利用环介导等温扩增技术检测西尼罗病毒

目的 建立一种早期快速检测西尼罗病毒的方法。方法 以人工合成西尼罗病毒基因(1 021~1 240,NY99)作为模板,利用环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计合成3套6对引物,特异性识别人工合成西尼罗病毒基因的8个位点,在恒温63℃ 60 min条件下扩增,80℃ 2 min终止反应,通过realtime PCR仪实时监测反应过程,最终产物经凝胶电泳观察。同时将该方法的灵敏度及特异性与常规PCR进行比较。结果 LAMP反应在20 min内即可完成,最终产物经电泳观察可见大小片段不等的呈梯度扩增条带, 而同为黄病毒属的登革热病毒、流行性乙型脑炎病毒及阴性对照等均无扩增。灵敏性是常规PCR的10倍,可以检测到9.23 copies/μl的病毒。结论 该方法具有灵敏、特异、快速、简便、成本低等优点,适合基层和现场检测使用,对西尼罗病的早期诊断和流行病学筛查具有重要意义。     

环介导等温扩增技术在寄生虫检测中的应用研究

随着分子生物学技术的快速发展,以检测核酸为基础的分子生物学技术如PCR、再生式序列复制以及链置换扩增技术等广泛应用于医学和生物学等领域,在病原体的检测以及疾病诊断方面发挥着重     

环介导等温扩增技术在小儿下呼吸道肺炎嗜衣原体感染中的应用

目的评价酶联免疫吸附试验(ELISA)和环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在检测小儿肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)中的应用价值.方法根据Genebank公布的Cpn基因序列设计6条LAMP引物(2条内引物,2条外引物,2条环引物),优化并建立LAMP检测体系.对收治的80例疑似Cpn感染患儿外周血单个核细胞中的Cpn进行检测,同时用ELISA检测Cpn特异性IgM抗体.结果80例患儿当中,Cpn 47例小儿血清IgM抗体阳性(阳性率58.8%);而LAMP能检测出57例阳性(阳性率71.3%),两者比较,差异无统计学意义(P>0.05).80例患儿当中有49例服用过大环内酯类抗生素,ELISA检测出26例阳性(53.1%),而LAMP检测率达75.6%,经统计学分析,差异有统计学意义,P<0.05.结论 LAMP检测小儿Cpn感染方法简便、快捷,尤其是对服用过抗生素的患儿也具有较高的检出率.     

寄生虫病环介导等温扩增技术研究进展

<正>寄生虫病在人类传染病中有着非常重要的影响。及时有效的寄生虫病诊断是疾病防治的首要环节。寄生虫病检测手段有病原学、免疫学和分子生物学等。病原学检查是常用的确诊方法,但易导致漏诊或误诊。免疫学检测在敏感性、特异性方面比病原学法有所提高,但却存在交叉反应、不能区分现症患者或既往感染等问题。分子生物学方法在寄生虫病检测中敏感性和特异性比前两者更高,同时也存在着一些不足,如操作繁琐、仪器昂贵、扩增耗时     

2种诊断小儿支原体肺炎方法的应用与比较

近几年 ,小儿支原体肺炎发病率有增高趋势 ,且本病缺少特异性临床表现和体征 ,故实验室检查成为该病诊断的重要手段 ,我们用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)和酶联免疫吸附试验(ＥＬＩＳＡ)诊断支原体肺炎 ,取得满意结果。1　资料与方法1 1　一般资料 :观察对象均为住院患儿 ,平均年龄 7岁 ,男女数量相当 ,共 2 5例 ,其发病特点为 :发热不退 (>5天 ) ,剧烈咳嗽 ,一般情况良好 ,肺部体征缺如 ,用 β -内酰胺类抗生素治疗无效 ,胸片提示为肺炎改变 ,其中 2 0例为单侧病变。1 2　检查方法 :分别于入院时和病程第 10天取患儿血清 ,用温州伊利康生物技术有…     

环介导等温扩增技术在临床检测中的应用

目的 探讨环介导等温扩增技术在临床检测中的应用.方法 采用我院2008年1O月门诊或住院患者85份试验用的含结核杆菌的阳性痰液和阴性痰液,通过染色涂片镜检和经典PCR的方法及使用改良罗氏培养法进行培养予以定性,并与LAMP法检测结果比较.结果 LAMP法与培养法、Amplicor MTB PCR法检测痰液中结核分枝杆菌的阳性率无明显差异.结论 LAMP法是一种新型的核酸扩增方法;由于它是近年来兴起的一种技术,是一种便捷、特异性强和灵敏度高的快速基因检测技术.     

环介导等温扩增技术在疾控机构微生物检测中的应用

环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型的体外等温扩增特异核酸片段的技术,具有特异性强、灵敏度高、快速简便等优点.本文综述了近年来LAMP在微生物检测领域的具体应用实例和研究进展,并对其应用前景做了展望.     

环介导等温扩增技术在检测痰标本结核分枝杆菌中的应用

目的评价结核分枝杆菌环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测试剂盒的临床应用效果。方法选取肺结核患者183例（肺结核组）和非肺结核患者120例（对照组）。采用涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP对痰标本进行检测,采用结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒（TB- PCR）检测罗氏培养与LAMP结果不符的标本,分析LAMP与罗氏培养的检出率及两者的符合率。结果去除经鉴定为非结核分枝杆菌的10例标本,涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP的阳性检出率分为64.1%（111/173）、64.7%（112/173）、78.6%（136/173）。LAMP与抗酸染色、罗氏培养阳性检出率的差异有统计学意义（P＜0.01）,抗酸染色与罗氏培养比较差异无统计学意义（P＞0.05）。以罗氏培养为金标准,LAMP检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为88.5%（108/122）、82.3%（149/181）、77.1%（108/140）、91.4%（149/163）,LAMP检测与罗氏培养的符合率为84.8%（257/303）。结论结核分枝杆菌环介导等温扩增技术的灵敏度和特异度高,具有简单易行、快速准确的特点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

环介导等温核酸扩增检测缓冲液成分的探索

目的 探索环介导等温扩增(LAMP)检测反应体系缓冲液,为我国野战/灾害等紧急输血的血液筛查提供技术支持.方法 通过对LAMP体系不同组分的梯度分析对检测结果的影响进行研究.结果 扩增效率随着反应体系内Mg2+浓度的增高而降低;LAMP反应的扩增效率随着反应体系内Betain浓度的增高而增高.随着Calcein浓度的降低,LAMP反应体系内的绿色荧光逐渐减弱.结论 建立的反应体系具有较好的反应灵敏度及特异性,与成品化的试剂相似,可适用于临床血液病原体筛查.     

应用多聚酶链反应检测肺炎支原体

参考Ｂｅｒｎｅｔ法合成引物一对，建立肺炎支原体ＤＮＡ的多聚酶链反应检测法，靶ＤＮＡ为１４４ｂｐ。特异性试验显示仅肺炎支原体呈阳性。敏感性试验显示≥１１３ｃｆｕ肺炎支原体呈阳性。检测３０例临床疑似肺炎支原体肺炎患儿的咽拭子，肺炎支原体ＤＮＡ阳性率８０％，１０例健康小儿咽拭子均呈阴性，全部操作可在２４ｈ内完成。     

用套式PCR诊断肺炎支原体感染

应用套式PCR检测患儿咽部分泌物中的肺炎支原体（MP），阳性率为44．4％（28／63），比单式明显增高，由于两次扩增，增强信息量，增除生殖道支原体的假阳性，排除了其他干扰，提高检测的特异性、敏感性。     

血清中肺炎支原体抗体检测的临床应用评价

目的：评价血清中肺炎支原体抗体检测对诊断肺炎支原体感染的临床价值。方法：用ELISA和金免疫斑点法检测636例呼吸道感染者血清中抗肺炎支原体-IgM类抗体,同时培养检测呼吸道标本中肺炎支原体。结果：以培养出MP为诊断MP感染的金标准,ELISA和金免疫斑点法检测血清肺炎支原体-IgM诊断肺炎支原体感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为90．3％和87．1％、97．3％和97．8％、93．3％和94．2％、96．1和94．8％。结论：血清中抗肺炎支原体-IgM类抗体能较较好地诊断肺炎支原体感染,但存在一定的漏诊和误诊。     

环介导等温扩增法检测孕妇血清中单纯疱疹病毒Ⅰ型方法的建立

目的建立稳定、可靠的环介导等温扩增法（LAMP）快速检测孕妇血清中单纯疱疹病毒Ⅰ（HSV-Ⅰ）DNA的方法。方法通过对影响LAMP反应体系的几个主要因素进行优化,确定最佳反应条件,并对其特异性、灵敏度及可靠性进行评判。结果 LAMP检测HSV-Ⅰ DNA的最佳反应条件：甜菜碱和Mg2＋的终浓度分别为1.0mol/L和10mmol/L,于62℃恒温反应1h。扩增产物可被Hinf Ⅰ消化,理论上检测下限可达10个拷贝,与定量PCR相比符合率达94.5%。结论本实验建立的LAMP检测HSV-I的方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,适合基层用于HSV-Ⅰ筛查。     

环介导等温扩增法快速检测结核杆菌复合群内主要致病菌

目的 快速诊断和区分结核杆菌复合群内两种主要致病菌.方法 利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立快速检测和区分结核杆菌复合群内主要致病菌的方法,利用该方法对相关的临床分离株样本进行特异性检测,并利用1∶ 10倍比稀释的已知菌株DNA模板分析其敏感性.反应结束后通过电泳或向反应管中加入DNA染料肉眼判定检测结果.结果 该方法可以成功检测到主要的结核致病菌:人型和牛型结核分枝杆菌,与包括卡介苗在内的其余相关菌株均未见非特异性交叉反应.检测的灵敏度可达100拷贝/微升,高于常规PCR方法.结论 该检测方法具有敏感、特异、低成本和快速的特点,可检测和区分人型和牛型结核分枝杆菌,并能排除卡介苗对诊断的干扰.     

利用环介导恒温扩增法快速检测空肠弯曲菌

目的 利用环介导恒温扩增技术,以空肠弯曲菌的VS1基因设计引物,建立快速检测空肠弯曲菌的方法,以期能应用于急性腹泻和肠炎等疾病的快速检验.方法 ①通过基因比对与引物设计,设计针对空肠弯曲菌的环介导恒温扩增检测(LAMP)方法;②用钙黄绿素、亚甲基蓝、结晶紫、溴化乙锭4种DNA染料对扩增产物进行染色,评价各染料染色效果;③检测该LAMP方法对空肠弯曲菌及其他干扰菌的扩增情况,评价其特异性;④将该LAMP方法与培养法比较,进行统计学分析.结果 ①设计出针对空肠弯曲菌的LAMP检测方法;②钙黄绿素与扩增产物结合后颜色变化明显,是该LAMP方法中较好的DNA染料物质;③本LAMP检测方法只针对空肠弯曲菌有扩增,对其他干扰菌不扩增,显示出良好的特异性;④试验共检测了60株临床和标准菌株,对于菌株的培养物,LAMP检测结果与培养鉴定法比较差异无统计学意义(x2 =0.3333,P＞0.05).结论 本试验设计出了针对空肠弯曲菌LAMP检测方法,该LAMP法较好的DNA染料物质是钙黄绿素,该方法具有良好的特异性,与培养鉴定法比较具有较高的阳性、阴性及总体符合率,能够用于空肠弯曲菌的快速检验.     

小儿肺炎支原体感染的早期诊断

探讨小儿肺炎支原体感染的早期诊断方法。方法：对３８５例呼吸道感染的住院患儿应用聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测咽拭子肺炎支原体ＤＮＡ，同时行血冷凝集试验（Ｃｏｌｄａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｔｅｓｔ，ＣＡＴ），进行配对资料研究。结果：不同年龄患儿呼吸道感染肺炎支原体发病情况有所不同。ＰＣＲ法检测肺炎支原体ＤＮＡ阳性率不受自然病程的影响，ＣＡＴ法检测阳性率则明显受到病程的影响。ＰＣＲ法阳性率为３８．１８％，ＣＡＴ法阳性率为１１．６９％，差异有极显著性意义。结论：咽拭子ＰＣＲ法检测肺炎支原体ＤＮＡ，不受病程、年龄因素的影响，具有特异、快速、敏感、标本易于采集等优点。     

PCR-ELISA检测TB DNA方法的建立及其初步应用

目的 建立灵敏，快速，特异的PCR-ELISA检测结核菌DNA的方法。方法 用一对生物素标记的上游引物和未标记的下游引物对TBIS6110的一段DNA进行快速PCR扩增，使扩增产物的一条链上带有生物素，同时PCR反应液中存在有地高辛的标记的检测探针，随着PCR的结束，探针与生物素标记的扩增产物形成特异的杂交体，该杂交体通过链霉亲和素被固定在微孔板表面，然后用标记有过氧化物酶的地高辛抗体与杂交体上的地高辛结合，漂洗后加底物显色。测定吸光度值（A450nm)。结果 该方法灵敏，特异，快速，可以检测出10copies的模板量，对临床60例痰标本进行培养法。结论 该方法适用于临床进行快速的TB基因检测，也可用于其它病原体的检测。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床价值

目的：探讨荧光定量PCR（ FQ-PCR）检测乙型肝炎病毒（ HBV）-DNA的临床意义。方法：采用FQ-PCR检测265例乙型肝炎（乙肝）患者和150名健康体检者的血清HBV-DNA,并将结果与酶联免疫吸附试验测定的乙肝血清标志物进行比较。结果：不同血清标志物模式的各组均可检出 HBV-DNA 阳性,其中 HBsAg、HBeAg、HBcAb 阳性组和 HBsAg、HBeAg 阳性组的HBV-DNA阳性率和病毒拷贝数均显著高于其他血清标志物模式组和对照组（P〈0.01）。 HBV所致不同疾病类型的HBV-DNA阳性率差异均无统计学意义（P〉0.05）,但急性乙肝病毒拷贝数均明显高于其他疾病（P〈0.01）。结论：FQ-PCR检测HBV-DNA可以直接反映是否存在HBV感染,判断病毒的复制能力和传染性,指导临床用药和观察疗效,具有重要的临床意义。     

肺炎患儿肺炎支原体感染的实验室检测

目的：探讨肺炎患儿肺炎支原体（ＭＰ）感染的实验室检测方法。方法：使用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测６７６例肺炎患儿ＭＰ的感染,其中１３９例同时采用支原体培养进行检测;１１２例做间接血凝试验（ＩＨＡ）。结果：ＰＣＲ法对ＭＰ感染的检出率明显高于培养法（Ｐ〈０．０１）,双份血清ＩＨＡ的检测率和ＰＣＲ法比较无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,单份血清ＩＨＡ的检出率明显低于ＰＣＲ法（Ｐ〈０．０１）。结论：ＰＣＲ法