胶质瘤细胞外泌体通过miR-125b对细胞增殖凋亡的影响

目的 探索胶质瘤细胞来源的外泌体对细胞增殖凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 高速离心法提取胶质瘤细胞U251外泌体,通过电镜及纳米粒径分析外泌体形态,Western blot检测外泌体特征性蛋白表达.在U251细胞培养基中分别加入浓度为100 μg/ml的外泌体悬液30μl(外泌体组)或等量不含外泌体培养基(对照组),通过双荧光染色法验证外泌体能否进入U251细胞;CCK-8及流式细胞法检测细胞增殖凋亡的变化.通过RT-PCR法筛选U251外泌体与人星型胶质细胞外泌体中差异性表达的miRNAs.最后,将miR-NC、miR-125b mimics或miR-125b inhibitor转染U251细胞,重新提取外泌体后加入细胞培养基,采用CCK-8及流式细胞法检测U251细胞增殖凋亡变化.结果 U251细胞分离的外泌体为圆形或卵圆形囊泡状小体,直径范围约100 nm,富含CD63和CD9蛋白.在U251细胞培养基中加入外泌体悬液后,外泌体能够被U251细胞吞噬.CCK-8及流式细胞法显示:外泌体组细胞增殖活性高于对照组,凋亡比例低于对照组.RT-PCR显示:U251细胞外泌体miRNA-125b含量高于人星型胶质细胞外泌体.将miR-NC、miR-125b mimics或miR-125b inhibitor转染U251细胞后,分别提取三组细胞外泌体并加入U251细胞培养基,miR-125b in-hibitor组细胞增殖活性低于miR-NC组,凋亡比例高于miR-NC组;miR-125b mimics组细胞增殖活性高于miR-NC组,凋亡比例低于miR-NC组.差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 胶质瘤细胞来源的外泌体可通过miR-125b,促进胶质瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡.     

外泌体含量与脑胶质瘤级别、预后的相关性研究

目的:分析外泌体含量与脑胶质瘤级别、预后的相关性。方法:选取2017年10月-2019年4月本院60例有明确病理诊断的脑胶质瘤患者的临床资料进行回顾性分析。根据术后病理诊断分级将其分为低级别胶质瘤组与高级别胶质瘤组,各30例。比较两组外泌体含量、死亡率及致残率,分析外泌体含量与脑胶质瘤级别、预后的相关性。结果:低级别胶质瘤组外泌体含量低于高级别胶质瘤组(P0.05);低级别胶质瘤组死亡率与致残率均低于高级别胶质瘤组(P0.05);外泌体含量与胶质瘤级别呈正相关性,与预后呈负相关性(P0.05)。结论:外泌体与脑胶质瘤级别,预后具有显著相关性,可根据外泌体含量评估脑胶质瘤的级别、预后,具有一定的临床指导意义。     

M2巨噬细胞来源的外泌体转运miR-1260b促进胶质母细胞瘤迁移的机制研究

肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数据库靶点预测miRNA可能的靶蛋白;采用双萤光素酶报告基因实验验证miRNA与靶基因的相互作用;采用裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤细胞增殖能力。实验结果表明,肿瘤相关巨噬细胞主要是M2巨噬细胞,M2巨噬细胞分泌的外泌体能够促进脑胶质瘤细胞的迁移,其机制与转运miR-1260b且靶向调控AJAP1影响脑胶质瘤细胞的迁移有关,提示巨噬细胞分泌的外泌体通过转运miR-1260b,从而影响胶质母细胞瘤的迁移能力。     

细胞外ATP对U87胶质瘤细胞生长和侵袭的作用

目的观察细胞外三磷酸腺苷(adenosine Triphosphate,ATP)对体外培养的U87人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法采用MTT法检测不同浓度细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖的影响;以相同条件下不加ATP作为对照组,以加入100μmol/L ATP作为处理组,采用Transwell细胞侵袭实验检测100μmol/L细胞外ATP对U87胶质瘤细胞侵袭能力的影响;用时间显微镜动态观察100μmol/L的ATP作用下U87胶质瘤细胞的迁移情况。结果高浓度(5 000μmol/L)细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖有显著抑制作用,较低浓度(50、100、500μmol/L)细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖无明显影响,5 000μmol/L ATP组与其他浓度组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验中,处理组细胞跨膜细胞数为(163.83±17.81)明显多于对照组(89.83±13.27)(P<0.01);迁移实验中,处理组细胞运动速度为(163.83±17.81)μm/h,对照组细胞运动速度为(89.83±13.27)μm/h,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 100μmol/L的细胞外ATP对体外培养的U87胶质瘤细胞的侵袭和迁移具有明显促进作用。     

榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响

目的观察榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响。方法应用MTT法检测不同浓度榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞的增殖抑制率。采用榄香烯单独或联合放射线作用于脑胶质瘤U251细胞,用集落形成实验和单击多靶模型拟合细胞存活曲线,获得放射增敏比;应用流式细胞技术分析榄香烯对U251细胞凋亡率的影响。结果榄香烯可抑制脑胶质瘤U251细胞的增殖,且与浓度相关;97.86μmoL和195.72μmoL榄香烯分别作用脑胶质瘤U251细胞24 h后,联合放射的放射增敏比(SER)分别为1.179和1.429;195.72μmoL榄香烯分别作用脑胶质瘤U251细胞3 h和6 h后,联合放射的SER分别为1.139和1.356;流式细胞仪分析表明榄香烯作用24 h后,随着榄香烯浓度的增加,U251细胞凋亡率越高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论榄香烯能够抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖,并有放射增敏作用,且放射增敏作用的大小与药物作用浓度及作用时间有关系。     

人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体调控恶性胶质瘤相关巨噬细胞的极化

目的 探究人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响,并初步探讨其对胶质瘤发生发展的影响.方法 利用试剂盒提取人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体,通过扫描电镜及Western blot鉴定外泌体.将胶质瘤细胞分为SHG449:SHG449细胞不做特殊处理;SHG449+M0组:SHG449细胞与M0型巨噬细...     

成骨前体细胞来源的外泌体对乳腺癌细胞迁移和增殖影响的研究

背景 乳腺癌骨转移是目前研究热点之一,骨微环境中成骨细胞可以促进肿瘤细胞存活并形成微转移,但目前鲜有成骨细胞来源的外泌体对乳腺癌作用的研究报道。目的 探讨成骨前体细胞MC3T3-E1来源的外泌体对乳腺癌4T1和MDA-MB-231细胞迁移和增殖的影响。方法 通过超高速离心法提取MC3T3-E1细胞来源的外泌体,透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析(nanopartic tracking analysis,NTA)和Western blot方法鉴定外泌体特性;利用划痕实验和Transwell实验检测分析MC3T3-E1来源的外泌体对乳腺癌4T1和MDA-MB-231细胞迁移的影响;CCK-8法和克隆形成实验检测MC3T3-E1来源的外泌体对乳腺癌4T1和MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果 MC3T3-E1细胞来源的外泌体具有膜结构囊状小泡,直径分布为100～200 nm,且表达外泌体标志蛋白Alix和TSG101。CCK-8活性实验结果显示,浓度为20μg/mL的MC3T3-E1细胞来源的外泌体不影响乳腺癌细胞的活性,30μg/mL、50μg/mL的外泌体能够降低乳腺癌细胞活性。划痕实...     

白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白表达的影响

探讨白藜芦醇对U251人脑胶质瘤细胞生长的抑制和相关蛋白的表达及其意义.采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响;采用ABC免疫组化法检测相关Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白的表达.结果显示,白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞生长有抑制作用,且呈时间、剂量相关;白藜芦醇作用于U251脑胶质瘤细胞后Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1、STAT-3蛋白表达下降,同时细胞形态也发生改变.白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤细胞的增殖,能诱导细胞凋亡.     

SP94和CD47双修饰外泌体靶向递送PLK1 siRNA治疗肝癌

目的 设计一种基于外泌体高效递送的方法,将治疗性核酸递送到肝癌组织治疗原发性肝癌。方法 构建靶向肝癌的融合表达SP94和CD47的质粒,转染至HEK293T细胞后提取分离外泌体。通过透射电子显微镜及纳米颗粒跟踪分析、蛋白质印迹法等方法对外泌体进行鉴定。小鼠经尾静脉分别注射200μg DiD标记的未修饰外泌体和SP94修饰的外泌体,采用小动物活体成像仪检测并分析外泌体对肝癌组织的靶向作用。将未修饰外泌体和CD47修饰的外泌体分别与巨噬细胞RAW264.7、小鼠肝癌细胞Hepa1-6共孵育,验证细胞对修饰后外泌体的吞噬情况。通过电穿孔法将Polo样激酶1(PLK1)siRNA加载到不同修饰的外泌体中,再与Hepa1-6细胞共孵育,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平。原发性肝癌模型小鼠经尾静脉注射加载PLK1 siRNA的修饰外泌体,系统研究并分析其对原发性肝癌的治疗效果。结果 SP94修饰增强了外泌体对肝癌组织的靶向作用,CD47修饰减少了外泌体被巨噬细胞吞噬。SP94和CD47双修饰外泌体递送PLK1 siRNA促进了肝癌细胞凋亡。在原发性肝癌模型小鼠中,SP94和CD47双修饰外泌体加载P...     

缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展

目的 探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法 将Huh7细胞置于0.1%O₂培养箱培养24 h作为缺氧组，另设常氧组，提取外泌体，纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小，免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis, RTCA)实验检测细胞增殖，划痕实验检测细胞迁移，免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达，激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果 与常氧组相比，缺氧组外泌体浓度增加，但外泌体粒径的大小没有明显变化，缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Ali...