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目的 建立一种早期快速检测西尼罗病毒的方法。方法 以人工合成西尼罗病毒基因(1 021~1 240,NY99)作为模板,利用环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计合成3套6对引物,特异性识别人工合成西尼罗病毒基因的8个位点,在恒温63℃ 60 min条件下扩增,80℃ 2 min终止反应,通过realtime PCR仪实时监测反应过程,最终产物经凝胶电泳观察。同时将该方法的灵敏度及特异性与常规PCR进行比较。结果 LAMP反应在20 min内即可完成,最终产物经电泳观察可见大小片段不等的呈梯度扩增条带, 而同为黄病毒属的登革热病毒、流行性乙型脑炎病毒及阴性对照等均无扩增。灵敏性是常规PCR的10倍,可以检测到9.23 copies/μl的病毒。结论 该方法具有灵敏、特异、快速、简便、成本低等优点,适合基层和现场检测使用,对西尼罗病的早期诊断和流行病学筛查具有重要意义。 相似文献
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目的评价酶联免疫吸附试验(ELISA)和环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在检测小儿肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)中的应用价值.方法根据Genebank公布的Cpn基因序列设计6条LAMP引物(2条内引物,2条外引物,2条环引物),优化并建立LAMP检测体系.对收治的80例疑似Cpn感染患儿外周血单个核细胞中的Cpn进行检测,同时用ELISA检测Cpn特异性IgM抗体.结果80例患儿当中,Cpn 47例小儿血清IgM抗体阳性(阳性率58.8%);而LAMP能检测出57例阳性(阳性率71.3%),两者比较,差异无统计学意义(P>0.05).80例患儿当中有49例服用过大环内酯类抗生素,ELISA检测出26例阳性(53.1%),而LAMP检测率达75.6%,经统计学分析,差异有统计学意义,P<0.05.结论 LAMP检测小儿Cpn感染方法简便、快捷,尤其是对服用过抗生素的患儿也具有较高的检出率. 相似文献
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殷勤 《邯郸医学高等专科学校学报》2001,14(4):284-284
近几年 ,小儿支原体肺炎发病率有增高趋势 ,且本病缺少特异性临床表现和体征 ,故实验室检查成为该病诊断的重要手段 ,我们用聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断支原体肺炎 ,取得满意结果。1 资料与方法1 1 一般资料 :观察对象均为住院患儿 ,平均年龄 7岁 ,男女数量相当 ,共 2 5例 ,其发病特点为 :发热不退 (>5天 ) ,剧烈咳嗽 ,一般情况良好 ,肺部体征缺如 ,用 β -内酰胺类抗生素治疗无效 ,胸片提示为肺炎改变 ,其中 2 0例为单侧病变。1 2 检查方法 :分别于入院时和病程第 10天取患儿血清 ,用温州伊利康生物技术有… 相似文献
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目的 探讨环介导等温扩增技术在临床检测中的应用.方法 采用我院2008年1O月门诊或住院患者85份试验用的含结核杆菌的阳性痰液和阴性痰液,通过染色涂片镜检和经典PCR的方法及使用改良罗氏培养法进行培养予以定性,并与LAMP法检测结果比较.结果 LAMP法与培养法、Amplicor MTB PCR法检测痰液中结核分枝杆菌的阳性率无明显差异.结论 LAMP法是一种新型的核酸扩增方法;由于它是近年来兴起的一种技术,是一种便捷、特异性强和灵敏度高的快速基因检测技术. 相似文献
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目的评价结核分枝杆菌环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测试剂盒的临床应用效果。方法选取肺结核患者183例(肺结核组)和非肺结核患者120例(对照组)。采用涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP对痰标本进行检测,采用结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒(TB- PCR)检测罗氏培养与LAMP结果不符的标本,分析LAMP与罗氏培养的检出率及两者的符合率。结果去除经鉴定为非结核分枝杆菌的10例标本,涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP的阳性检出率分为64.1%(111/173)、64.7%(112/173)、78.6%(136/173)。LAMP与抗酸染色、罗氏培养阳性检出率的差异有统计学意义(P<0.01),抗酸染色与罗氏培养比较差异无统计学意义(P>0.05)。以罗氏培养为金标准,LAMP检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为88.5%(108/122)、82.3%(149/181)、77.1%(108/140)、91.4%(149/163),LAMP检测与罗氏培养的符合率为84.8%(257/303)。结论结核分枝杆菌环介导等温扩增技术的灵敏度和特异度高,具有简单易行、快速准确的特点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。 相似文献
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应用多聚酶链反应检测肺炎支原体 总被引:1,自引:0,他引:1
参考Bernet法合成引物一对,建立肺炎支原体DNA的多聚酶链反应检测法,靶DNA为144bp。特异性试验显示仅肺炎支原体呈阳性。敏感性试验显示≥113cfu肺炎支原体呈阳性。检测30例临床疑似肺炎支原体肺炎患儿的咽拭子,肺炎支原体DNA阳性率80%,10例健康小儿咽拭子均呈阴性,全部操作可在24h内完成。 相似文献
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应用套式PCR检测患儿咽部分泌物中的肺炎支原体(MP),阳性率为44.4%(28/63),比单式明显增高,由于两次扩增,增强信息量,增除生殖道支原体的假阳性,排除了其他干扰,提高检测的特异性、敏感性。 相似文献
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目的:评价血清中肺炎支原体抗体检测对诊断肺炎支原体感染的临床价值。方法:用ELISA和金免疫斑点法检测636例呼吸道感染者血清中抗肺炎支原体-IgM类抗体,同时培养检测呼吸道标本中肺炎支原体。结果:以培养出MP为诊断MP感染的金标准,ELISA和金免疫斑点法检测血清肺炎支原体-IgM诊断肺炎支原体感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为90.3%和87.1%、97.3%和97.8%、93.3%和94.2%、96.1和94.8%。结论:血清中抗肺炎支原体-IgM类抗体能较较好地诊断肺炎支原体感染,但存在一定的漏诊和误诊。 相似文献
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目的建立稳定、可靠的环介导等温扩增法(LAMP)快速检测孕妇血清中单纯疱疹病毒Ⅰ(HSV-Ⅰ)DNA的方法。方法通过对影响LAMP反应体系的几个主要因素进行优化,确定最佳反应条件,并对其特异性、灵敏度及可靠性进行评判。结果 LAMP检测HSV-Ⅰ DNA的最佳反应条件:甜菜碱和Mg2+的终浓度分别为1.0mol/L和10mmol/L,于62℃恒温反应1h。扩增产物可被Hinf Ⅰ消化,理论上检测下限可达10个拷贝,与定量PCR相比符合率达94.5%。结论本实验建立的LAMP检测HSV-I的方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,适合基层用于HSV-Ⅰ筛查。 相似文献
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目的 快速诊断和区分结核杆菌复合群内两种主要致病菌.方法 利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立快速检测和区分结核杆菌复合群内主要致病菌的方法,利用该方法对相关的临床分离株样本进行特异性检测,并利用1∶ 10倍比稀释的已知菌株DNA模板分析其敏感性.反应结束后通过电泳或向反应管中加入DNA染料肉眼判定检测结果.结果 该方法可以成功检测到主要的结核致病菌:人型和牛型结核分枝杆菌,与包括卡介苗在内的其余相关菌株均未见非特异性交叉反应.检测的灵敏度可达100拷贝/微升,高于常规PCR方法.结论 该检测方法具有敏感、特异、低成本和快速的特点,可检测和区分人型和牛型结核分枝杆菌,并能排除卡介苗对诊断的干扰. 相似文献
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目的 利用环介导恒温扩增技术,以空肠弯曲菌的VS1基因设计引物,建立快速检测空肠弯曲菌的方法,以期能应用于急性腹泻和肠炎等疾病的快速检验.方法 ①通过基因比对与引物设计,设计针对空肠弯曲菌的环介导恒温扩增检测(LAMP)方法;②用钙黄绿素、亚甲基蓝、结晶紫、溴化乙锭4种DNA染料对扩增产物进行染色,评价各染料染色效果;③检测该LAMP方法对空肠弯曲菌及其他干扰菌的扩增情况,评价其特异性;④将该LAMP方法与培养法比较,进行统计学分析.结果 ①设计出针对空肠弯曲菌的LAMP检测方法;②钙黄绿素与扩增产物结合后颜色变化明显,是该LAMP方法中较好的DNA染料物质;③本LAMP检测方法只针对空肠弯曲菌有扩增,对其他干扰菌不扩增,显示出良好的特异性;④试验共检测了60株临床和标准菌株,对于菌株的培养物,LAMP检测结果与培养鉴定法比较差异无统计学意义(x2 =0.3333,P>0.05).结论 本试验设计出了针对空肠弯曲菌LAMP检测方法,该LAMP法较好的DNA染料物质是钙黄绿素,该方法具有良好的特异性,与培养鉴定法比较具有较高的阳性、阴性及总体符合率,能够用于空肠弯曲菌的快速检验. 相似文献
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探讨小儿肺炎支原体感染的早期诊断方法。方法:对385例呼吸道感染的住院患儿应用聚合酶链反应(Polymerasechainreaction,PCR)技术检测咽拭子肺炎支原体DNA,同时行血冷凝集试验(Coldagglutinationtest,CAT),进行配对资料研究。结果:不同年龄患儿呼吸道感染肺炎支原体发病情况有所不同。PCR法检测肺炎支原体DNA阳性率不受自然病程的影响,CAT法检测阳性率则明显受到病程的影响。PCR法阳性率为38.18%,CAT法阳性率为11.69%,差异有极显著性意义。结论:咽拭子PCR法检测肺炎支原体DNA,不受病程、年龄因素的影响,具有特异、快速、敏感、标本易于采集等优点。 相似文献
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PCR-ELISA检测TB DNA方法的建立及其初步应用 总被引:1,自引:1,他引:1
目的 建立灵敏,快速,特异的PCR-ELISA检测结核菌DNA的方法。方法 用一对生物素标记的上游引物和未标记的下游引物对TBIS6110的一段DNA进行快速PCR扩增,使扩增产物的一条链上带有生物素,同时PCR反应液中存在有地高辛的标记的检测探针,随着PCR的结束,探针与生物素标记的扩增产物形成特异的杂交体,该杂交体通过链霉亲和素被固定在微孔板表面,然后用标记有过氧化物酶的地高辛抗体与杂交体上的地高辛结合,漂洗后加底物显色。测定吸光度值(A450nm)。结果 该方法灵敏,特异,快速,可以检测出10copies的模板量,对临床60例痰标本进行培养法。结论 该方法适用于临床进行快速的TB基因检测,也可用于其它病原体的检测。 相似文献
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目的:探讨荧光定量PCR( FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒( HBV)-DNA的临床意义。方法:采用FQ-PCR检测265例乙型肝炎(乙肝)患者和150名健康体检者的血清HBV-DNA,并将结果与酶联免疫吸附试验测定的乙肝血清标志物进行比较。结果:不同血清标志物模式的各组均可检出 HBV-DNA 阳性,其中 HBsAg、HBeAg、HBcAb 阳性组和 HBsAg、HBeAg 阳性组的HBV-DNA阳性率和病毒拷贝数均显著高于其他血清标志物模式组和对照组(P〈0.01)。 HBV所致不同疾病类型的HBV-DNA阳性率差异均无统计学意义(P〉0.05),但急性乙肝病毒拷贝数均明显高于其他疾病(P〈0.01)。结论:FQ-PCR检测HBV-DNA可以直接反映是否存在HBV感染,判断病毒的复制能力和传染性,指导临床用药和观察疗效,具有重要的临床意义。 相似文献
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肺炎患儿肺炎支原体感染的实验室检测 总被引:4,自引:1,他引:3
目的:探讨肺炎患儿肺炎支原体(MP)感染的实验室检测方法。方法:使用聚合酶链反应(PCR)技术检测676例肺炎患儿MP的感染,其中139例同时采用支原体培养进行检测;112例做间接血凝试验(IHA)。结果:PCR法对MP感染的检出率明显高于培养法(P〈0.01),双份血清IHA的检测率和PCR法比较无显著性差异(P〉0.05),单份血清IHA的检出率明显低于PCR法(P〈0.01)。结论:PCR法 相似文献