糖肾汤对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

背景：肾小球系膜细胞是糖尿病肾病致病的主要靶细胞,高糖环境下系膜细胞发生一系列功能改变,导致疾病不断发生发展,应用中药进行干预治疗,对延缓糖尿病肾病的发展具有重要意义.目的：探讨肾小球系膜细胞在高糖环境下增殖情况以及糖肾汤含药血清对其的影响.设计：对照实验.单位：浙江中医学院附属第二医院实验室.材料：以2003-08取自上海市第一人民医院肾内科SD大鼠系膜细胞株作为实验对象,2003-10浙江中医学院实验动物中心的清洁级SD大鼠45只,雌雄各半,体质量（180&;#177;20）g,作为制备含药血清动物.糖肾汤（由大黄、桃仁、虫、黄芪、地骨皮、黄连等组成）,按比例称取后,水煎、过滤、浓缩至含生药3 g/mL.方法：将SD大鼠随机分为正常组、糖肾汤组、卡托普利组各15只.将糖肾汤和卡托普利含药血清分为不同的剂量组作用于系膜细胞体系,正常组每日灌胃相同容量蒸馏水,用锥虫蓝染色法和四唑盐法分别检测用药后对系膜细胞毒性及增殖的影响.主要观察指标：在含药血清刺激后大鼠肾小球系膜细胞活力,及细胞增殖情况.结果：实验大鼠均进入结果分析.①系膜细胞在高糖持续作用下,其增殖受到抑制（与空白组比较P＜0.05）,糖肾汤及卡托普利干预后均可不同程度地逆转上述高糖的抑增殖作用（与高糖组比较P＜0.05）.②各组含药血清干预大鼠肾小球系膜细胞后,无明显毒性作用（细胞活力均达94%以上,与空白组比较P＞0.05）.结论：高糖可抑制系膜细胞增殖,而糖肾汤可刺激系膜细胞增殖.     

迷迭香酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖中氧化应激及炎症介质分泌的影响

目的：观察PDGF—BB诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖过程中氧化与抗氧化系统的改变及炎症介质的分泌变化，并探讨迷迭香酸的干预作用。方法：培养大鼠系膜细胞，以PDGF刺激系膜细胞增殖及迷迭香酸干预。实验设正常对照组、增殖组、单纯迷迭香酸组和迷迭香酸干预组，利用分光法分别测定细胞上清液中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。应用双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中TGF～β1，MCP～1及纤维连结蛋白的蛋白分泌量。结果：经PDGF—BB刺激系膜细胞后超氧化物歧化酶活性降低，丙二醛含量升高；而迷迭香酸干预能促进超氧化物歧化酶活性升高而降低丙二醛的产生。PDGF—BB（20ng／mL）同样刺激肾小球系膜细胞分泌TGF—β1与MCP-1，刺激GMC合成FN蛋白。RA则呈浓度依赖性地抑制肾小球系膜细胞中TGF-β1，MCP-1，FN蛋白分泌。结论：氧自由基、脂质过氧化及炎症介质参与了系膜细胞的增生，而迷迭香酸则能抑制系膜细胞的上述改变，具有抗氧化活性。同时在PDGF—BB诱导的肾小球系膜细胞增殖中，抑制肾球系膜细胞分泌TGF-β与MCP-1，并能抑制肾小球系膜细胞合成纤维连结蛋白。     

螺内酯对醛固酮刺激下大鼠肾小球系膜细胞PAI-1表达的影响

目的探讨醛固酮对体外培养大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物－1（PAl-1）表达的影响及螺内酯的干预作用。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,设正常对照组、醛固酮（10-7mol·L-1）组、不同浓度螺内酯（10-7,10-8,10-9mol·L-1）干预组,48h后收集细胞及上清液,以RT-PCR检测PM-1、醛固酮受体（MR）和保护其配体特异性的11p羟类固醇脱氢酶2（11β-HSD2）的mRNA表达,采用ELISA检测培养细胞上清中PAI-1蛋白的浓度。结果RT-PCR结果,肾小球系膜细胞表达MR和118．HSD2mRNA,醛固酮可显著上调肾小球系膜细胞PM-1mRNA表达,螺内酯可抑制醛固酮诱导的PA／-1mRNA表达,且呈剂量依赖性;ELISA结果示醛固酮组上清液中PAI-1水平明显增加,螺内酯干预组PAI-1水平明显降低并与浓度有关。结论螺内酯与醛固酮竞争结合MR,抑制醛固酮刺激的大鼠。肾小球系膜细胞中PAI-1mRNA的表达和蛋白合成。     

缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞炎症介质的影响

目的 观察缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨缬沙坦对糖尿病肾病的防治作用.方法 高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,于培养12、24、48小时,应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖程度,分别应用免疫细胞化学和蛋白质印迹法检测系膜细胞MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度.结果 高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显(0.815±0.007)A,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高(17.29±1.95)μg/L,缬沙坦干预后MCP-1及ICAM-1表达减弱,细胞增殖受抑制(0.652±0.004)A,Ⅳ型胶原浓度降低(13.19±0.89)μg/L.结论 缬沙坦可下调MCP-1及ICAM-1表达,抑制系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,发挥其独立于降压之外的肾脏保护作用.     

益气养阴活血方对肾小球系膜细胞增殖及ERK通路的影响

目的 观察益气养阴活血方含药血清对高糖条件培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响.方法 制备益气养阴活血方和福辛普利含药血清.将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖培养组、高糖培养+福辛普利含药血清组和高糖培养+三个不同浓度益气养阴活血方含药血清组.培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的表达进行半定量分析,用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 与正常对照组相比,高糖组早期(24 h、48 h)能显著促进系膜细胞增殖,福辛普利和高浓度中药含药血清组均可抑制高糖引起的系膜细胞增殖(P<0.05),两组间无统计学差异(P>0.05).高糖刺激6 h后系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达即明显增高,24 h达到高峰,后逐渐减弱,福辛普利和不同浓度中药含药血清干预后,pERK1/2蛋白水平显著下降(P<0.05),中药组和西药组间无统计学差异(P>0.05).结论 益气养阴活血方能抑制肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,这可能是其临床肾脏保护作用机制所在.     

糖肾汤对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

背景肾小球系膜细胞是糖尿病肾病致病的主要靶细胞,高糖环境下系膜细胞发生一系列功能改变,导致疾病不断发生发展,应用中药进行干预治疗,对延缓糖尿病肾病的发展具有重要意义.目的探讨肾小球系膜细胞在高糖环境下增殖情况以及糖肾汤含药血清对其的影响.设计对照实验.单位浙江中医学院附属第二医院实验室.材料以2003-08取自上海市第一人民医院肾内科SD大鼠系膜细胞株作为实验对象,2003-10浙江中医学院实验动物中心的清洁级SD大鼠45只,雌雄各半,体质量(180±20)g,作为制备含药血清动物.糖肾汤(由大黄、桃仁、虫、黄芪、地骨皮、黄连等组成),按比例称取后,水煎、过滤、浓缩至含生药3 g/mL.方法将SD大鼠随机分为正常组、糖肾汤组、卡托普利组各15只.将糖肾汤和卡托普利含药血清分为不同的剂量组作用于系膜细胞体系,正常组每日灌胃相同容量蒸馏水,用锥虫蓝染色法和四唑盐法分别检测用药后对系膜细胞毒性及增殖的影响.主要观察指标在含药血清刺激后大鼠肾小球系膜细胞活力,及细胞增殖情况.结果实验大鼠均进入结果分析.①系膜细胞在高糖持续作用下,其增殖受到抑制(与空白组比较P＜0.05),糖肾汤及卡托普利干预后均可不同程度地逆转上述高糖的抑增殖作用(与高糖组比较P＜0.05).②各组含药血清干预大鼠肾小球系膜细胞后,无明显毒性作用(细胞活力均达94%以上,与空白组比较P＞0.05).结论高糖可抑制系膜细胞增殖,而糖肾汤可刺激系膜细胞增殖.     

吡格列酮对高糖培养的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达和合成的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂-吡格列酮对肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达和合成的影响,探讨其肾脏保护机制。方法体外培养肾小球系膜细胞,随机分组为正常对照糖（NG组）、高糖（HG组）及高糖＋不同浓度吡格列酮（P1、P2、P3组）。培养48小时后收集各组细胞及上清液,应用RT-PCR方法检测细胞MCP-1mRNA含量,采用ELLSA法检测细胞上清液中MCP-1蛋白浓度。结果 （1）肾小球系膜细胞可表达及合成MCP-1;（2）与NG组比较,高糖刺激后肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达以及细胞上清液中MCP-1蛋白含量显著增高（P〈0.05）;（3）加入吡格列酮干预后,肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达以及细胞上清液中MCP-1蛋白含量显著下降,且呈现浓度依赖性。结论吡格列酮可抑制肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达和蛋白合成,且呈现剂量依赖性,该作用可能与其肾脏保护部分有关。     

罗格列酮对高糖时人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

【目的】探讨高糖对人肾小球系膜细胞（HRMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响，以及过氧化物酶增殖体激动剂罗格列酮对其影响及作用机制。【方法】将HRMC分为三组处理：①正常对照组（糖浓度5．5mmol／L）；②高糖（30mmol／L）组；③高糖加罗格列酮（5μmol／L，10μmol／L）组。用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测MCP-1mRNA表达，用EIISA方法测定细胞上清MCP-1蛋白浓度。【结果】高糖刺激系膜细胞后MCP-1mRNA表达明显升高，蛋白浓度增加，加入罗格列酮后MCP-1表达明显下降。且随罗格列酮浓度增大，作用更明显。【结论】高糖刺激HRMC，其MCP-1表达增强，可能是糖尿病肾病（DN）发病机制中的一个重要途径。罗格列酮能抑制MCp-1mRNA表达及蛋白合成，说明其具有抑制炎症的作用，在预防DN的发生发展中可能有重要意义。     

姜黄素对肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因表达的影响

目的：观察姜黄素对肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）mRNA基因表达水平的影响。方法：将高浓度葡萄糖液及不同浓度的姜黄素液与肾小球系膜细胞共孵育,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法,检测各组细胞PPAR-γ mRNA表达强度。结果：单纯高浓度葡萄糖组肾系膜细胞PPAR-γ mRNA表达量（0.394±0.026）显著低于正常对照组（0.995±0.016）,P〈0.01;当姜黄素的浓度达100mg/L时,其PPAR-γ mRNA积分吸光度比值为0.701±0.04,高于高浓度葡萄糖＋姜黄素（25mg/L）组（0.541±0.018）,显著高于高浓度葡萄糖＋姜黄素（6.25mg/L）组（0.432±0.024）,P〈0.01。结论：姜黄素拮抗高浓度葡萄糖对肾系膜细胞PPAR-γ基因表达的抑制作用,上调PPAR-γ mRNA的表达水平。     

选择性环氧合酶抑制剂NS-398对高糖诱导系膜细胞增殖的影响

目的:研究选择环氧合酶抑制剂NS-398对高糖诱导的系膜细胞抑制作用.方法:空白组,不加任何刺激剂;高糖组,加入30 mmol/L葡萄糖处理;干预组,不同浓度选择性环氧合酶抑制剂NS-398(5、10、20、40μmol/L)加入高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中,分别共同培养0、12、24、48、72 h,用[3H]-亮氨酸掺入法检测细胞蛋白质的从头合成情况,用流式细胞仪分析检测细胞G0-G1周期分布的变化,观察选择性环氧合酶抑制剂NS-398对系膜细胞增殖的影响.结果:高糖刺激的系膜细胞的[3H]-亮氨酸掺入量明显增加,用不同浓度的NS-398共同培养高糖系膜细胞,观察不同时间[3H]-亮氨酸掺入量,选择性环氧合酶抑制剂NS-398在5～40μmol/L浓度范围内,随着时间的延长、浓度的增加,可明显抑制MC[3H]-亮氨酸掺入,且呈浓度和时间依赖性.流式细胞仪检测干预组细胞G0-G1周期百分比较高糖组差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论:选择性环氧合酶抑制剂NS-398能抑制高糖诱导系膜细胞增殖,促进细胞凋亡.     

吡格列酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β-1的影响

目的观察吡格列酮(PIO)对高糖(HG)培养的肾小球系膜细胞(MCs)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和转化生长因子β-1(TGF-β1)表达的影响,探讨PIO肾保护作用及机制。方法体外培养MCs,取对数生长期的细胞以2×105/孔的密度接种于6孔细胞培养板,同步化后随机分为正常对照(NG)组、HG组、p38MAPK抑制剂(S)组及PIO(P)组。Western blot测定磷酸化p38MAPK(p-p38)和总p38MAPK(t-p38)蛋白含量,半定量RT-PCR测定细胞TGF-β1 mRNA表达情况。结果与NG组比较,HG组细胞内p-p38MAPK含量和TGF-β1mRNA表达增强(P0.01);与HG组比较,p38MAPK抑制剂显著抑制HG刺激的细胞内p38MAPK活性和TGF-β1表达(P0.05);与HG组比较,P组细胞内上述变化亦明显降低(P0.05),与S组相似;p38MAPK活性和TGF-β1表达呈正相关(r=0.587,P0.01)。结论 PIO可抑制肾小球系膜p38MAPK通路,降低TGF-β1表达,该作用可能与其肾脏保护部分有关。     

miR-155在糖尿病肾病大鼠及大鼠肾系膜细胞表达的研究

目的：探讨miR-155表达水平在链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病肾病（DN）大鼠及大鼠肾系膜细胞中是否存在同样的变化。方法：将雄性清洁sD大鼠8只随机分成实验组（DN组,n=4）和对照组（Nc组,n=4）,DN组大鼠腹腔注射足量STZ诱导DN大鼠。观察血糖及肾脏结构变化,用real—timePCR检测肾脏miR-155表达水平;大鼠肾系膜细胞分为高糖培养组和正糖培养组,培养24h、48h、72h,用real-timePCR检测miR-155表达水平。结果：与对照组相比,DN组大鼠肾脏miR-155表达水平下降（P〈0．05）：高糖培养的大鼠肾系膜细胞miR-155表达水平较正糖培养的表达水平下降（P〈0．05）,于48h表达水平最低。结论：miR-155在高糖培养大鼠肾系膜细胞表达下降。     

普伐他汀对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质积聚的影响

摘要 目的：探讨普伐他汀对高糖培养的肾小球系膜细胞(MC)增殖和细胞外基质（ECM）积聚的影响。方法：大鼠MC分别培养在低糖组, 高糖组及普伐他汀组。CCK-8测定MC增殖，ELISA法检测细胞培养上清液Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 (TIMP-1)的分泌情况；明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的活性，RT-PCR 法检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达。结果：与低糖组相比，高糖能促进Col-Ⅳ、FN合成，抑制MMP-2 、MMP-9活性，增加TIMP-1、TGF-β1、CTGF的分泌，而普伐他汀能一定程度上逆转上述现象。结论：普伐他汀能抑制高糖环境下的MC增殖，并通过抑制 ECM 的合成、促进ECM的降解减少ECM积聚，机制可能与抑制TGF-β1、CTGF有关。     

单宁酸对高糖及AGEs引起肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原生成的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对高糖及糖化终产物(AGEs)引起的肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Ⅳ型胶原生成的影响。方法体外培养肾小球系膜细胞,分别用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)、不同浓度AGEs(25、50、100、200及400 mg/L)处理,同时用不同浓度单宁酸(10、20、40及80μmol/L)进行干预,设立相应对照组,于不同时间段(24、48 h)用MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测培养48 h后条件培养基中Ⅳ型胶原的含量。结果葡萄糖及AGEs均能明显促进系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的生成,与对照组比较具有显著差别。单宁酸可明显抑制高糖或AGEs引起的系膜细胞增殖,能减少Ⅳ型胶原的生成,并呈一定浓度依赖关系。结论单宁酸能抑制高糖或AGEs引起的GMC增殖,并能减少Ⅳ型胶原生成。     

Morin inhibits cell proliferation and fibronectin accumulation in rat glomerular mesangial cells cultured under high glucose condition

Morin, is a natural bioflavonoid isolated from Chinese herbs of the Moraceae family, has been reported to possess antidiabetic activity. However, the role of morin on glomerular mesangial cells (MCs) proliferation and extracellular matrix (ECM) accumulation in diabetic condition is still unclear. Therefore, in this study, we investigated the role of morin on cell proliferation and ECM accumulation in rat glomerular MCs cultured under high glucose (HG) condition. Our results showed that morin inhibited HG-induced MC proliferation, arrested HG-induced cell-cycle progression, reversed HG-inhibited expression of p21^Waf1/Cip1 and p27^Kip1. It also inhibited HG-induced ECM expression, ROS generation and NOX4 expression in MCs. Furthermore, morin suppressed HG-induced phosphorylation of p38 MAPK and JNK1/2 in MCs. These data suggest that morin inhibits HG-induced MC proliferation and ECM expression through suppressing the activation of p38 MAPK and JNK signaling pathways. Thus, morin may be useful for the prevention or treatment of diabetic nephropathy.