干扰盐皮质激素受体基因对RAW 264.7细胞增殖和凋亡的影响

 目的：应用RNA干扰技术沉默小鼠RAW 264.7巨噬细胞盐皮质激素受体(MR)基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法：针对MR基因设计合成重组MR shRNA质粒,脂质体法转染质粒至RAW 264.7细胞,经G418筛选后获得稳定表达细胞株。细胞分为3组：野生型(WT)组、阴性对照（NC）组和干扰（shMR）组。荧光显微镜下观察确定细胞的转染效率;实时定量PCR法检测细胞中MR mRNA的表达;CCK-8方法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡情况。结果：(1) MR shRNA能明显抑制RAW 264.7细胞的MR基因表达,抑制率70%以上。(2) 从第3 d开始,shMR组细胞的生长速度明显低于NC和WT组（P<0.05）,说明MR shRNA能明显抑制细胞增殖。(3) WT、NC和shMR组的增殖指数分别为(37.2±0.5)%、(37.5±1.6)%和(31.0±1.3)%,shMR组的细胞周期出现改变,S期和G₂/M期比例明显下降,增殖指数下降（P<0.05）。(4) WT、NC和shMR组的细胞凋亡率分别为(2.18±0.36)%、(6.65±0.81)%和(7.70±1.34)%,shMR组略高于NC组,但二者的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：本研究成功构建了稳定干扰MR基因表达的RAW 264.7细胞株,MR shRNA能够明显抑制RAW 264.7细胞增殖,但对其凋亡无明显影响。     

MicroRNA-100对肝癌细胞增殖活力和细胞周期的影响

 目的：探讨microRNA-100(miR-100) 对肝癌细胞增殖活力和细胞周期的影响及其可能机制。方法：通过脂质体介导将人工合成的miR-100模拟物及其阴性对照转染人肝癌HepG2细胞,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法检测转染后HepG2细胞的增殖活力,用流式细胞术判定细胞周期分布,并进一步用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting分析Polo样激酶1(Plk1)的表达水平。结果：荧光显微镜下观察到经阳离子脂质体介导的细胞转染效率大于85%。转染miR-100模拟物的实验组细胞的增殖抑制率在24、48和72 h分别为(43.5±12.2)%、(46.5±3.7)%和(52.1±0.2)%,均显著高于对照组细胞（P<0.01）,并且在72 h实验组细胞增殖指数（35.8±1.4）低于阴性对照组（39.2±1.0）和单纯脂质体组（40.7±2.0）(P<0.05)。同时与对照组相比,实验组细胞Plk1　mRNA和蛋白表达水平在转染miR-100后 72 h明显降低（P<0.05)。结论：miR-100可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与其下调Plk1的表达有关。     

超声引导前锯肌平面阻滞联合胸神经Ⅰ型阻滞在机器人辅助冠状动脉旁路移植术围术期镇痛中的应用

目的 探讨超声引导前锯肌平面阻滞（SAPB）联合胸神经（PECS）Ⅰ型阻滞对机器人辅助直视下冠状动脉旁路移植术（RADCAB）患者围术期镇痛的应用效果。方法 前瞻性随机对照研究。纳入2020年2月—2022年4月天津市第一中心医院行择期RADCAB患者60例,按数字表法随机分为对照组（C组）和SAPB联合PECS Ⅰ阻滞组（SP组）,每组30例。2组患者均采用全身麻醉和术后自控静脉镇痛（PCIA）,SP组患者于麻醉诱导前行超声引导下SAPB联合PECS Ⅰ型阻滞。记录2组患者拔除气管插管后2 h（T₁）、4 h（T₂）、12 h（T₃）和24 h（T₄）静息状态及咳嗽时的疼痛视觉模拟评分法（VAS）评分,比较术中及术后24 h内舒芬太尼用量、术后24 h内PCIA有效按压次数、首次补救镇痛时间、补救镇痛率、拔管时间、ICU停留时间和术后并发症发生情况。结果 C组术中转为开胸手术1例剔除观察。2组患者T₄静息状态和咳嗽时疼痛VAS评分的比较,差异均无统计学意义（P值均>0.05）。SP组患者T₁~T₃静息状态疼痛VAS评分[（2.2±0.7）分、（2.7±0.5）分、（3.1±0.5）分]均低于C组[（4.0±0.6）分、（3.7±0.5）分、（3.7±0.5）分],差异均有统计学意义（t=10.80、7.40、4.04,P值均<0.001）;T₁~T₃咳嗽时疼痛VAS评分[（2.9±0.7）分、（3.4±0.6）分、（3.5±0.6）分]均低于C组[（5.1±0.4）分、（4.6±0.6）分、（4.1±0.5）分],差异均有统计学意义（t=15.44、8.33、3.98,P值均<0.05）。SP组患者术中和术后24 h内舒芬太尼用量分别为（109±13）μg和（62±10）μg,均低于C组[（146±21）μg和（72±10）μg],差异均有统计学意义（t=8.01、3.74,P值均<0.001）。SP组患者术后24 h内PCIA有效按压次数为（4. 4±2.1）次,低于C组的（8.4±1.9）次;首次补救镇痛时间为术后（18.2±3.1）h,大于C组的（8.0±1.7）h;补救镇痛率为26.7%（8/30）,低于C组的82.8%（24/29）：差异均有统计学意义（t=7.57、11.90,χ²=18.70,P值均<0.001）。SP组患者拔管时间为术后（4.4±1.3）h,ICU停留时间为（44.7±10.7）h,均低于C组[（5.4±1.5）h和（54.6±9.7）h],差异均有统计学意义（t=2.81、3.71,P值均<0.001）。SP组患者术后24 h内恶心呕吐发生率为13.3%（4/30）,皮肤瘙痒发生率为3.3%（1/30）,肺不张发生率为3.3%（1/30）,均低于C组[41.4%（12/29）、27.6%（8/29）和27.6%（8/29）],差异均有统计学意义（χ²=5.87、4.97、4.97,P值均<0.05）。结论 超声引导SAPB联合PECS Ⅰ型阻滞能够为RADCAB患者提供安全有效的围术期镇痛,降低阿片类药物用量,减少术后并发症发生,加速患者康复。     

环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法 培养肺腺癌A549细胞,分为阴性对照（si-NC）组及circ0004771小干扰RNA（siRNA）组（si-circ0004771组）,将si-NC和circ0004771 siRNA分别转染入相应组A549细胞中。si-NC组和si-circ0004771组细胞转染后,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测2组细胞circ0004771、miR-339-5p的表达水平,通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力,通过EdU实验检测2组细胞增殖能力,通过Transwell小室实验检测2组细胞迁移和侵袭能力。结果 si-NC组和si-circ0004771组A549细胞circ0004771基因的相对表达水平分别为3.07±0.07和0.68±0.04,miR-339-5p相对表达水平分别为1.14±0.13和2.33±0.07,差异均有统计学意义（t=51.34、13.96,P值均<0.001）。si-NC组和si-circ0004771组A549细胞在培养前（0 h）和培养后24、48 h的吸光度值分别为0.21±0.02、0.35±0.05、0.65±0.04和0.21±0.01、0.33±0.04、0.59±0.05,差异均无统计学意义（P值均>0.05）;而在培养后72 h si-circ0004771组吸光度为0.92±0.15, 小于si-NC组的1.32±0.04,差异有统计学意义（t=4.46,P=0.011）。EdU实验中,si-circ0004771组细胞阳性率为47.97%±4.68%,低于si-NC组的58.61%±2.15%,差异有统计学意义（t=3.58,P=0.023）。转染后si-circ0004771组的细胞迁移率、侵袭率分别为52.27%±2.92%、55.33%±6.29%,均低于si-NC组的99.79%±4.23%、98.67%±5.72%,差异均有统计学意义（t=16.26、8.83,P值均<0.001）。结论 下调肺腺癌A549细胞circ0004771的表达水平,可以降低A549细胞的活力和增殖能力,可抑制A549细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与上调miR-339-5p的表达有关。     

miR-200a对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、成血管分化的作用机制

目的 探讨miR-200a对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSC)增殖、凋亡、成血管分化的作用机制。方法 将hBMSC分为3组，对照组；阴性对照组(NC组),NC组转染NC质粒；试验组，试验组转染MIR-200a inhibitor质粒，MTT法检测各组细胞24、48h和72h细胞活力，流式细胞法检测各组细胞凋亡水平，Western blot检测细胞凋亡关键蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)和Caspase3表达水平，通过miRDB软件对miR-200a的靶向基因进行预测，双荧光素报告实验验证靶基因，Western blot实验检测靶基因转化生长因子β₂(TGF-β₂)及成血管分化关键分子血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)的表达水平。结果 与对照和NC组相比，试验组细胞增殖受到显著抑制，并且随着时间增加抑制能力增强(r=0.63);细胞凋亡显著增加，凋亡相关蛋白Bcl-2表达显著降低，Caspase3表达显著增加，结果均具有显著的...     

下调MAC30对乳腺癌细胞焦亡、血管生成及ATP1A2蛋白的作用机制

目的 探讨下调MAC30对乳腺癌细胞焦亡、血管生成及ATP1A2蛋白水平的影响。方法 MCF-7细胞制成单个细胞悬液,分为乳腺癌组（MCF-7细胞）、NC组（MCF-7细胞转染MAC30-NC-shRNA）、MAC30 shRNA组（MCF-7细胞转染MAC30-shRNA）、ATP1A2组（MCF-7细胞转染ATP1A2-shRNA）及MAC30 shRNA+ATP1A2组（MCF-7细胞转染MAC30-shRNA、ATP1A2-shRNA）。qRT-PCR检测各组MCF-7细胞中MAC30 mRNA表达以证实转染效率,采用CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞焦亡率;体外血管形成实验检测血管形成数目;Western blot检测ATP1A2、SCr、AKT及PI3K水平。结果 乳腺癌组与NC组MCF-7细胞中MAC30 mRNA表达水平、MCF-7细胞焦亡率及MCF-7细胞血管形成数目比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。与乳腺癌组和NC组比较,MAC30 shRNA组、ATP1A2组及MAC30 shRNA+ATP1A2组MCF-7细胞中MAC30 mRNA表...     

RNA干扰UBQLN1基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制研究

目的：观察抑制泛素1（UBQLN1）基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法： Western blot检测UBQLN1在乳腺癌T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7细胞中相对于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的蛋白表达;用Lipofectamine^TM2000将干扰UBQLN1表达的siRNA（UBQLN1-siRNA）转染MDA-MB-231细胞,同时转染阴性对照组（NC组）,并设置空白对照组,收集转染48 h的细胞Western blot检测其UBQLN1的蛋白表达;CCK8法检测UBQLN1-siRNA转染24 h、48 h和72 h的细胞活力;流式细胞仪及Transwell小室分别检测UBQLN1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率及侵袭能力;Western blot检测促凋亡蛋白p53和抑凋亡蛋白Survivin、侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p STAT3)的蛋白表达。结果：与MCF-10A细胞比较,UBQLN1在T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7乳腺癌细胞中的表达均显著升高（P<0.01）;与NC组比较,UBQLN1-siRNA组UBQLN1的蛋白表达显著降低,24 h、48 h和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭能力显著降低,Survivin、MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高（P<0.01）,三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：抑制乳腺癌细胞中UBQLN1基因表达可降低乳腺癌细胞活力和侵袭能力,并诱导细胞凋亡和下调STAT3信号通路。     

颈椎后纵韧带骨化累及C2椎体对颈椎矢状面参数影响的影像学研究

目的 探讨累及C₂椎体的颈椎后纵韧带骨化症（OPLL）对颈椎矢状面形态及其参数的影响。方法 回顾性研究。纳入2016年1月—2020年12月徐州医科大学附属医院脊柱外科颈椎OPLL患者97例,其中男68例、女29例,年龄37~80（59.0±9.6）岁。根据骨化物是否累及C₂椎体将患者分为2组,OPLL累及C₂椎体36例为C₂阳性组,未累及C₂椎体 61例为C₂阴性组。在立位颈椎侧位X线片上测量C_0~2及C_2~7颈椎前凸角（CL）、C₂倾斜角（C₂S）、胸廓入口角（TIA）、T₁倾斜角（T₁S）、颈倾角（NT）、枕颈倾斜角（OCI）、C_2~7矢状轴距离（SVA）等矢状面参数。观察项目：（1）对比2组患者性别、年龄、日本骨科协会（JOA）评分、颈椎功能障碍指数（NDI）评分等临床一般资料;（2）比较2组患者骨化物累及的颈椎节段、椎管侵占率、OPLL分型以及影像学上有无脊髓高信号、骨化物是否触及K线的情况;（3）比较2组间颈椎矢状面各项影像学参数的差异,分别对2组内矢状面各影像学参数进行相关性分析;（4）对OPLL累及C₂的危险因素进行多因素logistic回归分析。结果 2组患者性别、年龄、JOA评分差异均无统计学意义（P值均>0.05）。C₂阳性组骨化物累及颈椎节段数（4.6±1.2）个、椎管侵占率52.42%±9.96%、NDI评分（21.08±7.65）分,均高于C₂阴性组的（3.1±0.9）个、45.87%±13.08%、（17.70±8.49）分,差异均有统计学意义（P值均<0.05）。在OPLL分型上,C₂阳性组和C₂阴性组分型构成比差异有统计学意义（P<0.001）。2组间骨化物触及K线率、脊髓高信号率差异均无统计学意义（P值均>0.05）。颈椎矢状面各项影像学参数中,仅C₂阳性组C₂S（11.25°±5.84°）高于C₂阴性组（7.66°±5.65°）,差异有统计学意义（t=2.99, P=0.004）。2组内颈椎矢状面影像参数相关性分析显示：C₂阳性组中,C₂S与C_0~2CL、C_2~7SVA呈正相关（r=0.52、0.80,P值均<0.05）;C₂阴性组中,C₂S与C_0~2 CL、C_2~7SVA呈正相关,与C_2~7CL呈负相关（r=0.43、0.71、-0.39,P值均<0.05）。多因素logistic回归显示,C₂S增大[比值比（OR）=1.208,95%可信区间（CI）1.032~2.210,P=0.014]和骨化物累及颈椎节段数（OR=3.026,95% CI 2.136~5.076,P=0.001）为OPLL累及C₂的独立性危险因素。结论 颈椎OPLL累及C₂者以累及节段更多和椎管侵占率更高为特点,在颈椎矢状面影像学参数上表现为更高的C₂S,且C₂S和骨化物累及颈椎节段数为OPLL累及C₂的独立危险因素。     

STIM1 对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析

目的：探讨STIM1对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析。方法：以正常乳腺上皮细胞MCF-10A作为对照,Western blot检测乳腺癌 MCF7、HCC1569、MDA-MB-231、BT549细胞中STIM1的蛋白表达;将STIM1的靶向siRNA序列（STIM1-siRNA组）转染MDA-MB-231细胞,并设置阴性对照组和空白对照组,转染48 h后检测各组细胞STIM1的蛋白表达;MTT法检测转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率;RT-PCR检测IL-6 和TNF-α 的mRNA表达;Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原（PCNA）、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：乳腺癌细胞中STIM1的蛋白表达均显著高于在MCF-10A细胞表达（P<0.05）;转染STIM1的siRNA后MDA-MB-231细胞中STIM1的蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）;与空白对照组比较,STIM1-siRNA 组细胞在48 h和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,IL-6 和TNF-α 的mRNA表达显著降低,PCNA、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达显著降低,Bax和Caspase3蛋白表达显著升高。结论：STIM1基因在乳腺癌细胞高表达,通过RNA干扰抑制其表达可降低癌细胞活力,诱导细胞凋亡、提高免疫及下调STAT3信号。     

膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞的增殖产生的影响。方法 采用Western blotting法鉴定siRNA可有效抑制膜联蛋白A7表达,然后用脂质体转染法将siRNA转染入HepG2细胞,将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,在转染后24h、48h、72h进行细胞计数以绘制细胞增殖曲线,转染后48h进行MTT实验以检测细胞增殖活力;免疫组织化学法检测cyclinD1和Ki67的表达,Western blotting法检测cyclinD1的表达情况。结果 转染了靶向膜联蛋白A7的siRNA后48h的HepG2细胞,细胞计数和MTT实验可见siRNA干扰组细胞增殖活力较阴性对照组和空白对照组显著降低（P<0.05）;cyclinD1和Ki67蛋白表达均为siRNA干扰组细胞表达显著低于两对照组（P<0.05）。 结论 膜联蛋白A7低表达可能对HepG2细胞的增殖具有一定的抑制作用。     

不同β-肾上腺素能受体对低氧应激大鼠心脏舒缩功能的影响

目的:探讨不同β-肾上腺素能受体(β-adrenergic receptor,β-AR)在急性低氧应激中对大鼠左、右心室舒缩功能的影响。方法:健康雄性SD大鼠随机分为4组(n=7):对照组(control group)、非选择性β-肾上腺素能受体阻断剂普萘洛尔组(propranolol group)、选择性β_1-肾上腺素能受体阻断剂阿替洛尔组(atenolol group)和选择性β2-肾上腺素能受体阻断剂ICI 118,551组(ICI 118,551 group),各组大鼠分别在常氧(西宁,海拔2 260 m,20.9% O_2,79.1% N_2)和急性低氧(15.0% O_2,85.0% N_2)通气的状态下进行实验,监测各组大鼠心率(heart rate,HR)、左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、右心室收缩压(right ventricular systolic pressure,RVSP)及左、右心室内压最大上升和下降速率(±dp/dt_(max))等心功能指标变化;同时,比较低氧通气前后动脉血气的变化。结果:常氧下,propranolol组、atenolol组与ICI 118,551组LVSP和左心室±dp/dt_(max)较给药前降低,同时propranolol组与atenolol组RVSP和右心室±dp/dt_(max)较给药前明显降低(P0.05)。低氧通气5 min后,各组大鼠与常氧组相比动脉血氧分压(PaO_2)、LVSP和左心室±dp/dt_(max)均降低(P0.05);但右心室±dp/dt_(max)明显升高(P0.05);且低氧条件下control组心功能指标的变化程度均比propranolol组和atenolol组明显。结论:低氧应激时心脏β_1-AR的激活可能是心脏发挥代偿调节的重要方式,但右心室通过紧张源性扩张代偿表现出的右心舒缩功能增强对低氧下机体循环血流量的维持更为重要。     

槲皮素诱导MCF-7细胞凋亡及其与Fas/FasL通路的相关性研究

目的:了解槲皮素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及其与Fas/Fas L通路的相关性。方法:建立槲皮素诱导的MCF-7细胞凋亡模型。采用透射电镜观察细胞核形态变化,Annexin V-FITC/PI和JC-1荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位(Δψm)及Fas L中和抗体对细胞凋亡的阻断作用。采用免疫荧光法和流式细胞术检测细胞Fas/Fas L的表达。流式细胞术观察p38 MAPK抑制剂SB203580对细胞Fas/Fas L表达的影响。Western blot检测p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白水平的变化。结果:80.0μmol/L槲皮素处理MCF-7细胞48h,透射电镜可见染色质浓缩及边缘化现象;处理24 h、48 h和72 h,Δψm分别下降17.4%、44.3%和68.9%,细胞凋亡率分别为(10.2±3.3)%、(28.9±7.5)%和(39.2±8.9)%。Fas L中和抗体预处理细胞后,24 h、48 h和72 h的细胞凋亡率则分别为(8.2±2.8)%、(19.2±5.3)%和(22.5±6.9)%,细胞凋亡阻断率分别为19.6%、33.6%和42.6%。Fas/Fas L表达率随处理时间增加而升高,SB203580可显著抑制细胞Fas/Fas L的表达率。p38 MAPK的蛋白水平变化不大,而p-p38 MAPK的蛋白水平在48 h和72 h显著增高。结论:槲皮素可上调MCF-7细胞的Fas/Fas L表达,并经膜Fas/Fas L途径诱导MCF-7细胞凋亡,p-p38 MAPK可能是上调Fas/Fas L表达的重要信号分子。     

miR-26-p 在甲状腺癌中的表达及其功能研究

目的:探讨微小分子核糖核酸(miR)-126-3p 在甲状腺癌中的表达,探讨其生物学功能。方法:RT-PCR 检测35 例甲状腺癌、癌旁组织以及三种甲状腺癌细胞系(TPC-1、FTC-133、8505C)中miR-126-3p 表达量;将甲状腺癌细胞分为类似物组(mimic)和对照组(NC),分别转染miR-126-3p mimic 及阴性对照质粒。两组细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA 法和流式细胞术检测, Transwell 小室法检测两组细胞迁移和侵袭。结果:35 例癌组织中miR-126-3p 相对表达量显著低于癌旁组织(0.384±0.28 vs 0.981±0.039,t =10.291,P<0.05);在三种甲状腺癌细胞中,TPC-1 细胞中miR-126-3p 相对表达量最低;与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 增殖受到显著的抑制,第3 天两组间开始表现出统计学差异(P<0.05);与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 凋亡显著增加[(15.32±3.20)% vs (8.12±1.17)%,t = 4.623,P<0.05],迁移受到抑制(26.68±4.48 vs 82.21±3.65,t=17.789,P<0.05),侵袭受到抑制(12.28±1.03 vs 34.43±2.10,t =8.103,P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中miR-126-3p 表达降低,上调miR-126-3p 表达可以显著抑制甲状腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制迁移和侵袭,miR- 126-3p 可能作为一种抑癌基因在甲状腺癌中发挥重要的生物学功能。     

高迁移率族蛋白1对Aβ_(25-35)刺激下BV-2细胞NF-κB表达的作用

目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对β-淀粉样蛋白(Aβ)_(25-35)刺激下的小鼠小胶质细胞系BV-2中核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:将对数期生长的BV-2细胞分为4组:正常细胞组(不做任何处理)、模型组(加入40μmol/L Aβ_(25-35))、RNA干扰组(采用RNA干扰HMGB1后加入40μmol/L的Aβ_(25-35))和溶剂对照组(加入终浓度为0.1%的DMSO)。各组细胞孵育72 h后(Aβ_(25-35)处理24 h)采用Western blot法检测HMGB1和NF-κB p65的蛋白表达情况。结果:CCK-8结果显示40μmol/L Aβ_(25-35)为最佳造模浓度。选择30 nmol/L带GFP荧光基团的HMGB1-siRNA转染BV-2细胞,转染效率约为80%~90%。Western blot实验结果显示,HMGB1-siRNA片段干扰后BV-2细胞中HMGB1的表达明显降低(P0.05);Aβ_(25-35)刺激BV-2细胞后,胞内HMGB1和核内NF-κB p65表达均明显升高(P0.05),HMGB1-siRNA作用后,HMGB1和核内NF-κB p65表达均明显下降(P0.05)。结论:RNA干扰HMGB1表达可减少Aβ_(25-35)刺激的BV-2细胞核内NF-κB的表达。     

术前颈椎过伸功能与颈椎后路单开门椎管扩大成形术后前凸角度丢失的关系

目的 探讨术前颈椎过伸功能与颈椎后路单开门椎管扩大成形术后前凸角度丢失的关系。方法 回顾性分析首都医科大学大兴教学医院骨科2017年1月-2018年12月58例行颈椎后路单开门椎管扩大成形术患者临床资料,其中男45例、女13例,年龄49~85岁(平均64.8岁)。术前测量患者中立侧位X线片上的T₁倾斜角、矢状面垂直轴(SVA),以及中立侧位、过伸位X线片的C₂~C₇ Cobb角。随访12~24个月,术后再次测量中立侧位X线片上的C₂~C₇ Cobb角。术前颈椎过伸功能测量值为术前过伸位X线片C₂~C₇ Cobb角度减去术前中立侧位X线片C₂~C₇ Cobb角。前凸角度丢失量为术前中立侧位片C₂~C₇ Cobb角减去末次随访时中立侧位片C₂~C₇ Cobb角。依据58例患者术前颈椎过伸功能均值(8.7°)分为两组,≥8.7°为A组,＜8.7°为 B 组。比较两组患者术前及术后影像及临床资料,同时对58例患者的影像学资料与临床资料进行相关性分析。结果 A组25例患者年龄54~83岁,B组33例患者年龄49~85岁,两组患者术前年龄、性别、疾病种类差异均无统计学意义(P值均>0.05)。术前A组颈椎过伸功能(14.09°±4.75°)大于B组(4.62°±2.54°),A组T₁倾斜角(17.00°±3.40°)小于B组(29.68°±6.34°),颈椎前凸角度丢失[1.10(-0.85,4.00)]小于B组[8.60 (7.70,12.40)],差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。颈椎过伸功能与前凸角度丢失之间呈负相关(r=-0.965, P＜0.01),T₁倾斜角与前凸角度丢失之间呈正相关(r=0.954, P＜0.01),颈椎过伸功能与T₁倾斜角呈负相关(r=-0.900, P＜0.01);SVA与T₁倾斜角、颈椎过伸功能、术后前凸角度丢失均无相关性(r=-0.065、0.216、-0.202, P＞0.05)。术后JOA评分改善率与过伸角度变化、SVA及T₁倾斜角均无相关性(r=0.201、-0.034、-0.213, P值均＞0.05)。A组术后JOA改善率为69%±23%,B 组术后JOA改善率为62%±23%,两组差异无统计学意义(t=1.147, P＞0.05)。术后Odom's分级评价A组优良率为88.0%(22/25),B组优良率为63.6%(21/33),差异有统计学意义(χ² =4.403, P<0.05)。结论 对于后路单开门椎管扩大成形术患者,颈椎过伸功能与前凸角度丢失存在相关性,术前过伸功能越低,术后越易发生前凸角度丢失,可作为术前预判术后颈椎曲度变化的参数之一。     

以短时心率变异性反映充血性心力衰竭患者自主神经活动的改变

基于短时心率变异性（HRV）分析,探讨充血性心力衰竭（CHF）患者自主神经活动的变化和影响。选用THEW数据库中正常人子数据库作为正常对照组（n=189）,对于PhysioNet中两个CHF子数据库的样本（n=44）,按照NYHA等级,将NYHA I-II级划分轻度CHF 组（n=12）,NYHA III-IV级为重度CHF组（n=32）。对每一个Holter记录选取日间和夜间安静态各5 min的RR间期（RRI）序列,分别进行时域、基于AR模型的频域和去趋势波动（DFA）分析。在正常组、轻度CHF组和重度CHF组等三组中,CHF患者日间的短时分形尺度指数（(α₁)_d）两两比较均有显著性差异,并存在下降趋势（依次分别为1.35±0.21、1.03±0.29和0.81±0.29）,反映心率动力学从分形特性转向更随机化的结构。同时,日间HFn((HFn)_d)在三组间的两两比较中均存在显著性差异,并存在上升趋势（依次分别为23.89%±12.78%、37.22%±11.24%和56.30%±15.28%）, 表明CHF导致交感神经和迷走神经交互作用趋于消失。利用夜间RRI（RRI_n）,(HFn)_d 和 (α₁)_d等3个指标进行Fisher线性判别,区分正常人和CHF患者的灵敏性和特异性分别为90.91%和92.06%,而区分轻度和重度CHF患者的灵敏性和特异性分别为84.38%和100%。所进行的研究将HRV非线性方法与传统方法相结合评估自主神经状态, 为监测CHF病情或观察治疗效果等潜在的临床应用提供了依据。     

负压封闭引流技术联合高压氧治疗糖尿病足的临床疗效分析

目的评估负压封闭引流技术(VSD)联合高压氧治疗糖尿病足的临床疗效。 方法选取2016年9月至2018年4月在青海大学附属医院烧伤整形科就诊的60例确诊为糖尿病足患者,按随机数字表法分为实验组30例和对照组30例,其中对照组予以控制饮食、控制血糖、抗感染等常规治疗的基础上以VSD技术对创面进行治疗;实验组在常规治疗的基础上以VSD技术联合高压氧进行治疗。对2组患者治疗7、14 d的综合疗效情况进行比较,观察治疗前及治疗7、14 d 2组患者血气分析、血液流变学各指标的变化,并观察2组患者治疗前及治疗7、14 d创面组织血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)水平的变化以及创面面积大小变化。数据比较采用t检验和χ²检验。 结果治疗7 d,实验组患者治疗总有效率93.3%(28/30),明显高于对照组80.0%(24/30),差异有统计学意义(χ²＝7.231,P<0.05);治疗7 d,实验组患者血液中酸碱度(7.42±0.19)、PCO₂(41.76±1.65) mmHg、血氧分压(66.10±2.36) mmHg、血氧饱和度(89.50±1.62)%、血氧含量(6.60±1.17) Vol%,明显高于对照组[(7.40±0.25)、(40.32±2.70) mmHg、(62.05±5.05) mmHg、(88.10±3.63)%、(6.08±1.17) Vol%],差异均有统计学意义(t＝2.221、2.442、4.023、2.135、2.073,P值均小于0.05);治疗7 d,实验组患者全血低切黏度(11.08±0.81) mPa.s、全血高切黏度(5.17±0.34) mPa.s、血浆高切黏度(2.09±0.16) mPa.s、红细胞变形指数(0.76±0.48),降低情况明显优于对照组[(12.29±1.81) mPa.s、(5.85±0.34) mPa.s、(2.58±0.21) mPa.s、(0.87±0.11)],差异均有统计学意义(t＝3.265、7.531、10.366、4.942,P值均小于0.05);治疗7 d,实验组患者创面组织VEGF(35.70±4.84) pg/mL、PDGF(36.60±2.98) pg/mL,较对照组[(25.36±3.21) pg/mL、(27.53±2.94) pg/mL]升高更明显,差异均有统计学意义(t＝9.235、11.134,P值均小于0.05);治疗7 d,实验组患者创面面积(5.13±0.60) cm²,减小程度明显优于对照组(7.03±0.82) cm²,差异有统计学意义(t＝10.594,P＝0.015)。治疗14 d,实验组患者治疗总有效率96.7%(29/30),明显强于对照组86.7%(26/30),差异有统计学意义(χ²＝7.157,P＝0.028);治疗14 d,实验组患者血液中酸碱度(7.42±0.21)、PCO₂(42.46±1.57) mmHg、血氧分压(69.26±1.49) mmHg、血氧饱和度(91.05±1.20)%、血氧含量(6.74±0.89) Vol%,高于对照组[(7.40±0.31)、(40.23±2.73) mmHg、(62.41±4.86) mmHg、(88.23±2.17)%、(6.13±1.22) Vol%],差异均有统计学意义(t＝2.790、3.778、7.455、6.620、2.185,P值均小于0.05);治疗14 d,实验组患者全血低切黏度(8.10±1.07) mPa.s、全血高切黏度(4.26±0.33) mPa.s、血浆高切黏度(1.64±0.22) mPa.s、红细胞变形指数(0.64±0.04),降低情况明显优于对照组[(11.74±1.54) mPa.s、(5.82±0.41) mPa.s、(2.53±0.23) mPa.s、(0.83±0.10)],差异均有统计学意义(t＝9.905、16.609、16.358、9.617,P值均小于0.05);治疗14 d,实验组患者创面组织VEGF(47.72±3.75) pg/mL、PDGF(49.17±2.48) pg/mL,较对照组[(37.04±2.90) pg/mL、(38.18±2.65) pg/mL]升高更明显,差异均有统计学意义(t＝13.062、17.276,P值均小于0.05);治疗14 d,实验组患者创面面积(2.88±0.52) cm²,减小程度明显优于对照组(5.07±0.61) cm²,差异有统计学意义(t＝12.332,P＝0.013)。 结论VSD联合高压氧治疗对于糖尿病足患者的创面愈合有显著疗效,明显优于单纯使用VSD治疗的疗效,其二者结合的功效十分显著。     

干扰P2X_7R基因对RAW264.7细胞增殖和吞噬的影响

目的:应用RNA干扰技术抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞P2X7受体(P2X7R)基因的表达,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法:用脂质体法将P2X7R shRNA重组质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选后获得稳定干扰细胞株。细胞分为野生型(WT)组、阴性对照(NC)组和干扰(sh P2X7R)组。Real-time PCR法检测细胞中P2X7R mRNA的表达,Western blot检测细胞中P2X7R蛋白的表达;CCK-8方法检测细胞生长活性,5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,Ed U)掺入实验检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞周期的分布和吞噬情况。结果:P2X7R shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的P2X7R mRNA和蛋白的表达,抑制率在80%以上。48 h后,sh P2X7R组细胞的生长速度明显高于NC组和WT组(P0.05),增殖期细胞比例明显升高(P0.05),说明下调P2X7R基因能明显促进细胞增殖。sh P2X7R组的细胞周期出现改变,S期和G2/M期的比例明显上升,增殖指数增高(P0.05)。sh P2X7R组的细胞吞噬活性明显高于NC组(P0.05)。结论:本研究成功构建了稳定干扰P2X7R基因表达的小鼠巨噬细胞株RAW264.7,sh P2X7R能够明显促进RAW264.7细胞的增殖,改变了细胞的吞噬活性。     

雷珠单抗治疗湿性年龄相关性黄斑变性的疗效观察及其对患者血浆miRNA-126、VEGF-A表达的影响

目的 探讨玻璃体腔注射雷珠单抗治疗湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)的临床疗效,及其对患者血浆中微小RNA(miRNA)-126、血管内皮生长因子(VEGF)-A的表达水平的影响。方法 前瞻性研究。纳入2018年6月-2019年6月蚌埠医学院第一附属医院眼科收治40例(40只眼)wAMD患者为wAMD组,其中男17例、女23例,年龄50~86岁。纳入同期在蚌埠医学院第一附属医院体检中心进行健康体检的中老年人为对照组(40人),其中男18人、女22人,年龄53~81岁。wAMD组患者均接受单次玻璃体腔注射雷珠单抗0.05 mL治疗。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测对照组和wAMD组治疗前及治疗后1个月血浆miRNA-126相对表达水平,酶联免疫吸附试验检测血浆中VEGF-A水平。(1)比较对照组、wAMD组治疗前miRNA-126及VEGF-A的表达水平。(2)比较wAMD组治疗前、治疗后1个月血浆miRNA-126、VEGF-A表达水平,以及最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中央区视网膜厚度(CMT)、脉络膜新生血管(CNV)面积的变化情况。(3)分析wAMD组患者治疗前、治疗后1个月血浆miRNA-126的相对表达量与VEGF-A水平、CMT、CNV面积的相关性。结果 (1)wAMD组患者的miRNA-126相对表达量(0.86±0.11)低于对照组(1.04±0.10),VEGF-A水平(329.09±17.58)pg/mL高于对照组(295.74±14.80)pg/mL,差异均有统计学意义(t=8.010、9.179,P值均＜0.01)。(2)wAMD组治疗后1个月miRNA-126相对表达量(1.47±0.27)较治疗前(0.86±0.11)增加,VEGF-A水平(315.36±15.44)pg/mL较治疗前(329.09±17.58)pg/mL降低,差异均有统计学意义(t=19.410、8.048,P值均＜0.01);BCVA(0.45±0.11)较治疗前(0.83±0.16)增加,CMT与CNV面积分别为(296.53±21.52)μm,(0.58±0.18)mm²,较治疗前的(311.88±37.25)μm、(0.70±0.17)mm²均降低,差异均有统计学意义(t=12.667、3.602、4.906,P值均＜0.01)。(3)wAMD组患者治疗前及治疗后1个月血浆miRNA-126相对表达水平与VEGF-A、CMT、CNV面积均呈显著负相关(r_治疗前=-0.706、-0.723、-0.552,r_{治疗后1个月}=-0.783、-0.709、-0.620, P值均＜0.01)。治疗前拟合VEGF-A、CMT、CNV面积与miRNA-126相对表达量之间的线性回归方程分别为:$\hat{Y}$_VEGF-A=-112X_miRNA-126+426,$\hat{Y}$_CMT=-243X_miRNA-126+522,$\hat{Y}$_CNV=-0.84X_miRNA-126+1.42;治疗后线性回归方程分别为:$\hat{Y}$_VEGF-A=-45.64X_miRNA-126+382,$\hat{Y}$_CMT=-57.53X_miRNA-126+381,$\hat{Y}$_CNV=-0.41X_miRNA-126+1.18。结论 雷珠单抗可通过降低VEGF-A的表达,减少CMT及CNV面积,有效改善BCVA。雷珠单抗在取得临床疗效的同时,可能通过增强miRNA-126基因表达活性而延缓wAMD的进展。