L-亮氨酸菌种选育及发酵

<正> L-亮氨酸是一种重要的氨基酸,可用于医药、食品以及农药的合成等。本试验以黄色短杆菌T_(6-13)为出发菌株,筛选AHV(α-氨基-β-羟基戊酸)和β-HL(β-羟基亮氨酸)抗性突变株从中筛选出一株L-亮氨酸产生菌No339,可积累L-亮氨酸8.1mg/ml.经过优化培养基组成,菌株No339的L-亮氨酸产量可达12.5mg/ml.     

利用原生质体诱变筛选L-亮氨酸产生菌

L-异亮氨酸产生菌钝齿棒状杆菌AS110可产L-异亮氨酸16.4mg/ml,不产生L-亮氨酸。在菌株AS110制备成原生质体再生后,结果发现90%以上的再生菌株可以产生L-亮氨酸。用紫外线诱变处理AS110的原生质体,从再生菌株中筛选出一株L-亮氨酸产生菌AS150,经分离纯化后,可产L-亮氨酸16.4mg/ml,并且不产L-异亮氨酸。     

环孢菌素A高产的Tolypocladiuminflatum融合株的选育

环孢菌素A(CyA)是一种由11个氨基酸组成的环肽,已作为免疫抑制剂在人体器官移植上广泛使用.目前工业生产上多采用Tolypocladiuminflatum和新从古巴土壤分离出的Sesquicillio-psis rosariensis发酵生产CyA.据最新报道,前者生产能力约1500mg/L(1994),后者可达3150mg/L(1993).但最近韩国科技研究所的研究人员利用T.inflatum的野生株进行原生质体融合,所获得的依赖L-(幺 颌)氨酸(L-Val)和L-亮氨酸(L-Leu)的融合株CyA发酵产量更高达8920mg/L.     

L-异亮氨酸发酵的研究——2.L-异亮氨酸产生菌AS110培养条件的考察及发酵产物的提取与鉴定

用突变株AS110进行培养条件考察,在适宜的条件下,该菌株可产L-异亮氨酸16.4mg/ml,其他氨基酸含量均低于0.5mg/ml。较高浓度的尿素对菌体生长和L-异亮氨酸的产生均有抑制作用。发酵产品经红外吸收光谱,比旋光测定,纸层析和生物鉴定证明是L-异亮氨酸。     

利用原生质体诱变筛选L-亮氨酸高产菌株的研究

本实验以L-亮氨酸产生菌黄色短杆菌CF-435为出发菌株,制备原生质体,在原生质体形成率和再生率最佳的条件下,利用紫外线、利福平、氯化锂对原生质体进行复合处理,获得再生突变株,从中挑取单独菌落进行摇瓶发酵,筛选出高产菌株UV_3-29,在含有葡萄糖10%的培养基中发酵72h可积累L-亮氨酸26.73mg/ml,比原始菌种产酸量提高26%.     

利用亚硝酸诱变原生质体筛选L-亮氨酸高产菌株的研究

本实验以L-亮氨酸产生菌黄色短杆菌CFN-19为出发菌株。我们首先对CFN-19菌株制备原生质体,原生质体制备率为95.1%,再生率为25%,然后对原生质体进行亚硝酸、利福平、氯化锂复合诱变处理,从再生菌株中筛选出一株高产菌株H_(6-66),产酸量由原来的23.1mg/ml提高到32.6mg/ml,提高率达41%.同时又对H_(6-66)菌株进行遗传稳定性考察,考察结果H_(6-66)菌株是高产稳定菌株。     

薄层色谱法测定强力宁注射液中的三种成分

强力宁注射液是治疗慢性迁延性肝炎,慢性活动性肝炎的常用制剂之一。主要成分为甘草酸单铵(2mg/ml)、L-盐酸半胱氨酸(1.6mg/ml)、氨基乙酸(20mg/ml)。《中国药典》2000版对甘草酸单铵鉴别尚未记载,后二者则选用红外光谱法,易受干扰,难在制剂中应用。江苏省药品标准利用化学反应法进行鉴别,方法较为繁琐,且不能同时鉴别。经研究用薄层色谱法可同时鉴别甘草酸单铵、L-盐酸半胱氨酸、氨基乙酸,结果专属性强,三组份色斑明显,操作简便快速,报告如下。     

L-异亮氨酸发酵的研究——1.L-异亮氨酸产生菌的菌种选育

以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)T_(6-13)为出发菌株,经亚硝基胍(NTG)和紫外线诱变处理以及结构类似物的筛选后,得到一株抗AHV、AEC和Eth三重遗传标记突变株AS110。有关末端产物对其生长的抑制作用都有一定程度解除。可以积累L-异亮氨酸7.0mg/ml。     

一种延长左旋多巴作用时间的新的前药:L-3-(3′-羟基-4′-三甲基乙酰氧苯基)-丙氨酸

口服左旋多巴是治疗帕金森氏症的一种最重要的治疗方法,但长期应用会出现药效减弱、作用时间缩短及运动症状。为了改进上述不足,本文对一种新型前药L-3-(3’-羟基-4’-三甲基乙酰氧苯基)-丙氨酸(NB-355)的药动学进行研究并分析其临床应用的可能性。把禁食18h 的雄性大鼠分成两组:(1)左旋多巴组(左旋多巴10mg/kg,卡比多巴2mg/kg);(2)NB-355组(相当于左旋多巴10mg/kg,卡比多巴2mg/kg)。门服给药,取血样进行HPLC-ECD 分析。结果表明,左旋多巴的血浆浓度快速升高,在0.28h 时C_(max)为2.27±0.55μg/ml。NB-355组则产生一个宽而低的血浆左旋多巴峰,在2h 时C_(max)为1.17±0.19μg/ml。左旋多巴组的MRT(平均保留时间)为0.99±0.10h,NB-355组为2.24±0.21h,后者是前者的2.3倍。两组AUCs 分别为2.38±0.45及3.23±0.34     

利用IABS模型选育L-异亮氨酸高产菌株

<正> 从黄色短杆菌ASⅢ(Brevibacterium flavum AS111,AHV~r+AEC~r+Eth~r变株,产L-异亮氨酸10mg/ml)为出发菌株,利用“点种琼脂块理性化筛选模型”(inoculated agarblock rational selection model;简称IABS)选育出了变株23-10.23-10变株可在琥珀酸为唯一碳源的培养基上迅速生长(Suc~g),对α-氨基丁酸、L-乙硫氨酸具有较强的抗性。(α-     

L-亮氨酸提取的研究

<正> L-亮氨酸属于分枝链氨基酸,由于它在性质上与缬氨酸、异亮氨酸等比较相似,因此提取收率较低,造成产品的成本增加。本文则采用离子交换法对发酵液中亮氨酸的提取做了一些研究。1 材料与方法1.1 材料离子交换树脂732强酸性离子交换树脂(上海树脂厂),离子交换柱在直径3cm,高45cm的玻璃柱中装处理好的树脂150g.     

三种血清总胆固醇测定方法的探讨

本文就国内采用较多的三种测定总胆固醇方法(磷硫铁法、乙酸酐提取法和单一显色法),进行了比较,现将结果报告如下: 一、三种方法测健康人总胆固醇50例,其结果用统计学处理(方差分析P<0.01),有非常显著差别。二、三种方法测定50例健康人血清总胆固醇,三种方法测得结果各例中有两法差误在35mg/100ml以下者38例,大于50mg/100ml4例。三种方法作胆固醇回收试验,单一显色法较理想(平均回收率为94％和93％)。乙酸     

L-亮氨酸产生菌的获得

目的:筛选一株优良的抗生素产生菌.方法:通过紫外线进行诱变处理筛选抗性突变株.结果:得到一种抗生素合成能力强的L-亮氨酸产生菌NO.145.结论:此方法可合成人们所期望的抗生素.     

肿痛安胶囊水提物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的体外抗菌活性

目的考察肿痛安胶囊水提物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的体外抗菌活性。方法采用琼脂二倍稀释法,以万古霉素为阳性对照品、以金黄色葡萄球菌ATCC29213为质控菌,测定了2个批次的肿痛安提取物对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)共123株临床分离致病菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果结果表明:肿痛安胶囊水提物对51株MRSA、25株MSSA、33株MRSE的MICrange为12.5 mg/ml~>50 mg/ml,MIC50分别为12.5 mg/ml、25 mg/ml、12.5 mg/ml;对受试的14株MSSE的MICrange为12.5~50 mg/ml,MIC50为25 mg/ml。结论肿痛安胶囊水提物对MRSA、MSSA、MRSE、MSSE均有较好的体外抗菌活性。     

均匀设计在L-亮氨酸发酵中的应用

<正> 均匀设计是一种新的试验方法,它适用于多因素、多水平的实验设计。这一方法在其他领域的优化处理上已取得一些成果,而在微生物发酵条件考查方面尚无报道。本实验则是采用这一方法进行了L-亮氨酸发酵条件的考查。     

L-苏氨酸产生菌选育的研究

用亚硝基胍(NTG)和紫外线(UV)诱变处理出发菌株T_(6-13),定向筛选α-氨基β-羟基戊酸(AHV)和S-(2-氯基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)抗性突变株和蛋氨酸缺陷型,得一苏氨酸产生菌M_(8-31)(AHV~rAEC~rMet~-),可积累L-苏氨酸6.7mg/ml。再以M_(8-31)为出发菌株,进一步提高抗性和筛选α-氨基-4-乙硫丁酸(Eth)敏感突变株,获得一苏氨酸高产菌株ME7(AHV~rAEC~rMet~-Eth~s),在含有葡萄糖10%的培养基中发酵48h可积累L-苏氨酸17.5mg/ml。     

建议改进《中国药典》95版二部L-亮氨酸重金属检查法

L-亮氨酸为非极性R基团的中性氨基酸^[1], 251C条件下在100ml水中的溶解度为2.426g^[2],属于略溶范围^[3],而中国药典1995版二部531页有关L-亮氨酸性状中将其描述为"在水中微溶",有误。此外,在其重金属检查项下中的规定为"取本品l.0g,加水适量,加热使溶解,加醋酸盐缓冲液2ml,加水使成25ml……",即样品加少于23ml的水加热后应能完全溶解。     

N-甲酰-L-甲硫氨酰-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸(fMLP)三肽的合成

目的合成N-甲酰-L-甲硫氨酰-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸三肽(fMLP)。方法以L-亮氨酸、L-苯丙氨酸为原料,采用环酸酐法(NCA)合成二肽L-亮氨酰-L-苯丙氨酸;又以DCC、HOBT为偶联剂,与N-甲酰-L-甲硫氨酸进行偶联,在0.5mol.L-1的NaOH溶液中水解得到fMLP三肽。结果与结论合成的三肽fMLP总收率为44.0%。其结构经IR、1H-NMR、MS确证。     

三种氨基酸对映体的柱前衍生-手性固定相HPLC法拆分及测定

建立了柱前衍生-手性固定相HPLC法拆分并测定了丙氨酸、门冬氨酸和亮氨酸3种光学异构体.利用4-氯-7-硝基苯并[1.2.5]噁二唑(NBD-CI)进行柱前衍生化,采用Sumichiral OA-2500S色谱柱,以甲醇(含5 mmol/L枸橼酸)-乙腈(60∶40)为流动相,检测波长470 nm.应用该法检查L-氨基酸中的D-异构体.结果表明,D-丙氨酸、D-门冬氨酸和D-亮氨酸在1～8 μg/ml浓度范围内线性关系良好,3种D-异构体的回收率分别为98.8%、98.1%和100.2%,RSD分别为1.8%、2.0%和1.7%.     

抗心律失常新药关附甲素血浓度测定的方法学研究

抗心律失常新药关附甲素(Guan-fu base A,GFA)为一种 C_(20)-二萜类生物碱,1966年由我国首次从黄花乌头(Aconitum coreanum(Levl.)Raipaics)的块根中分离得到。GFA与三氟醋酐(TFAA)反应,迅速定量地生成关附甲素双-三氟乙酸酯(GFA-TFAA),其结构经 GC-MSD 分析得到证实。GC-ECD 法对 GFA 的检测线性范围宽(10—20000ng/ml,r=0.9984),血浆中平均回收率为97.52%。日间及日内差的变异系数分别为9%及7%以下。该法用于 GFA 的临床前药理研究。GFA 三种剂量静脉给药6小时内的家兔血药浓度范围是:0.338±0.014至13.459±5.392μg/ml(10mg/kg),0.133±0.038至2.546±0.480μg/ml(2mg/kg)以及45.25±10.34至535.86±24.36 ng/ml(0.4 mg/kg)。