金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的调节机制研究

目的：研究金茵清热口服液（JYQR）对人外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样2受体（TLR2）信号通路免疫调节作用机制。方法：体外分离、培养人PBMC,设空白对照组和JYQR组,JYQR组加入JYQR刺激PBMC,与空白组经37℃,5% CO₂培养24 h后,分别提取各组PBMC中总RNA、总蛋白、细胞上清液,RT-PCR和Western Blot法检测空白对照组和JYQR组PBMC中相关信号分子TLR2、MyD88、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测细胞因子IL-1α、IL-6、TNF-α、IFN-α的分泌水平;分别设空白对照组：不作处理;JYQR组：JYQR 2.015 mg·mL^-1;TLR2激动剂组：Pam3CSK4 300 ng·mL^-1;TLR2抑制剂组：OxPAPC 30 μg·mL^-1+JYQR 2.015 mg·mL^-14组,提取核蛋白和浆蛋白,Western Blot法检测IRF3和NF-κB p65的核转位情况。结果：与空白对照组相比,JYQR组中TLR2、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA表达水平分别上调5.93倍、1.77倍、2.95倍、1.43倍（^*P<0.05,^**P<0.01）;MyD88、TRAF6蛋白的表达分别上调1.26倍、1.24倍（^*P<0.05）,IRAK4和IRF3的相对表达水平差异无统计学意义;细胞因子IL-1α、IL-6的表达下调55%、61%,TNF-α、IFN-α的分泌水平上调4.3倍、2.9倍（^*P<0.05,^**P<0.01）。JYQR预处理PBMC后,IRF3及NF-κB核转位增加,但是经过TLR2抑制剂预处理后,IRF3和NF-κB的核转位减弱;相反,TLR2激动剂预处理可以进一步上调IRF3和NF-κB的核转位。结论：金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的作用机制可能是通过MyD88依赖型信号通路激活中、下游的IRAK4、TRAF6、IRF3以及NF-κB调控终端效应因子发挥免疫调节作用。     

金茵清热口服液稳定性考察

目的：考察金茵清热口服液的稳定性。方法依据《药物制剂稳定性实验指导原则》,观察金茵清热口服液的性状、pH、相对密度,采用高效液相色谱（ HPLC）法测定样品中栀子苷、绿原酸、丹酚酸B在实验条件下的含量变化,色谱条件：AtlantisT3色谱柱（150 mm×4.6 mm,3μm）,流动相A：0.05%磷酸溶液,流动相 B：乙腈,梯度洗脱,流速：0.8 mL·min-1,柱温：35℃,检测波长：254 nm。结果影响因素实验和加速实验中口服液的性状、pH和相对密度均未发生明显变化,而药效成分栀子苷、绿原酸、丹酚酸B的平均含量随存放时间的延长出现不同程度的降低。结论光照和高温对金茵清热口服液的稳定性有一定影响。     

金茵清热口服液HPLC指纹图谱研究

目的：研究金茵清热口服液的HPLC指纹图谱测定方法.方法：采用HPLC方法测定金茵清热口服液,色谱柱 WATERS AtlantisT3（150 mm×215;4.6 mm,3 μm）; 流动相A：0.05%磷酸溶液;流动相B：乙腈,进行梯度洗脱;检测波长：254 nm;柱温：30℃;流速：0.8 ml·min^-1.结果：标示出金茵清热口服液15个共有峰,并确证3个已知峰为绿原酸、栀子苷、丹酚酸B.结论：本次HPLC指纹图谱为金茵清热口服液的质量控制提供了更全面的信息.     

金茵清热口服液半仿生提取醇沉浓度优选

摘 要 目的： 优选金茵清热口服液半仿生提取(SBE)液的醇沉浓度。 方法: 按比例分割法设立5个醇沉浓度30%、55%、61.25%、67.5%、80%进行平行试验。以绿原酸、栀子苷、丹酚酸B、总酚酸得率和干浸膏收率为指标进行考察,将各指标数据标准化处理,采用设定的加权系数进行综合评价得出综合评价值Y,根据Y值大小优选金茵清热口服液的SBE液醇沉浓度。结果: ５个指标综合评价Ｙ值由大到小的顺序为：３０％＞６１．２５％ ＞５５％ ＞８０％ ＞６７．５％。结论: 结合口服液的澄明度问题与生产实际,以含醇量61.25%为最佳醇沉浓度。     

均匀设计优选金茵清热口服液半仿生提取的工艺条件

目的:优选金茵清热口服液半仿生提取的工艺条件。方法:采用均匀设计,以绿原酸得率,栀子苷得率,总酚酸得率和干浸膏收率为指标进行综合评价,优选金茵清热口服液半仿生提取的工艺条件。结果:优选的三煎用水pH依次为A=2.89,B=6.50,C=8.43;煎煮总时间D=2.0 h。结论:结合生产实际,确定3煎用水的pH依次为3.0,6.5,8.5;煎煮时间依次为1.0,0.5,0.5 h。     

金茵清热口服液对甲型H1N1流感病毒致细胞病变效应的影响

目的：研究金茵清热口服液（试药）抑制甲型H1N1流感病毒的作用及其对喉癌上皮细胞（Hep-2细胞）免疫机能的影响。方法：甲型H1N1流感病毒感染狗肾细胞（MDCK细胞）和Hep-2细胞后,给予不同浓度的试药。显微镜观察细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,MTT法检测细胞活性,荧光定量PCR（qRT-PCR）检测试药作用于Hep-2细胞后细胞因子（TNF-α,IFN-1α,IFN-1β,IL-1α和IL-6）mRNA的水平。结果：实验细胞感染病毒后用试药处理,当试药质量浓度为3 mg·mL^-1时,MDCK细胞存活率提高了61.6%;试药质量浓度为4 mg·mL^-1时,Hep-2细胞存活率提高了40.6%,显著高于药物空白组细胞的存活率（P<0.05）。同时,试药显著上调Hep-2细胞的TNF-α（2.39倍）和IFN-1α（1.98倍）水平,下调炎症因子IL-1α（90%）和IL-6（64%）水平（P<0.05）,而IFN-1β水平的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：金茵清热口服液可以显著提高染毒细胞的存活率,并能显著上调Hep-2细胞抗病毒免疫分子,同时抑制炎症反应,推测金茵清热口服液调节细胞免疫应答可能是其抗流感病毒作用机制之一。     

金茵清热口服液的制备及质量标准研究

目的:制备金茵清热口服液并建立其质量标准。方法:采用薄层色谱(TLC)法对金茵清热口服液中大黄、黄芪进行定性鉴别,采用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中金银花、茵陈、栀子、丹参的主要成分绿原酸、栀子苷、丹酚酸B进行定性、定量测定。结果:TLC中特征斑点清晰。HPLC法中绿原酸、栀子苷、丹酚酸B分离度好,绿原酸在6.32～306.60μg/mL的浓度范围内有良好的线性关系,平均回收率为98.72%,RSD为1.30%;栀子苷在12.04～602.00μg/mL浓度范围内有良好线性关系,平均回收率为99.43%,RSD为0.80%;丹酚酸B在2.668～133.400μg/mL浓度范围内有良好线性关系,平均回收率为95.08%,RSD为1.98%。金茵清热口服液质量稳定,性状、相对密度、pH值等检验指标符合标准要求。结论:本文建立的制备工艺简单可行,建立的质量标准可用于金茵清热口服液的质量控制。     

金茵清热口服液通过NF-κB/NLRP3信号通路改善小鼠急性肺损伤

目的 探究金茵清热口服液对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤的保护作用及机制。方法 C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为6组：空白对照组、模型对照组、金茵清热口服液小剂量组、金茵清热口服液中剂量组、金茵清热口服液大剂量组和地塞米松组。除空白对照组,其他各组气管滴注LPS溶液(5 mg·kg^-1)构建小鼠急性肺损伤模型,金茵清热口服液低中高组连续灌胃给药3 d。24 h后,6组分别取小鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar larage fluid, BALF)进行后续检测,HE染色观察各组小鼠肺组织病理损伤;检测肺泡灌洗液总细胞数;BCA法检测BALF的总蛋白含量;ELISA法检测BALF中炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和免疫球蛋白M(IgM)的含量;免疫组化和Western blotting法检测肺组织核因子κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)蛋白的表达情况。结果 与模型对照组比较,金茵清热口服液减轻了肺组织的病理学损伤(P<0.05...     

感冒清热口服液的工艺研究

目的:研究感冒清热口服液的工艺。方法:对处方中的挥发性成分荆芥穗、薄荷、紫苏叶进行了挥发油提取条件的研究。以加水量、煎煮次数、煎煮时间为三因素,采用正交设计试验方法对提油后的三味药材同防风等其它八味药的混煎工艺进行筛选,以确定最佳工艺参数;同时,对混煎工艺中的浓缩密度,配剂前加入矫味剂蔗糖的浓度,表面活性剂吐温-80的用量以及处方中防腐剂山梨酸钾的用量进行了研究,以确定最佳工艺条件。结论:依据原部颁标准项下的感冒清热口服液处方,并参照药典中感冒清热颗粒项下的制法研究出了感冒清热口服液的工艺。     

清热平口服液的抗菌作用

目的观察清热平口服液的抗菌作用。方法采用二倍稀释法测定清热平口服液对标准菌株金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、乙型溶血性链球菌及肺炎球菌的MIC(最低抑菌浓度)与MBC(最低杀菌浓度)。结果清热平口服液对4种菌株均有一定的抗菌作用。     

金茵利胆口服液高效液相色谱指纹图谱及多成分含量同时测定研究

目的建立金茵利胆口服液的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,以及多成分含量同时测定的方法。方法色谱柱为DIKMA Diamonsil^?C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.9 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃,进样量为20μL。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)"绘制21批样品的特征图谱,计算相似度;确定共有峰并指认,进行主成分分析,并同时测定8种成分的含量。结果 21批样品的特征图谱共有18个共有峰,指认出其中8个特征峰,相似度均不小于0.947,不同批次样品中没食子酸、夏佛塔苷、新橙皮苷、盐酸小檗碱、甘草酸铵在3种主成分中得分较高,8批样品中没食子酸、绿原酸、夏佛塔苷、甘草苷、柚皮苷、新橙皮苷、盐酸小檗碱、甘草酸铵平均含量分别为0.136 1,0.119 3,0.091 9,0.198 7,1.390 5,1.655 0,0.089 9,0.028 9 g/L。结论所建立的HPLC指纹图谱及8种成分含量同时测定的方法可用于金茵利胆口服液的质量...     

HPLC法测定小儿清热止咳口服液中苦杏仁苷的含量

目的建立小儿清热止咳口服液中苦杏仁苷含量的测定方法.方法采用高效液相色谱法,Diamonsil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),甲醇-0.1%磷酸溶液(10∶90)为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为210 nm.结果苦杏仁苷浓度在4～48μg·mL-1间具有良好的线性关系(r=0.999 5),苦杏仁苷平均回收率为98.6%,RSD为1.86%(n=6).结论本法简便、准确、重现性好,可以用于小儿清热止咳口服液中苦杏仁苷的质量控制.     

小儿双金清热口服液联合奥司他韦治疗甲型流行性感冒的临床研究

目的探讨小儿双金清热口服液联合磷酸奥司他韦胶囊治疗甲型流行性感冒(流感)的临床疗效。方法选取2016年2月—2017年2月在延安市人民医院儿科和门诊进行治疗的甲型流感患者113例作为研究对象,在随机分组的原则下将患者随机分为对照组(56例)和治疗组(57例)。对照组患者口服磷酸奥司他韦胶囊,75 mg/次,2次/d;治疗组患者在对照组治疗的基础上口服小儿双金清热口服液,10 mL/次,3次/d。两组患者均连续治疗5 d。观察两组患者的临床疗效,同时比较治疗前后两组患者体温恢复时间、症状消失时间、病毒核酸阳性持续时间、细胞免疫指标和体液免疫指标水平。结果治疗后,对照组、治疗组总有效率分别为83.93%、96.49%,两组总有效率比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,治疗组体温恢复时间、症状消失时间和病毒核酸阳性持续时间均显著短于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组血清CD8~+水平显著降低,CD4~+、IgA、IgM水平均显著升高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗组细胞免疫和体液免疫指标明显优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论小儿双金清热口服液联合奥司他韦胶囊治疗甲型流感具有较好的临床疗效,改善临床症状,提高免疫力,具有一定的临床推广应用价值。     

益气养阴清热液对高血糖肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响

目的观察益气养阴清热液(YYQ)对高血糖肥胖大鼠胰岛素抵抗的改善作用。方法采用高脂饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导高血糖肥胖大鼠胰岛素抵抗,用YYQ治疗4wk。检测空腹血糖(FBG)、葡萄糖耐量(OGT)、血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、红细胞膜胰岛素受体(INSR)、胰岛素钳夹实验下的葡萄糖输注率(GIR);测定肾周、附睾周围脂肪垫重量。同时测定YYQ对肝组织中IR-1、IRS-1mRNA表达的影响。结果YYQ治疗4wk后,大鼠血清中TC、TG、LDL-C、INS、FFA降低,OGT改善,而血清中HDL-C和GIR明显升高,INSR高、低亲和力受体数目均明显增多,肝组织中IR、IRS-1mRNA表达升高,各项指标均与模型组大鼠差异有显著性。结论YYQ对高血糖肥胖大鼠胰岛素抵抗有治疗作用,通过增加胰岛素受体数目而提高其胰岛素敏感性可能是其作用机制之一。     

Oral warfarin affects some aspects of systemic immunomodulation with topical dinitrochlorobenzene (DNCB) in rats

Purpose: The efficacy of topical dinitrochlorobenzene (DNCB) in the treatment of some skin dermatoses is based both on local and systemic effects. It is not known, however, whether it can be applied to patients receiving some other therapy associated with systemic immunomodulation. The aim of the present paper using a rat model was to examine whether oral warfarin (WF) intake, as shown by others and by us, had an immunomodulatory potential to interfere with effects of topical DNCB as systemic immunotherapy.

Materials and methods: Rats received 3.5?mg/l of WF sodium in drinking water for 30 days and were thereafter skin-sensitized with 0.4% DNCB. Changes in the oxidative activity (myeloperoxidase/MPO, reduction of nitroblue tetrazolium/NBT and nitric oxide/NO production) as well as tumor necrosis factor (TNF) production by peripheral blood polymorphonuclear cells (PMN) were measured and compared with PMN from sensitized unexposed to WF rats.

Results: WF intake enhanced some aspects of PMN activity (intracellular MPO activity and unstimulated NO production) as well as their responsiveness to exogenous stimulation (NBT reduction and TNF production from sensitized animals). However, WF also decreased PMN responsiveness of NO production to stimulation. WF affected NO and TNF production solely by PMN, as no effect on these activities of peripheral blood mononuclear cells was seen.

Conclusion: Having in mind that polymorphonuclear leukocytes are the most abundant cell type in peripheral blood in humans, increase of basic aspects of PMN activity described in the present paper might be relevant for consideration of using WF as therapeutic modality in patients topically treated with DNCB.