基于液质联用技术的急性淋巴细胞白血病血清代谢组学分析

目的:对急性淋巴细胞白血病(ALL)患者血清进行代谢组学分析,寻找与ALL相关的潜在代谢生物标志物,以探索ALL患者血清代谢组学一般规律。方法:运用代谢组学方法,采用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS)对ALL患者和正常人的血清样本进行代谢组学检测,原始数据经过Compound Discoverer 2.0软件处理,进一步应用SIMCA-P+软件对代谢组学数据进行主成分分析(PCA)及正交-偏最小二乘判别分析(OPLS-DA),寻找与ALL相关的差异代谢物。结果:多变量统计结果显示,与健康对照组相比,ALL患者存在异常的糖类、脂肪酸和氨基酸代谢,并初步鉴定出8种差异代谢产物,分别为癸酰肉碱、花生四烯酸、鞘氨醇-1-磷酸盐、乳酸、哌啶酸、柠檬酸、肌酸和棕榈酰肉碱。结论:ALL患者与对照组血清的代谢谱存在明显的差异,鉴定出的差异代谢物对ALL的诊断和治疗具有重要意义,可为研究ALL及临床用药提供新的思路和方法。     

基于RP-UPLC-MS技术的人血清样品脂质组学分析

目的建立基于RP-UPLC-MS技术的人血清样本脂质组学分析方法。方法以人血清为样本,利用甲醇-氯仿(体积比为2∶1,含质量分数为0.01%的BHT)混合溶剂进行脂质提取,优化液相色谱条件及质谱检测参数并对人血清中甘油三酯、甘油磷脂酰胆碱、溶血性甘油磷脂酰胆碱等代表性脂质类成分进行方法学考察。结果建立了以Acquity BEH C_(18)(5 cm×1.0 mm,1.7μm)为分析柱,柱温50℃,以乙腈-异丙醇(体积比为5∶2,含质量分数为1%的甲酸铵)为流动相A,超纯水(含质量分数为1%的甲酸铵)为流动相B,梯度方式洗脱,采用正负离子检测模式电喷雾电离(±ESI)方式进行质谱检测的RP-UPLC-MS人血清样本脂质组学分析方法,且方法学考察结果表明该方法精密度、稳定性及重复性均良好。结论该方法适用于人血清样本的脂质组学研究,为临床疾病脂类生物标志物的寻找奠定了基础。     

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的阿司匹林 抵抗血清代谢组学研究

目的：发现阿司匹林抵抗（AR）的潜在生物标志物,探讨AR可能机理。方法：以金黄地鼠的AR模型为研究对象,采用基于超高效液相色谱-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）技术的代谢组学方法考察血清中内源性代谢物的变化,采用主成分分析、偏最小二乘法及置换检验分析等,确定AR血清中潜在生物标志物。结果：与对照组相比,AR组金黄地鼠血清中有脱氧胆酸、硬脂酸、松香酸、谷氨酰胺、肌酸等11个特异性代谢分子。结论：脱氧胆酸、硬脂酸等11个成分可作为AR的潜在生物标志物,提示AR致病机理可能与脂肪酸生物合成、二次胆汁酸生物合成、氨基酸代谢有关,这为进一步研究药物改善AR奠定基础。     

癌症患者血清代谢组学的HPLC和LC-MS研究

目的 本实验采用HPLC法和LC-MS技术检测了健康人和肿瘤患者人血清样品中的代谢产物,鉴定了与肿瘤生长相关的代谢物,以阐明癌症患者血清代谢组学规律.方法 HPLC条件:色谱柱为Phenomenex Luna(150mm×4.6mm,5μm),流动相为水-75％甲醇(0.1％醋酸铵水溶液);检测波长为215nm,进样量为l0μL;质谱条件为电喷雾离子检测器(ESI)负离子模式下检测;毛细管电压为2.74kV;锥孔电压为25.52V;离子源温度为100℃;得到保留时间和峰面积,数据经SIMCA-P+软件进行正交-偏最小二乘投影判别分析(OPLS-DA),表达出与肿瘤相关的差异代谢物;利用LC-MS对相关代谢物进行鉴定.结果 检测精密度RSD在0.04％～0.61％之间,健康人血清和肿瘤人血清中代谢规律得到明显区分;5种相关代谢组分得到提取和鉴定,分别为苏氨酸,色氨酸,甘油二酯,磷酰胆碱和硬脂酸.结论 肿瘤患者和健康人血清代谢规律有明显差异,鉴定出的化合物与肿瘤生长代谢密切相关,可为肿瘤疾病生物标记物的研究提供相关基础依据.     

基于血清代谢组学探讨复方枣仁颗粒改善失眠的机制

目的 研究复方枣仁颗粒改善失眠的机制。方法 将49只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组1（艾司唑仑片0.5mg/kg）、阳性对照组2（舒眠胶囊0.6 g/kg）和复方枣仁颗粒低、中、高剂量组（2.5、5、10 g/kg）,每组7只。通过慢性不可预见性温和应激刺激联合对氯苯丙氨酸建立小鼠失眠模型,通过小鼠旷场实验、戊巴比妥钠协同催眠实验考察小鼠行为学变化,通过苏木精-伊红染色观察小鼠下丘脑组织病理形态学变化。结合超高效液相色谱-飞行时间质谱技术对小鼠血清进行代谢组学分析及多元统计分析筛选差异代谢物,并基于MetaboAnalyst 5.0数据库进行代谢通路分析。结果 与空白组比较,模型组小鼠总行进距离、中央区域进入次数、中央区域移动距离显著减少（P<0.05）,总静息时间比例显著升高（P<0.05）,睡眠时长显著缩短（P<0.05）,下丘脑神经细胞受损且空泡化严重。与模型组比较,复方枣仁颗粒低、中剂量组小鼠总行进距离显著增加（P<0.05）、总静息时间比例显著降低（P<0.05）,复方枣仁颗粒高剂量组小鼠睡眠时长显著延长（P<0.05）;各给药组小...     

基于液质联用技术的代谢组学生物样本——血液及尿液的收集和处理

代谢组学是定性及定量描述内源性代谢物变化的科学,正广泛应用于疾病诊断和预后过程中。血液和尿液是代谢组学研究中常用的生物样本,但因其代谢物繁多、成分复杂,亟须使用灵敏度高、特异性强的分离分析技术。液相色谱-质谱联用（liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS）技术分析速度快、分离效率高,非常适用于代谢组学等方面的研究。生物样本的采集、处理过程是实验中最关键的一步,直接决定着实验结果的准确性,因此生物样本预处理过程的标准化显得尤为重要。本文综述了常用的生物流体—血液和尿液的收集、处理及储存方法,以期为有关代谢组学研究提供参考。     

基于UPLC-Q-TOF/MS平台的结晶肾损伤小鼠的尿液代谢组学研究

目的 通过研究草酸钙结石小鼠尿液中代谢物的变化,探究草酸钙结晶导致肾损伤的内在机制。方法 以乙醛酸盐诱导的小鼠草酸钙结晶模型为对象,采用基于超高效液相-四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-Q-TOF/MS）的代谢组学方法测定尿液中内源性代谢物的变化,并采用SIMCA-P进行多元统计分析,Metabo Analyst软件进行代谢物通路分析。结果 与正常组相比,模型组小鼠的肾组织出现明显的钙盐沉积且血清中的肌酐和尿素氮含量异常升高,肾脏出现损伤;从尿液中筛选出尿酸、牛磺酸、苯丙氨酸等21个差异代谢物。结论 通过代谢物通路分析,差异代谢物主要涉及氨基酸代谢、能量代谢、牛磺酸代谢、嘌呤代谢和VB₆代谢,为进行结石疾病机制研究以及早期标志物的筛选提供了重要参考。     

基于UPLC-MS技术和代谢组学对胶类中药的比较分析

目的:分析阿胶、鹿角胶、龟甲胶和黄明胶这四类胶类药材中化合物成分的关联及差异,对样品进行鉴别分析.方法:选择阿胶、鹿角胶、龟甲胶、黄明胶四类胶类中药,共10批次,采用UPLC-MS技术,结合代谢组学的方法,检测不同胶类中药特征成分,比较不同胶类中药的质谱信号差异,探讨物质组成及分布情况,鉴别区分不同的胶类药材.结果:共...     

基于代谢组学技术的虫草鉴别研究

目的 采用超高效液相色谱-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）对不同产地虫草化学成分进行鉴定与比较分析。方法 采用超高效液相-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）及多元统计分析技术对实验结果进行分析,并对差异化合物进行鉴定。结果 对不同产地的虫草进行了成分鉴定,核苷类物质含量高。不同产地虫草药材在组分种类和相对量上存在着一定的差异。湖南、湖北、丽江的虫草含有其他成分,丽江虫草含有大量的虫草素,湖南虫草含有一些黄酮类物质。采用主成分分析（PCA）将不同产地药材分别聚成不同组别,其中西藏（那曲）、四川、青海之间聚集紧密,而凉山、湖北、湖南及丽江虫草散布在四周,差别非常显著。结论 UPLC-Q-TOF-MS结合多元统计分析方法可为虫草药材的质量评价提供依据。     

基于液相色谱-质谱技术的乳腺癌转移相关 代谢标志物的筛选

摘要：目的 应用代谢组学技术筛选与乳腺癌转移相关的代谢标志物。方法 收集100例乳腺癌患者和50例 健康志愿者的血清标本,采用高效液相色谱-轨道离子阱质谱联用（HPLC-LTQ Orbitrap XL MS）代谢组学研究平台分 析乳腺癌未转移患者、乳腺癌转移患者和健康人群血清标本的代谢轮廓,并通过模式识别方法结合非参数检验对数 据进行分析。结果 由乳腺癌未转移组、乳腺癌转移组和健康对照组的代谢轮廓构建的正交偏最小二乘判别分析 （OPLS-DA）模型具有很好的判别能力（R2=95.2%,Q2=86.7%）,可以鉴别出用于区分乳腺癌转移与否的8个代谢标志 物,包括溶血磷脂酸［18∶1（9Z）/0∶0］、溶血磷脂酰胆碱（18∶0）、溶血磷脂酰胆碱［20∶3（5Z,8Z,11Z）］、胆碱、磷酸二羟 丙酮（18∶0e）、2R,3S-番石榴酸、芥酸、L-氢化乳清酸。结论 利用代谢组学方法获得的血清代谢轮廓可以用来构建 区分模型和寻找乳腺癌转移相关的代谢标志物,为乳腺癌的早期诊治、预后评估和药物治疗靶点的选择提供支持和 依据。     

UPLC-MS/MS法同时测定藿香正气软胶囊中10种成分的含量

目的建立同时测定藿香正气软胶囊中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、川陈皮素、白术内酯Ⅲ、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚10种成分含量的超高效液相色谱-串联质谱法。方法 12批藿香正气软胶囊内容物经乙醇超声提取,以Ultimate XB-C18为色谱柱、乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为30℃;采用电喷雾离子源、正负离子扫描的多反应监测模式。结果甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、川陈皮素、白术内酯Ⅲ、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚的检测质量浓度线性范围分别为1.64~52.40、1.73~55.20、1.54~49.20、1.71~54.80、1.74~55.60、4.19~134.00、1.51~48.40、1.61~51.60、1.80~57.60、1.74~55.60 ng/mL(r≥0.999 5);定量限分别为0.41、0.43、0.19、0.43、0.11、1.05、0.19、0.40、0.45、0.11ng/mL;精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均小于6%;平均加样回收率分别为102.42%、98.65%、98.34%、101.48%、96.74%、100.40%、104.92%、98.53%、99.50%、105.40%(RSD为1.34%~5.44%,n=9)。12批藿香正气软胶囊中上述10种成分的含量分别为201.21~287.89、5.03~20.37、1 465.56~1 988.35、5.35~9.01、217.09~306.44、1.91~16.17、1 081.59~1 377.12、2 388.34~2 915.13、341.26~397.45、7 633.47~8 976.99μg/g。结论所建含量测定方法便捷、灵敏、准确,可用于藿香正气相关制剂的质量控制与评价。     

不同产地黄芪药材的UPLC/Q-TOF-MS指纹图谱研究

目的:采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪(UPLC/Q-TOF-MS)建立黄芪药材的指纹图谱,初步鉴定其主要色谱峰,并结合主成分分析(PCA)模式识别方法评价不同产地药材质量。方法:用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以水-乙腈-异丙醇体系梯度洗脱,使用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据。应用Markerlynx软件进行不同产地药材的PCA分析。结果:在18 min内建立了黄芪药材的UPLC/Q-TOF-MS指纹图谱,结合PCA分析,可以区分不同产地的药材,并找出包括毛蕊异黄酮,芒柄花素,黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ等8个差异最大的化合物。结论:UPLC/Q-TOF-MS方法所得谱图重现性和特征性较好,可以用于黄芪指纹图谱的快速鉴别。应用化学计量学方法可以较全面地反映不同产地药材学成分的差异,为其质量控制提供实验依据。     

代谢组学技术在乳腺癌标志物筛选中的应用进展

代谢组学是“后基因组学”时期的一门新兴学科,其同基因组学、转录组学、蛋白质组学共同构成了系统生物学的核心内容。代谢组学对生物体系在生理或病理状态下所有内源性小分子代谢产物的动态变化进行分析,从而探索内源性小分子物质与疾病发生发展间的关系。目前,代谢组学被广泛应用于肿瘤标志物筛选、疾病诊断、新药研究与开发等多个领域。近年来,国内外学者通过代谢组学技术分析了乳腺癌患者的代谢物轮廓特征,筛选出有价值的潜在标志物,为乳腺癌的预防、早期诊断和个体化治疗开辟了新途径。本文针对这些乳腺癌潜在代谢标志物进行综述。     

三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌的超声特征对比分析

目的对比分析三阴性乳腺癌（TNBC）和非三阴性乳腺癌（NTNBC）的超声和病理学特征差异。方法将135例经病理证实的乳腺癌患者根据术后免疫组织化学结果分为TNBC组和NTNBC组,对比分析两组患者病灶的超声表现及临床病理特征。结果 135例乳腺癌病例中,TNBC患者占26.67%,NTNBC患者占73.33%;TNBC组和NTNBC组腋窝淋巴结转移率分别为58.33%和40.40%,差异有统计学意义（P〈0.05）;两组浸润性导管癌和非浸润性导管癌的比例相似,两组间病理类型比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。TNBC组患者肿块边缘毛刺征、肿块内部微钙化及血流分级为Ⅱ～Ⅲ级者所占比例均明显低于NTNBC组,差异有统计学意义（P〈0.05）;两组肿块直径〉2cm者比例及肿块后方无回声衰减者比例差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 TNBC患者的淋巴结转移率高于NTNBC患者,且TNBC患者缺少毛刺征、微钙化、丰富的血流等典型的乳腺癌超声表现,诊断检测时应注意与良性肿块间的区别,以免漏诊。     

湿疹样乳腺癌85例临床分析

目的 探讨湿疹样乳腺癌的临床特点,诊治方法 及预后因素,提高对湿疹样乳腺癌的认识。方法 回顾性分析作者在韩国首尔峨山医院进修时收集的85例湿疹样乳腺癌患者的临床资料。结果 女83例,男2例。乳腺有湿疹样表现79例（92.9%）,伴乳腺肿块52例（61.2%）,同侧腋窝淋巴结转移27例（占本组85例的31.8%及占伴乳腺肿块病例的51.9%）,均为伴有乳腺肿块的病例。52例行乳癌改良根治术,30例行乳腺单纯切除术,3例行局部切除术。单纯乳头及乳晕湿疹样乳腺癌11例（12.9%）,均为无乳腺肿块的病例,其余74例（87.1%）均合并其他类型的乳腺癌。本组5年生存率为82.1%,其中无乳腺肿块者5年生存率为93.9%,合并肿块者5年生存率为75.0%（P〈0.05）,无同侧腋窝淋巴结转移者5年率为96.6%,有转移者5年生存率为51.9%（P〈0.01）。结论 湿疹样乳腺癌有特殊的临床表现,但易误诊,病灶细胞学和病理学检查可以确诊,伴乳腺肿块者应选择乳癌改良根治术,无乳腺肿块者可选择乳腺单纯切除术,预后与乳腺肿块及同侧腋窝淋巴结转移密切相关。     

染料木素在乳腺癌MCF-7细胞内的代谢研究

目的研究染料木素在乳腺癌细胞中的代谢行为。方法将10μmol.L-1染料木素与乳腺癌MCF-7细胞在37℃下孵化一定时间后终止反应。采用UPLC-MS-MS法测定孵化液中染料木素及II相代谢产物的浓度。结果染料木素在乳腺癌MCF-7细胞中可迅速代谢为7或4′-葡萄糖醛酸结合物以及7或4′-硫酸结合物。孵化24、48和72 h后,每100μg孵化样品蛋白中,7-葡萄糖醛酸结合物的生成率分别为2.9、5.2和8.9μg.h-1,4′-葡萄糖醛酸结合物的生成率分别为1.1、1.9和3.0μg.h-1,7-硫酸结合物的生成率分别为20.3、32.9和47.3μg.h-1,4′-硫酸结合物的生成率分别为1.7、3.1和4.5μg.h-1。结论染料木素在乳腺癌MCF-7细胞中的主要代谢产物是7-硫酸结合物。     

基于非靶向代谢组学的促乳腺癌曲妥珠单抗耐药 代谢产物分析

摘 要 目的：探究人类表皮生长因子受体2（HER2）阳性乳腺癌曲妥珠单抗（trastuzumab）耐药细胞（HCC1954）和敏感细胞（SK-BR-3）之间的代谢物差异。方法：利用超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）非靶向代谢组学方法进行代谢物的鉴定与定量,结合多元统计方法主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘-判别分析（OPLS-DA）以筛选差异代谢物,并对差异代谢物进行KEGG通路富集分析。结果：在正负离子模式下鉴定筛选出15种显著性变化差异代谢物,在曲妥珠单抗耐药细胞中丙酰肉碱和谷胱甘肽等7种代谢物上调,肉豆蔻酸和D-葡萄糖酸等8种代谢物下调。KEGG通路富集分析发现,9条代谢通路具有统计学意义（P<0.05）,其中氮代谢和谷氨酰胺与谷氨酸代谢最为显著,P值为0.001 3,还发现谷氨酸和谷氨酰胺均在这两条通路中发挥作用。结论：本研究初步揭示了HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药和敏感细胞之间的代谢物差异,为HER2阳性乳腺癌细胞曲妥珠单抗诊断标志物进一步研究提供了代谢组学的数据支持。     

高效液相色谱－四级杆飞行时间串联质谱的儿童性早熟代谢组学研究

目的：用代谢组学研究儿童真性性早熟（ CPP）的代谢标记物,以探讨儿童性早熟的发病机制。方法用高效液相色谱－四级杆飞行时间质谱联用系统（ HPLC－QTOF－MS）对性早熟组和对照组儿童的血液样本进行代谢图谱分析,并结合主成分分析法（PCA）和偏最小二乘辨别分析法（PLS－DA）,根据PLS分析的载荷图和VIP值,筛选24个代谢标记物,并对其参与的代谢途径进行分析。结果氨基酸、5－羟色胺、儿茶酚胺及脂代谢等多条代谢途径异常与儿童性早熟发生相关。此外,一些环境内分泌干扰物也可能导致性早熟。结论性早熟儿童和正常儿童血液代谢特征存在明显差异。     

索拉非尼联合多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肺癌A549细胞抑制作用的研究

目的观察索拉非尼联合多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肺癌A549细胞的抑制作用。方法不同浓度索拉非尼联合多柔比星处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肺癌A549细胞。①以CCK-8法检测处理24、48和72 h后MDA-MB-231和A549的抑制率;②以细胞划痕试验观察受试细胞的迁移能力;③以印迹试验检测处理24 h后MDAMB-231细胞内P-ERK和Bcl-2的表达情况。结果索拉非尼联合多柔比星能显著抑制人肺癌A549细胞和人乳腺癌MDAMB-231细胞的体外增殖,且具时间依赖性;人乳腺癌MDA-MB-231细胞经不同浓度索拉非尼联合多柔比星处理24 h,P-ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调并呈剂量依赖性。结论索拉非尼联合多柔比星具有抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞和人肺癌A549细胞的增殖,诱导细胞凋亡的作用。