金雀异黄酮酊对去卵巢骨质疏松大鼠OPG/RANKL/RANK通路的影响

目的观察金雀异黄酮酊对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、血清骨代谢生物标志物以及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)和破骨细胞分化因子(receptor activator of NF-κB,RANKL)表达的影响,探讨其抗骨质疏松的作用机制。方法将30只3月龄SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组和金雀异黄酮酊组,通过去卵巢法构建骨质疏松大鼠模型,给予金雀异黄酮酊外用喷涂,治疗8周后分别测定大鼠股骨骨密度,采用Elisa法检测血清骨碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)及血清Ⅰ型胶原交联C-末端肽(S-CTX)等骨代谢生物标志物,采用Western Blot法检测OPG和RANKL蛋白表达水平。结果与假手术组比较,去卵巢组大鼠子宫质量、血清雌激素水平、股骨骨密度、血钙、血磷和OPG蛋白表达水平均降低,而体质量、ALP、OC、S-CTX和RANKL蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);采用金雀异黄酮酊治疗8周后,与模型组比较,金雀异黄酮酊组体质量、ALP、OC、S-CTX和RANKL蛋白表达水平降低,而子宫质量、血清雌激素水平、股骨骨密度、血钙、血磷和OPG蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论金雀异黄酮酊可调节骨代谢,显著提高骨质疏松大鼠的骨密度,可能与调控OPG/RANKL/RANK通路蛋白表达水平有关。     

枸杞多糖对去势雌性大鼠骨质疏松影响的研究

目的研究枸杞多糖(LBP)对去势雌性大鼠骨质疏松骨质变的影响。方法选用两月龄成年雌性SD实验大鼠50只,随机分为假手术组,去势+生理盐水组,去势+枸杞多糖高剂量组,去势+枸杞多糖低剂量组,去势+己烯雌酚组等5组,每组10只。术后各组常规饲养10周后给药干预,12周后行股骨干重测量、骨矿密度检查并观察骨的形态学改变。SPSS1.0统计软件分析。结果与去势+生理盐水组相比,去势+枸杞多糖高剂量组、去势+低剂量组均能增加去势雌性SD大鼠骨密度值,两组骨小梁结构较完整、连续性较好、吸收陷窝少。结论枸杞多糖对成年去势雌性大鼠骨质疏松有明显的骨质改善作用。     

基于RANKL/RANK/OPG信号通路探讨土贝母苷甲对糖尿病性骨质疏松大鼠骨质流失的影响

目的 探讨土贝母苷甲对糖尿病性骨质疏松(OP)大鼠骨质流失及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)/骨保护蛋白(OPG)信号通路的影响。方法 采用高脂高糖饮食+链脲佐菌素腹腔注射法构建大鼠糖尿病性OP模型，将60只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、土贝母苷甲低剂量组(1μmol/L)、土贝母苷甲高剂量组(5μmol/L)、OPG组(3 mg/kg)、土贝母苷甲高剂量+OPG组(5μmol/L土贝母苷甲+3 mg/kg OPG)。酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清核心结合因子α1(CBF-α1)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、骨钙素(OC)水平；Micro-CT测定骨密度(BMD)及骨小梁微结构参数；TRAP染色测定股骨表面破骨细胞数量(N.Oc/BS);HE染色观测大鼠骨组织病理变化；qRT-PCR法与Western blot法分别测定骨组织RANKL、RANK、OPG mRNA与蛋白水平。结果 与对照组相比，模型组大鼠血清CBF-α1、PINP、OC水平、股骨最大负荷、断裂挠度、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、OPG m...     

含中药骨金散血清对大鼠成骨细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的：本研究旨在探讨含中药骨金散血清对成骨细胞的增殖及OPG/RANKL系统的影响。方法：6月龄雌性大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、骨金散低剂量组和骨金散高剂量组,每组12只,模型组、骨金散低剂量组和骨金散高剂量组大鼠建立去卵巢大鼠骨质疏松的动物模型,4周后低剂量骨金散组和高剂量骨金散组按1.8g/kg和3.6g/kg灌服骨金散,每日一次;模型组和假手术组均每天一次生理盐水灌胃。连续给药8周后处死大鼠,观察骨金散对去卵巢大鼠股骨骨密度的影响,制备含骨金散血清。体外培养成骨细胞,观察含药血清对成骨细胞的增殖和OPG、RANKL mRNA的表达的影响。结果：与假手术组相比,去卵巢大鼠股骨骨密度明显降低（P〈0.01）,低剂量的骨金散组和高剂量组大鼠股骨骨密度高于去卵巢组（P〈0.01）。低剂量的骨金散组和高剂量组血清促进成骨细胞的增殖（P〈0.05）,升高OPGmRNA表达水平（P〈0.01）,降低RANKL mRNA的表达水平（P〈0.01）,使OPGmRNA/RANKLmRNA的表达比值升高（P〈0.01）。结论：中药骨金散能增加去势大鼠BMD,促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞OPGmRNA表达,降低RANKLmRNA表达,发挥抑制破骨细胞的骨吸收作用,这可能与其治疗骨质疏松的机制有关。     

补肾中药对骨质疏松大鼠股骨谷氨酸信号的影响

目的：探讨补肾活血中药对双侧卵巢摘除引起的骨质疏松大鼠mGluR5的影响。方法：取3月龄SPF级雌性SD大鼠70只,随机分为造模组（60只）行双侧卵巢摘除和假手术组（Sham group,10只）行假手术,术后30 d将造模组动物随机分为6组（10只/组）：补肾活血方组（BSHX group）、龟鹿二仙胶组（GLEX group）、二仙汤组（EX group）、仙灵骨葆组药物对照组（XLGB group）及雌二醇药物对照组（EV group）各自按1 mL/100 g体质量给于相应的药物灌胃,假手术组（Sham group）和模型组（Model group）各自灌服等量的生理盐水。连续给药12周后测定各组大鼠血清中Ⅰ型胶原羧基端肽（β-Crosslaps）、总Ⅰ型胶原氨基端延长肽（P1NP）、TRAP（抗酒石酸酸性磷酸酶）的含量;测定大鼠的骨密度;用Western-blot方法检测股骨骨骺Glu、mGluR5蛋白表达。结果：与Sham组比较,Model组大鼠骨密度、血液PINP浓度、Glu表达均显著降低（P<0.01）,β-Crosslaps、TRAP浓度及mGluR5表达显著增高（P<0.01）。与Model组比较,各治疗组大鼠骨密度、PINP、Glu蛋白表达显著增高（P<0.05）,β-Crosslaps、TRAP浓度及mGluR5表达显著降低（P<0.01）,补肾活血组骨密度及Glu表达高于其他各治疗组。结论：补肾活血能有效防止去卵巢模型大鼠骨质疏松的形成,可能通过调节骨内谷氨酸进一步介导骨重建而发挥作用。     

鸢尾素在运动改善去势大鼠骨质疏松中的作用研究

目的：探讨鸢尾素(irisin)在运动改善去势大鼠骨质疏松中的作用机制。方法：将100只雌性SD大鼠(清洁级)随机分为空白组、模型组、假手术组、运动组和模型+鸢尾素(irisin)注射组,每组各20只。空白组不做任何治疗,模型组、运动组和模型+irisin注射组行双侧卵巢摘除术造大鼠骨质疏松症模型。假手术组只切除少量肠系膜,保留卵巢,不做任何治疗。模型鉴定成功后,运动组进行运动训练,模型+irisin注射组行双侧卵巢摘除术造大鼠骨质疏松症模型,每天一次irisin肌肉注射,空白组、模型组和假手术组不做任何治疗。治疗后测定大鼠腰椎和股骨骨密度(BMD),血清irisin、成骨细胞特异性转录因子2(Runx2)、骨保护素(OPG)表达水平,碱性磷酸酶(ALP)、Runx2及OPG蛋白表达水平,Runx2、OPG基因表达含量,骨髓中骨钙素(OC)、I型前胶原氨基肽(PINP)含量。结果：与模型组相比,运动组和模型+irisin注射组腰椎及股骨BMD、血清irisin、Runx2、OPG含量、ALP、Runx2、OPG蛋白表达量、Runx2、OPG mRNA表达水平、骨髓中OC和PINP含量均...     

骨金散对去卵巢大鼠骨密度、雌激素水平的影响

目的:复制去卵巢大鼠骨质疏松的动物模型,探讨中药骨金散对去卵巢雌性大鼠雌激素和骨密度的影响.方法:6月龄雌性SD大鼠40只,随机分为去势组和假手术组.去势组切除双侧卵巢,假手术组切除部分脂肪.大鼠去势后1个月,将去势组随机分为3组:模型组、雌激素组和骨金散组,雌激素组每日灌服己烯雌酚0.05mg/kg,骨金散组按1.8...     

唑来磷酸联合普伐他汀治疗大鼠骨质疏松

目的 探讨唑来磷酸和普伐他汀对大鼠骨质疏松的治疗作用.方法 建立SD大鼠雌性去势骨质疏松大鼠模型32只,分别给予唑来磷酸(A组)、普伐他汀(B组)或两种药物联合应用(C组),D组为假手术组,另选8只正常大鼠作为空白对照组.测定大鼠骨密度(BD),同时检测血清中骨钙素(OC)、护骨素(OPG)和护骨素配体(OPGL)的水平.结果 唑来磷酸、普伐他汀能增加骨质疏松大鼠的BD,还能降低血清中OC含量和OPGL/OPG比值,联合使用两者的作用更强.结论 联合使用唑来磷酸和普伐他汀对去势大鼠的骨质疏松有良好的治疗作用.其作用可能与降低血清OC含量和OPGL/OPG比值有关.     

异鼠李素抗骨质疏松作用及机制探讨

目的：研究异鼠李素对去卵巢大鼠致骨质疏松骨的干预作用及机制。方法：取45只11周龄未经产SD雌性大鼠随机分为去卵巢假手术组（Sham）、去卵巢模型组（Model）和异鼠李素治疗组（IH）。用药12周后,micro-CT检测骨微结构形态并进行分析,ELISA法检测血清中抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和骨钙素（OC）水平,RT-PCR检测骨组织骨保护素（OPG）和NF-kB受体活化因子配体（RANKligands,RANKL）mRNA的表达,western blotting检测骨组织活化T细胞核因子c1（NFATc1）的表达。结果：与模型组比,异鼠李素可增加松质骨骨矿密度和体积,增加骨小梁厚度和数量,降低骨小梁间距（P<0.01）;增加骨皮质（密质骨）骨矿密度和体积,使骨皮质增厚,骨皮质孔隙率减少。RT-PCR结果显示,异鼠李素显著增加去卵巢大鼠骨组织OPG mRNA的表达,降低RANKL mRNA的表达。ELISA检测显示,异鼠李素显著降低去卵巢大鼠血液TRAP和OC水平。western blotting检测结果显示,异鼠李素可显著降低骨组织NFATc1的表达。结论：异鼠李素具有防治去卵巢大鼠骨质疏松作用,其机制与调控骨组织RANKL/RANK/OPG信号通路有关。     

红景天苷调控PI3K/Akt信号通路对永久性脑缺血大鼠的保护作用

目的研究红景天苷(salidroside,Sal)通过调控PI3K/AKT信号通路对永久性大脑中动脉闭塞模型(pMCAO)大鼠的神经保护作用及其机制。方法健康成年雄性SPF级雄性SD大鼠70只,其中30只大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(pMCAO组)、红景天苷给药组(pMCAO+Sal组),线栓法造模成功后,对sham组和pMCAO组大鼠腹腔注射生理盐水,pMCAO+Sal组按照50 mg·kg^-1·d^-1腹腔注射红景天苷(50 mg·kg^-1·d^-1),给药1 d。40只大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(pMCAO组)、红景天苷给药组(pMCAO+Sal组)、抑制剂组(pMCAO+Sal+LY组);侧脑室注射PI3K抑制剂30 min后,制备pMCAO模型,1 h后腹腔注射红景天苷,给药1 d。免疫组织化学染色测定脑组织中NeuN表达,Western blot分析脑组织中NeuN蛋白、NF-κBp50核蛋白的表达,RT-qPCR检测IL-6和TNF-α的表达。结果与pMCAO组比较,红景天苷作用后,NeuN免疫荧光染色表达量明显增加,且能够促进NeuN蛋白,抑制NF-κB p50核蛋白及IL-6和TNF-αmRNA表达。经PI3K抑制剂LY294002作用后,红景天苷对上述指标作用不明显。结论红景天苷能够通过调控PI3K/AKT信号通路,抑制NF-κB p50核转录水平,进而抑制炎症因子,对pMCAO模型大鼠具有神经保护的作用。     

柚皮素对破骨细胞特异性基因及OPG/RANKL/RANK表达的影响

目的 观察柚皮素对破骨细胞特异性基因组织蛋白酶-K(CATK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体/核因子-κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK)表达的影响.方法 采用全骨髓细胞诱导法培养破骨细胞,细胞分5组:空白对照组、HG-DMEM诱导组、HG-DMEM+0构.1μmol/L柚皮素组、HG-DMEM+1μmol/L柚皮素组、HG-DMEM+10μmol/L柚皮素组.HE染色、TRAP染色观察破骨细胞形态;分光光度计检测TRAP阳性细胞数;Real time-PCR和Western-blot检测CATK、MMP-9、TRAP及OPG/RANKL/RANK mRNA和蛋白表达.结果 与空白对照组比较,HG-DMEM诱导组TRAP阳性细胞数、TRAP、MMP-9、CATK、RANKL、RANK mRNA和蛋白表达明显增加,OPG mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05).与HG-DMEM诱导组比较,柚皮素预处理24 h能够明显降低TRAP阳性细胞数、CATK、MMP-9、TRAP、RANKL、RANK mRNA和蛋白表达,增加OPG mRNA和蛋白表达(P<0.05),呈剂量依赖性.结论 柚皮素能够抑制破骨细胞的生成和分化,该作用可能是通过OPG/RANKL/RANK信号通路抑制TRAP、MMP-9、CATK表达实现的.     

注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对强直性脊柱炎患者血清DKK-1及骨代谢指标的影响

目的:观察注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者血清Dickkopf-1蛋白(DKK-1)及骨代谢指标的影响.方法:选取2016年12月至2018年6月华中科技大学同济医学院附属普爱医院诊治的40名AS患者为AS组,另选取同期40名健康体检...     

Genistein prevents bone resorption diseases by inhibiting bone resorption and stimulating bone formation

Genistein, a soybean-derived isoflavone, has been shown to suppress osteoclastic bone resorption. To clarify the mechanisms underlying this action, we investigated the effects of genistein on the differentiation, cytoskeleton and function in mice osteoclasts in vitro and bone metabolism in ovariectomized rats. Study design: Primary OCs were isolated from 3 week-old mice and induced by 1,25(OH)(2)D(3). Then OCs were exposed to genistein at various concentration of 0 M, 10(-9) M, 10(-8) M, 10(-7) M, 10(-6) M, and 10(-5) M. The number of TRAP+ cells were counted as well as the surface area of bone resorption on bone slice. F-actin change was observed by Confocal. In vivo, forty 12 week-old female SD rats were randomly assigned to four groups: (1) sham operated (Sham); (2) (OVX); (3) ovariectomized and treated with estradiol (OVX-E); (4) ovariectomized and received genistein (OVX-G). After 12 weeks, BMD, body weight, serum level of alkaline phosphatase (ALP), acid phosphatase (ACP), osteocalcin (OC), IL-1beta, TNFalpha, IL-6 and calcitonin (CT) were evaluated. Femur were sectioned. In addition, the serum estradiol, the weight of uteri and histological behavior were also examined to indicate the side effect of genistein to the uteri. Results: In vitro, the number of TRAP+ cells decreased depending on the concentration of genistein as well as the area of bone resorption. F-actin became disorder under Confocal. In vivo, after treated with genistein, BMD and the serum level of ALP, ACP, osteocalcin increased significantly, while the serum level of IL-1beta and TNFalpha decreased. Especially, the increase of ALP and osteocalcin of OVX-G was higher than that of OVX-E. Histologically, the pachy-trabecula were observed as well as the more mineral deposition lines. Additionally, the uterus weight index and the serum estradiol in OVX-G rats were lower significantly than those of OVX-E. The epithelia of uteri gland in OVX-G appeared cubic while those of OVX-E became squamous. Conclusions: Genistein can prevent bone resorption diseases by the promotion of bone formation and the prevention of bone resorption with slight side effect.     

绝经后妇女骨密度与骨代谢标志物的关系

目的 研究绝经后妇女骨密度(Bone mineral density,BMD)与骨代谢标志物的关系.方法 应用双能X线骨密度仪测量绝经期妇女腰椎BMD值,参照WHO的骨质疏松诊断标准,将109例绝经后妇女分为无骨质疏松(NOP)组,骨量减少组(OPl)组和骨质疏松(OP2)组,测定各组受试者BMD和电化学发光法检测骨代谢标志物包括血清骨钙素(0C)、Ⅰ型原胶原N端肽(PINP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(β-CTX)、25羟维生素D(VitD-T)和甲状旁腺素(PTH)的水平.结果 随着OP程度的加重,BMD值逐渐降低,而年龄逐渐增大;然而不同骨量组患者的OC、PINP、β-CTX和PTH等比较差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).结论 绝经后骨质疏松患者血清骨代谢标志物水平未提示与骨密度存在联系;血清OC、PINP、β-CTX和PTH只反映绝经后妇女骨转换的高低,对绝经后骨质疏松的诊断无明显意义.     

白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素及核因子κB受体活化子配体表达的影响

目的：观察白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素（OPG）及核因子κB受体活化子配体（RANKL）表达的影响。方法：健康3月龄雌性SD大鼠48只，按体重随机分为6组：假手术组（SHAM）、单纯卵巢切除组（OVX）、17β-雌二醇组（ERT，0．1mg·kg^-1·d^-1）。低、中、高剂量白藜芦醇组（RL、RM、RH，每天分别给予10、20、40mg／kg白藜芦醇）。除假手术组外其余各组均切除双侧卵巢。术后1周开始给药，给药8周后处死所有大鼠，测定股骨骨密度（BMD）及骨生物力学性能：弹性模量（ELASTIC）、刚度（STIFFNESS）、最大应力（M-STRESS）最大承载力（M-LORD）。用免疫组织化学染色方法观察股骨OPG、RANKL的表达。结果：与OVX组比较，20、40mg·kg^-1·d^-1白藜芦醇均能上调股骨OPG表达（P〈0．05）。与OVX组比较，20、40mg·kg^-1·d^-1白藜芦醇均下调RANKL的表达，改善股骨骨密度及生物力学性能（P〈0．05）。结论：白藜芦醇在体内可上调骨组织中OPG的表达，下调RANKL的表达，这可能是其改善股骨骨密度及生物力学性能的作用机制。     

壮骨止痛方调节OPG/RANKL平衡抗绝经后骨质疏松作用

目的：研究壮骨止痛方对去卵巢骨质疏松大鼠OPG和RANKL的影响,探讨其抗骨质疏松的作用机制。方法：72只200g左右的SD大鼠按体质量随机抽出假手术组12只,造模组60只,造模组采用双侧去卵巢法造模,假手术组只切除卵巢周围相应质量的脂肪。造模成功后,造模组大鼠按体质量随机分为模型组壮骨止痛方高剂量组(13.2g/kg)、中剂量组(6.6g/kg)、低剂量组(3.3g/kg)和戊酸雌二醇组,每组12只。术后第5天开始药物干预,模型组和假手术组给予相应体积的纯净水,持续13周。给药结束后,酶联免疫法检测大鼠血清和骨组织OPG、RANKL含量,免疫组化法检测大鼠骨组织OPG、RANKL蛋白表达。结果：去卵巢后,大鼠血清和骨组织OPG含量显著下降,RANKL含量显著增加;骨组织OPG蛋白表达显著下调,RANKL蛋白表达显著增强。壮骨止痛方组大鼠血清和骨组织OPG含量显著增加,RANKL含量显著下降;骨组织OPG蛋白表达显著增强,RANKL蛋白表达显著下调。与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论：调节OPG/RANKL平衡可能是壮骨止痛方抗绝经后骨质疏松的作用机制之一。     

Graves眼病患者血清骨代谢相关细胞因子变化及与骨密度的相关性

目的 探讨Graves眼病(GO)患者血清骨代谢相关细胞因子变化及与骨密度的相关性.方法 选取2014年5月至2016年10月收治的60例GO患者为GO组,其中分为轻度GO组18例,重度GO组42例.另设同期进行健康体检的正常人为对照组(40例).测定3组血清骨代谢相关细胞因子[护骨素(OPG)、细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)]及第2~4腰椎(L2~4)、股骨颈、Ward三角和大转子区骨密度(BMD).结果 (1)GO组血清OPG、RANKL、IL-6、TNF-α较对照组明显升高,OPG/RANKL、IL-10、IGF-Ⅰ较对照组明显降低,且重度GO组血清OPG、RANKL、IL-6、TNF-α较轻度GO组明显升高,OPG/RANKL、IL-10、IGF-Ⅰ较轻度GO组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).(2)GO组L2~4、股骨颈、Ward三角和大转子区BMD较对照组明显降低,且重度GO组L2~4、股骨颈、Ward三角和大转子区BMD较轻度GO组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).(3)对照组血清OPG、RANKL、OPG/RANKL、IL-6、IL-10、TNF-α、IGF-Ⅰ与各部位BMD均无相关性(P>0.05).GO组血清OPG、RANKL、IL-6、TNF-α与各部位BMD均具有负相关性(r值分别为-0.685、-0.722、-0.775、-0.798,P<0.05),OPG/RANKL、IL-10、IGF-Ⅰ与各部位BMD均具有正相关性(r值分别为0.712、0.689、0.803,P<0.05).结论 GO患者血清OPG、RANKL、IL-6、TNF-α水平升高,OPG/RANKL、IL-10、IGF-Ⅰ水平降低,且其变化与骨代谢异常和骨密度降低有关.