ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤中的表达及其与转移的关系

目的 建立裸鼠鼻咽癌转移模型并探讨 E-选择素（ELAM-1）与鼻咽癌转移的相关性。方法 将鼻咽癌5-8F细胞悬液注射于裸鼠左后肢爪垫，观察裸鼠状态、成瘤情况并测量裸鼠体重及移植瘤长短径；采用连续病理切片苏木精-伊红染色观察移植瘤及转移情况，将16只人鼻咽癌荷瘤裸鼠分为转移组和非转移组；采用免疫组织化学法检测两组移植瘤组织中ELAM-1的表达。 结果 16只裸鼠均成瘤，成瘤率为100.0%，其中10只裸鼠出现转移瘤，转移率为62.5%。建模前，两组裸鼠体重差异无统计学意义［（13.83±0.56）g vs （14.62±0.30） g，t=1.026，P=0.071］。建模后4~7周，裸鼠瘤体体积呈指数增长，且转移组移植瘤增长速度较非转移组快，非转移组裸鼠瘤体体积小于转移组［（198.91 ± 163.29） mm³ vs （268.76 ±174.31） mm³，t=4.376，P=0.005］。ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤、淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达均为阳性，主要表达于细胞膜。转移组移植瘤光密度值高于非转移组（0.4497±0.0705 vs 0.0435±0.0082，t=4.388，P＝0.001）。结论 本研究成功构建稳定性好、转移率高的鼻咽癌裸鼠移植瘤转移模型，且ELAM-1在裸鼠移植瘤中高表达，可促进鼻咽癌裸鼠移植瘤生长和转移。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米对食管鳞状细胞癌生长的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对食管鳞状细胞癌生长的影响。方法 基于全基因组测序数据,利用药物靶标数据库DGIdb筛选食管鳞状细胞癌相关药物靶基因,采用DAVID软件进行KEGG信号通路富集分析。采用MTT法检测硼替佐米对KYSE30、KYSE180、KYSE150、TE1、KYSE510等5株食管鳞状细胞癌细胞生长的影响,以DMSO作用为相应对照组。裸鼠体外成瘤后分别腹腔注射生理盐水（对照组）及硼替佐米（硼替佐米组）,观察硼替佐米对裸鼠移植瘤体积及重量的影响;免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤细胞Ki-67蛋白的表达。结果 469例食管鳞状细胞癌的基因组学测序数据在DGIdb数据库中共鉴定出307个药物靶基因,突变频率>2.5%的显著突变药物靶基因包括PIK3CA、NOTCH1、CDKN2A、ERBB4等;药物靶基因富集的信号通路有RTK-RAS、PI3K/AKT/mTOR、NOTCH、ERBB信号通路、细胞周期和蛋白酶体途径等。MTT实验结果显示,硼替佐米处理后,5株食管鳞状细胞癌细胞的增殖能力均较对照组降低（P<0.05）;与对照组相比,硼替佐米组裸鼠移植瘤体积减小［（1 909.18±533.40） mm³ vs （1 065.83±283.94） mm³,P＝0.007］,移植瘤重量降低［（1.60±0.36） g vs （0.98±0.30） g,P＝0.009］。免疫组织化学法检测结果显示,与对照组比较,硼替佐米组裸鼠移植瘤组织中Ki-67表达降低（86.32±4.51 vs 43.83±3.22,P＝0.001）。结论 蛋白酶体抑制剂硼替佐米在体外和体内均可抑制食管鳞状细胞癌细胞生长。     

中性粒细胞与淋巴细胞比值评估老年中晚期宫颈鳞状细胞癌患者同放化疗的疗效及预后的价值

目的 探讨老年中晚期宫颈鳞状细胞癌患者治疗前中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）与同步放化疗疗效及预后的关系。方法 回顾性分析2014年1月至2018年12月青岛市中心医院行同步放化疗的103例老年中晚期（ⅡB~ⅢB期）宫颈鳞状细胞癌患者的临床资料,分为高NLR组（NLR≥3.48）和低NLR组（NLR＜3.48）,比较两组疗效,并分析影响预后的因素。 结果 高NLR组有效率明显低于低NLR组（57.69% vs 84.31%,χ²=8.840,P=0.004）。NLR与患者年龄、病灶大小、组织分化程度无关（P>0.05）,与FIGO分期和淋巴结转移有关（P<0.05）。高NLR组中位OS低于低NLR组（24.0个月 vs 46.0个月,χ²=7.187,P=0.007）。多因素Cox回归分析显示,NLR≥3.48是影响老年中晚期宫颈癌鳞状细胞患者OS的独立危险因素（HR=1.937,95%CI：1.086~3.456,P=0.025）。结论 老年中晚期宫颈鳞状细胞癌患者治疗前NLR高同步放化疗疗效较差,预后不良。     

沉默VEGF对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R侵袭迁移的影响

目的 探讨沉默血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R迁移和侵袭能力的影响。方法 制备含VEGF-shRNA的慢病毒载体（VEGF-LV1、VEGF-LV2、VEGF-LV3）和对照shRNA重组慢病毒（VEGF-NC）,并转染人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R,建立稳定沉默VEGF细胞（CNE-LV1、CNE-LV2和CNE-LV3）和阴性对照细胞（CNE-NC）。采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞转染效果,划痕实验和Transwell小室实验检测VEGF沉默后细胞的迁移和侵袭能力。结果 成功构建VEGF-shRNA重组慢病毒并建立了稳定沉默VEGF细胞CNE-LV3。划痕实验和Transwell小室迁移实验显示,与空白对照组和CNE-NC组相比,CNE-LV3组细胞迁移率明显降低［（50.17±1.76）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001;（50.63±1.52）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001］,穿膜细胞数亦明显下降［（95.3±3.8） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001;（94.3±4.0） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001］;Transwell小室侵袭实验结果亦显示,CNE-LV3组细胞穿膜细胞数较空白对照组和CNE-NC组明显下降［（46.3±2.1） 个 vs（105.3±1.5） 个,P＜1.001;（46.3±2.1） 个 vs （93.3±2.5） 个,P＜0.001］。结论 沉默VEGF表达可抑制人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的迁移和侵袭能力。     

shRNA沉默Annxin A2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨shRNA沉默Annxin A2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 采用FuGENE HD将Annexin A2 shRNA转染放射抗拒的鼻咽癌CNE2（R743）细胞,qRT-PCR验证转染细胞中Annxin A2基因的表达,细胞划痕实验和Transwell实验观察下调Annxin A2基因表达及联合照射对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2（MMP2）蛋白的表达。结果 转染组细胞Annexin A2 基因的mRNA相对表达量为（0.25±0.17）,较对照组的（1±0.00）和转染对照组的（0.96±0.06）明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。细胞划痕实验显示,下调Annxin A2基因表达可抑制照射诱导的CNE2（R743）细胞的迁移能力（P<0.05）。Transwell实验结果显示,下调Annxin A2基因表达可抑制照射诱导的CNE2（R743）细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）。Western blot结果表明,下调Annxin A2基因表达能抑制照射诱导的MMP2蛋白的表达上调（P<0.05）。结论 下调Annxin A2基因表达能抑制照射诱导放射抗拒的鼻咽癌CNE2（R743）细胞的迁移和侵袭能力,可能与MMP2蛋白表达下调相关。     

低糖增强肿瘤对二甲双胍的敏感度

目的 观察不同浓度葡萄糖对二甲双胍抗肿瘤作用的影响并探讨其作用机制。方法 在含不同浓度葡萄糖的培养基中加入二甲双胍培养细胞24 h后,检测细胞增殖情况及ATP水平。构建裸鼠皮下移植瘤,随机分成四组：正常饮食（SD）组、SD+二甲双胍（Met）组、生酮饮食（KD）组、KD+Met组,实验干预8周后,检测瘤体体积、重量以及裸鼠血糖水平。结果 培养基中葡萄糖水平≥10 mmol/L时,二甲双胍对胰腺癌细胞增殖抑制不明显,但在低糖培养基（≤5 mmol/L）中, 10mmol/L二甲双胍能明显抑制胰腺癌细胞增殖。同时,低糖培养基中各细胞ATP水平显著降低（P<0.01）。体内实验中,KD组血糖水平明显降低（P<0.01）,肿瘤生长受到显著抑制（P<0.01）。与KD组相比,KD+Met组可进一步抑制移植瘤生长（P<0.05）。结论 低糖增强肿瘤对二甲双胍的敏感度,其机制可能与减少机体ATP生成有关。     

miR-502对宫颈癌Hela细胞增殖和转移的影响

目的 探讨miR-502对宫颈癌患者预后及其对宫颈癌Hela细胞增殖和转移的影响。方法 通过数据库分析miR-502表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系及其对预后的影响。在Hela细胞中过表达miR-502-3p后,采用CCK-8检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果 数据库分析结果显示,高表达miR-502的宫颈癌患者总生存期更长,但与TNM分期无明显相关性。CCK-8检测结果显示,miR-502-3p类似物组细胞增殖率低于miR-502-3p抑制剂组[(78.82±1.41)% vs (124.06±7.72)%,P<0.05];Transwell 实验检测结果显示,miR-502-3p类似物组细胞迁移率较miR-502-3p抑制剂组低[(85.39±7.19)% vs (121.17±8.20)%,P<0.05],细胞侵袭率亦较低[(85.32±7.12)% vs (117.13±7.37)%,P<0.05]。结论 高表达miR-502的宫颈癌患者预后较好,可能与其抑制宫颈癌细胞增殖和转移有关。     

缬沙坦对阿霉素所致心肌细胞损伤保护作用的初步研究

目的 研究缬沙坦（valsartan,VAT）对阿霉素（doxorubicin,DOX）所致心肌细胞损伤的保护作用。方法 采用不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX处理H9C2心肌细胞建立DOX心肌细胞损伤模型。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果 与对照组比较,不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX作用H9C2心肌细胞12 h和24 h,细胞存活率均随药物浓度增加而降低（P＜0.01）。其中1 μmol/L DOX作用24 h即可明显引起H9C2心肌细胞损伤,细胞存活率为（75.5±5.6）%,细胞凋亡率为（11.94±2.07）%,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;10 μmol/L的 VAT预处理H9C2心肌细胞24 h后可明显抑制1 μmol/L DOX引起的心肌毒性作用,与单用 DOX组比较,细胞存活率升高［（74.2±3.0）% vs （89.3±4.0）%,P＜0.01］、细胞凋亡率下降［（13.15±6.07）% vs （11.01±3.17）%,P＜0.01］、G₀/G₁期细胞所占比例明显减少［（69.21±2.03）%  vs （50.28±1.21）%,P＜0.05］。结论 VAT能抑制DOX所致的心肌细胞损伤,保护作用可能与其调控细胞凋亡有关。     

卵巢癌相关抗原TM4SF1 HLA-A2限制性CTL表位预测及鉴定

目的 预测并筛选免疫反应性较强的四跨膜蛋白超家族成员1（transmembrane 4 L6 family member 1，TM4SF1） 人类白细胞抗原A2（human leukocyte antigen A2，HLA-A2）限制性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte，CTL）表位肽。方法 联合4种软件（BIMAS、SYFPEITHI、IEDB、PROPRED I）对TM4SF1的 HLA-A2限制性CTL表位进行预测，并采用预培养法酶联免疫斑点法（enzyme-linked immunospot assy，ELISOPT）、直接法ELISOPT对所测得表位肽的免疫反应性进行鉴定。结果 4种不同软件共预测出10条表位多肽，对其中4条（P1、P2、P8、P10）进行免疫反应性验证。多肽活化CTL能力结果显示，预培养法ELISPOT产生斑点形成细胞（spvt forming cell，SFC）的净值T明显高于直接法ELISPOT：［（阳性对照肽：322±8 vs 169±22，P<0.05）、（多肽P1：114±10 vs 39±7，P<0.05）、（多肽 P10：156±31 vs 52±8，P<0.05）］。单个活化CTL细胞分泌INF-γ因子的水平检测结果显示，预培养法 ELISPOT 产生斑点的平均大小明显大于直接法 ELISPOT［（阳性对照肽：21.91±2.45 vs 13.80±1.76，P<0.05）、（多肽P1：12.90±0.88  vs 8.31±1.40，P<0.05）、（多肽P10：17.50±3.85 vs 11.96±0.61，P<0.05）］。表位多肽P1、P10均具有免疫原性，P10的免疫活性更高。结论 预培养法ELISPOT检测多肽的免疫反应性较直接法ELISPOT灵敏性更高，多种软件联合ELISPOT预培养法可有效筛选出免疫反应性更强的卵巢癌相关抗原TM4SF1 HLA-A2限制性CTL优势表位，其中P10的免疫活性最高。     

Hsa-miR-4282对肝癌细胞系SMMC-7721生长的影响

目的  探讨Hsa-miR-4282在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达及其对细胞生长的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测Hsa-miR-4282在人正常肝上皮细胞系HL-7702和人肝癌细胞系MHCC97-H、SMMC-7721，以及 20例肝癌组织及其相应癌旁组织中的表达。采用瞬时转染法将Hsa-miR-4282 mimics（上调组）和Hsa-miR-4282 inhibitor（下调组）分别转染肝癌SMMC-7721细胞，上调组和下调组分别设置相应阴性对照组。转染后采用MTT法检测细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果 Hsa-miR-4282在肝癌组织、肝癌细胞MHCC97-H及肝癌细胞SMMC-7721中的表达均低于癌旁组织及正常肝细胞HL-7702（P＜0.05）。MTT实验结果显示，Hsa-miR-4282上调后肝癌SMMC-7721细胞的OD值低于其阴性对照组，而下调后OD值高于其阴性对照组 （P＜0.05）。平板克隆形成实验显示，下调组的细胞克隆数高于其阴性对照组［（240±7） 个 vs （191±10） 个，P=0.005）］，而上调组细胞克隆数低于基阴性对照组［（146±10） 个 vs （193±12） 个，P=0.013）］。流式细胞仪检测结果显示，Hsa-miR-4282上调组细胞凋亡率较其阴性对照组升高［（23.89±1.89）% vs（16.6±1.14）%，P=0.009）］，下调组细胞凋亡率较期阴性对照组降低［（14.98±0.46）% vs （17.79±0.73）%，P=0.010］。结论 Hsa-miR-4282上调可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，促进细胞凋亡，可能与肝癌的发病机制有关。     

美蓝染色标记法联合Glisson蒂横断式肝切除与非规则性肝切除治疗肝癌的临床疗效

目的 探讨美蓝染色标记法联合Glisson蒂横断式肝切除与非规则性肝切除治疗肝癌的临床疗效。方法 对美蓝染色标记法联合Glisson蒂横断式肝切除25例（联合组）与非规则性肝切除23例（非规则组）治疗肝癌作前瞻性研究,比较两组患者围手术期情况,包括平均手术时间、术中出血量、术后1 d和4 d AST的水平、肿瘤标本切缘阳性率、并发症发生率、术后1年复发率和1年生存率等,并分析其临床疗效。结果 两组患者均无围手术期死亡病例。联合组平均手术时间较非规则组少［（120.16±15.45） min vs（130.26±8.48） min,t=2.77,P<0.05］;联合组术中出血量较非规则组少［（252.40±81.25） ml vs （493.44±100.96） ml,t=8.42,P<0.05］;联合组术后1 d、4 d AST水平上升幅度较非规则组小［（1 d AST：（143.76±49.48）U/L vs （253.82±77.79） U/L,t=5.90,P<0.05;4 d AST：（79.36±24.51） U/L vs（129.57±45.66） U/L,t=4.80,P<0.05］;肿瘤标本切缘阳性率分别为4.0%和8.7%（P>0.05）;围手术期并发症发生率联合组较非规则组低（12.00% vs 39.13%,P<0.05）;术后1年复发率联合组较非规则组低（20.00% vs 47.83%,P<0.05）;术后1年生存率两组差异无统计学意义（80.00% vs 78.26%,P>0.05）。结论 美蓝染色标记法联合Glisson蒂横断式肝切除较非规则性肝切除治疗肝癌的术中出血量和术后并发症少,患者术后恢复快,复发率低,值得临床推广应用。     

SOX方案联合阿帕替尼一线治疗晚期胃癌的临床研究

目的 观察替吉奥、奥沙利铂联合阿帕替尼在晚期胃癌一线治疗中的临床疗效。方法 选择2015年2月至2016年10月于新疆维吾尔自治区人民医院就诊的晚期胃癌患者88例，随机分为试验组和对照组，每组44例。对照组给予替吉奥联合奥沙利铂（SOX方案）化疗，试验组在对照组的基础上应用阿帕替尼，比较两组患者的近期疗效、不良反应及生存情况。结果 试验组患者的客观缓解率明显高于对照组（40.91% vs 20.45%，χ²=4.238，P=0.037），疾病控制率与对照组比较差异无统计学意义（86.36% vs 70.45%，χ²=3.289，P=0.070）。试验组中位总生存期较对照组长（12个月 vs 9.5个月，χ²=4.254，P=0.039），中位无疾病进展生存期亦较对照组长（9个月 vs 6个月，χ²=8.815，P=0.003）；试验组高血压和手足综合征总发生率高于对照组（P＜0.05），其余不良反应发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 替吉奥和奥沙利铂联合阿帕替尼一线治疗晚期胃癌患者可取得较好的临床疗效，能有效延长患者的生存期和疾病进展时间，且安全性良好。     

外周血血小板与淋巴细胞比值在滤泡淋巴瘤预后中的价值

目的  探讨外周血血小板与淋巴细胞比值（platelet to lymphocyte ratio,PLR）与滤泡淋巴瘤（follicular lymphoma,FL）的预后的关系。方法 回顾性分析四川省肿瘤医院2006年2月至2016年12月收治的74例FL患者的临床资料,通过X-Tile　3.6.1软件计算PLR的截断值,并根据截断值将患者分为低PLR组（<186.8,n=59）和高PLR组（≥186.8,　n=15）。采用Cox回归分析PLR与预后的关系。结果 中位随访42个月（范围：6~144个月）,4年无疾病进展生存（progression free survival,PFS）为42.0%,4年总生存（overall survival,OS）为54.7%。低PLR组的4年PFS较高PLR组长（51.3% vs 6.7%,χ²=25.320,P<0.001）,4年OS亦较高PLR组长（65.7% vs 8.3%,χ²=29.414,P<0.001）。多因素Cox回归分析显示,PLR≥186.8是影响FL患者PFS（HR=3.949,95%CI：1.856~8.404,P<0.001）和OS（HR=4.795,95%CI：2.259~10.178,P<0.001）的独立危险因素。进一步分析发现,在低危FL患者中,低PLR组的中位PFS和中位OS均高于高PLR组（PFS：75.5个月 vs 19.0个月,χ²=14.798,P<0.001;OS：85.5个月 vs 28.0个月,χ²=13.271,P<0.001）。在中高危FL患者中,低PLR组的中位PFS和中位OS亦均高于高PLR组（PFS：32.0个月 vs 12.0个月,χ²=10.766,P=0.001;OS：51.0个月 vs 19.0个月,χ²=13.404,P<0.001）。结论 PLR与FL患者预后相关,ＰＬＲ高的ＦＬ患者的预后较差,可作为评估其预后的指标。     

膀胱癌患者尿液中表皮生长因子受体的表达及临床意义

目的 研究膀胱癌患者尿液中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR） mRNA的表达及临床意义。方法 以60例膀胱癌患者为研究组,选择同期行健康体检的30名正常人为对照组,以荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术测定所有受试者尿液中EGFR mRNA的表达水平,比较两组尿液中EGFR mRNA的表达并分析其表达与膀胱癌临床病理特征的关系。结果 研究组尿液中EGFR mRNA的阳性表达率（71.67%）与对照组（0）比较差异有统计学意义（P＜0.05）。浸润型肿瘤与浅表型肿瘤（100% vs 63.04%）、高级别肿瘤与低级别肿瘤（100% vs 62.22%）、有淋巴结转移者与无淋巴结转移者（90.91% vs 60.53%）的EGFR mRNA阳性表达率差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论 表皮生长因子受体在膀胱癌患者尿液中过表达,其过表达与肿瘤类型、病理分级及淋巴结转移密切相关,检测膀胱癌患者尿液中表皮生长因子受体的表达可作为膀胱癌诊断、肿瘤类型及肿瘤转移的评估指标。     

NK4基因联合奥沙利铂对人结肠癌细胞株HCT116凋亡和侵袭的影响

目的 探讨NK4基因联合奥沙利铂（oxaliplatin, L-OHP）在人结肠癌细胞HCT116凋亡和侵袭中的作用。方法 构建NK4质粒表达载体,将NK4基因转染至HCT116细胞,采用流式细胞术分析NK4基因联合奥沙利铂对HCT116细胞凋亡的影响,Transwell小室法检测NK4基因联合奥沙利铂对该细胞侵袭的影响。采用金正均Q值法判断NK4基因联合奥沙利铂是否有协同作用;Western blot法检测不同药物作用下相关机制蛋白p-Akt的变化情况。结果 在HCT116细胞中成功构建NK4质粒表达载体,NK4组 mRNA表达水平高于阴性对照组（NC组）和空白组,差异有统计学意义（P<0.01）。与NC组相比,NK4基因联合奥沙利铂促细胞凋亡作用最显著（16.55% vs 46.86%,P<0.05）;抑制细胞侵袭能力最强（0.9% vs 77.4%,P<0.05）;金正均Q值法结果显示NK4基因联合奥沙利铂具有协同相加作用（0.85≤Q<1.15）,且细胞凋亡和侵袭相关蛋白p-Akt的表达在联合用药组中显著下调,亦显示协同作用（P<0.01）。结论 NK4基因协同奥沙利铂可能通过Akt相关信号通路诱导HCT116结肠癌细胞凋亡并抑制该细胞侵袭。