外泌体及其在干细胞中的研究进展

外泌体是在细胞间交流中起重要作用的小分泌囊泡,可由多种类型的细胞分泌,在细胞间起着质膜交换及转运蛋白质、mRNA、microRNA和细胞器等生命活性物质的作用.外泌体可通过改变基因调控网络或表观遗传重组来调控正常的生理过程.最近的研究发现,干细胞分泌的外泌体可以有效转运mRNA、microRNA和蛋白质,在调控组织再生方面发挥重要作用.该文对外泌体的生成及其在干细胞中的研究进展进行综述.     

干细胞源外泌体及改良外泌体在治疗急性心肌梗死中的研究进展

干细胞疗法可缩小急性心肌梗死的梗死面积,而干细胞源外泌体可能是干细胞发挥心肌保护作用的主要载体,外泌体内包含脂质、蛋白质、信使RNA、微RNA等,是细胞间传递信息的重要载体,可通过抗凋亡、抗纤维化、抗炎、促进内皮细胞增殖和血管生成在急性心肌梗死中发挥生物学作用.近年来通过各种方法改良干细胞源外泌体,提高了体内移植后外泌...     

干细胞外泌体心肌保护作用的研究进展

由于各种致病因素(心肌缺血、缺氧、感染等)的存在,导致心肌收缩、舒张功能发生障碍,影响心脏功能。心肌细胞自身恢复其功能相对比较困难。干细胞移植用于心肌保护存在争议,而其外泌体可发挥有效作用,主要表现在促进新生血管形成、发挥抗凋亡和抗纤维化作用。本文就干细胞外泌体在心肌保护方面的研究展开综述。     

肝癌干细胞源性外泌体对肝癌细胞增殖耐药性的影响

目的 观察肝癌干细胞外泌体对肝癌细胞增殖和耐药性的影响.方法 流荧光细胞技术筛选人肝癌细胞株MHCC97干细胞,超速离心提取干细胞外泌体.MTT和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感程度,实时荧光定量RT-PCR和Western Blot检测细胞增殖和耐药相关基因和蛋白表达水平.结果 实验肝癌细胞各时间点OD值要明显高于对照组和普通组(P<0.05).实验组肝癌细胞对5-氟尿嘧啶和阿霉素的半数抑制浓度明显高于对照组和普通组(P<0.05).RT-PCR和Western blot结果显示:实验组肝癌干细胞外泌体中survivin、c-myc、ras、ABCG2、MDR-1、MRP-1基因mRNA和蛋白的表达均较对照组的普通肝癌细胞明显增强,而P53和PTEN的表达则较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 肝癌干细胞外泌体能促进肝癌细胞的增殖,诱导肝癌细胞对化疗药物的耐药,其机制可能通过调控细胞增殖和耐药相关基因蛋白表达来实现.     

星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经保护作用的研究

目的 通过观察星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经细胞调亡的影响,探索星形胶质细胞在脑创伤中的作用及其机制.方法 分离培养小鼠星形胶质细胞并对其进行鉴定.将60只小鼠随机分成假手术组、外泌体组和生理盐水组.在脑创伤后第3天检测小鼠脑组织Bcl2、Bax以及Caspase-3的表达水平、神经细胞凋亡情况以及神经功能预后.结果 样本中存在直径30～150 nm不等的外泌体.脑创伤后第3天,外泌体组小鼠脑组织Bax、Caspase-3的表达水平以及神经细胞调亡水平均低于生理盐水组(P<0.05),而Bcl2的表达水平则高于生理盐水组(P<0.05);外泌体组小鼠神经功能预后较生理盐水组也有明显改善(P<0.05).结论 星形胶质细胞外泌体能显著减少脑创伤小鼠神经细胞调亡,改善神经功能预后.     

星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经保护作用的研究

目的 通过观察星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经细胞调亡的影响,探索星形胶质细胞在脑创伤中的作用及其机制.方法 分离培养小鼠星形胶质细胞并对其进行鉴定.将60只小鼠随机分成假手术组、外泌体组和生理盐水组.在脑创伤后第3天检测小鼠脑组织Bcl2、Bax以及Caspase-3的表达水平、神经细胞凋亡情况以及神经功能预后.结果 样本中存在直径30～150 nm不等的外泌体.脑创伤后第3天,外泌体组小鼠脑组织Bax、Caspase-3的表达水平以及神经细胞调亡水平均低于生理盐水组(P<0.05),而Bcl2的表达水平则高于生理盐水组(P<0.05);外泌体组小鼠神经功能预后较生理盐水组也有明显改善(P<0.05).结论 星形胶质细胞外泌体能显著减少脑创伤小鼠神经细胞调亡,改善神经功能预后.     

间充质干细胞外泌体在糖尿病肾病治疗中的研究进展

糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）已成为影响人类健康的重大问题,防治其发生发展备受业界关注。近年来,干细胞移植治疗策略在防治DN进展中已彰显潜力,尤其是间充质干细胞（mesenchymalstemcell,MSCs）移植治疗。越来越多的证据表明,MSCs主要以旁分泌方式发挥治疗功能,而其释放一系列纳米级囊泡（外泌体）则作为细胞间通讯的重要介质。MSCs可将干细胞表型传递给受体细胞,促进干细胞维持、分化、自我更新与修复,并且可能介导基质元件之间相互作用,促进受体细胞的组织修复再生。新近干细胞外泌体介导治疗慢性肾脏病已成为研究热点,在DN研究中已取得一定结果。本文主要就干细胞外泌体治疗DN的国内外研究最新进展进行综述并讨论。     

MSC来源外泌体治疗缺血性脑卒中机制及进展

缺血性脑卒中是由于脑动脉血流中断从而导致细胞缺氧和氧化应激,同时激活炎症反应,造成组织细胞损伤,增加细胞凋亡和血液再灌注的风险。间充质干细胞可以通过诱导血管生成来改善缺血性脑卒中程度,同时间充质干细胞还具有抗凋亡,抗炎等诸多功能,被应用于卒中治疗。临床前期研究证实,间充质源外泌体通过靶向传递到受体细胞起到诱导血管生成,抗凋亡和抗炎的效果,也避免了间充质干细胞在治疗过程中存在的不足,进而用于卒中治疗。现系统地对间充质干细胞源外泌体在脑卒中中的作用机理进行总结,为缺血性脑血管病的临床治疗提供一种新的可能性,以期获得更好的治疗效果。     

间充质干细胞来源外泌体治疗心肌梗死的研究进展

大量研究表明间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）主要通过旁分泌作用抑制细胞凋亡、抑制心肌纤维化、促进血管生成、抑制免疫反应来修复心肌损伤,外泌体在其中起主要作用。外泌体是细胞分泌的天然的纳米载体,内含细胞特异性蛋白、核酸和脂质。与脂质体载体相比,还具有低免疫原性、无细胞毒性及能够穿透生物屏障等优点。目前已有多种靶向心脏的工程外泌体在动物心肌梗死模型中取得很好的疗效。本文就MSC及MSC来源外泌体促进心肌梗死后受损心肌修复的机制及研究进展作一综述。     

间充质干细胞外泌体作用机制的研究进展

间充质干细胞（MSC）来源于中胚层,具有修复组织损伤的作用。外泌体是细胞分泌的囊泡样物质,与来源细胞功能相似。近年来,间充质干细胞来源外泌体（MSC-exo）受到广泛关注,其生物学特性及作用机制成为研究热点。本文就外泌体特性及间充质干细胞来源外泌体在治疗疾病中作用机制作一综述。     

跨膜型与分泌型干细胞因子对肥大细胞趋化作用的影响

干细胞因子（SCF）在体内以分泌型(S)和跨膜型(TM)两种形式存在，通过其受体C-kit发挥生物学效应。观察并比较了两型SCF对肥大细胞趋化作用及在人活化血清作用下对肥大细胞的促趋化作用。实验证明两型SCF均能趋化肥大细胞的定向运动，同时发现两型SCF还可明显促进酵母活化血清对肥大细胞的趋化作用，但S-SCF的促进作用比TM-SCF强约1.7倍，且所需活化血清浓度较后者低。提示TM-SCF与S-SCF一样，不但自身对肥大细胞具有趋化作用，而且还可促进肥大细胞的定向运动。     

bFGF对神经干细胞分化为星形胶质细胞的影响

 目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠脊髓来源神经干细胞分化形成星形胶质细胞亚型的影响。方法：悬浮培养法培养大鼠脊髓来源的神经干细胞,形成神经球后,以免疫荧光法鉴定神经干细胞。把神经干细胞分为A、B两组,A组加入血清,B组加入血清和bFGF,分化培养7 d后,GFAP抗体标记星形胶质细胞,观察其各亚型的比率和形态特点。结果：神经干细胞分化第7d,A组和B组均形成4种亚型星形胶质细胞,分别为胞体延长型,扁平多角形,星形和双极型。B组中双极型星形胶质细胞的突起长度明显超过A组。结论：bFGF可以显著促进脊髓来源神经干细胞分化成的双极型星形胶质细胞的突起生长。     

激活的星形胶质细胞分泌TNF-α对大鼠GABA表达的影响

目的 为进一步探讨星形胶质细胞在癫痫发病中的作用。方法 选用肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactot-α，TNF-α)刺激及TNF-α反义寡核苷酸阻断后马桑内酯(coriaria lactone，CL)刺激纯化培养的海马星形胶质细胞，将上述两种条件培养基提取液(astrocytic conditioned medium，ACM)10μl分别注入正常Sprague-Dawley(SD)大鼠侧脑室，观察动物行为与脑电图的变化；用免疫细胞化学方法检测大脑皮质与海马中γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid，GABA)表达水平的改变，并做显微图像分析。结果 ①侧脑室注射TNF-α刺激后的条件培养基提取液可引起大鼠Ⅲ级癫痫样发作及典型的尖波、棘波、棘-慢波癫痫样脑电图表现，大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值均明显低于对照组；②侧脑室注射TNF-α反义寡核苷酸阻断后由马桑内酯刺激的条件培养基提取液，大鼠无癫痫样行为发生，大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值与对照组无显著性差异。结论 ①激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α可诱导大鼠癫痫发作。②GABA表达的变化可能与癫痫发作有关。     

CD基因修饰的神经干细胞对C6胶质瘤细胞的作用

目的研究CD基因修饰神经干细胞(NSCs)对脑胶质瘤细胞的抑制作用、效果及机制,为NSCs在脑胶质瘤治疗中的应用提供理论依据。方法以胎脑作为供体,采用神经球形成法培养NSCs,脂质体介导CD基因转染NSCs,G418筛选。NSCs/CD与C6胶质瘤细胞分组共培养,MTT检测细胞存活情况。结果成功构建CD基因转染NSCs,NSCs/CD对C6细胞生长有明显抑制作用。结论 NSCs是良好的载体,NSCs/CD-5-FC自杀基因治疗系统具有很强的抗肿瘤效果。     

鼠星形胶质细胞重编程为诱导多潜能干细胞的研究

目的研究星形胶质细胞重编程为诱导多潜能(iPS)干细胞的可行性,为进一步研究iPS细胞诱导技术奠定基础。方法用分别含Oct4,Sox2,Klf4和c-myc因子的4种逆转录病毒载体病毒颗粒感染星形胶质细胞,获得iPS细胞并进行鉴定。结果感染后第28天具有胚胎干细胞形态的克隆出现,诱导效率为(0.015±0.005)%,且碱性磷酸酶(AP)染色及SSEA-1和Oct4免疫荧光染色均显阳性。结论星形胶质细胞可以重编程为iPS细胞,进一步证明了iPS细胞诱导技术的普遍适用性。     

分泌性卷曲相关蛋白3影响小鼠胚胎肝干细胞体外成熟分化的实验研究

目的 检测不同发育阶段的肝组织中Wnt信号拮抗因子分泌性卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related protein,SFRP)的表达,并探讨SFRP3对胚胎肝干细胞体外成熟分化的影响.方法 分离胚胎12.5 d至出生后4周共9个阶段的小鼠肝组织,RT-PCR检测5种SFRPs在肝组织及胚胎肝干细胞...     

血性脑脊液对人胎脑神经干细胞影响的体外研究

目的:研究血性脑脊液对人胎脑神经干细胞增殖和分化的影响.方法:分别用人的血性脑脊液和正常脑脊液培养神经干细胞,分为试验组(血性脑脊液组)和对照组(正常脑脊液组),分别于不同时间观察神经干细胞在两组脑脊液中的生长及增殖分化情况,并应用免疫细胞化学技术对两组脑脊液中神经下细胞的分化进行鉴定和比较.结果:神经干细胞在血性脑脊...     

神经干细胞研究

神经干细胞一般是指,能产生神经组织或来自神经系统,具有一定自我更新能力,能通过不对称分裂产生其他类型的细胞[1]。神经干细胞可以由更原始并能够产生多种组织干细胞的多潜能细胞分化而来,例如胚胎干细胞。干细胞的类型通常是以组织     

外源性重组HMGB1对神经干细胞增殖分化的影响及其机制研究

目的研究外源性重组高迁移率组蛋白B1（HMGB1）对神经干细胞增殖及分化的影响及其作用机制。方法在无血清的神经干细胞培养基中培养SD鼠大脑皮层细胞,传代扩增及纯化神经干细胞,免疫荧光检测神经干细胞标记物巢蛋白（nestin）,分析神经干细胞纯度。CCK-8测定加入不同浓度的重组HMGB1对神经干细胞增殖活性的影响,选择重组HMGB1的最适浓度进行后续实验;细胞免疫荧光检测重组HMGB1对神经干细胞分化的影响,Real-time PCR检测晚期糖基化终末产物受体（RAGE）mRNA、Toll样受体（TLRs）mRNA、基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA、神经生长因子（NGF）mRNA的表达,Western blot检测RAGE、TLRs、MMP-9、NGF蛋白的表达。结果大鼠大脑皮层细胞在培养至第3代时,nestin鉴定神经干细胞纯度可达99%及以上。在重组HMGB1 10 ng/mL刺激下,神经干细胞增殖活性最高。实验组神经Ⅲ类β-微管蛋白（TUJ1）表达高于对照组(P<0.05),实验组RAGE、TLRs、MMP-9、NGF mRNA及蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论外源性重组HMGB1或可通过RAGE、TLRs、MMP-9等信号通路促进神经干细胞增殖及其向神经元方向分化。     

低氧对帕金森病模型大鼠脑内神经干细胞的影响

目的观察间歇性低氧对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损毁大鼠脑内神经干细胞增殖和分化的影响。方法应用6-OHDA损毁大鼠内侧前脑束。将损毁大鼠每天置于气压0.3 Mpa的低氧环境中4 h,持续2周。分别在低氧2周和低氧2周、复氧2周时进行动物行为学测试,并切片染色鉴定新生细胞增殖和分化情况。结果低氧未对损毁大鼠行为学产生影响。免疫学鉴定显示,低氧可促进脑内原位神经干细胞的增殖,新生细胞主要出现在脑室下层。这些增殖的神经干细胞分化能力弱,未见向神经元和胶质细胞分化;在损毁的纹状体脑区,也未见新生细胞向酪氨酸羟化酶阳性的多巴胺能神经元分化。结论间歇性低氧可以激活成体脑内神经干细胞的增殖,但不足以诱导新生细胞分化,并形成特定神经元表型,提示单纯的损伤因素不能诱导特定神经元的分化。如果联合其他因素如神经营养因子等,可能有利于成体神经干细胞的定向分化,并应用于相应疾病的治疗。