全反式维甲酸联合阿司匹林对体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖和促凋亡的作用及其机制

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）联合阿司匹林（ASA）体外抑制肺癌A549细胞增殖,促凋亡作用和机制。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞,5,10 μmol·L^-1的ATRA单独及分别联合5,10 μmol·L^-1的ASA进行干预48 h、72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法观测药物作用48 h后细胞凋亡状态;RT-PCR法检测药物作用后肺腺癌A549细胞COX-2 mRNA的表达;Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、COX-2和caspase-3蛋白的表达。结果： ATRA与ASA联用对A549增殖具有协同作用;TUNEL法结果显示ATRA可诱导A549细胞凋亡,与ASA联用凋亡率显著升高（P<0.05）;RT-PCR显示A579细胞中COX-2 mRNA呈现高表达状态,ASA可下调COX-2表达,ATRA无此作用;Western blot结果显示ATRA和ASA协同作用使A549细胞中Bcl-2、COX-2蛋白表达受到抑制,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax值降低,对凋亡通路的影响大于单药作用（P<0.05）。结论： ASA联合ATRA可协同抑制肺腺癌细胞A549的增殖及以及促进其发生凋亡,其作用机制可能是ASA通过抑制COX-2蛋白表达,与ATRA共同通过Bcl/caspase通路诱导肿瘤凋亡实现的。     

毛冬青甲素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及迁移的影响

目的观察毛冬青甲素(ilexonin A,IA)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,并探讨IA是否通过上调CXCR4的表达促进大鼠BMSCs迁移。方法采用MTT比色法检测IA(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400、800 mg·L^-1)预处理BMSCs 24、48、72 h,观察对BMSCs增殖的影响,确定最佳药物浓度和最佳作用时间。用最佳浓度的IA干预第3代BMSCs 48 h,Transwell检测BMSCs迁移能力,Western blot法检测CXCR4的表达水平。结果 MTT结果显示,IA孵育BMSCs 24、48 h,与对照组相比,100~800 mg·L^-1组的细胞增殖明显减少(P<0.05);IA孵育BMSCs 48h,与对照组相比,6.25、3.125 mg·L^-1组细胞增殖明显增加(P<0.05);IA孵育BMSCs 72 h,与对照组相比,12.5~800mg·L^-1组细胞增殖明显减少(P<0.05),提示IA 6.25、3.125 mg·L^-1剂量组于48 h预处理BMSCs是最优选择。Transwell细胞迁移实验表明,IA(6.25、3.125 mg·L^-1)预处理BMSCs 48 h明显增强BMSCs运动迁移能力(P<0.05),且迁移与IA浓度无关,CXCR4拮抗剂AMD3100可完全阻断其促迁移效应。Western blot显示,IA(6.25、3.125 mg·L^-1)预处理BMSCs 48 h,上调CXCR4蛋白表达(P<0.05)。结论 IA可以促进BMSCs的增殖,并通过上调CXCR4的表达,提高BMSCs的迁移能力。     

苯甲酸钠对PC12细胞的增殖抑制及MAPKs活化表达的影响

目的观察苯甲酸钠(sodium benzoate,SB)对PC12肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖的抑制作用及在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点,为进一步了解SB的神经毒性及相关的分子机制提供实验依据。方法大鼠PC12细胞在含0~50 mmol/L浓度SB的培养基中培养24 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Western blot检测JNK和ERK磷酸化水平的改变。结果 SB可呈一定的时间和浓度依赖性抑制PC12细胞增殖,其中40 mmol/L SB作用24 h对PC12细胞的抑制率为47.81%±5.23%;Western blot结果显示,SB处理可增加JNK的磷酸化水平并降低基础的ERK磷酸化水平;预孵SP600125 30 min后再加入SB,则能短暂降低JNK的磷酸化水平。结论 SB能够明显抑制PC12细胞的增殖,JNK和ERK信号转导通路可能参与了SB对PC12细胞的毒性作用机制。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌SPC-A1细胞增殖及SFRP1、MGMT甲基化蛋白表达的影响

目的观察甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肺癌SPC-A1细胞增殖、细胞划痕和凋亡的影响,探讨抑癌基因分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)基因启动子区DNA甲基化mRNA和蛋白在其中的表达和意义。方法CCK-8法检测不同浓度的5-Aza-CdR对人肺癌SPC-A1细胞增殖影响,划痕实验测定5-Aza-CdR对SPC-A1细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258染色检测(0、3、10、30μmol·L^-1)5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞24h后细胞凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测SPC-A1细胞中SFRP1和MGMT的mRNA、蛋白表达。结果5-Aza-CdR可以浓度梯度的抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,IC 50为21.2μmol·L^-1;5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^-1)作用48 h后,肺癌SPC-A1细胞划痕愈合分别为对照组的(92.4±2.6)%、(83.6±4.2)%、(76.7±4.5)%;5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞后,出现典型的细胞凋亡形态学改变;不同浓度5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^-1)处理SPC-A1细胞24 h后,SFRP1、MGMT mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论5-Aza-CdR可抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,抑制肺癌细胞划痕修复和促进凋亡,可能与升高MGMT和SFRPl的甲基化表达有关。     

褐藻素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究褐藻素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度褐藻素处理MDA-MB-231细胞后,采用CCK-8法测定细胞抑制率、Live/Dead^TM细胞成像试剂盒进行活死细胞荧光分析,TUNEL法、Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达,采用试剂盒检测Caspase-9和Caspase-3/7活性。结果:褐藻素处理MDA-MB-231细胞24 h时,16μmol·L^-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC₅₀为68.79μmol·L^-1;处理48 h时,8μmol·L^-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC₅₀为38.08μmol·L^-1;褐藻素对乳腺癌细胞的细胞活力和增殖的抑制作用表现出一定的时间和剂量依赖性(P<0.05)。与阴性对照组相比,16,32,64μmol·L^-1     

基于细胞代谢组学的柴胡皂苷b2对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的 研究柴胡皂苷b2(SSb2)对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法 (1)将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),CORT(100～800μmol·L^-1孵育24 h)组和SSb2(1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50和100μmol·L^-1孵育24 h)组,MTT法检测细胞存活率。(2)将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),模型组(CORT 400μmol·L^-1孵育24 h)和模型+SSb2组(SSb2 1.5625,3.125,6.25,12.5和25μmol·L^-1预处理3 h,去上清,然后加入CORT 400μmol·L^-1及对应浓度SSb2共孵育24 h)。MTT法检测细胞存活率,微板法检测PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率。(3)将细胞分为细胞对照组、模型组和模型+SSb2 12.5μmol·L^-1组,采用AnnexinV-FITC/PI流式...     

吉非替尼通过调控hPTTG1表达抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡的机制研究

目的：吉非替尼和人垂体瘤转化基因1（hPTTG1）对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法：以不同浓度吉非替尼干预A2780细胞,MTT法检测细胞增殖。流式细胞仪、qRT-PCR和Western blot实验检测20 μmol·L^-1吉非替尼对A2780细胞凋亡及细胞中hPTTG1表达的影响。敲减hPTTG1或过表达hPTTG1联合20 μmol·L^-1吉非替尼处理,qRT-PCR和Western blot、MTT和流式细胞术检测细胞中hPTTG1表达及细胞增殖、凋亡情况变化。结果：吉非替尼能够有效抑制A2780细胞增殖（P<0.05）,呈浓度依赖性。以20 μmol·L^-1吉非替尼干预A2780细胞,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中hPTTG1在mRNA和蛋白水平的表达显著下调（P<0.05）。将hPTTG1 siRNA转染至A2780细胞后,细胞hPTTG1表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖抑制率和凋亡率增大（P<0.05）;过表达hPTTG1可减弱吉非替尼对A2780细胞增殖的抑制及凋亡的促进作用。结论：吉非替尼可抑制A2780细胞增殖并诱导凋亡,这一结果可能是通过抑制hPTTG1表达来完成。     

桑皮苷A对人肺癌细胞A549紫杉醇化疗的增敏作用及其机制研究

目的 研究桑皮苷A(Mul A)对人肺癌细胞A549紫杉醇(Taxol)化疗作用的影响及机制。方法 将A549细胞分为溶媒对照组(二甲基亚砜)、紫杉醇单用组(50 nmol·L^-1紫杉醇处理48 h)、桑皮苷A组(10、20、40μmol·L^-1 桑皮苷A处理48 h)、紫杉醇联用桑皮苷A组(50 nmol·L^-1 紫杉醇+10、20、40μmol·L^-1桑皮苷A处理48 h)。用噻唑蓝(MTT)法检测药物对细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡和细胞周期分布变化的影响;分别用聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测桑皮苷A对A549细胞中P-糖蛋白(P-gp)mRNA表达、蛋白表达及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路相关蛋白的影响。结果 桑皮苷A可显著增强紫杉醇对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用,其中20, 40μmol·L^-1桑皮苷A与紫杉醇联用可分别使细胞存活率显著下降约17.28%和27.38%。同时,...     

银杏达莫注射液联合鼠神经生长因子治疗重型急性颅脑损伤的临床研究

目的 探讨消岩汤逆转肺癌顺铂（DDP）耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;siRNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Werstern blotting检测mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Western blotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白（P-gp）和肺耐药相关蛋白（LRP）蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1（YAP1）、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论 消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

藁本内酯对帕金森病细胞模型的保护作用及其机制研究

目的 研究藁本内酯对帕金森病细胞模型的保护作用及其作用机制。方法 取对数生长期的SK-N-SH细胞使用200μmol·L^-1的MPP⁺处理48 h,构建帕金森病细胞模型；以正常培养基培养的细胞作为对照组。藁本内酯组加入终浓度为30.0μmol·L^-1藁本内酯进行培养；P79350组加入30.0μmol·L^-1的藁本内酯后，实验结束前1 h加入50μmol·L^-1的P79350处理细胞；对照组和MPP⁺组加入不含药物的培养基培养。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力；以流式细胞术检测细胞周期情况和细胞凋亡率；以蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(p38 MAPK/JNK)信号通路和增殖、凋亡相关蛋白的表达水平。结果 对照组、MPP⁺组和10.0、20.0、30.0、50.0、100.0和200.0μmol·L^-1藁本内酯组的细胞存活率分别为(100.00±1.91)%、(35...     

麦冬皂苷B促进细胞铁死亡抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖的机制

目的：研究麦冬皂苷B对A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法：细胞计数试剂盒（CCK-8）检测不同浓度麦冬皂苷B处理后A549细胞的存活率;将A549细胞分为对照组和麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组干预24 h,分析细胞克隆形成情况;DCFH-DA、C11-BODIPY、FeRhonox-1荧光探针分别检测细胞内活性氧、脂质过氧化水平、Fe²⁺浓度的荧光强度变化;GSH和MDA试剂盒分别检测细胞内GSH和MDA水平;Real-time PCR法和Western blot法分别检测SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Transferrin、Nrf2、HO-1的mRNA水平和蛋白表达情况。结果：与对照组比较,A549细胞存活率随麦冬皂苷B药物浓度增大逐渐降低,其IC₅₀为 23.7 μmol·L^-1。麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著细胞克隆形成（P<0.05）。与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内脂质过氧化水平的荧光强度和脂质过氧化产物MDA 积累（P<0.05）,且呈剂量依赖性,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内ROS和亚铁离子的荧光强度（P<0.05）,明显降低细胞内GSH含量（P<0.05）。RT-PCR结果显示,与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11 mRNA 水平（P<0.05）,只有OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC40A1 的mRNA水平;Western blot结果显示,与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）。与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低Nrf2的mRNA水平和Nrf2和HO-1的蛋白水平（P<0.05）,而OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低HO-1的mRNA水平（P<0.05）。结论：麦冬皂苷B能够抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖,其机制可能与抑制Nrf2/HO-1抗氧化通路促进细胞铁死亡有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人脐带动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的: 考察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)对体外培养的人脐带动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的抑制作用及作用机制,为临床治疗相关的心血管疾病提供参考。方法: 组织块贴壁法原代培养HUASMCs,选传至3代的细胞进行免疫组织化学染色法鉴定;MTT比色法,测定EGCG(109.08 μmol·L^-1)在不同作用时间(3~96 h)和不同作用浓度(1.09~1 090.75 μmol·L^-1)下对HUASMCs增殖的抑制作用;RT-PCR法,测定EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs表达IL-6 mRNA的影响;ELISA法,测定EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs分泌IL-6水平的影响。结果: EGCG在各个检测时间点均可抑制体外培养HUASMCs的增殖(P<0.01),3~48 h抑制作用随作用时间延长而增加,48 h增殖抑制最强,72 h,96 h与48 h增殖抑制作用相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EGCG各浓度对HUASMCs体外增殖均有抑制作用(P<0.05或P<0.01),EGCG呈剂量依赖性,IC₅₀为413.39 μmol·L^-1。EGCG(21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs表达IL-6 mRNA有抑制作用(P<0.01)。EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)可抑制HUASMCs分泌IL-6(P<0.05)。结论: EGCG对HUASMCs的体外增殖有抑制作用。EGCG可抑制HUASMCs IL-6 mRNA的表达和IL-6因子的分泌。     

灯盏花素对张氏肝细胞中CYP3A4和CYP2C19的影响和机制

目的：观察灯盏花素对人张氏肝细胞中孕烷X受体（PXR）及细胞色素P450 3A4（CYP3A4）和细胞色素P450 2C19（CYP2C19） mRNA和蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花素对CYP3A4和CYP2C19的影响及其作用机制。方法： MTT法检测不同浓度的灯盏花素对张氏肝细胞活力的影响;采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测不同浓度灯盏花素对张氏肝细胞中PXR、CYP3A4及CYP2C19 mRNA的表达;采用Western-blot检测不同浓度的灯盏花素对CYP3A4和CYP2C19蛋白的表达影响。结果： MTT结果表明不同浓度的灯盏花素处理张氏肝细胞24 h、48 h后的IC₅₀分别为9 768.8、1 372.8 μmol·L^-1,IC₁₀分别为2 689.2、154.4 μmol·L^-1;RT-qPCR结果表明灯盏花素对CYP3A4和PXR mRNA的影响呈抑制作用,对CYP2C19 mRNA的影响呈不同程度的促进作用;Western-blot结果表明灯盏花素对CYP3A4蛋白的影响呈抑制作用,对CYP2C19蛋白的影响呈促进作用。结论：灯盏花素对CYP3A4的抑制作用可能通过抑制PXR途径;对CYP2C19的促进作用可能不经PXR通路。     

贝伐珠单抗单药及联合化疗对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的： 探究贝伐珠单抗单药及联合紫杉醇加卡铂给药,对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响。方法： 体外培养Ishikawa细胞,MTT法检测贝伐珠单抗（Bev）、紫杉醇（T）、卡铂（C）抑制Ishikawa细胞增殖能力的变化,并计算半数抑制浓度（IC₅₀）。以不同浓度的Bev将实验设为4组,分别为A组：对照组;B组：低浓度组（Bev 2.5 mg·mL^-1）;C组：中浓度（Bev 5.5 mg·mL^-1）;D组：高浓度组（Bev 11 mg·mL^-1）。采用MTT法在24,48,72 h分别检测A、B、C、D 4组对Ishikawa细胞抑制增殖的作用。同时实验根据IC₅₀值还将不同浓度的Bev联合紫杉醇、卡铂分为4组,分别为a组（Bev 5.5 mg·mL^-1）;b组（Bev 2.5 mg·mL^-1+卡铂7.0 mg·mL^-1+紫杉醇10 μg·mL^-1）;c组（Bev 5.5 mg·mL^-1+卡铂7.0 mg·mL^-1+紫杉醇10 μg·mL^-1）;d组（Bev 11 mg·mL^-1+卡铂7.0 mg·mL^-1+紫杉醇10 μg·mL^-1）采用MTT法检测对Ishikawa细胞的抑制增殖作用;用Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪分析48 h贝伐珠单抗A、B、C、D四组对Ishikawa细胞凋亡的影响。结果： MTT法测定出A、B、C、D 4组药物对Ishikawa细胞体外增殖抑制作用显著,并随着剂量的增大、时间的延长,抑制作用也明显增强;MTT法显示不同浓度Bev联合紫杉醇、卡铂,a、b、c、d 4个组均显著抑制Ishikawa细胞的增殖,与a组相比,Bev（5.5 mg·mL^-1）+紫杉醇、卡铂组对Ishikawa细胞有显著抑制增殖作用（P<0.05）,Bev（11 mg·mL^-1）+紫杉醇、卡铂组对Ishikawa细胞表现出更为显著的抑制增殖作用（P<0.01）;通过流式细胞仪检测48 h后A、B、C、D 4组均能诱导细胞的凋亡,且随着剂量增加作用也增强。与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论： 贝伐珠单抗单药及联合卡铂和紫杉醇给药,均能在体外抑制人子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞增殖反应,且呈剂量和时间依赖性。     

南蛇藤多萜通过抑制Chk1介导胃癌细胞DNA损伤并诱导其凋亡

目的从DNA损伤应答角度探讨南蛇藤多萜(the total terpenoids of Celastrus orbiculatus Thunb.,TTC)对胃癌细胞的抑制作用。方法CCK-8实验考察不同浓度(0、20、40、80、160、320 mg·L^-1)的南蛇藤多萜对胃癌细胞的毒性影响;克隆形成率实验检测TTC对胃癌细胞的克隆形成的影响;彗星实验分析南蛇藤多萜对胃癌细胞DNA的影响;Western blot实验检测DNA损伤相关蛋白γH2AX、Poly-PAR、p-Chk1以及cleaved-PARP1的影响。结果TTC在24 h,48 h,72 h对AGS和MKN-45细胞的IC 50分别是421.1、99.68、58.57 mg·L^-1和308.2、124.1、68.21 mg·L^-1;克隆形成实验表明5、10 mg·L^-1的TTC对AGS和MKN-45细胞的克隆形成抑制率分别为29.67%、61.46%和42.73%、64.39%;TTC能够加重胃癌细胞DNA损伤而同等剂量对正常胃粘膜上皮细胞GES-1细胞DNA几乎无损伤;TTC能够增加DNA单双链断裂Poly-PAR、γH2AX蛋白的表达;抑制Chk1的磷酸化水平表达,并增加cleaved-PARP1的蛋白表达。结论TTC能够抑制DNA损伤应答激酶Chk1的激活,从而诱导胃癌细胞DNA单双链断裂加剧最终诱导细胞凋亡。     

氮网球花定碱盐酸盐对活化T细胞增殖的抑制作用

目的 探究氮网球花定碱盐酸盐(NMHC)抑制活化T细胞增殖的作用机制.方法 Ficoll法提取分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠法纯化出PBMC中的T细胞,抗人CD3/CD28抗体活化纯化后的静息T细胞.NMHC 0.125,0.5,2和8μmol·L-1与静息T细胞作用,用流式细胞术检测细胞毒性(96 ...     

氯通道参与姜黄素诱导的乳腺癌MCF-7凋亡

目的： 探讨姜黄素（curcumin）诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡性途径中氯通道是否参与。方法： MTT检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用,及用氯通道阻断剂5-nitro-2-（3-phenylpropyl-amino）-benzoate （NPPB）预孵2 h后再加入姜黄素的增殖抑制作用;流式细胞术验证姜黄素诱导细胞的凋亡;采用全细胞膜片钳技术记录加入姜黄素后,细胞氯电流的变化。结果： （1）姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。NPPB组与单加入姜黄素组相比,细胞生存率存在明显差异,提示阻滞氯通道可导致姜黄素抑制MCF-7细胞增殖的作用减弱。（2）流式结果表示,加入姜黄素（25 μmol·L^-1）24 h后凋亡率33.16%;而姜黄素（25 μmol·L^-1）+NPPB （100 μmol·L^-1）组凋亡率仅为9.16%,相比对照组（6.26%）、NPPB组（7.31%）,氯通道阻断剂明显抑制姜黄素诱导的MCF-7乳腺癌细胞的凋亡,且对早期凋亡的抑制作用明显。（3）全细胞膜片钳技术结果,细胞外灌流姜黄素（25 μmol·L^-1）可激活乳腺癌细胞MCF-7氯通道的开放,产生氯电流,翻转电位（－3.18±1.30） mV,外向电流密度（3.16±1.42） pA·pF^-1,内向电流密度为（－2.76±1.38） pA·pF^-1,该电流可被氯通道阻断剂NPPB、DIDS完全抑制,细胞外灌流高渗溶液亦可完全抑制该电流。结论： 姜黄素可能通过激活容积敏感性氯通道而诱导细胞的凋亡,氯通道的激活可能在姜黄素诱导肿瘤凋亡通路中起着重要的作用。     

来那替尼对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的:探讨来那替尼对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:以0,0.5,1和2 μmol·L^-1四种浓度的来那替尼处理人乳腺癌细胞BT474,MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对细胞生长周期及凋亡的影响;蛋白免疫印迹法检测其对细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。结果:MTT实验结果表明来那替尼可显著抑制人乳腺癌细胞的增殖,2 μmol·L^-1来那替尼处理96 h后,其细胞存活率为31%;流式细胞分析结果表明来那替尼可将BT474细胞阻滞在G₀/G₁期,2 μmol·L^-1来那替尼阻滞效果最为明显,处于G₀/G₁期的细胞百分比为76%;来那替尼也可促进细胞凋亡,2 μmol·L^-1剂量时凋亡率为19.3%。蛋白免疫印迹结果表明来那替尼可减弱细胞内AKT、mTOR的磷酸化蛋白表达水平。结论:来那替尼可能通过抑制细胞内PI3K-AKT-mTOR信号通路促进乳腺癌细胞凋亡,为乳腺癌的治疗提供理论依据。     

阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤的抑制作用及机制研究

目的探讨抗血管生成药物阿帕替尼与常用化疗药物阿霉素联合应用对外周T细胞淋巴瘤Hut78细胞株的抑制作用以及相关分子作用机制,为开发外周T细胞淋巴瘤治疗新方法提供实验依据。方法将Hut78细胞分为不同浓度药物处理组:阿帕替尼单药(10、20、40、60μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2、4μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1、(60+1)μmol·L^-1、(60+2)μmol·L^-1],分别作用72 h,采用CCK-8法检测药物对细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]}作用24 h后对Hut78细胞凋亡的影响。采用流式细胞术检测不同浓度阿帕替尼(10、20、40μmol·L^-1)作用24 h后对Hut78细胞周期的影响。采用蛋白印迹法检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]}作用24 h后,Hut78细胞中PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白Bcl-2、Casepase-3、Bax的表达变化。结果不同浓度(10、20、40、60μmol·L^-1)的阿帕替尼作用72 h后,细胞抑制率分别为(13.42±2.19)%、(19.52±4.16)%、(31.49±3.16)%、(52.88±3.37)%,72 h的IC₅₀值为(59.34±0.31)μmol·L^-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义(χ²=10.116,P=0.018);不同浓度(1、2、4μmol·L^-1)的阿霉素分别作用72 h后,细胞抑制率分别为(15.82±3.23)%、(31.70±4.79)%、(42.34±5.23)%,72 h的IC₅₀值为(5.52±0.18)μmol·L^-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义(χ²=10.532,P=0.015);阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1、(60+1)μmol·L^-1、(60+2)μmol·L^-1]作用72 h的细胞抑制率分别为(51.70±2.09)%、(56.62±4.83)%、(61.35±1.79)%、(65.13±3.88)%。两药的联合指数(CI)<1,说明二者具有药物协同作用。阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)作用24 h的细胞凋亡率分别为(15.65±0.75)%、(13.85±2.15)%、(23.60±1.30)%,阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]作用24h的细胞凋亡率分别为(27.00±1.90)%、(33.20±2.30)%,各药物处理组与对照组[(6.10±0.90)%]比较,差异有统计学意义(χ²=16.251,P=0.006)。不同浓度(10、20、40μmol·L^-1)的阿帕替尼作用24 h后,G₀/G₁期细胞比例随浓度升高而升高[(49.27±0.45)%、(50.34±1.24)%、(59.16±1.23)%],S期细胞比例随浓度升高而降低[(42.81±2.22)%、(39.19±2.71)%、(34.08±1.01)%],各药物处理组与空白对照组[G₀/G₁期(39.26±0.65)%,S期(49.40±2.52)%]比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)以及阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]作用24 h后,PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、p-Akt和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平呈下降趋势,促凋亡蛋白Casepase-3和Bax的表达水平呈上升趋势,Akt蛋白的表达水平无明显变化,各药物处理组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2、Casepase-3及Bax蛋白表达水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿帕替尼可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,同时具有细胞周期阻滞作用,其作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路激活实现的。阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤细胞具有协同抑制作用。