盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB- 231增殖和凋亡

目的 探讨盐霉素（salinomycin,Sal）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用流式细胞术筛选ALDH高表达乳腺癌细胞系;采用MTT法检测不同浓度Sal（1~32 μmol/L）对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测Sal对细胞凋亡以及肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达的影响;采用qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2、PARP mRNA和蛋白表达;TCGA（the Cancer Genome Atlas）数据库下载乳腺癌患者数据集（n=1 218）,采用Pearson法分析ALDH与凋亡相关分子表达的相关性。结果 Sal在24 h、48 h、72 h均可以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.001）;Sal作用MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,2 μmol/L组、4 μmol/L组、8 μmol/L组的细胞凋亡率均升高（均P<0.05）;Bcl-2、PARP、Caspase-3 mRNA表达下降（均P<0.05）,Bax mRNA表达升高（均P<0.05）;Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达下降（均P<0.05）,PARP、Bax 蛋白表达升高（均P<0.05）;MDA-MB-231乳腺癌干细胞表面标志物ALDH表达下降（均P<0.05）。TCGA数据库分析显示,ALDH与抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-3的表达呈正相关（r=0.209,P=0.007;r=0.235,P=0.002）,与Bax、PARP的表达呈负相关（r=-0.326,P＜0.001;r=-0.453,P＜0.001）。结论 Sal可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,可能通过下调肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达实现。     

lncBRM对乳腺癌细胞生长的影响及作用机制

目的  探讨Brahma相关长链非编码RNA （long non-coding RNA for association with Brahma,lncBRM）对人乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-453）生长、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法 采用RT-PCR实验检测lncBRM在不同乳腺癌细胞（MCF-7、 ZR-75-30、BT474、MDA-MB-231和MDA-MB-453）和正常人乳腺上皮细胞株MCF 10A中的表达;利用siRNA在MCF-7、MDA-MB-453细胞中敲低lncBRM,分别转染si-lncBRM质粒（si-lncBRM组）和空载质粒（si-Ctrl组）,采用CCK-8实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blot检测迁移相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达水平,并采用miRDB数据库预测lncBRM靶点。结果 lncBRM在不同乳腺癌细胞中的表达水平均高于正常人乳腺上皮细胞株MCF 10A （P<0.01）。si-Ctrl组比较,敲低lncBRM可抑制MCF-7、MDA-MB-453细胞增殖能力（P<0.05）,提高细胞凋亡率（P<0.01）,细胞侵袭和迁移细胞数目较少（均P<0.01）;同时E-cadherin表达明显上调,而N-cadherin表达下调（均P<0.01）。miRDB数据库预测发现lncBRM和68个miRNAs存在结合位点,敲低lncBRM导致评分最高的前5个miRNA中的4个（miR-4646-5p、miR-204-3p、miR-204-5p和miR-6832-3p）表达上调。结论 lncBRM可能通过调控miRNAs的表达而抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移并诱导其凋亡。     

过表达RSK4m1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和侵袭的影响

目的 探讨过表达p90核糖体S6蛋白激酶4变异体1（ribosomal protein S6 kinase 4 variant 1,RSK4m1）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长和侵袭的影响。方法 通过负载RSK4m1慢病毒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中稳定过表达RSK4m1。以MDA-MB-231亲本细胞为空白对照组（Con组）、转染空载病毒的MDA-MB-231细胞为阴性对照组（Mock组）、转染过表达RSK4m1的MDA-MB-231细胞为实验组（OE组）。采用qRT-PCR和Westen Blot法检测各组RSK4m1 mRNA及蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果 OE组中RSK4m1 mRNA及蛋白的表达量均明显高于Con组及Mock组（P<0.05）。CCK-8实验显示,24 h、48 h、72 h和96 h时OE组细胞增殖均低于Mock组和Con组（P<0.05）;细胞划痕实验显示,细胞培养24 h后,OE组细胞迁移率显著低于Con组和Mock组［（14.53±0.64）% vs （25.67±2.44）%、（24.47±2.25）%,P<0.05］。Transwell小室侵袭实验显示,OE组细胞侵袭能力显著低于Con组和Mock组［（35.00±5.57）个 vs （66.70±5.86）个、（58.67±4.16）个,P<0.05］。结论 过表达RSK4m1可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭能力,为RSK4m1可能成为乳腺癌的治疗新靶点提供了实验依据。     

尼妥珠单抗联合顺铂对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及其机制研究

[目的]探讨尼妥珠单抗（泰欣生）联合顺铂对三阴性乳腺癌细胞的增殖抑制作用及可能机制。[方法]100μg/ml泰欣生、5μg/ml顺铂单独和联合作用三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24h、48h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot技术检测ERK1/2、pERK1/2及BRCA1蛋白表达水平。[结果]泰欣生和顺铂联合作用MDA-MB-231细胞48h后,细胞增殖抑制达82.53%±6.46%,与其余各组相比,差异有显著性（P〈0.01）。顺铂和泰欣生单药作用24h,未能明显诱导MDA-MB-231细胞凋亡;但作用48h后顺铂诱导的凋亡率为14.56%,泰欣生组的细胞凋亡仍不明显。泰欣生联合顺铂作用24h未能明显诱导MDA-MB-231细胞凋亡;48h后,细胞凋亡率明显增高,达37.57%,与其余各组相比差异有显著性（P〈0.01）。ERK1/2在对照组和各处理组中的表达无变化;pERK1/2在对照组和顺铂组的表达无变化,在泰欣生组和泰欣生＋顺铂组的表达明显降低。顺铂和泰欣生单药处理MDA-MB-231细胞后BRCA1蛋白表达量增加,泰欣生与顺铂联合作用后,BRCA1蛋白表达明显降低。[结论]尼妥珠单抗（泰欣生）与顺铂可协同抑制三阴性乳腺癌细胞,其机制可能是降低BRCA1蛋白的表达。     

鞣花酸对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及SDF1α/CXCR4信号通路的影响

目的 探讨鞣花酸对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖侵袭转移的作用.方法 采用0（对照）、6、12 μg/ml鞣花酸培养液分别处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别于培养后24、48、72 h计数MDA-MB-231细胞数.细胞趋化实验观察鞣花酸对MDA-MB-231细胞趋化运动的影响,Western Blot 观察鞣花酸对乳腺癌细胞MDA-MB-231中SDF-1α信号通路激活的抑制作用.数据分析采用重复测量的方差分析,两两比较采用SNK-q分析方法.结果 与对照组比较,6、12 μg/ml鞣花酸处理组在24、48、72 h的细胞计数显著降低.重复测量的方差分析结果提示分组比较（F=4875.56,P=0.00）及三个时间点间比较（F=670.73,P=0.00）差异有统计学意义,而分组与时间有交互作用（F=122.92,P=0.00）,表明鞣花酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖有显著抑制作用.乳腺癌细胞趋化运动实验提示各组乳腺癌细胞的趋化数分别为（14.00±1.00）＆#215;105/ml、（7.70±0.58）＆#215;105/ml、（3.00±1.00）＆#215;105/ml,差异有统计学意义（F=117.57,P=0.00）.Western Blot结果显示鞣花酸明显抑制CXCR4表达及SDF1α/CXCR4对乳腺癌细胞AKT信号通路的激活.结论 鞣花酸可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,SDF1α/CXCR4介导的细胞趋化运动及其SDF1α/CXCR4信号通路激活,在预防乳腺癌复发及转移中可能有潜在价值.     

NRP-1过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3生物学行为的影响

目的 通过上调乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3中NRP-1的表达,观察NRP-1对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法 构建pcDNA3.1-NRP-1表达载体,脂质体介导NRP-1 表达质粒转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞,用G418筛选出稳定转染的乳腺癌细胞株。利用RTqPCR、Western blot法分别检测NRP-1基因mRNA及其蛋白表达;CCK-8法、AnnexinⅤ-APC/7-AAD法、Transwell小室分别检测转染细胞增殖率、凋亡率及侵袭、迁移能力。结果 成功构建pcDNA3.1- NRP-1表达载体,转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞并筛选稳定表达系。与对照组相比,过表达组细胞的NRP-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（均P<0.05）;NRP-1过表达组的细胞较对照组增殖率增加、凋亡率降低、侵袭及迁移能力增强（均P<0.05)。结论 NRP-1在乳腺癌发展、浸润、转移中起着一定的作用,它可促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。     

c-Met抑制剂SGX523诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系的凋亡

目的:研究c-Met小分子抑制剂SGX523对人乳腺癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:以不同浓度的SGX523作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）、PARP的表达和c-Met及Akt磷酸化水平的变化。结果:SGX523能明显抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05）,其对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为（0.767±0.115）μmoL/L。SGX523处理MDA-MB-231细胞48 h后,可诱导乳腺癌细胞凋亡和细胞周期G₀/G₁期阻滞。同时,SGX523可促进凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的剪切,并有效抑制c-Met及AKT的磷酸化水平,呈一定的剂量依赖关系。结论:c-Met抑制剂SGX523通过诱导凋亡和G₀/G₁期阻滞来抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,其机制可能与c-Met/PI3K/AKT信号转导通路的磷酸化水平受抑制相关。     

阿帕替尼通过抑制糖酵解途径对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制及凋亡的作用

 目的 探讨阿帕替尼体外水平抗乳腺癌作用及其机制。方法 采用CCK-8法检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用；采用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响；采用乳酸含量检测试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞内乳酸产量的影响；采用糖酵解压力试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞外酸化速率的影响。结果 阿帕替尼可浓度依赖性地抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖（P<0.05），作用48 h的半数抑制浓度IC₅₀为1.56 μmol/L；阿帕替尼可浓度依赖性地诱导MDA-MB-231细胞凋亡（P<0.05）；阿帕替尼可浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞内乳酸产量（P<0.05）；阿帕替尼干预可抑制MDA-MB-231细胞的糖酵解能力值及糖酵解保留值，降低MDA-MB-231细胞外酸化速率（P<0.05）。结论 阿帕替尼可能通过抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的有氧糖酵解效应，进而诱导其凋亡。     

顺铂诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞株的建立及鉴定

目的 建立人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231顺铂（DDP）耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法 采用逐步增加顺铂浓度、间歇诱导的方法,建立人三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DDP体外耐药细胞模型;MTT法检测MDA-MB-231/DDP的耐药特性;高效液相色谱法检测耐药细胞内DDP药物浓度的改变; 实时荧光定量PCR法分析两种细胞耐药相关基因MDR1、BCRP、MMP7及 GST-π表达差异。结果 MTT显示MDA-MB-231/DDP的顺铂、5-氟尿嘧啶及环磷酰胺的耐药指数分别为9.80、4.43及2.21;高效液相检测显示2种细胞分别与6 μg/ml的DDP接触24 h后,MDA-MB-231细胞内DDP的浓度为（47.10±2.37）ng/（5×10⁴） cells,而MDA-MB-231/DDP细胞则为（6.30±1.64）ng/（5×10⁴）cells（P<0.01）;MDA-MB-231/DDP细胞中MDR1、BCRP、MMP7及GST-π基因 mRNA的表达量分别是亲本细胞的15.39、13.73、22.52及44.90倍（P<0.01）。结论 逐步增加浓度、间歇诱导的方法建立了稳定、耐药性较高的MDA-MB-231/DDP细胞株,其耐药机制可能与ABC转运蛋白表达增加等多种机制相关。     

siRNA 沉默Sema 4D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响

目的： 观察siRNA沉默信号素 4D(semaphorin 4D, Sema 4D）对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响。方法： 构建靶向Sema 4D基因的siRNA,脂质体法转染MDA-MB-231细胞系,通过实时荧光定量-PCR、Western blotting检测干扰效率,筛选有效序列。siRNA有效干扰MDA-MB-231细胞Sema 4D表达后,CCK-8法及Transwell迁移实验检测细胞增殖及迁移能力的变化。结果：Sema 4D siRNA转染MDA-MB-231细胞后Sema 4D的（mRNA及蛋白）表达水平明显下降（P<0.05）,其中以siRNA-C最明显（P<0.05）;与空白、阴性对照组相比,siRNA-C沉默MDA-MB-231细胞Sema 4D表达可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.05）,同时明显减弱细胞的迁移能力\[穿膜细胞数：（105.60±12.07） vs（196.20±9.04）、（186.40±6.69）个,均P<0.05\]。结论： siRNA沉默Sema 4D可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并抑制细胞迁移,可作为乳腺癌基因治疗的潜在位点。     

马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的  探讨马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞,分别用不同浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL）马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞,以生理盐水溶液为阴性对照组,5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照组,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 不同浓度马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长和药物浓度的提高而增加。作用48 h后,200 μg/mL、300 μg/mL马齿苋多糖组的细胞增殖抑制率分别为（53.02±2.46）%、（57.20±2.14）%,与5-FU组细胞增殖抑制率（56.36±3.26）%相当（P＞0.05）;各浓度组的细胞凋亡率依次为31.92%、38.39%、40.45%、48.49%、55.71%,与阴性对照组比较均升高（均P＜0.05）;与5-FU组比较,低浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL）组的细胞凋亡率降低（P＜0.05）,而高浓度（300 μg/mL）组的细胞凋亡率升高（P＜0.05）。结论 马齿苋多糖可抑制胃癌SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡。     

吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及分子机制研究

目的 探讨吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,分别以吡格列酮（0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、50 μmol/L）和吉西他滨（50 μmol/L）作用0 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,采用CCK-8检测各时间点的细胞增殖情况,流式细胞仪检测72 h细胞周期及凋亡情况,4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色检测48 h细胞凋亡形态学变化,Western blot检测48 h细胞凋亡相关蛋白及MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达。结果 与0 μmol/L吡格列酮相比,吉西他滨及各剂量吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均降低（P＜0.05）;48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均升高（P＜0.05）,而S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）,且细胞逐渐收缩,细胞核逐渐碎裂。与50 μmol/L吉西他滨组相比,10 μmol/L吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞作用48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均降低（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均升高（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞48 h 的S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）。结论 吡格列酮能抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖,诱导其凋亡,可能通过上调MAPK/ERK通路实现。     

TRPM8激活Calcineurin-NFATc3通路调节结肠癌细胞免疫逃逸

目的  探讨TRPM8调节结肠癌细胞免疫逃逸的机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot检测结肠癌细胞系SW620和正常人结肠上皮细胞系CCD 841 CoN中TRPM8的表达水平。将干涉和过表达TRPM8载体TRPM8 siRNA和pcDNA3.1-TRPM8转染至SW620细胞，并设置相应对照组（Control siRNA组和pcDNA3.1组），用CCK-8、集落形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡，酶标仪检测Calcineurin活性，Western blot检测Calcineurin-NFATc3信号通路相关蛋白的表达。采用CCK-8检测CD8⁺T细胞与SW620细胞共孵育的细胞活力，Western blot检测Calcineurin特异性抑制剂FK506处理SW620细胞后NFATc3和PD-L1蛋白表达。结果 与CCD 841 CoN细胞相比，TRPM8 mRNA和蛋白在SW620细胞中的表达均增加（P<0.01）。与Control siRNA组比较，干涉 TRPM8表达后SW620细胞活力、细胞增殖能力、Calcineurin活性，以及TRPM8、PD-L1和 NFATc3蛋白表达均降低（P<0.01），而细胞凋亡率和p-NFATc3蛋白表达均升高（P<0.01）；过表达TRPM8可增强细胞活力、细胞增殖能力和Calcineurin活性，上调TRPM8、PD-L1及NFATc3蛋白表达（P<0.01），下调p-NFATc3蛋白表达（P=0.002）。CD8⁺ T细胞与干涉TRPM8表达的SW620细胞共孵育后总细胞活力降低（P=0.002），而与过表达SW620细胞共孵育后总细胞活力增强（P=0.005）。FK506处理可抑制SW620细胞Calcineurin活性，下调NFATc3、PD-L1蛋白表达（P<0.01）。结论 TRPM8过表达可能通过激活Calcineurin-NFATc3信号通路而促进PD-L1表达，从而增强结肠癌细胞免疫逃逸能力，促进结肠癌细胞增殖。     

积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和自噬的影响

目的  探讨积雪草酸（asiatic acid,AA）对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和自噬的影响。方法 不同浓度AA作用于人肝癌SMMC-7721细胞24 h后,MTT法检测细胞活性并观察自噬抑制剂3-MA对40 μmol/L AA的干预作用;MDC染色检测自噬泡的形成,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、mTOR、p-mTOR及p53的表达。结果 MTT检测结果显示,不同AA浓度均可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并呈浓度依赖性（F＝46.790,P＝0.006）,IC₅₀ =37.313 μmol/L。与单独使用40 μmol/L AA相比,自噬抑制剂3-MA可部分逆转40 μmol/L AA对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用［（46.400±9.099）% vs （22.000±3.391）%,P＜0.001］。MDC染色实验表明40 μmol/L AA干预可增加自噬泡形成。Western blot检测发现,与对照组比较,40 μmol/L AA可明显降低LC3-Ⅰ的蛋白表达,而提高LC3-Ⅱ表达（1.744±0.108 vs 1.529±0.065,t=2.928,P=0.043;0.113±0.031 vs 0.380±0.036,t=-9.754,P<0.001）,降低p62蛋白表达（0.522±0.024 vs 0.123±0.019,t=22.565,P<0.001）和p-mTOR蛋白表达（1.252±0.039 vs 0.353±0.028,t=30.775,P<0.001）,但对mTOR和p53的蛋白表达无影响（1.713±0.111 vs 1.556±0.076,t=1.555,P=0.190;0.671±0.040 vs 0.726±0.055,t=-1.555,P=0.210）。结论 AA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,可能与其通过非p53依赖方式负调控mTOR通路诱发自噬有关。     

E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响

目的 探讨E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响及作用机制。方法 HCT116/L细胞分为HCT116/L+E2F1组、HCT116/L+NC组和HCT116/L组，HCT116/L+E2F1组和HCT116/L+NC组分别转染E2F1过表达重组慢病毒载体（pCMA-E2F1-HA）及其阴性对照慢病毒载体（pCMA-HA）。Western blot检测E2F1蛋白的表达水平；MTT法检测各组对化疗药物（阿霉素、5-FU和顺铂）的敏感性；流式细胞仪检测各组细胞内阿霉素的泵出率和细胞凋亡情况；细胞划痕实验检测细胞迁移情况。Western blot进一步检测耐药相关基因MDR1蛋白的表达水平。结果 HCT116/L+E2F1组的E2F1蛋白表达水平明显高于HCT116/L+NC组和HCT116/L组（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组对阿霉素、5-FU和顺铂的IC₅₀值分别为（1.61±0.21） μg/mL﹑（5.22±0.12） μg/mL﹑（3.52±0.15） μg/mL，高于HCT116/L+NC组的（0.61±0.11） μg/mL、（3.93±0.54） μg/mL、（2.31±0.45） μg/mL和HCT116/L组的（0.69±0.13） μg/mL、（4.19±0.51） μg/mL、（2.51±0.42） μg/mL（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组阿霉素的泵出率为（22.51±0.12）%，亦高于HCT116/L+NC组的（10.92±0.09）%和HCT116/L组的（8.45±0.11）%（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组细胞凋亡率为（6.42±0.52）%，低于HCT116/L+NC组的（12.81±0.69）%和HCT116/L组的（11.45±0.31）%（P＜0.05），HCT116/L+E2F1组能增强细胞迁移能力（P＜0.05），并阻滞细胞于S期。HCT116/L+E2F1组中MDR1蛋白表达量为0.41±0.08，高于HCT116/L+NC组的0.19±0.08和HCT116/L组的0.15±0.07（P＜0.05）。结论 E2F1 基因过表达可降低人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L 对化疗药物的敏感性，上调MDR1基因表达，使化疗药物在结肠癌细胞内的蓄积浓度降低，从而增强人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L的多药耐药性。     

Linc00704对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨Linc00704（long non-coding RNA 00704）对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 RT-qPCR检测配对结直肠癌及癌旁正常组织、结直肠癌细胞和正常永生化人结肠上皮细胞系FHC中Linc00704 mRNA的表达。反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,ASO）转染结直肠癌细胞构建Linc00704低表达细胞模型,慢病毒感染结直肠癌细胞构建Linc00704过表达细胞模型,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果 相比癌旁组织,Linc00704在结直肠癌组织中表达降低（t=4.103,P<0.001）。8种结直肠癌细胞系中有6种细胞系（RKO、HCT15、NCI-H716、SW480、SW1463、SW48）Linc00704的表达较FHC细胞低（F=44.750,P<0.001）。沉默 Linc00704表达可促进Caco-2、DLD-1细胞迁移和侵袭能力（均P<0.01）,但对增殖无明显影响（均P>0.05）。过表达Linc00704可抑制RKO、HCT15细胞迁移和侵袭能力（均P＜0.001）,但对增殖无明显影响（均P>0.05）。结论 Linc00704在结直肠癌组织中呈低表达,过表达Linc00704可抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷序贯顺铂对MDA-MB-231细胞的影响

目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)、顺铂(PDD)序贯应用对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖、周期及凋亡的影响.方法 实验分4组:对照组、DAC组(5μmol/L DAC处理)、PDD组(15 μmol/L PDD处理)、DAC序贯PDD组(2.5μmol/L DAC处理24h,再用8μmol/L PDD处理48 h).分别用MTT法、流式细胞仪测定各组MDA-MB-231细胞的增殖、周期及凋亡,并用金氏公式来评价两药联合效应.结果 DAC序贯PDD组较DAC组、PDD组增殖抑制率高(P＜0.01).DAC序贯PDD组48 h、72 h的q值分别为1.12、1.17,两药联合有增效作用.DAC序贯PDD组G1、S期细胞减少,G2/M期细胞增多,DAC序贯PDD组较DAC组、PDD组细胞凋亡率高(P＜0.01).结论 低剂量的DAC与PDD序贯应用可以抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞凋亡.