋g/ml的LC与各个浓度的的GEM协同作用最强,CI值为0.53~0.65。B、C、D组的早、晚期凋亡率与A组比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）,且D组与B、C组的早期凋亡率比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）。C、D组与A组比较,PARP蛋白表达水平明显降低（均P＜0.05）;B、C、D组与A组比较,Caspase-3蛋白表达水平增加（均P＜0.05）。结论LC有抑制胰腺癌细胞生长的作用,与GEM联合作用效果更好;其作用机制可能是通过激活Caspase-3表达,分解PARP,从而诱导细胞凋亡。