CD4+/CD8+ T淋巴细胞在肝细胞癌组织中的浸润及与预后的相关性研究

目的 检测CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的浸润程度,并分析其与预后的相关性。方法 收集行肝切除术的HCC患者215例,采用免疫组化技术检测CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞在HCC癌组织中的浸润程度,根据浸润情况比较患者肝切除术后无瘤生存率和总生存率。结果 CD4⁺ T淋巴细胞高浸润和低浸润比例分别为60.9%和39.1%。CD4⁺ T淋巴细胞高浸润组患者总生存率和无瘤生存率均显著高于低浸润组（P=0.015,P=0.038）。CD8⁺ T淋巴细胞高浸润和低浸润比例分别为34.9%和65.1%。CD8⁺ T淋巴细胞高浸润组患者的总生存率和无瘤生存率亦显著高于低浸润组患者（P=0.033,P=0.047）。结论 CD4⁺或CD8⁺ T淋巴细胞低浸润可能与HCC患者术后不良预后相关。     

基于质谱流式细胞技术揭示TP53突变型乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌的免疫微环境特征

目的 探讨TP53突变型乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）相关性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的肿瘤免疫微环境特征。方法 收集2018—2019年广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科手术切除的38例HCC患者活体组织标本及其配对癌旁组织标本，提取组织DNA，并进行基因突变分析。采用质谱流式细胞术（CyTOF）比较TP53突变组和TP53未突变组中癌组织与癌旁组织以及两组癌组织之间的免疫微环境特点。结果 采用CyTOF鉴定TP53突变组和TP53未突变组所有免疫细胞，结果鉴定为22个细胞亚群，包括CD4⁺T细胞亚群、CD8⁺T细胞亚群、B细胞亚群、树突细胞亚群、自然杀伤（natural killer cell，NK）细胞亚群、NKT细胞亚群、粒细胞亚群和2个未知细胞亚群。其中，TP53突变组癌组织中CD8⁺T细胞和CD4⁺T细胞的表达比例均较未突变组癌组织高（2.26% vs 0.47%，P=0.028；7.53% vs 3.55%，P=0.046）。结论 TP53突变型HBV相关性HCC的肿瘤免疫微环境具有免疫异质性。     

碳离子（12C6+）抑制JAK2/STAT3通路促进肺癌中CD8+ T细胞浸润的研究

目的 探索碳离子（¹²C⁶⁺）照射后JAK2/STAT3通路的改变及下游蛋白FOXP3调控的肺癌中CD8⁺T细胞的浸润差异。方法 基于C57BL/6小鼠Lewis荷瘤模型的RNA测序分析,筛选出碳离子照射后肺癌中显著改变的JAK2/STAT3通路及相关的差异表达基因及蛋白如FOXP3。利用R软件“GSVA”中ssGSEA免疫浸润算法,探索FOXP3与肺癌免疫微环境中主要免疫细胞浸润的相关性并基于碳离子联合STAT3抑制途径（氯硝柳胺）对肺癌中CD8⁺T细胞浸润进行分析。结果 碳离子照射后,肺癌中JAK2/STAT3通路被抑制,相关基因和蛋白表达下调。基于ssGSEA算法的免疫评分显示,FOXP3表达与肺癌免疫微环境中CD8⁺T细胞浸润呈显著负相关。通过碳离子照射联合STAT3抑制剂氯硝柳胺,进一步明确了靶向JAK2/STAT3通路对于增加肺癌中CD8⁺T细胞浸润的协同作用。结论 碳离子（¹²C⁶⁺）可以通过靶向JAK2/STAT3通路与免疫治疗发挥协同增效的作用。     

乳腺浸润性导管癌组织中ALDH1+/CD133+干细胞样细胞与血管生成的关系

目的 探讨乳腺浸润性导管癌组织中肿瘤干细胞标志物ALDH1、CD133的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法 应用免疫组织化学双染法检测120例乳腺浸润性导管癌组织中ALDH1⁺/CD133⁺ 干细胞样细胞,单染法检测血管性标记CD34、CD105及VEGF的表达情况。统计ALPH1⁺/CD133⁺干细胞样细胞与临床病理因素;CD34、CD105与VEGF的关系。结果 25.83％（31/120）的病例存在ALDH1⁺/CD133⁺干细胞样细胞,ALDH1⁺/CD133⁺干细胞样细胞与ER、VEGF的表达及MVD均相关（P＜0.05）,但与年龄、肿瘤直径、PR、Her-2、组织学分级及淋巴结转移均无关（P＞0.05）。结论 乳腺浸润性导管癌组织中ALDH1⁺/CD133⁺干细胞样细胞可能通过调节VEGF的表达促进肿瘤新生血管的生成。     

基于单细胞质谱流式技术分析膀胱肿瘤微环境中免疫细胞的组成

目的 探讨单细胞质谱流式技术（single-cell mass cytometry,CyTOF）分析膀胱癌组织与癌旁组织浸润性免疫细胞亚群特征的效果,为膀胱癌异质性研究提供新的策略。方法 收集4例膀胱癌患者新鲜癌组织及其癌旁组织,通过酶解法联合机械法解离制备成单细胞悬液。采用CyTOF检测肿瘤浸润性免疫细胞中26种免疫相关标志物的表达情况。结果 通过细胞相似性分析,将膀胱 CD45⁺免疫细胞分成25个亚群（CD4⁺T细胞簇7个、CD8⁺T细胞簇8个、巨噬细胞簇4个、B细胞簇2个、树突状细胞簇1个和其他类型的免疫细胞簇3个）。膀胱癌组织与癌旁组织浸润性免疫细胞亚群相对含量存在差异,膀胱癌组织中T细胞相对富集,占比为76.73%;癌旁组织中B细胞和巨噬细胞相对富集,占比分别为15.20%和23.82%。膀胱癌组织中CD4⁺Treg细胞的平均占比高于癌旁组织（2.20% vs 0.81%,P=0.016）。结论 CyTOF可有效区分膀胱肿瘤微环境中的免疫细胞亚群,实现对肿瘤异质性的检测,可为膀胱癌的精准治疗提供依据。     

硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术患者认知功能及细胞免疫功能的影响

目的 探讨硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术患者认知功能及细胞免疫功能的影响。方法 采用查随机数字表法将40例老年肺癌根治术患者随机分为观察组和对照组,每组20例。观察组采用硬膜外阻滞联合全身麻醉,对照组采用静脉全身麻醉。用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法测定CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺细胞和NK细胞水平,简易智力状态检查表（MMES）评估认知功能,VAS评分法及Ramsay镇静评分法评估疼痛和镇静状况,并观察两组患者手术时间、术后恢复自主呼吸时间、苏醒时间以及拔管时间。结果 观察组患者手术时间、术后恢复自主呼吸时间、苏醒时间以及拔管时间均优于对照组（P＜0.05）,但两组患者术后6 h、12 h VAS疼痛评分和Ramsay镇静评分差异均无统计学意义（P＞0.05）。两组患者术后1 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均低于术前（P＜0.05）;CD8⁺细胞水平高于术前（P＜0.05）;观察组患者术后1 d 和7 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均显著高于对照组（P＜0.05）,但CD8⁺细胞水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。术后7 d两组患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平明显高于术后1 d（P＜0.05）,CD8⁺细胞水平明显低于术后1 d（P＜0.05）;观察组术后7 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平明显高于对照组（P＜0.05）,CD8⁺细胞水平明显低于对照组（P＜0.05）。两组患者MMES评分均显著低于术前（P＜0.05）,但观察组评分高于对照组;术后认知功能障碍发生率亦低于对照组（P＜0.05）。结论 硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术后认知功能影响较小,同时可促进细胞免疫功能恢复。     

肺腺癌浸润CD8+T细胞表达CD39的机制

目的：探讨肿瘤浸润CD8⁺T细胞表达CD39的可能机制。方法：通过TCGA数据库的肺腺癌(LUAD)组织及正常肺组织转录组数据分析CD39在LUAD组织和正常肺组织中的表达差异及其对患者预后的影响,分析CD39表达与T细胞浸润、激活的关系。用小鼠LUAD Lewis细胞建立小鼠皮下移植瘤模型,FCM检测淋巴结、脾脏以及移植瘤组织中CD8⁺CD39⁺T细胞。收集Lewis细胞培养上清液作为条件培养基(CCM),免疫磁珠法(MACS)分选CD8⁺T细胞、CD11b⁺细胞;在培养基中分别加入CCM、IL-6和采取非接触或接触培养方式进行培养,探索CD8⁺T细胞表达CD39的可能机制。结果：CD39在LUAD组织中呈低表达(P<0.01),其表达水平与LUAD患者OS、T细胞浸润和激活水平均呈正相关(P<0.05或P<0.001)。FCM检测结果显示,在移植瘤组织中CD8+CD39⁺T细胞的比例明显高于淋巴结及脾脏(P<...     

术前超声引导下单次腰方肌阻滞对胃癌根治术患者早期康复及T细胞免疫功能的影响

目的 探讨术前超声引导下单次腰方肌阻滞对胃癌根治术患者早期康复及T细胞免疫功能的影响。方法 选取2017年3月至2018年6月于我院行胃癌根治手术的68例患者作为研究对象,采用随机数字表法分为观察组（n=34）和对照组（n=34）,观察组在麻醉诱导后经彩超引导下行双侧腰方肌阻滞（注射盐酸罗哌卡因）,对照组单纯注射生理盐水,比较两组患者术后镇痛指标、视觉模拟评分（visual analogue score,VAS）、血清CD4⁺CD25⁺ T细胞水平及不良反应。结果 观察组的舒芬太尼用量、镇痛泵按压次数和补救性镇痛比例均低于对照组（P＜0.05）,但镇痛满意度评分高于对照组（P＜0.05）;观察组术后2 h、6 h、12 h和24 h静息状态和运动状态的VAS评分均低于对照组（P＜0.05）;观察组手术前后CD4⁺CD25⁺　T细胞含量差值高于对照组（2.0±0.8 vs 1.1±0.6,t=5.248,P<0.001）;观察组麻醉后发生恶心呕吐比例（5.9% vs 26.5%）、眩晕比例（2.9% vs 20.6%）均低于对照组（P＜0.05）。结论 术前超声引导下单次腰方肌阻滞可减少胃癌根治术患者镇痛药物的使用量,提高术中和术后镇痛效果及术后疼痛满意度,且T细胞免疫功能恢复更快,不良反应较少,有利于早期康复。     

过继性免疫治疗对非小细胞肺癌患者外周血T细胞亚群的影响

目的 研究细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞治疗对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者外周血T细胞亚群及一般情况的影响。方法 采集非小细胞肺癌患者外周血,常规方法体外扩增CIK细胞,分三次回输患者体内,流式细胞仪检测非小细胞肺癌患者治疗前与治疗3次后T细胞亚群的变化,分析其与健康对照组相比外周血T细胞亚群的差异,并观察CIK细胞治疗前后患者一般情况变化。结果 与对照组相比,NSCLC患者外周血中CD3⁺ T 细胞比例、CD3⁺CD4⁺T细胞比例、CD4⁺/CD8⁺ 比值显著下降（P<0.05）,CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著升高（P<0.05）。CIK细胞治疗后与治疗前,CD3⁺ T 细胞比例、CD3⁺CD4⁺ T细胞比例、CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值显著升高（P<0.05）,CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著降低（P<0.05）。CIK细胞治疗后与对照组相比,CD3⁺ T 细胞比例、CD4⁺/CD8⁺T细胞比值显著下降（P<0.05）。CD3⁺CD4⁺ T细胞比例、CD3⁺CD8⁺ T细胞比例升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。CIK细胞治疗前Tregs较对照组显著升高（P<0.05）。CIK细胞治疗后与治疗前相比,Tregs比例显著下降（P<0.05）。结论 CIK细胞输注治疗可以增强NSCLC患者的免疫功能,并改善患者的一般情况,提高生活质量,且未见明显不良反应。     

CD15及CD133在高、低级别胶质瘤中的表达及意义

目的探讨CD15在胶质瘤的表达及分布特征,与目前公认的脑肿瘤干细胞标志物CD133作对照,并探讨两者相关性。方法采用免疫组织化学法检测80例胶质瘤组织（高级别39例,低级别41例）CD15和CD133的表达。用Image-Pro Plus 6.0图像分析处理软件计算CD15和CD133阳性细胞积分光密度值（IOD）。结果CD15与CD133在高、低级别的胶质瘤均有表达。CD15及CD133阳性细胞数以及壁龛随胶质瘤病理级别增高而增多。在高、低级别胶质瘤中CD15⁺细胞与CD133⁺细胞IOD值差异均有统计学意义（z=－3.432,P=0.001;z=－4.192,P=0.000）;CD15⁺细胞与CD133⁺细胞IOD值呈显著正相关（r=0.535,P=0.000）;CD133还表达于含有肥胖细胞成分的胶质瘤肥胖细胞中,并可见CD133+血管。结论CD15及CD133阳性细胞数以及壁龛随胶质瘤病理级别增高而增多。CD15及CD133表达成正相关关系。含有肥胖细胞成分的胶质瘤中大量肥胖细胞CD133阳性,与其不良临床预后相符。关键词：     

基于生物信息学分析细胞周期蛋白依赖蛋白激酶5表达与胃癌免疫浸润细胞的相关性

目的 探讨细胞周期蛋白依赖蛋白激酶5(CDK5)表达与胃癌免疫浸润细胞的关系.方法 采用基因富集分析(GSEA)及单样本基因富集分析(ssGSEA)对免疫相关基因集进行富集评分,采用CIBERSORT网站对免疫细胞组分进行评分.收集36例行胃癌根治术的患者的胃癌组织,采用免疫组织化学法检测CDK5及CD8表达水平.结果...     

TRPM8激活Calcineurin-NFATc3通路调节结肠癌细胞免疫逃逸

目的  探讨TRPM8调节结肠癌细胞免疫逃逸的机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot检测结肠癌细胞系SW620和正常人结肠上皮细胞系CCD 841 CoN中TRPM8的表达水平。将干涉和过表达TRPM8载体TRPM8 siRNA和pcDNA3.1-TRPM8转染至SW620细胞，并设置相应对照组（Control siRNA组和pcDNA3.1组），用CCK-8、集落形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡，酶标仪检测Calcineurin活性，Western blot检测Calcineurin-NFATc3信号通路相关蛋白的表达。采用CCK-8检测CD8⁺T细胞与SW620细胞共孵育的细胞活力，Western blot检测Calcineurin特异性抑制剂FK506处理SW620细胞后NFATc3和PD-L1蛋白表达。结果 与CCD 841 CoN细胞相比，TRPM8 mRNA和蛋白在SW620细胞中的表达均增加（P<0.01）。与Control siRNA组比较，干涉 TRPM8表达后SW620细胞活力、细胞增殖能力、Calcineurin活性，以及TRPM8、PD-L1和 NFATc3蛋白表达均降低（P<0.01），而细胞凋亡率和p-NFATc3蛋白表达均升高（P<0.01）；过表达TRPM8可增强细胞活力、细胞增殖能力和Calcineurin活性，上调TRPM8、PD-L1及NFATc3蛋白表达（P<0.01），下调p-NFATc3蛋白表达（P=0.002）。CD8⁺ T细胞与干涉TRPM8表达的SW620细胞共孵育后总细胞活力降低（P=0.002），而与过表达SW620细胞共孵育后总细胞活力增强（P=0.005）。FK506处理可抑制SW620细胞Calcineurin活性，下调NFATc3、PD-L1蛋白表达（P<0.01）。结论 TRPM8过表达可能通过激活Calcineurin-NFATc3信号通路而促进PD-L1表达，从而增强结肠癌细胞免疫逃逸能力，促进结肠癌细胞增殖。     

CD20+B和CD3+T淋巴细胞在乳腺浸润性导管癌和髓样癌中的表达及与预后的关系

目的 检测CD20+B、CD3+T淋巴细胞在乳腺浸润性导管癌和髓样癌中的表达分布,探讨淋巴细胞浸润与浸润性导管癌预后的关系。方法 利用免疫组织化学链霉素亲和素生物素法检测128例浸润性导管癌,44例髓样癌中CD20、CD3的表达,分析表达差异与预后的关系。组间采用Kruskal-Wallis Test,组内采用卡方检验进行分析。结果 （1）CD20+B、CD3+T这两种淋巴细胞在浸润性导管癌中分布均是瘤周多于瘤内,在髓样癌中淋巴细胞表达高于浸润性导管癌（P＜0.05）。（2）浸润性导管癌中CD20+B、CD3+T淋巴细胞浸润越多,无病生存率越高（P＜0.05）。（3）CD20+B淋巴细胞与组织学分级、肿瘤pTNM分期、淋巴结状态、复发情况呈负相关（P＜0.05）;CD3+T淋巴细胞与组织学分级、淋巴结状态、复发状态呈负相关（P＜0.05）。结论 CD20+ B、CD3+ T淋巴细胞在浸润性导管癌和髓样癌中表达差异有显著性,在浸润性导管癌中其浸润程度与预后相关。     

趋化因子CXCL5调控NF-κB与Wnt/β-catenin信号通路抑制肿瘤免疫促进胃癌的机制研究CSCD

目的探讨CXC趋化因子配体-5(CXCL5)促进胃癌的作用及其潜在分子机制。方法纳入胃癌患者83例,另选取健康者40例作为对照。比较两者的血清CXCL5水平;比较癌组织及癌旁正常组织中CXCL5与CXCR2的表达。检测CXCL5对胃癌细胞ERK/MAPK、PI3K/AKT、NF-κB及Wnt/β-catenin信号通路的影响。用对照与过表达CXCL5的MFC细胞建立胃癌移植瘤模型,记录肿瘤生长和小鼠生存曲线;检测各组小鼠移植瘤中CXCL5、p-NF-κB与p-β-catenin的表达及CD4^+T、CD8^+T与CD56^+CD16^+NK细胞数量。结果胃癌患者的血清CXCL5水平较健康者显著升高(P<0.05)。癌组织中CXCL5与CXCR2的表达较癌旁正常组织显著升高(P<0.05)。CXCL5能显著增加SNU216与MFC细胞p-NF-κB与p-β-catenin的表达(均P<0.05)。与对照组小鼠相比,过表达CXCL5组小鼠的肿瘤体积显著增高(P<0.05),生存期显著降低(P<0.05),癌组织中CXCL5、p-NF-κB与p-β-catenin的表达显著升高(P<0.05),癌组织中CD4^+T、CD8^+T与CD56^+CD16^+NK细胞数量均显著降低(均P<0.05)。结论 CXCL5可能通过调控NF-κB与Wnt/β-catenin信号通路抑制肿瘤免疫从而发挥促进胃癌的作用。     

基于ChinaPca全基因组数据和基因表达量探讨LRP1对前列腺癌发病的影响

目的 探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（low density lipoprotein receptor-related protein-1,LRP1）基因对前列腺癌（prostate cancer,Pca）发病的影响。方法 在ChinaPca GWAS数据中对9个LRP1的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）进行前列腺癌易感性验证;取前列腺癌组织标本12例、癌旁正常组织18例和前列腺炎组织4例进行免疫组化检测;对TCGA和GTEx数据库的LRP1基因表达数据进行分析;在String网站构建LRP1基因的交互作用网络。结果 ChinaPca GWAS数据分析显示,LRP1基因的rs11172113位点可能是前列腺癌遗传易感位点（P=0.083）,TC基因型与Pca发病风险有关（OR=1.267,95%CI：1.066~1.505,P=0.007）。免疫组化检测和TCGA数据库分析结果显示,LRP1在前列腺癌组织和癌旁正常组织中的表达量差异无统计学意义（P>0.05）,整合TCGA和GTEx数据库数据后LRP1在前列腺癌组织中的表达降低（P＜0.05）。交互作用网络显示,LRP1与前列腺癌通路相关基因PLAT、PDGFB、PDGFRB有关联。结论 LRP1基因rs11172113位点可能是前列腺癌的遗传易感位点。LRP1基因在前列腺癌组织中呈低表达,可能通过调节PLAT、PDGFB和PDGFRB基因表达调控前列腺癌相关通路而导致前列腺癌发病。     

SOX方案联合阿帕替尼一线治疗晚期胃癌的临床研究

目的 观察替吉奥、奥沙利铂联合阿帕替尼在晚期胃癌一线治疗中的临床疗效。方法 选择2015年2月至2016年10月于新疆维吾尔自治区人民医院就诊的晚期胃癌患者88例，随机分为试验组和对照组，每组44例。对照组给予替吉奥联合奥沙利铂（SOX方案）化疗，试验组在对照组的基础上应用阿帕替尼，比较两组患者的近期疗效、不良反应及生存情况。结果 试验组患者的客观缓解率明显高于对照组（40.91% vs 20.45%，χ²=4.238，P=0.037），疾病控制率与对照组比较差异无统计学意义（86.36% vs 70.45%，χ²=3.289，P=0.070）。试验组中位总生存期较对照组长（12个月 vs 9.5个月，χ²=4.254，P=0.039），中位无疾病进展生存期亦较对照组长（9个月 vs 6个月，χ²=8.815，P=0.003）；试验组高血压和手足综合征总发生率高于对照组（P＜0.05），其余不良反应发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 替吉奥和奥沙利铂联合阿帕替尼一线治疗晚期胃癌患者可取得较好的临床疗效，能有效延长患者的生存期和疾病进展时间，且安全性良好。