人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用

目的：探讨人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导的雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用,阐明人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3对生殖功能保护作用的相关机制,为其深入开发提供实验依据。方法：28只清洁级雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组（400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg1+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg3+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1 DBP）和联合组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1DBP）,每组7只。DBP溶于玉米油于每天上午灌胃给药,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3溶于生理盐水于每天下午皮下注射给药,每天各给药1次,连续给药35 d。采用WLJY-9000型精子质量检测系统检测各组小鼠的精子密度、精子活力和总畸形率,HE染色观察小鼠睾丸组织病理形态表现,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠血清中睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）水平,采用免疫荧光法检测睾丸组织缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达水平。结果：与模型组比较,联合组小鼠睾丸脏器系数明显升高（P<0.05）,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠精子密度和精子活力明显升高（P<0.01）;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠血清中T和LH水平明显升高（P<0.01）,FSH水平明显降低（P<0.01）,小鼠睾丸组织中Cx43蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。HE染色,模型组小鼠睾丸组织生精上皮较薄,管腔中生精细胞严重脱落;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组和人参皂苷Rg3+DBP组小鼠睾丸组织生精上皮变厚,管腔中脱落细胞较少;联合组小鼠睾丸组织生精上皮结构完整,各级生精细胞排列规则,腔内精子丰富。析因分析,人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3可致小鼠精子活力（F=6.704,P=0.016）、血清中T水平（F=4.912,P=0.036）和睾丸组织中Cx43蛋白表达水平（F=6.937,P=0.018）升高。结论：人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3单独使用及人参皂苷Rg1与人参皂苷Rg3联合使用,可提高精子密度和精子活力,使小鼠血清中T和LH水平升高,FSH水平降低,减轻小鼠生殖功能损伤,其作用机制可能与上调Cx43表达水平发挥生精保护作用有关,可抑制DBP所致的生殖功能损伤,且人参皂苷Rg1与Rg3联合使用表现为协同作用。     

骨肉瘤组织中 Hedgehog 信号通路的表达及意义

目的：研究Hedgehog信号通路在骨肉瘤组织中的表达情况及临床意义。方法采用免疫组化法分别检测31例骨肉瘤、21例骨良性肿瘤（13例骨软骨瘤、8例骨样骨瘤）组织中IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白的表达情况,分析此4种蛋白相关关系以及其表达水平与骨肉瘤临床特征的关系。结果骨肉瘤中IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白在骨肉瘤组织中的阳性率分别为70．97％、72．73％、70．97％、70．97％,与骨良性肿瘤（19．05％、14．28％、14．28％、9．5％）比较,差异均有统计学意义（ P＜0．001）。 IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白表达与患者年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤大小及是否肺转移无关;相关分析显示IHH和PTCH、SMO、Gli1蛋白在骨肉瘤组织中的表达呈正相关。结论 Hedgehog信号通路中的IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白异常高表达,提示Hedgehog信号通路可能在骨肉瘤的发生和发展中起重要作用。     

人参皂苷Rg1联合阿霉素对K562/ADR细胞增殖及耐药的影响

目的 探究人参皂苷Rg1对人慢性髓细胞白血病耐阿霉素(adriamycin, ADR)细胞K562/ADR增殖的影响及其对K562/ADR细胞的耐药逆转作用。方法 CCK-8法检测不同浓度的人参皂苷Rg1对K562/ADR细胞增殖的影响;CCK-8法检测人参皂苷Rg1与ADR联用对K562/ADR细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC₅₀)和逆转倍数;集落形成实验检测人参皂苷Rg1联合ADR对K562/ADR细胞集落形成能力的影响;流式细胞术检测人参皂苷Rg1联合ADR对K562/ADR细胞周期的影响。结果 与对照组相比,各浓度和作用时间的人参皂苷Rg1均可抑制K562/ADR细胞增殖(P<0.001),当人参皂苷Rg1浓度为120μg/mL,作用时间为48 h时,细胞增殖抑制率最高(P<0.05);与单用ADR相比,人参皂苷Rg1联合ADR作用48 h后,K562/ADR细胞IC₅₀值明显下降(P<0.05),人参皂苷Rg1对K562/ADR细胞的耐药逆转倍数为2.34;与对照组和ADR或人参皂苷Rg1单药作用相比,人参皂...     

5种不同中药组合对血管内皮细胞生物活性的影响

目的比较5种不同中药组合对人微血管内皮细胞株(HMEC-1)生物活性的影响,为抗肿瘤血管形成复方中药的研制提供依据。方法设置7个组,A组(阴性对照组)为生理盐水,B_1组为藤黄酸+人参皂苷Rg3+斑蝥素,B_2组为藤黄酸+人参皂苷Rg3+青蒿琥脂,B_3组为斑蝥素+人参皂苷Rg3+青蒿琥脂,B_4组为藤黄酸+人参皂苷Rg3,B_5组为藤黄酸+苦参碱,C组(阳性对照组)为沙利度胺。药物浓度:藤黄酸为20μg/mL,去甲斑蝥素为20μg/mL,人参皂苷Rg3为100μg/mL,青蒿琥脂为150μg/mL,苦参碱为100μg/mL,沙利度胺为50μg/mL。每孔加每种药物100μL,每组设6个复孔。比较每组HMEC-1细胞增殖、黏附、迁移、体外血管形成能力。结果 5种不同中药组合中,藤黄酸+人参皂苷Rg3+斑蝥素组合抑制血管内皮细胞增殖、黏附、迁移、体外血管形成效果最好,其次是藤黄酸+人参皂苷Rg3+青蒿琥脂组合,第3是人参皂苷Rg3+斑蝥素+青蒿琥脂组合,第4是藤黄酸+人参皂苷Rg3组合,第5是藤黄酸+苦参碱组合,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论藤黄酸+人参皂苷Rg3+斑蝥素组合具有较强的抑制血管内皮细胞生物学活性的效果。     

人参皂苷Rg1促进人牙周膜干细胞增殖与成骨分化

目的 观察人参皂苷Rg1对体外培养的人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和成骨分化的影响.方法 选取第3代PDLSCs,采用MTT法和细胞周期检测不同浓度(0.25、0.5、1、2、4μmol/L)人参皂苷Rg1对PDLSCs增殖的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)活性、实时荧光定量RT-PCR和放免法检测人参皂苷Rg1对PDLSCs成骨分化的影响;采用ELISA方法检测人参皂苷Rg1对PDLSCs碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响.结果 与对照组比较,浓度为0.5、1、2μmol/L的人参皂苷Rg1能明显提高PDLSCs的增殖能力(P＜0.05),其中浓度为1μmol/L的促增殖作用最强,S+G2/M期细胞百分率明显高于对照组(P＜0.05);浓度为1μmol/L的人参皂苷Rg1组ALP活性、骨钙素(osteocalcin,OCN)和bFGF的表达水平明显高于对照组(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1对体外培养的PDLSCs有促进增殖和成骨分化的作用.     

卵巢和卵巢肿瘤中Hedgehog 信号通路的表达

目的 探讨正常卵巢和卵巢肿瘤中Hedgehog信号通路的表达.方法 采用RT-PCR和免疫组织、细胞化学染色检测26例卵巢肿瘤组织、3例卵巢癌细胞株(SKOV3、A2780和COC1)和7例正常卵巢组织中Hedgehog信号通路的信号分子SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA和蛋白表达情况;通过实时定量RT-PCR对随机抽取的11例卵巢肿瘤组织和5例正常卵巢组织进行PTCH和GLI1 mRNA水平的比较.结果 SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA在卵巢肿瘤组织中均有表达;SHH mRNA在正常卵巢组织中不表达,而IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA在正常卵巢组织中有表达;在卵巢肿瘤组织中,PTCH和GLI1的mRNA表达水平高于正常组织(P＜0.05).SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1蛋白在卵巢肿瘤组织中均呈阳性表达,在正常卵巢组织中不表达.卵巢癌细胞株SKOV3、A2780和COC1均有IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA和蛋白的表达;SHH仅在SKOV3和A2780中表达. 结论 卵巢肿瘤中存在Hedgehog信号通路,在部分卵巢肿瘤中有Hedgehog信号通路过度激活的现象.     

灵芝菌液体发酵人参茎叶总皂苷化学成分变化及其抗肿瘤活性

目的：研究灵芝菌液体发酵人参茎叶总皂苷前后化学成分的生物转化规律,为人参茎叶药性菌质的进一步开发奠定基础。方法：采用灵芝菌种对人参茎叶总皂苷进行液体发酵,薄层色谱法分析发酵前后其化学成分的变化;紫外分光光度法检测发酵前后人参茎叶总皂苷水平;高效液相色谱法检测发酵前后人参皂苷Rb₁、Rg₃、Rd、CK、Re、Rg₁和Rh₁水平。将人肝癌SMMC-7721细胞株分为空白对照组,低、中和高剂量人参茎叶总皂苷组,低、中和高剂量人参茎叶药性菌质组。低、中和高剂量人参茎叶总皂苷和人参茎叶药性菌质组给药剂量分别为5、10和20 mg·L^-1,MTT法检测人参茎叶总皂苷发酵前后SMMC-7721细胞株的生长抑制率（IR）。结果：薄层色谱检测,发酵前后皂苷之间发生了相互转化;发酵前人参茎叶总皂苷水平为749.98 mg·g^-1,发酵后人参茎叶总皂苷水平为602.26 mg·g^-1。发酵前人参二醇组皂苷中人参皂苷Rb1、Rg3、Rd和CK水平分别为24.54、2.21、87.22和0 mg·g^-1,人参三醇组皂苷中人参皂苷Re、Rg1和Rh1水平分别为151.34、77.02和3.06 mg·g^-1;发酵后人参二醇组皂苷中人参皂苷Rb1水平降低了61.45%,Rg3水平增加了238.91%、Rd水平增加了34.43%、CK水平增加了268.00%,人参三醇组皂苷中人参皂苷Re水平降低了63.75%、Rg1水平降低了64.41%,Rh1含量增加了408.88%。中剂量人参茎叶药性菌质组SMMC-7721细胞株的IR高于中剂量人参茎叶总皂苷组（P<0.05）,高剂量人参茎叶药性菌质组SMMC-7721细胞株的IR高于高剂量人参茎叶总皂苷组（P<0.01）。结论：以灵芝菌液体发酵人参茎叶总皂苷可明显改变其化学成分,发酵后组分对SMMC-7721细胞株具有更强的抗增殖活性。     

人参皂苷Rg1对Aβ1-40致AD模型大鼠行为学及caspase-3表达的影响

【目的】 观察人参皂苷Rg1对Aβ-淀粉样蛋白1-40致阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠学习记忆能力的影响及对caspase-3表达的调控作用,探究人参皂苷Rg1对海马CA1区神经元凋亡的防护作用。 【方法】 选取3个月龄健康SD大鼠75只,随机分为青年组、假手术组、模型组、人参皂苷Rg1干预组[模型+人参皂苷Rg1 20 mg/(kg·d)剂量组和模型+人参皂苷Rg1 40 mg/(kg·d)剂量组],每组15只。D-半乳糖50 mg/kg大鼠腹腔注射,连续注射6周后,依照Paxions《大鼠脑立体定位图谱》,在海马区注入凝聚态Aβ1-40溶液1 μL制作AD模型。造模成功后,人参皂苷Rg1干预组分别给予人参皂苷Rg1 20、40 mg/(kg·d)灌胃,其它三组以等量生理盐水灌胃(1次/d),连续30 d后利用Morris水迷宫观察人参皂苷Rg1对AD大鼠学习记忆能力的影响;断头取海马,应用H-E染色法观察海马CA1区病理学改变;应用RT-PCR、免疫组化(SABC)和蛋白质印迹法检测caspase-3基因及蛋白表达情况。 【结果】 (1)人参皂苷Rg1干预组大鼠的学习记忆成绩优于模型组(P<0.05);(2)模型组海马CA1区神经元排列欠规则,可见肿胀的细胞,出现核固缩,锥体细胞较少,可见凋亡小体。人参皂苷Rg1干预组可见细胞排列基本规则,明显坏死的锥体细胞较少;(3)与青年组比较,模型组大鼠海马组织caspase-3基因及蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,Rg1干预组大鼠的caspase-3基因及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。 【结论】 人参皂苷Rg1通过抑制caspase-3的表达,从而抑制Aβ1-40致AD模型大鼠神经元凋亡,进而改善AD大鼠学习记忆能力,达到防治AD的目的。     

卵巢和卵巢肿瘤中Hedgehog 信号通路的表达

目的探讨正常卵巢和卵巢肿瘤中Hedgehog信号通路的表达。方法采用RT—PCR和免疫组织、细胞化学染色检测26例卵巢肿瘤组织、3例卵巢癌细胞株（SKOV3、A2780和COC1）和7例正常卵巢组织中Hedgehog信号通路的信号分子SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA和蛋白表达情况;通过实时定量RT—PCR对随机抽取的11例卵巢肿瘤组织和5例正常卵巢组织进行PTCH和GLI1 mRNA水平的比较。结果SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA在卵巢肿瘤组织中均有表达;SHH mRNA在正常卵巢组织中不表达,而IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA在正常卵巢组织中有表达;在卵巢肿瘤组织中,PTCH和GLI1的mRNA表达水平高于正常组织（P〈0．05）。SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1蛋白在卵巢肿瘤组织中均呈阳性表达,在正常卵巢组织中不表达。卵巢癌细胞株SKOV3、A2780和COC1均有IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA和蛋白的表达;SHH仅在SKOV3和A2780中表达。结论卵巢肿瘤中存在Hedgehog信号通路,在部分卵巢肿瘤中有Hedgehog信号通路过度激活的现象。     

人参皂苷Rg3对急性髓细胞性白血病THP-1、HL-60细胞的干预作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对急性髓细胞性白血病的干预机制。方法:体外培养急性单核细胞性白血病细胞系(THP-1)、急髓白血病M3细胞系(HL-60),采用人参皂苷Rg3对细胞系进行干预,采用MTS法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法分析相关蛋白表达。结果:人参皂苷Rg3对THP-1、HL-60细胞均有不同程度的抑制生长效果,IC50分别为3.5、3.02 g·L~(-1)。人参皂苷Rg3作用24 h、48 h均可抑制急性髓细胞性白血病细胞增殖,且抑制作用与药物剂量呈依赖关系;人参皂苷Rg3对THP-1以及HL-60细胞的凋亡可起到诱导作用,细胞凋亡会随药物浓度升高而增加,且干预时间延长同样会增加细胞凋亡率,细胞凋亡率呈现时间、剂量依赖性。在作用48 h后,凋亡相关因子PARP出现了降解分裂条带,THP-1出现了Caspase-8条带轻度减弱,HL-60细胞出现了p-Akt明显减弱。结论:人参皂苷Rg3可以对Caspase-8及PARP相关蛋白的表达以及凋亡过程起到激活作用,使p-Akt表达水平降低,从而对肿瘤细胞的增殖以及凋亡起到抑制以及诱导作用。     

基于Sonic Hedgehog通路探讨复方胃炎合剂干预慢性萎缩性胃炎癌前病变的机制

目的 观察复方胃炎合剂对慢性萎缩性胃炎癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)脾虚痰湿热瘀证大鼠Sonic Hedgehog(Shh)通路相关基因表达的影响,并探讨其抑制PLGC进展的机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠随机分为空白组、空白+中药组、模型组、...     

人参皂苷CK对PDGF-BB诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖和表型转换的影响及机制

  目的   探讨人参皂苷CK（ginsenoside compound K, CK）对体外培养肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs）增殖、表型转换的影响和相关机制。   方法   以体外培养的PASMCs为研究对象,血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor-BB, PDGF-BB）为诱导剂,CK为干预剂。实验分为对照组（不做处理）、模型组（给予20 ng/mL PDGF-BB）和干预组（同时给予20 ng/mL PDGF-BB+5 μmol/L CK）。CCK-8法检测细胞增殖情况〔在上述分组的基础上,将干预组CK浓度设为1、3、5 μmol/L,并增设药物组（分别予以1、3、5 μmol/L CK）〕,流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞表型转换标志基因α-肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）和平滑肌22α蛋白（smooth muscle 22α, SM22α）mRNA和蛋白的表达,Western blot检测Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白表达。   结果   与模型组比较,CK以剂量依赖性的方式抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,5 μmol/L CK干预时结果与对照组无明显差异（P>0.05）,故后续实验CK浓度选用5 μmol/L;CK以1、3、5 μmol/L剂量单独与PASMCs孵育,未发现细胞毒性作用（P>0.05）;CK将细胞周期阻滞于G₀/G₁期,促进PASMCs的凋亡,并逆转α-SMA、SM22α的mRNA和蛋白表达（P<0.01）;同时CK下调β-catenin蛋白和细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表达,并上调磷酸化糖原合酶激酶3β（phosphorylated glycogen synthase kinase-3β, pGSK-3β）/糖原合酶激酶3β（glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β）蛋白表达（P<0.01）。   结论   CK抑制异常的PASMCs增殖并逆转了表型转换,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。提示CK可能具有控制肺动脉高压的治疗潜力。     

白术内酯Ⅰ通过调低CyclinD1/CDK4抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖及机制

目的 探讨白术内酯I抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖及可能机制。 方法 MTT法检测白术内酯Ⅰ对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用;流式细胞仪检测白术内酯Ⅰ作用后胃癌细胞SGC-7901的凋亡率及细胞周期的改变;Western blotting检测度白术内酯Ⅰ作用后胃癌细胞SGC-7901中Cyclin D1、CDK4蛋白的变化。 结果 MTT试验结果显示与对照组相比,白术内酯Ⅰ可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,并且呈时间及剂量的依赖性（P < 0.05~P < 0.01）;流式细胞仪结果显示与对照组相比白术内酯Ⅰ能够明显促进胃癌细胞SGC-7901后的细胞凋亡,并且呈剂量的依赖性（P < 0.01）,同时会增加细胞中G₁期细胞的比例（P < 0.01）,减少G₂期细胞的比例（P < 0.01）,并且呈剂量的依懒性（P < 0.05）;Western blotting结果显示同对照组相比白术内酯Ⅰ能够调低胃癌细胞SGC-7901中Cyclin D1、CDK4蛋白的表达（P < 0.01）,并且呈剂量的依赖性（P < 0.05）。 结论 白术内酯Ⅰ能通过调低Cyclin D1、CDK4蛋白进而改变细胞周期来抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖同时促进其凋亡。     

塞来昔布联合紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡的协同作用及其机制

目的: 观察塞来昔布联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,探讨环氧化酶2(Cox-2)抑制剂与化疗药物协同作用的可能机制。方法: 将MCF-7细胞分为空白对照组(不含药物作用的培养基)、塞来昔布组(含不同浓度塞来昔布的培养基)、紫杉醇组(含不同浓度紫杉醇的培养基)和塞来昔布联合紫杉醇组(含不同浓度塞来昔布和不同浓度紫杉醇的培养基)。Hoechst 33258染色观察各组MCF-7细胞凋亡形态;MTT法检测各组MCF-7细胞存活率;流式细胞术检测各组MCF-7细胞周期分布和细胞凋亡率;Western blotting法检测各组MCF-7细胞中B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达量。结果: Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7凋亡细胞数增多,塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7凋亡细胞最多,并随塞来昔布浓度增加而增加。MTT法检测,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7细胞存活率均随药物作用时间的延长而降低;而在相同时间段内,50mg·L^-1塞来昔布与30μg·L^-1紫杉醇联合应用组MCF-7细胞存活率低于单独使用两药时的细胞存活率(P<0.05)。流式细胞术检测,塞来昔布组细胞阻滞于G₀/G₁期,紫杉醇组细胞阻滞于G₂/M期;与空白对照组比较,塞来昔布联合紫杉醇组细胞周期分布改变最明显,在G₀/G₁期及G₂/M期的细胞比例均有明显升高,S期细胞比例下降。AnnexinⅤ/PI双染,药物刺激细胞6h后,塞来昔布组和紫杉醇组细胞早期凋亡率均高于空白对照组(P<0.05),塞来昔布联合紫杉醇组细胞早期凋亡率高于其他组(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,塞来昔布组、紫杉醇组和塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7细胞中bcl-2蛋白和p-ERK蛋白表达量均下调,塞来昔布联合紫杉醇组下调最明显;而ERK2蛋白表达量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 塞来昔布和紫杉醇在促乳腺癌MCF-7细胞凋亡方面有协同作用,其机制可能与下调bcl-2和p-ERK蛋白表达水平有关。     

人参皂苷Rg1联合抗生素治疗小鼠脓毒症急性肺损伤

  目的  观察人参皂苷Rg1联合抗生素亚胺培南对脓毒症急性肺损伤的影响。  方法  C57BL/6雄性小鼠以盲肠穿刺法建立脓毒症模型,将模型小鼠随机分为模型组、亚胺培南组、人参皂苷Rg1组、人参皂苷Rg1+亚胺培南组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠只开腹不穿刺,作为假手术组。各组于术后2 h、26 h、50 h腹腔注射给药。末次给药2 h后（术后52 h）,取小鼠动脉血液测定氧合指数,取肺组织测定肺脏湿/干质量比,HE染色观察肺脏炎症,ELISA测试盒检测肺泡灌洗液白介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α及核转录因子（NF）-κB的水平,蛋白印迹及免疫组织化学染色检测肺组织NF-κB p65的表达。  结果  各给药组均能够显著降低脓毒症小鼠的肺脏湿/干质量比,并升高血液中的氧合指数（P<0.01）,降低肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α及NF-κB水平（P<0.01）,同时降低肺组织中NF-κB p65的表达（P<0.01）。人参皂苷Rg1合并亚胺培南应用时,与单用人参皂苷Rg1及单用亚胺培南组相比,上述指标更接近对照组水平。HE染色结果显示给药治疗后的各组脓毒症小鼠的肺泡炎细胞浸润减轻,联合用药组的肺脏组织形态与假手术组最为接近。  结论  人参皂苷Rg1单用和联用均能够抑制脓毒症小鼠的肺脏炎症,以抗生素治疗脓毒症时或可考虑联合使用。     

人参皂甙Rg3在体外对胃癌细胞生长和凋亡的影响

目的 研究人参皂甙Rg3在体外对低、中分化胃腺癌细胞株MKN-45和SGC-7901生长及凋亡的影响。方法 取处于对数生长期的MKN-45和SGC-7901细胞,加入不同终浓度（20、30、40、50 μg/mL）的人参皂甙Rg3分别培养24、48 h或24、48和72 h,以不加药细胞作为阴性对照。MTT法检测MKN-45和SGC-7901细胞生长抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测SGC-7901细胞凋亡率;流式细胞仪分析SGC-7901细胞周期;透射电子显微镜观察50 μg/mL人参皂甙Rg3处理组SGC-7901细胞的形态学改变。结果 人参皂甙Rg3各处理组SGC-7901和MKN-45细胞生长抑制率均明显高于对照组(P<0.05),且随药物浓度的增加和作用时间的延长而上升(P<0.05)。与对照组比较,人参皂甙Rg3各处理组SGC-7901细胞凋亡率和G0/G1期细胞百分比均明显上升,且呈浓度和时间依赖性。透射电子显微镜观察50 μg/mL人参皂甙Rg3处理组SGC-7901细胞,可见典型的凋亡细胞结构。结论 人参皂甙Rg3在体外对胃癌细胞生长具有抑制作用,且呈现一定的时效和量效关系,其机制可能与诱导胃癌细胞凋亡有关。     

Effect of Mono-2-ethyhexyl Phthalate on DNA Methylation in Human Prostate Cancer LNCaP Cells

Objective To evaluate whether mono(2‐ethylhexyl) phthalate(MEHP) affects genomic DNA methylation and the methylation status of some specific genes such as patched gene(PTCH) and smoothened gene(SMO) in LNCaP cells. Methods LNCaP cells were treated with MEHP(0, 1, 5, 10, and 25 μmol/L) for 3 days. An ELISA assay was preformed to detect genomic methylation, including 5‐methylcytosine(5‐mC) and 5‐hydroxymethylcytosine(5‐hmC) content. A pyrosequencing assay was applied to assess DNA methylation in PTCH and SMO gene promoters. The correlation between DNA methylation and gene expression was assessed. Results The proportion of cytosines with 5‐mC methylation in LNCaP cells was significantly decreased by MEHP(1, 5, 10, and 25 μmol/L) in a dose‐dependent manner(P 0.01). For genes in the Hedgehog pathway, there was no significant MEHP concentration‐dependent difference in the DNA methylation of PTCH and SMO. Conclusion MEHP might affect the progression of prostate cancer through its effect on global DNA methylation.     

NLRP3炎性小体在胃癌细胞中的表达及对其焦亡、增殖、侵袭、迁移的影响

目的 研究胃癌细胞中NLRP3炎性小体的表达及其对增殖、侵袭和迁移的影响。并初步探讨NLRP3介导caspase-1依赖的焦亡信号通路在胃癌发展中的作用。 方法qRT-PCR和Western blotting法分别检测人胃黏膜上皮细胞(GES-1)和人胃癌细胞(MKN45及MGC803)中NLRP3、caspase-1表达;随后下调NLRP3,检测胃癌细胞NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白的表达;Western blotting检测GSDMD、白细胞介素(IL)-18、IL-1β蛋白表达;ELISA法检测细胞培养液上清液中IL-1β、IL-18含量;乳酸脱氢酶(LDH)实验、流式细胞术检测细胞焦亡;CCK-8法及细胞周期试剂盒检测细胞增殖情况;Transwell和划痕实验检测胃癌细胞侵袭和迁移能力。 结果NLRP3、caspase-1在胃癌细胞中较GES-1表达增高(P < 0.01)。下调NLRP3后,胃癌细胞LDH释放率及焦亡率显著降低(P < 0.01);GSDMD、IL-1β、IL-18表达降低(P < 0.01);细胞增殖阻滞在G₁期(P < 0.01);细胞增殖以及侵袭迁移能力显著减弱。 结论NLRP3在胃癌中高表达,其表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移以及其介导的caspase-1依赖焦亡信号通路关键蛋白的表达。