镉诱导人胚肾细胞损伤分子机理的初步研究

目的：初步探讨镉诱导人胚肾细胞损伤的细胞分子机理。方法：采用MTT法，观察镉对人胚肾细胞损伤的影响；用流式细胞仪检测镉诱导人胚肾细胞凋亡；用分光光度计检测镉对肾细胞SOD活性的影响。结果：几种不同剂量的镉加入细胞作用24h，48h,72h后均能损伤肾细胞，抑制细胞生长；镉能诱导人胚肾细胞凋亡。并且能降低肾细胞SOD活性。结论：镉对人胚肾细胞生长有一定的抑制作用，能诱导人胚肾细胞凋亡及抑制肾细胞SOD活性。     

亚慢性镉中毒大鼠肾近曲小管细胞凋亡的初步研究

本试验对雄性ＳＤ大鼠进行了亚慢性镉染毒，经ＨＥ染色、甲基缘一派若宁双重染色和过碘酸－雪夫反应（ＰＡＳ）染片后，在光学显微镜下观察了大鼠肾脏的改变。结果显示，大鼠肾脏未见明显的肾小管坏死、间质纤维化或炎细胞浸润，但肾近曲小管上皮细胞发生凋亡。镉处理组的肾近曲小管的凋亡细胞数（５２．２５±５．１９个／ｍｍ２）明显高于对照组（１２．５０±３．５４个／ｍｍ２），两者之间差异有显著性意义（Ｐ＜０．０１）。     

慢性镉中毒肾功能损伤的研究

本实验用0.8％CdCl_2生理盐水按1 mgCd/kg体重,隔日1次皮下注射3个月,建立兔中毒模型。测定了血尿素氮、肌酐含量及肾皮质的Na~+/K~+-ATPase,Ca~(2+)-ATPase,γ-GT的活性。结果表明,在肾中毒早期,尿素氮、肌酐无明显变化,几种酶活性明显下降,P值分别<0.05及<0.001。提示,这些酶活性下降,可能是镉中毒所致肾功能紊乱和病理改变的启动环节之一和进一步导致肾衰的机理之一。     

腺病毒介导过表达ANT1基因诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的利用腺病毒载体转染体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),研究过表达腺嘌呤核苷酸转位酶1(adenine nucleotide translocase 1,ANT1)对大鼠VSMCs凋亡的影响。方法用携带ANT1的腺病毒载体(Ad-ANT1)或空载体腺病毒载体(Ad-GFP)感染VSMCs,采用激光共聚焦观察Hoechst33258染色后细胞凋亡情况,流式细胞术检测Annexin V标记细胞凋亡率。Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果激光共聚焦观察转染Ad-ANT1后48 h细胞出现凋亡,且凋亡率[(13.40±1.14)%]与转染空载体对照组[(1.80±0.84)%]相比较差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术检测转染Ad-ANT1后48 h细胞凋亡率[(10.66±1.75)%]明显高于转染空载体组细胞[(3.13±0.37)%](P<0.05)。Western blot结果显示转染Ad-ANT1后Bax蛋白表达明显高于转染空载体组,Bcl-2蛋白表达2组比较无明显差异。结论腺病毒介导过表达ANT1可诱导大鼠VSMC的凋亡,其机制可能通过上调Bax实现。     

牛磺酸通过线粒体凋亡途径诱导胃癌细胞凋亡

目的:探讨牛磺酸对人胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:体外培养的HGC27细胞,用不同浓度牛磺酸处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;牛磺酸(浓度分别为20、40、80 mmol/L)处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,western blot法检Bcl-2、Bax、细胞色素C(cyt-c)、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达情况。结果:牛磺酸(浓度10~160 mmol/L)能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;牛磺酸(浓度分别为20、40、80 mmol/L)作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为15.2%、23.3%、35.4%,而对照组凋亡率仅为3.4%;线粒体膜电位降低,Bax、细胞色素C表达上调,而Bcl-2表达下调,Casepase-3、Caspase-9酶原均有活化,可见裂解后片段,呈剂量依赖性。结论:牛磺酸能抑制HGC27细胞的增殖并可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。     

硒对镉诱导肾细胞凋亡及其相关蛋白bcl-2、p53表达的影响

目的:探讨硒对镉诱导肾小管上皮细胞(LLC-PK1)凋亡及其凋亡相关蛋白bcl-2和p53表达的影响.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测硒对镉抑制LLC-PK1细胞生长的影响,AO/EB荧光双染法观察硒对镉诱导细胞凋亡形态的作用,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白bcl-2和p53表达水平的变化.结果:不同浓度硒对镉的细胞毒性具有一定的拮抗作用,并呈剂量效应关系;40 μmol/L镉可诱导LLC-PK1细胞凋亡,当加入20μmol/L硒预处理30 min再染镉12 h后,细胞凋亡的程度与单独染镉组相比有所减弱.检测凋亡相关蛋白bcl-2和p53的表达,发现镉可上调p53蛋白表达及下调bcl-2蛋白的表达,当加入硒预处理后可对镉引起的p53蛋白上调具有一定的抑制作用,但硒对镉引起的bcl-2蛋白下调作用不明显.结论:硒可拮抗镉性肾细胞凋亡,其机制可能与抑制镉引起促凋亡蛋白p53的上调有关.     

超低浓度七氟烷诱导幼鼠海马神经细胞线粒体损伤及细胞凋亡

目的:研究超低浓度七氟烷诱导幼鼠海马神经细胞线粒体损伤及细胞凋亡的相关机制.方法:选取出生后7d的SD大鼠90只,随机分为对照组、假处理组和实验组,每组30只,对照组不做任何处理,假处理组放入麻醉箱内吸氧4h,实验组放入2％七氟烷麻醉箱内处理4h,处理完成12h后取海马组织,苏木精-伊红(HE)染色观察神经元形态学改变...     

esp1基因过表达可诱导肿瘤细胞凋亡

目的研究esp1基因转染进入A549细胞后对细胞凋亡的影响.方法将含esp1基因的IRE-EGFP质粒经FUGENE 6 转染试剂转染到肺腺癌细胞A549,用倒置显微镜及流式细胞仪检测转染后细胞染色体数以及转染后细胞凋亡及增殖的情况.结果 esp1基因导入A549细胞后,染色体数目减少,无血清培养后细胞凋亡增加,增殖减少.结论 esp1基因在A549细胞中不但可以显著地改善细胞的非整倍性而且可以有效地抑制细胞恶性增殖、促进细胞凋亡,从而为肺癌的治疗提供了一个新的靶标.     

流感病毒鼠肺适应株FM1诱导犬肾细胞MDCK凋亡的实验研究

流感病毒鼠肺适应株FM1攻击犬肾细胞36 h后,通过对其细胞形态学的观察、DNA电泳图谱的分析及流式细胞仪的检测,显示受到病毒攻击后犬肾细胞在形态学上主要表现为细胞圆缩,核固缩、碎裂等,在细胞周围形成典型的圆形凋小体;琼脂糖凝胶电泳实验图谱可见到清晰的ladder梯状条带;流式细胞仪的检测提示在正常的二倍体峰前可见明显的亚二倍体峰,并有一定的细胞凋亡率.根据以上结果可得出结论:在流感病毒鼠肺适应株FM1攻击犬肾细胞MDCK后诱导了细胞凋亡的发生.     

miR-143-5p对镉致肾细胞凋亡的调控作用及其机制

目的:探讨miR-143-5p对镉诱导LLC-PK1细胞凋亡的调控作用及其机制?方法:通过基因芯片技术筛选出由镉引起的差异表达miRNAs,并用实时定量PCR方法验证基因芯片结果的可靠性;应用Lipofectamine 2000瞬时转染miR-143-5p的模拟物和抑制剂建立miR-143-5p高表达和低表达的模型,并结合qRT-PCR技术验证转染效果;Hoechst 33258染色和Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡;生物信息学分析结合实时定量PCR和Western blot验证miR-143-5p靶基因的表达;Western blot分析miR-143-5p对细胞凋亡相关通路的调控作用?结果:镉可增强LLC-PK1细胞的miR-143-5p表达水平(P < 0.01);转染miR-143-5p模拟物或抑制剂后,与对照组(miR-NC)比较,miR-143-5p表达明显上调或下调(P < 0.01);miR-143-5p的过表达可促进 LLC-PK1细胞凋亡 (P < 0.01);miR-143-5p在AKT3的mRNA和蛋白水平上发挥靶向调控作用;miR-143-5p过表达能抑制p-Akt和p-Bad蛋白表达,促进caspase-9和caspase-3蛋白上调?结论:miR-143-5p可能通过作用于靶基因AKT3,并抑制Akt/Bad信号通路,促进镉诱导LLC-PK1细胞的凋亡?     

p27~(Kip1)诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨过表达的p27Kip1对肝癌细胞的抑制作用。方法:利用脂质体介导法将真核表达载体pcDNA3.1/Myc-His(+)C-p27Kip1基因导入HHCC细胞中,用Westernblot检测p27Kip1是否导入到肝癌细胞中;用流式细胞仪检测过表达的p27Kip1对肝癌细胞HHCC的抑制作用;电子显微镜技术探讨过表达的p27Kip1抑制肝癌细胞生长的可能机制。结果:Westernblot检测表明,转染p27Kip1的HHCC细胞大部分有p27Kip1蛋白的表达;而转染空载体或未转染的HHCC细胞,均未见p27Kip1蛋白表达。经连续3次克隆化后,转染pcDNA3.1/Myc-His(+)C-p27Kip1的HHCC细胞100%表达p27Kip1蛋白。过表达的p27Kip1对HHCC细胞有明显的抑制作用,其抑制率为49.09%～56%;过表达的p27Kip1可以封闭G1期的进程和诱导肝癌细胞发生凋亡,其凋亡百分比为12.3%。结论:过表达的p27Kip1可以通过诱导肝癌细胞凋亡抑制肝癌细胞生长。     

过表达GCNF诱导骨髓间充质干细胞凋亡的相关研究

目的研究过表达生殖细胞核因子(GCNF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的可能机制。方法通过过表达GCNF腺病毒上调BMSCs中GCNF表达水平,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,MTT检测细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡,Caspase3/8/9检测细胞凋亡蛋白活性。结果 BMSCs细胞中GCNF过表达后,GCNF蛋白亚细胞定位于细胞核,细胞活力降低,凋亡通路被激活。结论腺病毒GCNF过表达能降低大鼠BMSCs细胞活力,增加其凋亡水平。     

6-OHDA诱导过表达nurr1基因的SK-N-SH细胞凋亡

目的比较自身不表达核相关受体因子(nuclear receptor related factor1,Nurr1)基因的人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH和过表达外源性nurr1基因的SK-N-SH/Nurr1细胞对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的损伤反应,探讨nurr1基因在6-OHDA致细胞损害(死亡或凋亡)中的作用。方法用免疫细胞化学方法和RT-PCR检测基因转染细胞SK-N-SH/NURR1的nurr1蛋白及NURR1 mRNA的表达。细胞经不同浓度6-OHDA(50～100μmol/L)作用不同时间(6、12 h),经AnnexinV/PI双染后流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定早期细胞凋亡比例。细胞经75μmol/L 6-OHDA作用12 h,通过透射电镜(transmission electronmicroscopy,TEM)观察细胞超微结构变化。用Western blotting方法检测75μmol/L6-OHDA作用6、12 h,细胞凋亡因子Caspase-3活性前体蛋白的表达水平。结果免疫细胞化学染色结果显示,基因转染细胞SK-N-SH/Nurr1表达NURR1蛋白;经RT-PCR检测,基因转染细胞表达NURR1 mRNA,说明外源性nurr1基因在转染细胞内过表达。FCM检测结果显示,75μmol/L 6-OHDA作用12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡比例明显高于SK-N-SH细胞(P=0.000),而100μmol/L6-OHDA作用6、12 h后,2株细胞均表现为毒性损伤。TEM显示,75μmol/L6-OHDA作用12 h后,部分SK-N-SH/Nurr1细胞出现了典型凋亡改变,而SK-N-SH细胞主要表现为毒性损伤。4.75μmol/L6-OHDA作用6、12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞Caspase-3活性前体蛋白表达显著下降(P=0.000),而SK-N-SH细胞Caspase-3活性前体蛋白表达变化不明显。结论外源性nurr1基因过表达促进6-OHDA诱导的SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡,在低剂量(≤75μmol/L)时,凋亡比例与剂量呈正相关,高剂量时6-OHDA主要诱导细胞毒性损伤。     

六种金属中毒解毒药治疗肝豆状核变性的临床研究

目的　探讨金属中毒解毒药治疗肝豆状核变性 (HLD)的临床应用价值。方法　将 85 2例HLD随机分为还原型谷胱甘肽组 (GSH组 )、二巯基丁二钠组 (DMS组 )、依地酸钙钠组 (EDTA组 )、二巯基丙磺酸钠组 (DMPS组 )、青霉胺组 (PCA组 )及二巯基丁二酸组 (DMSA组 )等六个治疗组 ,对各组治疗前后的尿铜等元素、疗效及不良反应进行对比。结果　治疗前后尿排铜量对比GSH组无显著变化 ,其他各组由高到低依次为DMPS组 ( 4 8.68± 2 0 .67) μmol·2 4h-1、PCA组 ( 3 0 .0 4± 10 .5 1) μmol·2 4h-1、DMS组 ( 2 4.3 0± 8.60 ) μmol·2 4h-1、DMSA组 ( 18.2 5± 7.73 ) μmol·2 4h-1、EDTA组 ( 10 .5 8± 4.67) μmol·2 4h-1,均较疗前有显著增高 (P <0 .0 1)。上述解毒药对HLD的锌、铁、钙元素代谢亦有一定影响。治疗后各组的有效率依次为DMPS组 ( 78.9% ) >DMS组 ( 74.5 % ) >PCA组 ( 71.3 % ) >DMSA组 ( 69.1% )>EDTA组 ( 5 3 .7% ) >GSH组 ( 2 8.8% ) ,组间对比差异有非常显著性 ( χ2 =73 .5 ,P <0 .0 1)。各治疗组不良反应发生率依次为 :PCA组 ( 4 4.5 % ) >DMPS组 ( 4 3 .8% ) >DMS组 ( 4 2 .2 % ) >DMSA组 ( 4 1.2 % ) >EDTA组 ( 3 9.8% ) ,与GSH组对比差异有非常显著性 ( χ2 =3 3 .6,P <0 .0 1)。常见的     

过表达Mxi1对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的：构建含有Max结合蛋白1（Mxi1）基因的重组慢病毒载体,并探讨过表达Mxi1基因对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：利用DNA重组技术将Mxi1基因克隆至慢病毒载体,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T 细胞,获得含 Mxi1基因的重组慢病毒。重组慢病毒感染人胃癌SGC-7901细胞,荧光显微镜下观察感染效率,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Mxi1、cyclinB1和caspase-8的基因表达,免疫印迹法（Western blot）检测Mxi1蛋白的表达。CCK-8比色法和流式细胞术分别检测Mxi1 基因对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。结果：成功构建含 Mxi1基因的慢病毒表达载体,RT-PCR和Western blot检测到Mxi1 基因和蛋白的表达。RT-PCR结果显示,过表达Mxi1 的SGC-7901细胞与空白对照细胞及过表达空病毒对照细胞相比,细胞内cyclinB1的mRNA表达水平明显降低,而caspase-8的 mRNA表达水平显著升高。CCK-8实验和流式细胞术检测结果显示,过表达Mxi1的SGC-7901细胞与空白对照细胞及过表达空病毒对照细胞相比,细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡率显著升高。结论：成功构建Mxi1慢病毒载体且有效转染SGC-7901细胞,过表达Mxi1 可以抑制胃癌细胞增殖并促进其凋亡。     

PIK3CD-AS1对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨长链非编码RNA PIK3CD AS1在肾癌细胞与正常肾脏细胞中的差异表达及其对肾癌细胞增殖和凋亡能力的影响,并寻找与PIK3CD AS1功能相关的基因。方法: 运用qRT PCR检测PIK3CD AS1在正常肾脏细胞（HK 2）与肾癌细胞（769 P、786 O、A498）中的表达差异;将PIK3CD AS1过表达载体转染入肾癌769 P细胞,构建PIK3CD AS1稳定过表达的细胞株,通过CCK 8实验及流式细胞术检测PIK3CD AS1过表达对肾癌细胞增殖和凋亡能力的影响,通过凋亡相关基因表达谱芯片寻找与PIK3CD AS1功能可能相关的基因。结果： 与正常肾脏细胞HK 2相比,PIK3CD AS1在肾癌细胞（769 P、786 O、A498）中表达明显下降（P<0.01或P<0.05）。成功构建PIK3CD AS1过表达细胞株,经qRT PCR验证,实验组细胞中PIK3CD AS1表达量较阴性对照明显升高（P<0.05）。增殖实验及凋亡实验表明,实验组细胞的增殖能力显著下降（P<0.01）,同时细胞凋亡显著增多（P<0.01）。凋亡基因表达谱芯片筛选结果显示,与PIK3CD AS1相互作用进而促进肾癌细胞凋亡的基因有DFFA、BCL2L1、CASP9。 结论： PIK3CD AS1可能为抑癌基因,在肾癌细胞中呈现低表达状态。PIK3CD AS1可抑制肾癌细胞的增殖并促进凋亡,其促凋亡功能可能与CASP9、DFFA、BCL2L1基因有关。