丹皮酚对食管鳞癌细胞株Eca-109的体外放射增敏作用和机制

目的探讨丹皮酚在体外对人食管癌Eca-109细胞放射增敏作用的机制。方法采用 MTT 法检测丹皮酚对Eca-109细胞的增殖抑制作用。松胞素B ( CB )微核法研究丹皮酚对Eca-109放射敏感性的影响。克隆形成试验观察丹皮酚对Eca-109细胞的放射增敏作用。免疫组织化学法分析射线联合丹皮酚对Eca-109细胞的COX-2和Survivin表达的影响。结果①丹皮酚对人食管癌细胞Eca-109有生长抑制作用,半数抑制浓度( IC50)为(59.40±2.23) mg/L。②7.81 mg/L 丹皮酚加重照射后Eca-109细胞的染色质损伤,提高其放射敏感性。③克隆形成实验显示,丹皮酚对Eca-109细胞有增敏作用,放射增敏比为1.092。④6 Gy X射线照射后48 h,Eca-109细胞中的COX-2和Survivin的表达增加(P<0.01),3.91、7.81、15.63 mg/L丹皮酚可不同程度降低照射后COX-2和Survivin的表达,其中3.91 mg/L丹皮酚对COX-2表达的下调差异无统计学意义,其余差异均有统计学意义( P<0.01)。两种蛋白表达的变化呈正相关性(r=0.955,P<0.05)。结论丹皮酚在体外对人食管癌细胞 Eca-109有放射增敏作用,其作用机制可能与下调COX-2和Survivin两种蛋白的表达相关。     

丹皮酚抑制U251人脑胶质瘤细胞增殖的作用研究

目的 探讨丹皮酚(Paeonol,Pae)对人脑胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的人脑胶质瘤细胞株U251的增殖抑制作用,用透射电镜和流式细胞仪观察Pae对U251细胞的诱导凋亡作用.结果 Pae在31.25～250 mg/L浓度范围内对U251细胞的增殖均有抑制作用,呈现明显的量效和时效依赖关系.诱导电镜下可见肿瘤细胞发生凋亡改变.Pae在31.25～250 mg/L浓度下均可诱导U251细胞发生凋亡,其浓度越高、作用时间越长,凋亡率越高,有明显的时效和量效关系.结论 Pae对有抑制人脑胶质瘤细胞株U251的增殖和诱导其发生凋亡的作用.     

丹皮酚对大肠癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响

目的 观察丹皮酚(Paeonol)对大肠癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 用不同浓度的丹皮酚(0、30、60、120mg/L)在体外处理大肠癌LoVo细胞,分别用CCK-8比色法、PI/Annexin V双染法、蛋白质印迹法检测LoVo细胞活力、细胞凋亡率、细胞凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)及自噬相关基因蛋白(Atg5、LC3-Ⅱ和Beclin1)的表达情况。结果 通过丹皮酚处理后,CCK-8比色法显示丹皮酚以剂量、时间依赖的方式抑制LoVo细胞的增殖;PI/Annexin V双染后流式细胞仪检测显示,随着药物浓度的增加,LoVo细胞凋亡率也逐渐增加;免疫印迹结果显示,LoVo细胞凋亡相关蛋白Bax蛋白表达增加,抗凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白的表达降低;此外,丹皮酚能上调LoVo细胞自噬相关基因Atg5、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白的表达。结论 丹皮酚对大肠癌LoVo细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,其机制可能是通过诱导细胞自噬实现的。     

丹皮酚抑制GLC-82细胞增殖的体外实验研究

目的探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对人肺癌细胞株GLC-82增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的人肺癌细胞株GLC-82的增殖抑制作用,用透射电镜和流式细胞仪观察Pae对GLC-82细胞的诱导凋亡作用。结果Pae在31.25～250mg/L浓度范围内对GLC-82细胞的增殖均有抑制作用,呈现明显的量效和时效依赖关系。透射电镜下可见肿瘤细胞发生凋亡改变。Pae在31.25～250mg/L浓度下均可诱导GLC-82细胞发生凋亡,有明显的时效和量效关系。丹皮酚作用后细胞周期发生明显变化,主要表现为S期细胞增加,G0/G1期和G2/M期细胞减少,细胞周期几乎停滞于S期。结论Pae有抑制人肺癌细胞株GLC-82的增殖和诱导其发生凋亡的作用。     

高效液相色谱法测定丹皮酚软膏中丹皮酚的含量

目的建立用高效液相色谱法测定丹皮酚软膏中丹皮酚含量的方法。方法采用高效液相色谱法,C18柱,流动相为甲醇-水(60∶40),流速1.0 ml/min,紫外检测波长为274 nm。结果丹皮酚在0.112~1.12μg之间呈良好的线性关系(r=0.9997)。平均回收率为97.05%(RSD=1.35%,n=6)。结论所建立的方法稳定可靠灵敏、准确、简便,可用于丹皮酚软膏的质量控制。     

荧光增敏法测定咽炎片中丹皮酚的含量

目的 建立测定咽炎片中丹皮酚含量的荧光分析法.方法 基于AlC13试剂对于丹皮酚具有荧光增敏作用,在pH7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲体系中,于最大发射波长λem=455 nm处（最大激发波长λex=295nm）下检测丹皮酚的含量.结果 丹皮酚的浓度在1.3 ×10-4～7.3 ×10-4μg/ml内与荧光强度增大值△F呈线性关系良好（r=0.999）,回归方程为△F=89.45p（×10-3 μg/ml）-0.2777,检出限为0.8×10-4μg/nl,回收率为95.4％～97.8％,相对标准偏差小于2.53％.结论 该方法准确可靠,可应用于咽炎片中丹皮酚含量的测定.     

丹皮酚的抗炎作用及其机制

丹皮酚对由角叉菜胶、蛋清、甲醛、组胺、5-羟色胺和缓激肽所致的大鼠足砳肿胀,对二甲苯致小鼠耳壳肿胀和内毒素致腹腔毛细血管通透性升高均有显著的抑制作用,摘除大鼠双侧肾上腺后其抗炎作用仍存在。丹皮酚抑制炎性组织中PGE_2的生物合成,抑制角叉菜胶胸膜炎多形核白细胞的移行,对大鼠肾上腺Vc的含量无明显影响,也不能抑制由单侧切除大鼠肾上腺所致对侧肾上腺代偿性增生。     

丹皮酚诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

丹皮酚有镇静、催眠、解热、镇痛、抗炎、抗菌等药理作用。细胞凋亡是生物体内广泛存在的一种重要的生命过程,是多细胞动物调节机体发育、维护内环境稳定、有基因调控的细胞主动性死亡过程。近年来试验研究表明,丹皮酚还具有抗肿瘤细胞增殖及促肿瘤细胞凋亡的生物学作用。本文综述了丹皮酚诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究进展。     

丹皮酚对人肝癌Bel-7404的抑瘤效应及其机制

目的：探讨丹皮酚（Paeonol,Pae）抑制人肝癌细胞株Bel-7404增殖作用及其分子机制。方法：应用光学显微镜、MTT法检测经不同浓度、不同时间Poe处理Bel-7404细胞后的增殖抑制作用;DNA凝胶电泳法、TUNEL法检测细胞凋亡;用RT—PCR法、免疫细胞化学ABC法检测抑癌基因PTEN和致癌基因Akt表达水平。结果：与空白对照组比,Pae能抑制人肝癌细胞Bel-7404的增殖,诱导其凋亡,光镜下可见明显的凋亡细胞;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征;RT—PCR和免疫细胞化学检测显示,Poe处理Bel-7404后可使PTEN表达升高,Akt表达下降。结论：Pae具有抗Bel-7404细胞增殖的作用,其机制可能是通过抑制P13K通路,增强诱导其凋亡有关。     

丹皮酚对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及其机制

目的 探讨丹皮酚对大鼠肾缺血再灌注损伤（RIRI）的作用及其机制。方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（RIRI组）、丹皮酚组（Pae组）、TLR4抑制剂组（TAK242组）及丹皮酚+TLR4抑制剂组（Pae+TAK242组）,每组6只。缺血（45 min）再灌注（24 h）损伤模型成功建立后检测各组大鼠血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、胱抑素C (CysC)水平,ELISA检测血清中IL-1β和IL-18水平,HE染色观察各组肾脏组织形态学变化,免疫组化检测肾脏组织中TLR4、MyD88、IL-1β、IL-18、caspase 1表达及分布,Western blotting检测TLR4、MyD88、细胞焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3 (NLRP3)、caspase 1、Gasdermin D (GSDMD)、IL-1β、IL-18蛋白表达水平。结果 与Sham组比较,RIRI组Scr、Bun及CysC水平升高（均P <0.05）,肾组织损伤较重,炎性细胞因子IL-1β、IL-18水平升高（均P <0.05）,NLRP3、caspase 1、G...     

冬凌草甲素对食管癌干细胞放射增敏作用的研究

目的 研究冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人食管癌细胞(ECCs)株Eca-109中食管癌干细胞的放射增敏作用.方法 32μg/mL冬凌草甲素处理的Eca-109细胞给予不同剂量照射,MTT法检测细胞增殖抑制作用,克隆形成实验检测细胞放射敏感性和克隆形成能力,流式细胞仪检测p75NTR的表达.结果 实验组和对照组增殖抑制率组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).克隆形成实验放射增敏比为2.35.随着照射剂量的增加,实验组和对照组p75NTR的表达均呈增加趋势;0、2和4 Gy剂量照射后实验组p75NTR的表达均少于对照组.结论 ORI对Eca-109细胞有明显的增殖抑制作用和放射增敏作用,其增敏机帝l可能与增加食管癌干细胞的放射敏感性有关.     

ZEB1对食管癌细胞侵袭转移的影响及作用机制研究

目的 探讨E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding protein 1,ZEB1）对食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）增殖和侵袭转移的影响和机制。 方法 选择人ESCC细胞系EC9706细胞为研究对象,采用ZEB1 shRNA对EC9706细胞进行转染,敲除ZEB1表达;采用CCK8法检测细胞活力;细胞侵袭转移能力通过划痕实验检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）技术检测转染后细胞ZEB1 mRNA表达水平;ZEB1,细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）1/2,p-ERK1/2, E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平通过免疫印迹（Western blot,WB）检测。 结果 与对照组相比,敲除ZEB1的EC9706细胞系的细胞活力明显降低,并抑制了ESCC的侵袭转移能力（P＜0.05）。ZEB1表达水平降低减少了ERK1/2激活水平,促进E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达（P＜0.05）。 结论 下调ZEB1表达抑制ESCC细胞增殖和侵袭转移能力,其作用机制与ERK1/2激活抑制及调控E-cadherin、N-cadherin相关。     

ABCE1基因对人食管癌细胞Eca109的影响及作用机制

目的 明确ABCE1基因对食管癌Eca109细胞中的增殖、侵袭、迁移、凋亡生物学行为的影响并对其作用机制进行初步探讨.方法 将构建好的ABCE1的SiRNA绿色荧光载体转染入食管癌Eca109细胞中,于荧光显微镜下观测转染效率并应用Western blot法及RT-PCR法证实基因沉默的效果,通过Western blot法检测RNase L的改变,MTT法分析细胞增殖能力并绘制细胞生长曲线,Transwell法检测细胞侵袭力,Transwell法检测细胞侵袭力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 转染ABCE1-SiRNA后的Eca109细胞内可见绿色荧光.Western blot法及RT-PCR法证实了基因沉默的效果(P＜0.05).MTT实验证实,转染ABCE 1-SiRNA载体的食管癌细胞与阴性对照组和空白对照组的细胞相比,增殖受到显著抑制(P＜0.05).Transwell结果显示转染ABCE1-SiRNA载体的食管癌细胞穿膜细胞数较阴性对照组和空白对照组的细胞明显减少(P＜0.05).转染ABCE1-SiRNA-1和转染ABCE1-SiRNA-2的细胞与空白对照组细胞和转染ABCE1-SiRNA-N的细胞相比较,细胞迁移发生明显减慢(P＜0.05),流式细胞仪检测细胞凋亡显示转染ABCE1-SiRNA载体的细胞的细胞凋亡率均显著高于阴性对照组和空白对照组细胞(P＜0.05).结论 抑制ABCE1基因表达后,食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力被抑制,细胞发生早期凋亡.这表明ABCE1基因的表达对食管癌细胞Eca109具有肿瘤生物学行为的影响.     

lncRNA-NORAD表达对食管癌Eca-109细胞生物学行为的影响及其机制

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)-DNA损伤诱导的非编码RNA(NORAD)在食管癌Eca-109细胞中的表达,分析沉默NORAD通过miR-26a-5p/Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)对食管癌Eca-109细胞生物学行为的影响.方法:收集45例食管癌患者癌组织和40例癌旁正常组织标本,培养正常人食...     

环巴胺阻断Hedgehog信号通路对食管癌EC109细胞上皮间质化逆转的影响及机制

目的：探讨环巴胺阻断Hedgehog通路对食管癌EC109细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用及其可能机制。方法：实验分为实验组和对照组,实验组应用Hedgehog通路特异性阻断剂环巴胺作用食管癌EC109细胞48 h。通过real-time PCR检测Gli1的表达变化,观察细胞形态变化,通过血管拟态实验检测血管形成能力变化,Transwell小室侵袭和迁移实验、黏附实验分别检测细胞侵袭、迁移和黏附能力变化,real-time PCR及Western 印迹方法检测EMT相关标志物E钙粘蛋白（E-cadherin）、β连环蛋白（β-catenin）、波形蛋白（Vimentin）及EMT调控因子Snail、Twist1等的表达变化。结果：环巴胺阻断EC109细胞Hedgehog 信号通路Gli1的mRMA表达明显减少为（41.819±20.150）%,形态发生明显变化,血管拟态个数较对照组[（2.780±0.424） vs. （5.080±0.634）]明显减少（t=-16.919,P=0.000）,侵袭实验较对照组[（24.800±2.588） vs.（55.400±4.879）]和迁移实验较对照组[（23.200±1.924） vs. （65.400±4.775）]均明显减少（t=-12.390,P=0.000;t=-18.331,P=0.000）,同种细胞间黏附增强（F=9.327,P=0.009）,上皮表型标志物E-cadherin表达较对照组[（0.38８±0.56５） vs. （0.22８±0.582）]明显上调（t=3.421,P=0.027）,而间质表型Vimentin、β-catenin的表达水平较对照组[（0.58８±0.109） vs. （0.507±0.05１）;（0.998±0.128） vs. （0.756±0.03８）]明显下调（t=4.221,P=0.013;t=6.781,P=0.002）;与对照组相比,实验组细胞中转录因子Snail的表达较对照组[（0.401±0.02１） vs. （0.756±0.03８）]下调（t=6.774,P=0.002）,Twist1的mRNA表达量相对于对照组也明显下调为（74.987±9.031）%。结论：环巴胺阻断Hh信号通路能明显逆转EC109细胞EMT过程,其机制可能与下调转录因子Snail及Twist1表达有关。     

丹皮酚增强顺铂对人食管癌细胞Eca-109的抗肿瘤作用

目的探讨丹皮酚联合顺铂在体内外应用对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用。方法采用MTT体外试验法和裸鼠移植瘤动物模型体内试验法研究两药的抗肿瘤作用,两药相互作用指数(CDI)评价联合用药性质。结果丹皮酚在体外可明显抑制Eca-109细胞增殖,其IC50为124·77mg/L;不同浓度的丹皮酚与顺铂联用时抑制率较单一用药时显著提高,差异具有显著性,采用两药相互作用指数分析,丹皮酚7·81、15·63、31·25mg/L与系列浓度(0·078～2·5mg/L)的顺铂联合用药时具有协同作用(CDI<1)。体内灌胃给予丹皮酚25、50、100、200mg/kg对裸鼠移植人食管癌Eca-109的抑制率分别为10·67%、23·54%、27·91%、34·46%;丹皮酚在100mg/kg剂量下与顺铂5mg/kg联合用药抑制率为77·91%,与单一用药时比较差异有显著性(P<0·05),CDI=0·74。结论丹皮酚对人食管癌细胞Eca-109有抗肿瘤作用,与顺铂联合应用具有明显的协同作用。     

塞来昔布对食管癌EC109细胞凋亡及机制的影响

目的利用分析各种浓度环氧化酶-2 (COX-2)特异度抑制剂塞来昔布对食管癌EC109细胞系的作用,进而对COX-2蛋白表达的影响及对细胞凋亡能力的作用,进一步探讨塞来昔布对食管癌细胞凋亡的作用及机制。方法使用0μmol/L、20μmol/L、60μmol/L、100μmol/L四个浓度的塞来昔布处理EC109细胞24 h,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法测定COX-2蛋白表达;流式细胞仪测定EC109细胞凋亡情况。结果与0μmol/L塞来昔布组比较,20μmol/L、60μmol/L、100μmol/L塞来昔布组EC109细胞内COX-2蛋白表达不断降低(1. 581±0. 116; 1. 226±0. 089,0. 846±0. 076,0. 521±0. 082)(P <0. 05);而细胞凋亡率逐步上升(1. 700±0. 557,13. 400±1. 735,18. 766±1. 301,28. 100±1. 997)(P <0. 05)药物浓度依赖于梯度。结论塞来昔布是一种COX-2抑制剂,可能以浓度梯度的形式抑制COX-2蛋白的表达,从而促进EC109细胞的...     

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。     

蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western-Blot法检测凋亡抑制蛋白survivin,caspeas-3蛋白的表达.结果 随着蟾蜍灵浓度及作用时间的增加,细胞存活率逐渐降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);随着药物浓度增加,survivin蛋白表达逐渐下降,同时活化caspase-3.结论 蟾蜍灵可诱导食管癌ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin蛋白和活化caspase-3有关.     

EVI1表达与食管癌细胞放疗敏感性的关系及机制

目的 探讨异位病毒整合位点1(EVI1)对食管癌细胞放疗敏感性的影响及作用机制.方法 选择在我院接受放射治疗的食管癌患者组织标本67例,qRT-PCR检测EVI1在食管癌组织中的表达水平,Spearman等级相关分析EVI1的表达与放疗敏感性的相关性.常规培养ECA109细胞,采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株...