miR-20a-5p通过下调BMPR2促进人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡

目的 探讨微小RNA-20a-5p（miR-20a-5p）是否通过下调骨形成蛋白2型受体（BMPR2）基因调控人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡。 方法 在永生化人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）中分别转染miR-20a-5p mimics,BMPR2小干扰RNA(si-BMPR2)或过表达质粒（pcDNA-BMPR2）。实时定量PCR（qRT-PCR）测定miR-20a-5p表达,免疫印迹（Western Blot）检测BMPR2、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、活化的的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved caspase-3）、磷酸化-磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白水平,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。生物信息学预测与荧光素酶报告基因检测分析miR-20a-5p和BMPR2之间的关系。共转染miR-20a-5p mimics和pcDNA-BMPR2,利用上述方法评估其对细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT信号通路的影响。 结果 过表达miR-20a-5p明显增加hCMEC/D3的细胞活性,CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）。低表达BMPR2明显提高hCMEC/D3的细胞活性、CyclinD1蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）,高表达BMPR2时具有相反的效果。miR-20a-5p靶向BMPR2,并调控BMPR2蛋白的表达。高表达BMPR2可以逆转miR-20a-5p促hCMEC/D3增殖、PI3K/AKT信号通路活性和抑凋亡的作用。 结论 miR-20a-5p通过靶向BMPR2激活PI3K/AKT信号通路,促进人脑微血管内皮细胞的增殖,并抑制凋亡。     

重楼皂苷在 miR-125a-5p 靶向 调控GAB2诱导乳腺癌细胞增殖 和凋亡中的作用及机制研究

目的 探讨重楼皂苷（RPS）在 miR-125a-5p 靶向调控 Grb2 相关结合蛋白 2（GAB2）诱导乳腺癌细胞增殖和凋亡 中的作用及机制。 方法 取人乳腺癌细胞系 MCF-7 和人正常乳腺上皮细胞系 MCF-10A,采用 qRT-PCR、Western blot 法分别 检测并比较两者 miR-125a-5p、GAB2 表达水平。再将 MCF-7 细胞按随机数字表法分成 6 组：RPS 0 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL+阴性抗体组、RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组、RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p+阴性干扰组和 RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组,每组设 3 个复孔;培养 48 h 后检测并比较 miR-125a-5p、GAB2、B 淋巴细胞 瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）表达水平以及细胞增殖率、细胞凋亡率。将 GAB2 与空白质粒和过表达 miR-125a-5p 质 粒共转染到 MCF-7 细胞中,采用荧光素酶 Promega 检测法检测 miR-125a-5p 与 GAB2 的靶向作用。 结果 与 MCF-10A 细胞 比较,MCF-7 细胞中 miR-125a-5p 表达水平较低（P＜0.05）,GAB2 表达水平较高（P＜0.05）。与 RPS 0 μg/mL 组比较,RPS 80 μg/mL 组和 RPS 80 μg/mL+阴性抗体组 miR-125a-5p、Bax 表达水平和细胞凋亡率均明显升高（均 P＜0.05）,细胞增殖率和 Bcl-2 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）;RPS 80 μg/mL 组和 RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干扰组 GAB2 表达水平 均明显降低（均 P＜0.05）。与 RPS 80 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL+阴性抗体组比较,RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组 miR- 125a-5p 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）;RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组和 RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴 性干扰组细胞增殖率和 Bcl-2 表达水平均明显升高（均 P＜0.05）,细胞凋亡率和 Bax 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）。与 RPS 80 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干扰组比较,RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组 GAB2表达水平均明显降低（均P＜0.05）。与RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p组、RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干 扰组比较,RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组细胞增殖率和 Bcl-2 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）,细胞凋亡率 和 Bax 表达水平均明显升高（均 P＜0.05）。GAB2 与 miR-125a-5p 的结合位点为 CAGGGA,GAB2 的突变位点为 AGUCCC; miR-125a-5p与GAB2野生型结合能明显降低荧光活性比（P＜0.05）,但与GAB2突变型结合不影响荧光活性比（P＞0.05）。 结 论 RPS 能够介导 miR-125a-5p/ GAB2 轴发挥抗肿瘤活性,具体机制可能与 miR-125a-5p 发挥抑癌效应来负向调控 GAB2 蛋 白表达,进而影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡能力有关。     

红枣色素通过调控miR-29b-3p/MST1表达对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及机制

目的探讨红枣色素对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及其机制。方法设正常对照组(NG)(5 mmol/L D-葡萄糖),高糖处理(HG)组(30 mmol/L D-葡萄糖),HG+红枣色素-低组(30 mmol/L D-葡萄糖+50 mg/L红枣色素)、HG+红枣色素-中组(30 mmol/L D-葡萄糖+150 mg/L红枣色素)、HG+红枣色素-高组(30 mmol/L D-葡萄糖+250 mg/L红枣色素);将miR-NC、miR-29b-3p、anti-miR-NC、anti-miR-29b-3p分别转染至未经任何处理的MPC5细胞中,记为miR-NC组,miR-29b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-29b-3p组;将miR-NC、miR-29b-3p、si-NC、si-蛋白激酶1(MST1)染至单纯30 mmol/L的D-葡萄糖处理的MPC5细胞中,记为HG+miR-NC组,HG+miR-29b-3p组、HG+si-NC组、HG+si-MST1组。将anti-miR-NC、anti-miR-29b-3p转染至30 mmol/L的D-葡萄糖和250 mg/L红枣色素处理的MPC5细胞中,记为HG+红枣色素+anti-miR-NC组、HG+红枣色素+anti-miR-29b-3p组,均采用脂质体法。qRT-PCR检测miR-29b-3p和MST1 mRNA的表达水平;Western Blot检测蛋白表达;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD活性和MDA含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与NG组比较,HG组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著降低,MST1 mRNA的表达水平显著升高,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著降低,Bax、MST1表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05);与HG组比较,不同浓度红枣色素的高糖处理组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平逐渐显著升高,MST1 mRNA的表达水平显著降低,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax、MST1表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示,miR-29b-3p组小鼠足细胞中MST1蛋白的表达水平(0.21±0.03)显著低于miR-NC组(0.42±0.04);anti-miR-29b-3p组小鼠足细胞中MST1蛋白的表达水平(0.87±0.08)显著高于anti-miR-NC组(0.40±0.04),差异均有统计学意义(P0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-29b-3p组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著升高,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05);与HG+miR-NC组比较,HG+si-MST1组小鼠足细胞SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax、MST1表达水平显著降低,凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。与HG+红枣色素+anti-miR-NC组比较,HG+红枣色素+anti-miR-29b-3p组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著降低,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著降低,Bax、MST1表达水平显著升高,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论红枣色素对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡有保护作用,其机制可能与调控miR-29b-3p/MST1及SOD和MDA活性有关。红枣色素可作为治疗肾损伤的药物,miR-29b-3p、MST1可成为肾损伤治疗的靶点。     

lncRNA RP11-1C8.5通过结合miR-181a-5p 对糖尿病心肌细胞凋亡和增殖的影响

目的 探究长链非编码(long non-coding RNA,lncRNA)RP11-1C8.5对糖尿病心肌细胞凋亡和增殖的影响及其分子机制。方法 分别采用5.5、10.0、13.9、22.2和33.3mmol/L葡萄糖浓度的培养基培养人心肌HCM细胞24h后,实时定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测不同葡萄糖浓度培养下HCM细胞中RP11-1C8.5的表达水平。选择RP11-1C8.5表达最高的葡萄糖浓度继续培养HCM细胞,分别感染RP11-1C8.5干扰腺病毒(实验组)和对照病毒(对照组)。流式细胞术和CCK-8法检测对照组和实验组HCM细胞的凋亡情况和细胞活力。通过生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证RP11-1C8.5与miR-181a-5p的结合作用。qPCR检测对照组和实验组HCM细胞中miR-181a-5p的表达水平。Western blot法检测下调RP11-1C8.5表达对凋亡相关蛋白Bax、caspase3、Bcl-2、CED-9表达的影响。结果 与正常葡萄糖浓度(5.5mmol/L)比较,在高糖培养心肌HCM细胞中RP11-1C8.5的表达水平显著增加(P＜0.01),其中在33.3mmol/L葡萄糖浓度培养HCM细胞中的表达最高(P＜0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞中RP11-1C8.5的表达显著降低(P＜0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞的凋亡率显著降低(P＜0.01),细胞活力明显增加(P＜0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实RP11-1C8.5与miR-181a-5p存在互补结合作用(P＜0.01)。与对照组比较,实验组HCM细胞促凋亡蛋白Bax、caspase3表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-2、CED-9表达增加。结论 下调RP11-1C8.5通过结合miR-181a-5p发挥抑制糖尿病心肌细胞凋亡和促进细胞增殖的作用。     

miR-18b-5p调控WWOX对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的研究miR-18b-5p对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测癌旁组织和胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达,MTT法和流式细胞术检测胶质瘤U251细胞增殖和凋亡率,Western blotting检测包含WW域的氧化还原酶基因（WWOX）、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-18b-5p和WWOX的调控关系。结果与癌旁组织相比,胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达量升高（P < 0.01）。抑制miR-18b-5p表达可以抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡;miR-18b-5p靶向负调控WWOX的表达;过表达WWOX可抑制U251细胞增殖并诱导细胞凋亡;抑制WWOX表达逆转了抑制miR-18b-5p表达对U251细胞增殖、凋亡的影响（P < 0.01）。结论miR-18b-5p可能通过靶向调控WWOX表达抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导细胞凋亡,miR-18b-5p是胶质瘤潜在的分子靶点。     

miR-431-5p抑制MDM2表达影响白血病细胞增殖、凋亡的机制研究

目的探讨miR-431-5p靶向MDM2对白血病细胞增殖、凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测白血病患者、正常人骨髓细胞和白血病细胞HL-60、K562中miR-431-5p的表达。以K562细胞为研究对象,将其随机分为miR-NC组（转染miR-NC）、miR-431-5p组（转染miR-431-5p）、miR-431-5p+pcDNA3.1组（miR-431-5p和pcDNA3.1共转染）和miR-431-5p+pcDNA3.1-MDM2组（miR-431-5p和pcDNA3.1-MDM2共转染）。MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测MDM2、CyclinD1、P21、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因法和Western blot验证miR-431-5p和MDM2的靶向关系。结果与正常人骨髓细胞相比,白血病患者骨髓细胞和白血病细胞HL-60、K562中miR-431-5p的表达显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-NC组相比,miR-431-5p组K562细胞MDM2、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达明显下调,P21和Bax蛋白的表达明显上调,细胞的增殖活力显著减弱,凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-431-5p+pcDNA3.1组比较,miR-431-5p+pcDNA3.1-MDM2组K562细胞MDM2、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达明显升高,P21和Bax蛋白的表达明显降低,细胞的增殖活力显著升高,凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-431-5p通过靶向下调MDM2可抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡。     

LncRNA GABPB1-AS1调控miR-150-5p表达对高糖诱导人肾小球系膜细胞纤维化的影响

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)GABPB1-AS1调控miR-150-5p表达对高糖诱导人肾小球系膜细胞（HMC）纤维化的影响。方法 采用qRT-PCR法检测高糖诱导的HMC细胞中LncRNA GABPB1-AS1、miR-150-5p表达情况,将对数期HMC细胞分为对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、高糖+pcDNA3.1-NC组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+mimic NC组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+miR-150-5p mimic组,培养48 h后,CCK-8法检测各组细胞增殖率;qRT-PCR法检测细胞中纤维连接蛋白（FN）、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、纤维结缔组织生长因子（CTGF）mRNA表达水平;ELISA法检测细胞上清液白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western blot法检测FN、ICAM-1、CTGF蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因验证LncRNA GABPB1-AS1、miR-150-5p靶向...     

miR-485-5p通过下调FOSL2表达影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡

【摘要】 目的 探讨微小RNA-485-5p（miR-485-5p）对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 选取2016年5月～2018年4月本院行手术治疗的36例鼻咽癌患者癌组织为研究对象,对应癌旁组织距离肿瘤边缘＞3cm作为对照组。RT-qPCR检测鼻咽癌组织和对应的癌旁组织中miR-485-5p和FOS样抗原2（FOSL2）mRNA水平,Pearson相关性分析鼻咽癌组织中miR-485-5p和FOSL2 mRNA表达相关性。以人永生化鼻咽上皮细胞系NP69为对照,RT-qPCR检测鼻咽癌细胞系6-10B和5 8F中miR-485-5p和FOSL2 mRNA表达水平,Western Blot检测FOSL2蛋白水平。将5-8F细胞分为miR-NC组、miR-485-5p组、si-NC组、si-FOSL2组、miR-485-5p+pcDNA3.0组和miR-485-5p+pcDNA3.0 FOSL2组,MTT实验、流式细胞术、Western Blot分别检测各组5-8F细胞增殖、凋亡及Cyclin D1、p21、Bcl-2和Bax表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-485-5p与FOSL2调控关系。结果 与癌旁组织比较,鼻咽癌组织中miR-485-5p水平降低（P＜0.05）,FOSL2 mRNA表达水平升高（P＜0.05）,且鼻咽癌组织中miR-485-5p与FOSL2 mRNA表达水平呈负相关（P＜0.05）。与NP69细胞比,鼻咽癌细胞系6-10B和5-8F中miR-485-5p表达水平显著降低（P＜0.05）,FOSL2 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与miR-NC组比较,miR-485-5p组5-8F细胞存活率、CyclinD1和Bcl-2蛋白水平降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平升高（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-FOSL2组5-8F细胞存活率及CyclinD1和Bcl-2蛋白水平降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平升高（P＜0.05）。miR-485-5p在5-8F细胞中负调控FOSL2表达。与miR-485-5p+pcDNA3.0组比较,miR-4855p+pcDNA3.0 FOSL2组5-8F细胞存活率及CyclinD1和Bcl-2蛋白水平升高（P＜0.05）,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白水平降低（P＜0.05）。结论 miR-485-5p在鼻咽癌组织和细胞中表达降低,FOSL2表达升高;过表达miR-485-5p通过靶向负调控FOSL2抑制鼻咽癌细胞增殖,并促进其凋亡。     

lncRNA TUG1靶向调控miR-199a-3p对高糖诱导的足细胞损伤的作用与机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)是否通过靶向miR-199a-3p调控高糖诱导的足细胞损伤.方法:将MPC5细胞分为NG 组(正常对照)、HG 组(高糖)、HG+pcDNA-NC 组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-199a-3p组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-NC组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-199a-3p组.RT-qPCR检测TUG1、miR-199a-3p表达,CCK-8法测定细胞增殖,Western blotting分析Podocin、Nephrin表达,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒测定IL-1β、TNF-α、MDA、LDH水平.结果:与HG+pcDNA-NC组或HG+anti-miR-NC组比较,HG+pcDNA-lncRNATUG1 组或HG+anti-miR-199a-3p组MPC5细胞增殖率、Podocin、Nephrin表达量升高,凋亡率、IL-1β、TNF-α、MDA、LDH 水平降低(P＜0.05).TUG1 靶向调控miR-199a-3p 的表达.与 HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-NC组相比,HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-199a-3p组减少MPC5细胞增殖率、Podocin、Nephrin 表达量,增加 miR-199a-3p、凋亡率、IL-1β、TNF-α、MDA、LDH水平(P＜0.05).结论:TUG1通过靶向miR-199a-3p,促进高糖诱导的足细胞的增殖,减轻细胞凋亡、炎症和氧化应激.     

芝麻素通过lncRNA WEE2-AS1/miR-515-5p通路影响高糖诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的：探讨芝麻素对高糖诱导的血管内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能作用机制。方法：高糖诱导HUVEC建立细胞损伤模型,用不同浓度的芝麻素处理细胞;qRT-PCR法检测LncRNA WEE2-AS1与miR-515-5p的表达量;sh-NC、sh-WEE2-AS1转染至HUVEC后加入30 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+sh-NC组、HG+sh-WEE2-AS1组);构建WEE2-AS1稳定过表达HUVEC细胞,用30 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+WEE2-AS1-LV组),用40μmol/L芝麻素与30 mmol/L葡萄糖共同处理细胞(HG+SES+WEE2-AS1-LV组);MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的水平;双荧光素酶报告基因实验检测WEE2-AS1与miR-515-5p的靶向关系;Western blotting法检测cleaved-caspase3蛋白表达量。结果：芝麻素可降低高糖诱导的HUVEC中WEE2-AS1的表达量(P<0.05),可降低凋亡率和cleaved...     

胃饥饿素通过抑制内质网应激减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡

目的 研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响。方法 将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组。对照组细胞不加干预，高糖组采用30 mmol/L葡萄糖构建细胞损伤模型，高糖+ghrelin组采用30 mmol/L葡萄糖和10 nmol/L ghrelin处理细胞，高糖+ghrelin+衣霉素组采用30 mmol/L葡萄糖、10 nmol/L ghrelin和10μmol/L衣霉素联合处理细胞，所有细胞均培养48 h。采用AnnexinⅤ-FITC/7-AAD试剂盒检测4组细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测对照组、高糖组和高糖+ghrelin组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激蛋白GPR78、IRE1α的表达。结果 与对照组比较，高糖组HRMECs细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与高糖组相比，高糖+ghrelin组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较，高糖组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达明显增加(均P&...     

miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路调节滋 养层细胞的增殖、浸润和凋亡

目的 探讨miR-34a-5p及CDK6对滋养层细胞增殖,浸润和凋亡的作用和下游机制以及二者的调节关系。方法 培养滋养 层细胞HTR-8/Svneo和人绒毛膜癌细胞系BeWo和JEG-3HTR-8/Svneo,使用RTqPCR法检测3种细胞中miR-34a-5p的表达差 异。根据对HTR-8/Svneo细胞的不同处理进行如下分组：无处理的HTR-8/Svneo细胞（对照组）;miR-34a-5p拟似物mimic转染 细胞（mimic组）,pcDNA-CDK6和mimic共转染HTR-8/Svneo细胞（pcDNA-CDK6+mimic组）,miR-34a-5p抑制剂inhibitor转 染HTR-8/Svneo细胞（inhibitor组）。MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定caspase 3活性检测细胞凋亡水平,Transwell实验检 测细胞浸润能力;Western blot 检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK6,凋亡标记物cleaved-caspase 3,浸润标记物MMP-9的表达; 荧光素酶报告基因实验确认miR-34a-5p对CDK-6的直接靶向关系。结果 过表达miR-34a-5p抑制HTR-8/Svneo细胞的增 殖活性（P=0.000）和浸润能力（P=0.049）,下调细胞中MMP-9（P=0.004）和CDK6（P=0.014）的表达水平,上调caspase 3活性 （P=0.018）和cleaved caspase 3的表达水平（P=0.003）;CDK6是miR-34a-5p的靶基因,过表达CDK6削弱miR-34a-5p对细胞 增殖（P=0.000）、凋亡（P=0.015）和浸润（P=0.046）的作用;使用IFG-1激活PI3K/AKT通路部分逆转miR-34a-5p对细胞增殖 （P=0.011）、凋亡（P=0.004）和浸润（P=0.002）的作用。结论 miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路激活调节滋 养层细胞的增殖,浸润和凋亡。     

高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响.方法 利用Ⅳ型胶原的快速黏附法分离培养小鼠表皮干细胞,观察其形态学;通过免疫荧光法检测表皮干细胞标志物β1整合素和K19来鉴定表皮干细胞;将小鼠表皮干细胞分别放在葡萄糖浓度为5.6、15和30mmol/L的培养基里培养;MTT法检测细胞增殖情况,免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平.结果 体外培养的小鼠表皮干细胞呈克隆样生长,增殖速度较快,细胞形态呈铺路石样,边缘细胞呈梭形,细胞核质比较大;免疫荧光法检测到培养的小鼠表皮干细胞β1整合素和K19呈阳性表达且阳性表达率均为100％;MTT法检测到与对照组（5.6mmol/L浓度葡萄糖）相比,15mmol/L浓度葡萄糖刺激72h后检测到细胞增殖速度无明显改变,而30mmol/L浓度葡萄糖刺激24、48和72h后检测到细胞增殖速度降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot法检测到与对照组相比,30mmol/L浓度葡萄糖刺激48h后凋亡蛋白Bax的蛋白表达量明显增加而抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）.结论 本研究结果表明较高浓度（30mmol/L）葡萄糖可以明显抑制小鼠表皮干细胞的增殖,从干细胞角度进一步为糖尿病创面难愈的原因提供了实验室依据.     

脂联素预处理对高糖诱导下HRMECs细胞损伤的保护

目的 观察脂联素(adiponectin, APN)预处理对高糖诱导下人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)凋亡及增殖的影响。方法 将生长状况良好的HRMECs随机分为对照组(DMEM培养基,无干预)、高糖组(DMEM培养基+25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+APN组(细胞先用10μg/ml APN预处理2 h,然后用高糖培养基培养)。各组分别培养24 h后,Western blot检测HRMECs凋亡过程中Bax、Bcl-2以及Caspase-3的蛋白表达水平,流式检测HRMECs凋亡率,CCK-8法检测HRMECs增殖。结果 与对照组比较,高糖组HRMECs的Bax、Caspase-3蛋白水平以及细胞凋亡率均明显增高,但Bcl-2的表达量及细胞增殖率均明显降低(均P<0.001)。与高糖组比较,高糖+APN组HRMECs的Bax、Caspase-3蛋白水平以及细胞凋亡率有所回落,Bcl-2的蛋白水平及细胞增殖率有所回升(均P<0.001)。结论 高糖诱导下HRMECs凋亡增加,增殖减少,APN预处理可以抑制凋亡,促进增殖,提示APN对高糖下视网膜微血管内皮细胞损伤...     

miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的 微小miRNA-93-3p（miR-93-3p）对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti miR NC组、anti miR-93-3p组、HG+ miR NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR 93 3p的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C caspase-3）、磷酸化 磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷酸化 蛋白激酶 B（p-AKT）表达量。结果 与NC组相比,HG组miR 93 3p的表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与anti miR NC组相比,anti miR-93-3p组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与HG+ miR NC组相比,HG+miR 93 3p组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著降低（P＜0.05）。结论 miR 93 3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。     

miR-27a-3p调控XIAP表达对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-27a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的T-ALL Jurkat细胞分为未转染组(未处理)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p模拟物),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-27a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)蛋白表达水平,比色法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-27a-3p和XIAP的靶向关系.结果 与未转染组或miR-NC组比较,miR-27a-3p组细胞中miR-27a-3p表达水平、细胞凋亡率、细胞中Bax表达水平和caspase-3活性均明显升高,而细胞增殖活力和细胞中Bcl-2、XIA P蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);miR-NC组和未转染组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).DLR实验证实miR-27a-3p可与XIAP靶向结合.结论 miR-27a-3p可抑制T-ALL Jurkat细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控XIA P表达有关.     

miR-431-5p通过调控AKT1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡研究

目的研究miR-431-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞CFPAC-1和PANC-1中miR-431-5p表达水平。转染miR-431-5p模拟物至胰腺癌CFPAC-1细胞中过表达miR-431-5p后,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-431-5p与AKT1的调控关系。结果与hTERT-HPNE细胞相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中miR-431-5p表达量降低（P < 0.05）。过表达miR-431-5p后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-431-5p在CFPAC-1细胞中靶向负调控AKT1表达。同时过表达miR-431-5p和AKT1后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数升高,凋亡率降低,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-431-5p通过靶向抑制AKT1降低胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡,可能是胰腺癌的潜在分子治疗靶点。     

苍耳亭通过调控LOXL1-AS1/miR-520d-5p轴对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨苍耳亭对白血病细胞的抗癌作用及其机制是否与调控长链非编码RNA（lncRNA）类赖氨酰氧化酶1反义RNA1（LOXL1-AS1）和微小RNA（miR）-520d-5p表达有关。方法 按转染细胞分组：对照组、苍耳亭6 μmol/L组、苍耳亭20 μmol/L组、苍耳亭60 μmol/L组、si-NC组、si-LOXL1-AS1组、苍耳亭+pcDNA-LOXL1-AS1组;采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。实时定量PCR（RT-qPCR）检测LOXL1-AS1和miR-520d-5p表达;蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤（Bcl）-2和Bcl相关x蛋白（Bax）蛋白表达。分别转染LOXL1-AS1小干扰RNA、LOXL1-AS1过表达载体至K-562细胞中,通过CCK-8法、流式细胞术、蛋白质印迹法分析干扰LOXL1-AS1表达或过表达LOXL1-AS1联合苍耳亭对K-562细胞增殖、凋亡以及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。双荧光素酶报告实验分析LOXL1-AS1和miR-520d-5p相互作用。结果 苍耳亭处理后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高（均P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达、LOXL1-AS1表达显著降低（均P＜0.05）。干扰LOXL1-AS1表达后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高（均P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。过表达LOXL1-AS1明显减弱苍耳亭处理对K-562细胞细胞增殖、凋亡以及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。LOXL1-AS1与miR-520d-5p直接结合。结论 苍耳亭可抑制白血病细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制LOXL1-AS1/miR-520d-5p轴有关。     

miR-27a-3p调控XIAP表达对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-27a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的T-ALL Jurkat细胞分为未转染组(未处理)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p模拟物),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-27a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)蛋白表达水平,比色法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-27a-3p和XIAP的靶向关系.结果 与未转染组或miR-NC组比较,miR-27a-3p组细胞中miR-27a-3p表达水平、细胞凋亡率、细胞中Bax表达水平和caspase-3活性均明显升高,而细胞增殖活力和细胞中Bcl-2、XIA P蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);miR-NC组和未转染组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).DLR实验证实miR-27a-3p可与XIAP靶向结合.结论 miR-27a-3p可抑制T-ALL Jurkat细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控XIA P表达有关.     

miR-208a-3p靶向LZTFL1调控宫颈癌细胞的增殖和侵袭转移及其分子机制

【摘要】 目的 探讨miR-208a-3p靶向亮氨酸拉链转录因子样1（LZTFL1）对宫颈癌细胞增殖、侵袭转移的影响和分子机制。方法 收集2016年5月～2018年3月于湖北省中西医结合医院妇产科收治并经病理科确诊的40例宫颈癌患者手术标本。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印记（Western Blot）检测宫颈癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-208a-3p和LZTFL1的表达。将将宫颈癌细胞Hela分为anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、anti-miR-208a-3p组（转染anti-miR-208a-3p）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-LZTFL1组（转染pcDNA-LZTFL1）。采用MTT法检测细胞活力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数目,western blot检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP 2）和MMP 9蛋白的表达。〖HTH〗结果〖HTK〗〓相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-208a-3p的表达显著升高,LZTFL1的表达显著降低（P＜0.05）。miR-208a-3p靶向LZTFL1并负性调控其表达。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-208a 3p组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP 2和MMP-9蛋白的表达显著降低,p21的表达显著升高,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。与pcDNA组比较,pcDNA-LZTFL1组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP-2和MMP 9蛋白表达显著降低,p21表达显著升高,差异均有统计学意义（P＜005）。与anti-miR-208a-3p+si-NC组比较,anti-miR-208a-3p+si-LZTFL1组Hela细胞活力、迁移侵袭能力、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著升高,p21的表达显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 宫颈癌中miR-208a-3p呈高表达,LZTFL1呈低表达。抑制miR-208a-3p通过上调LZTFL1可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。