蛋白激酶C抑制剂对脑缺血大鼠突触体游离钙的影响

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ,ＰＫＣ）参与神经损伤机制。方法：采用大鼠全脑缺血模型,观察脑缺血／再灌流后突触体游离钙的变化及ＰＫＣ的抑制剂灯盏花对突触体游离钙的影响。结果：脑缺血／再灌流可以导致突触体游钙增加的抑制剂灯盏花可以阻止脑缺血／再灌流导致突触体游离钙增加。结论：ＰＫＣ参与神经元缺血性损伤可能与其促进钙内流有关。     

Advanced glycosylation end products, protein kinase C and renal alterations in diabetic rats

Objective To study the relationship between advanced glycosylation end products (AGE) an d protein kinase C (PKC), and their effects on renal alteration in diabetic rats .
Methods Insulin or aminoguanidine was administered to diabetic rats. Blood glucose, hem oglobin A_1C (HbA_1C), glomerular tissue extracts AGE (GTE-AGE), PKC, glomerular basement membrane thickness (GBMT) and urine protein/creatinine ( Pr/Cr) ratio in diabetic rats were measured and analysed.
Results Levels of blood glucose, HbA_1C and AGE, PKC activity, the Pr/Cr ratio an d GBMT were all significantly increased (P values all less than 0.01) in di abetic rats. Insulin could decrease the formation of HbA_1C and AGE, and improve PKC activity. Aminoguanidine had no influence on PKC activity (P >0.05) although it decreased the formation of AGE. Both drugs could delay t he increase of urine Pr/Cr ratio and GBMT (P<0.05 or P<0.01).
Conclusions Chronic hyperglycemia may lead to an increase of PKC activity. HbA_1Cand AGE may not directly contribute to alterations of PKC activity, but the increa se of PKC activity could promote the action of AGE on GBM thickening. It is imp ortant t o inhibit the formation of AGE and reduce the PKC activity so as to prevent or d elay the development of diabetic nephropathy.     

Comparison of inositol phosphates formation and gene expression of Gq alpha subunit in cultured aortic smooth muscle cells from spontaneously hypertensive and Wistar Kyoto rats

ＳＨＯＲＴＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮＳＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｉｎｏｓｉｔｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｉｏｎｏｆＧｑａｌｐｈａｓｕｂｕｎｉｔｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄａｏｒｔｉｃｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓｆｒｏ...     

逼尿肌不稳定大鼠蛋白激酶C蛋白的表达

目的探讨逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌细胞蛋白激酶C(PKC)蛋白的表达及与DI的关系.方法建立DI大鼠模型,原代培养DI与逼尿肌稳定(DS)大鼠膀胱逼尿肌细胞,应用Western-blotting方法检测培养细胞PKC蛋白的表达.结果DI大鼠逼尿肌培养细胞PKC蛋白表达明显高于DS大鼠(P＜0.01).结论DI大鼠逼尿肌细胞PKC蛋白表达明显升高,逼尿肌细胞PKC信号通路的改变与DI逼尿肌自发兴奋性升高可能有着密切联系.     

蛋白激酶C在大鼠重症急性胰腺炎中的表达

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)家族成员PKCα和PKCδ在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺及肺脏中的动态表达情况和组织病理改变的关系.方法: 胰胆管逆行注射牛黄胆酸钠制成大鼠SAP模型,观察胰腺及肺脏病理学变化,采用免疫组织化学方法分别检测PKCα,PKCδ在SAP大鼠胰腺和肺脏中的表达情况,并进行对比分析.采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测96只大鼠胰腺组织中PKC mRNA的表达情况.结果: 建模后1,6,12和24 h假手术(SO)组胰腺中PKCα表达分别为0.70±0.04,0.71±0.05,0.75±0.04和0.71±0.07;SAP组分别为0.83±0.05,0.95±0.09,1.10±0.10和1.08±0.16,两组各时间点之间差异均有统计学意义(P<0.01).轻型急性胰腺炎(MAP)组大鼠建模后胰腺中PKCα表达分别为0.73±0.04,0.73±0.03,0.85±0.08和0.84±0.06,与SO组各时间点相比,在12 h和24 h差异具有统计学意义(P<0.05),与PKCα相类似,PKCδ的表达在1 h开始增高,12 h达到高峰,且维持时间较长.MAP组PKCδ在12 h达到高峰,但维持时间较短,24 h时有所减低.结论: PKCα在SAP的病程发展中起重要作用.监测PKCα水平可为SAP的早期诊断提供帮助.     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性作用的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)活性的影响,来探讨氯沙坦(Losartan)对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制.方法大鼠随机分为正常对照组(C组)、糖尿病对照组(D组)和糖尿病氯沙坦治疗组(DL组).于24周后,筛洗肾小球,提取肾小球胞浆和胞膜蛋白,利用[γ-32P]ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性;同时测量血、尿肌酐和计算内生肌酐清除率(Ccr).结果D组胞膜PKC的活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、Ccr、24h尿蛋白定量分别与C组相比明显升高,氯沙坦治疗后,DL组胞膜PKC的活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、Ccr、24h尿蛋白定量均明显低于D组(P＜0.05).结论AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏病变有部分保护作用,其机制可能是部分通过下调肾脏PKC活性.     

大鼠脑出血蛋白激酶C与细胞凋亡关系的实验研究

目的研究大鼠脑出血后血肿周围蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）及神经细胞凋亡的表达及其多粘菌素B（polymyxin B,PMB）对上述表达的影响。方法将100只SD大鼠随机分为四组：假手术组、脑出血组、小剂量多粘菌素B干预组[0.4mg/（kg.d）]、大剂量多粘菌素B干预组[0.8mg/（kg.d）],立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠脑出血模型,分别为术后6、12、24、72、120h处死,免疫组织化学法检测血肿周围区PKC、TUNEL阳性细胞（凋亡细胞）数的表达、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）含量、NO（一氧化氮）含量以及大小剂量PMB对其干预后的影响。结果假手术组PKC少量表达,偶见凋亡细胞;脑出血组自6h起PKC、凋亡细胞及TNF-α、NO含量大量增加,72h达高峰,PKC在120h基本降至假手术组,但凋亡细胞TNF-α、NO含量仍处于较高水平,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;大小剂量多粘菌素B干预组均明显抑制PKC、凋亡细胞、TNF-α含量的表达,有统计学意义（P〈0.01）;但PMB剂量的大小差异无统计学意义（P〉0.05）。结论脑出血后血肿周围存在大量PKC表达上调、神经细胞凋亡、TNF-α、NO含量增加,PMB能够明显抑制PKC激活,TNF-α、NO释放,减少血肿周围细胞凋亡,起到神经元保护作用。     

葛根素对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的作用

目的 研究葛根素(Pue)对糖尿病大鼠。肾脏蛋白激酶C(PKC)活性、肾功能及肾脏结构的影响。方法 链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病组、Pue(500、250、125mg／kg)治疗组、维生素E(VitE)组，同时另设正常对照组，给药12周后，测定肾功能及。肾脏指数，ELISA法测定肾脏PKC活性，放免法测定尿蛋白排泄率，并对肾组织进行光镜及电镜观察。结果 糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率、肾脏指数(肾脏质量／体重)、肾小球细胞膜PKC活性明显升高，给予Pue治疗12周后，治疗组糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率较糖尿病组显著降低，肾脏肥大也有明显改善，肾小球细胞膜PKC：活性显著下降，光镜及电镜下肾脏病理改变较糖尿病组有较大改善。结论 Pue可以纠正糖尿病大鼠早期肾脏高滤过、高灌注，并对糖尿病大鼠肾脏病变有一定的保护作用，其部分机制可能是通过下调。肾脏PKC活性而实现的。     

蛋白激酶C对逼尿肌不稳定大鼠逼尿肌细胞钾离子通道影响的实验研究

目的观察蛋白激酶C(PKC)对逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌细胞钾离子通道亚型Kv1.5的影响.方法建立DI大鼠模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫蛋白印迹(Western-blotting)技术检测原代培养的DI及逼尿肌稳定(DS)大鼠逼尿肌细胞Kv1.5的表达及乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、H-7(PKC 特异抑制剂)对DS大鼠逼尿肌培养细胞Kv1.5的影响.结果DS、DI组大鼠膀胱逼尿肌细胞中均有Kv 1.5 mRNA和蛋白表达,DI组和DS PMA组大鼠逼尿肌细胞Kv 1.5 mRNA和蛋白表达显著低于DS组(P＜0.05～0.01), DS PMA组Kv 1.5蛋白表达明显低于DI组(P＜0.05),DS PMA H-7组Kv 1.5 mRNA和蛋白表达显著高于DI组(P＜0.05).结论PKC对逼尿肌钾离子通道Kv 1.5具有明显抑制作用,这可能是导致DI发生的一个重要原因.     

糖尿病大鼠视网膜血管蛋白激酶C同工酶表达模式

目的 :探讨糖尿病大鼠视网膜血管蛋白激酶C(PKC)活性变化及其同工酶表达特性。方法 :采用渗透休克法获取正常及链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜血管。原位PKC催化活性分析法测定两组大鼠视网膜血管PKC活性 ,α、β、γ、δ、ε、ζ-PKC同工酶表达水平则采用Westernblot法。结果 :病程 2月时糖尿病大鼠视网膜血管PKC活性为 346± 18.1PmolesPimin-1·mgprotein-1(单位下同 )较正常对照组 131± 10 .5显著为高 (P <0 .0 5 )。α、β、δ、ζ -PKC分布于正常和糖尿病大鼠血管细胞浆、膜部 ,而γ、ε则无信号 ,α、β、ζ同工酶在糖尿病大鼠视网膜血管膜部较正常对照大鼠显著为高 (P <0 .0 5 ) ,尤以α、β为著 ,光密度 (OD)值分别为对照的 2 82 %± 32 %、340 %± 2 6 %、187%± 14 %。而糖尿病大鼠视网膜血管浆部α、β、ζ -PKC同工酶表达则较对照组显著为低 (P <0 .0 5 ) ,其OD值分别为对照的 71%± 11%、6 3%± 8%、84 %± 6 %。但δ -PKC浆部则较对照组显著增高 ,其OD值为正常对照之 2 0 8%± 13% ,但膜部δ -PKC与正常对照相比较无显著性差异。结论 :糖尿病视网膜病变 (DR)靶组织———视网膜血管中PKC显著激活 ,呈α、β、ζ同工酶从胞浆至胞膜 ,而δ -PKC则从胞膜至胞浆移位激活特征。     

新生Wistar鼠海马CA1区GFAP和Syp的表达

目的动态观察Wistar鼠生后7～21d海马CA1区胶原纤维酸性蛋白(GFAP)和突触素(Syp)的表达并探讨其意义.方法应用免疫组化的方法动态观察Wistar大鼠生后7d、8d、10d、14d、21d海马CA1区GFAP和Syp的表达.结果海马CA1区Syp和GFAP的表达随日龄增加而增加.结论 Wistar大鼠海马CA1区GFAP和Syp的表达随日龄增加而增加,表明新生Wistar大鼠脑于生后大脑处于不断生长发育阶段,测定GFAP和Syp是研究新生鼠脑发育的有效指标之一.     

蛋白激酶C在脂多糖致心肌细胞骨架结蛋白损伤中的作用

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对心肌细胞结蛋白(desmin)结构形态和数量的影响,并探讨蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)信号通路在LPS作用过程中起的作用.方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,随机分为4组,分别是正常对照组、LPS组(100ng/ml LPS)、Calphostin C处理组(40mmol/L Calphostin C 100ng/ml LPS)和12-o-十四烷酰佛波醋酸酯-13(12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate, TPA)处理组(100mmol/L TPA),每组分别处理6h和8h.使用免疫荧光技术标记心肌结蛋白,在共聚焦显微镜下观察细胞内结蛋白的结构、分布并计算细胞内结蛋白荧光强度.结果正常对照组结蛋白均匀分布于除细胞核的胞质内,并在局部有明显的聚集增加,荧光强度为(45.57±2.96);LPS 6h组结蛋白分布和荧光强度与正常组相比差异无统计学意义,LPS 8h组结蛋白在细胞内分布与正常相比差异有统计学意义,且荧光强度显著减弱(31.33±2.23,P＜0.01);Calphostin C 6h和8h处理组的结蛋白分布以及荧光强度与正常组接近;TPA处理6h即可造成结蛋白荧光显著减弱(33.30±1.15,P＜0.01),且结蛋白有异常的纤维样聚集.结论 LPS可以影响心肌细胞内结蛋白的结构、分布和数量,并存在一定的时效关系,而Calphostin C可抑制LPS造成的心肌细胞骨架蛋白结蛋白的改变,而TPA则可在较短的时间内造成与LPS相似的结果,提示PKC可能参与了LPS对结蛋白破坏的过程.     

蛋白激酶C对离体兔心脏的保护作用

目的探讨蛋白激酶C对离体兔心的保护及机制。方法应用蛋白激酶C的激活剂和阻断剂,通过Langendroff离体兔心灌注模型,测定心功能指标、心肌CK-MB、LDH、MDA、SOD含量,计算心肌含水量及检测凋亡细胞,了解蛋白激酶C对心功能的影响。结果缺血预适应组和蛋白激酶C激活组的心肌CK-MB(233·6U/g±24·6U/g,285·9U/g±21·4U/g),LDH(83·9U/g±6·5U/g,91·2U/g±5·4U/g和SOD(201·0U/g±17·4U/g,91·9U/g±22·1U/g)含量均高于对照组(132·5U/g±24·8U/g,74·1U/g±7·4U/g,180·3U/g±16·8U/g)和激活阻断组(135·1U/g±28·8U/g;75·1U/g±8·8U/g,184·5U/g±16·9U/g)(P<0·05),而MDA含量、心肌含水量明显低于对照组和激活阻断组(均P<0·05)。结论蛋白激酶C对离体兔心具有肯定的保护作用。     

L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的表达

目的 研究L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的空间表达情况。方法制备成年大鼠心脏冰冻切片，结合大体位置和HE染色结果快速辨认出窦房结、房室结和结后延伸，采用免疫荧光和免疫印迹技术检测L型钙通道α1C亚单位在大鼠窦房结、房室结、结后延伸、右房、右室的表达，用共聚焦显微镜观察其表达部位，通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行分析。结果荧光呈现点状、斑状或不规则的短线状，主要分布于细胞膜及细胞内的膜性结构，其荧光强度由弱到强依次为窦房结、房室结、结后延伸、右心房、右心室，房室结和结后延伸之间无显著性差异（P〉0．05），其余两两相比均有显著差异（P〈0．05），其中右心房、有心室明显强于窦房结、房室结和结后延伸（P〈0．01）。各部位在相对分子质量200000左右可见一特异性蛋白条带。对蛋白条带进行灰度值分析，结果与免疫荧光相一致。结论L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏分布广泛，在不同部位表达量不同，在工作肌组织的表达量明显高于传导组织．提示钙电流在心脏不同部位有不同的分子基础.     

妊娠高血压综合征大鼠肾脏组织PKC活性变化的研究

目的:观察妊娠高血压综合征(妊高征)大鼠肾脏组织蛋白激酶C(PKC)活性变化,探讨其关系.方法:Takai法检测妊高征大鼠(妊高征组)、正常妊娠大鼠(正常妊娠组)及同龄未孕大鼠(对照组)肾脏组织细胞膜和细胞浆的PKC比活,同时测定尿蛋白、血肌酐、尿素氮,对肾脏组织进行光镜观察.结果:正常妊娠组肾脏组织细胞膜和细胞浆活性明显低于对照组(P<0.01); 妊高征大鼠肾脏组织细胞膜PKC活性明显高于正常妊娠组(P<0.01),而细胞浆PKC活性显著降低(P<0.01).妊高征组肾脏组织细胞膜PKC活性与肾功能变化呈正相关关系.结论:PKC活性升高可能是导致妊高征肾脏病变的机制之一.     

雌激素替代治疗后大鼠下丘脑蛋白激酶C阳性细胞的变化

目的　观察雌性大鼠行去势后及雌激素替代治疗下丘脑蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)阳性神经元的变化 ,通过该模型研究绝经后女性内分泌失调的一些分子机制。方法　将大鼠分为对照组、去势 3个月组和去势后雌激素替代治疗 3个月组 ,用免疫组织化学方法检测了下丘脑PKC阳性细胞的变化。结果　下丘脑视前区、背内侧核、腹内侧核和乳头体核可见PKC阳性细胞的分布 ,正中隆起处未见PKC阳性细胞的分布。去势 3个月组与对照组相比 ,视前区PKC阳性细胞有显著性减少 (P <0 0 5 ) ;雌激素治疗组与对照组相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。去势 3个月组与对照组相比 ,下丘脑其他部位PKC阳性细胞无显著减少 (P >0 0 5 )。结论　下丘脑视前区PKC阳性细胞的减少可能在绝经后女性内分泌失调中起重要的作用。     

胰腺癌组织中蛋白激酶Cα、整合素β1的表达

目的：探讨胰腺组织中蛋白激酶Cα（PKCα）和整合素β1的表达及其临床意义.方法：采用免疫组织化学SP方法,检测56例胰腺癌（高、中分化36例,低分化20例;TNM分期Ⅰ～Ⅱ期24例,Ⅲ～Ⅳ期32例;有淋巴结转移30例,无淋巴结转移26例）及23例正常胰腺组织中PKCα和整合素β1的高表达情况.结果：胰腺癌组织中PKCα和整合素β1高表达率分别为62.50%和71.43%,均高于正常胰腺组织（21.74%,43.48%;P均＜0.05）;PKCα高表达与胰腺癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关,整合素β1高表达与胰腺癌TNM分期和淋巴结转移有关.在胰腺癌组织中,PKCα表达与整合素β1呈正相关.结论：PKCα和整合素β1的表达和（或）功能异常可能共同参与胰腺癌的发生发展,联合检测2种蛋白对于预测胰腺癌转移潜能具有一定参考价值.     

大鼠急性脊髓损伤后tau蛋白表达规律及意义

目的：探讨急性脊髓损伤后Wistar大鼠脊髓组织中tau蛋白动态表达规律及意义.方法：健康Wistar大鼠56只,雌雄不限随机分为两组,其中1组用改良Allen法制备成急性脊髓损伤模型,即作为手术组（48只）;另1组则作为对照组（对照组仅开椎板,不损伤大鼠脊髓组织n=8）.分别在12h、1d、3d、5d、7d、10d取出大鼠在T10及部分T9、T11椎板下的损伤脊髓组织制作蜡块并切片.采用HE染色及免疫组化法测定大鼠脊髓损伤后受损脊髓组织中tau蛋白的表达.结果：Wistar大鼠在急性脊髓损伤后,受损脊髓组织内即出现tau的阳性表达,随着时间的延长,tau蛋白的阳性表达结果逐渐增多;伤后3d阳性表达到达最大表达值,10d表达仍呈阳性且高于对照组.结论：损伤大鼠的脊髓组织后,组织中tau蛋白表达明显增加,且在不同时间点上有一定的变化关系,为急性脊髓损伤后临床的早期干预时机提供了一定的理论依据.     

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的影响

目的探讨阿魏酸钠(SF)对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C(PKC)活性的影响.方法链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠灌胃给予SF 110mg·kg-1.·d-1,治疗8周,测定各组大鼠肾皮质超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、PKC活性及丙二醛含量,观察肾脏病理改变.结果与正常对照组相比,糖尿病对照组大鼠肾重体重、肌酐清除率、24h尿蛋白、肾皮质胞膜PKC活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、肾皮质丙二醛显著升高,肾皮质超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性显著降低,肾脏病理学改变明显,SF治疗组上述指标显著改善.结论 SF可通过抑制肾脏PKC的激活对糖尿病大鼠肾脏产生保护作用.