近亲结婚所致非综合征型耳聋家系的线粒体基因突变分析

目的对一个呈母系遗传的非综合征型耳聋大家系进行线粒体DNA的突变检测。方法收集湖南省一个非综合征型遗传性耳聋家系成员外周静脉血，提取基因组DNA（含线粒体DNA），设计特异性引物对目的片段进行PCR扩增，直接测序检测突变类型。结果测序结果显示，线粒体12S rRNA基因A1555G突变为该家系的致病突变，非母系成员不存在这一突变。结论该家系中部分成员使用氨基糖甙类抗生素后出现耳聋，可能是因为药物与线粒体12S rRNA基因的A1555G突变共同参与了听力损伤过程。     

一个母系遗传非综合征型耳聋家系线粒体12S rRNA G709A位点的突变分析

目的 通过对一个母系遗传非综合征型耳聋家系进行线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)12S rRNA、tRNA~(Ser(UCN))以及核基因GJB2突变分析,研究mtDNA突变与遗传性耳聋的相关性.方法 临床听力测试以明确诊断,收集非综合征型遗传性耳聋家系中18例母系成员和53名对照(包括6名父系亲属、7名配偶对照和40名当地无关对照)外周静脉血样本,采用聚合酶链反应和测序技术对mtDNA 12S rRNA、tRNA~(ser(UCN))和GJB2基因进行突变分析,并对发现的基因突变进行计算机辅助的二级结构模拟分析.结果 测序结果表明,此家系线粒体DNA 12S rRNA存在mtDNA G709A点突变,该突变未见报道;无tRNA~(Ser(UCN))基因突变;对GJB2突变分析发现4例具有299-300 delAT.计算机分析显示12SrRNA的二级结构中第8、9茎环结构发生改变.结论 家系中8例耳聋患者都具有线粒体12S rRNAG709A位点的突变,该突变在正常人群中具有高度保守性,提示GT09A点突变与母系遗传家系成员的进行性耳聋具有相关性;10例具有G709A突变的母系遗传家系成员未出现耳聋的临床表现,提示G709A点突变可能在其他核修饰基因的协同作用下参与了听力损害的过程.     

两个非综合征型耳聋家系中线粒体DNA 12S rRNA基因A827G突变

目的探讨线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）12S rRNA基因与中国人非综合征型遗传性耳聋的关系。方法对两个母系遗传性的非综合征型耳聋家系中20名成员及32例散发耳聋患者外周血DNA进行12S rRNA、tRNA^ser（UCN）以及GJB2基因PCR扩增，产物通过限制性片段多态性分析及基因测序，进行突变检测和分析。结果所有研究对象的基因区域均扩增成功。12S rRNA全序列测定发现两家系中所有受检的母系成员（包括12例耳聋患者）均存在nt827A→G转换，并表现为同质性突变。而非母系成员该位点序列正常。32例散发耳聋中有1例A827G突变阳性。未检测到GJB2基因、tRN^ser（UCN） A7445G及12S rRNA A1555G突变。结论再次验证了mtDNA 12S rRNA基因突变在母系遗传性非综合征型耳聋发病中的重要性。首次发现mt DNA 12S rRNA nt827A→G转换是导致两个中国家系耳聋遗传易感性的分子基础。     

12个非综合征型遗传性耳聋家系mtDNA12SrRNA，tRNA^Leu（UUR）,tRNA^Ser（UCN）及16SrRNA基因序列分析

目的 探讨mtDNA突变与遗传性耳聋的关系。以及突变家系对氨基糖甙类抗生素（aminoglycoside antibiotic,AmAn)耳毒敏感性差异的原因。方法 调查了12个非综合征型耳聋家系;抽取外周血,提取DNA;PCR扩增线粒体DNA9mitochondrialDNA,mtDNA)目的片段,分别以Alw26Ⅰ、ApaⅠ及XbaⅠ限制性内切酶检测1555^G、3243^G及7445^G点突变,行mtDNA12SrRNA,tRNA^Leu(UUR)、tRNA^Ser(UCN)及16SrRNA基因序列测定。结果 经酶切及测序证实12个家系具有mtDNA突变,形式为：1555^G突变家系10个,7445^G突变家系2个,示发现3243^G突变家系,基因测序显示mtDNA16SrRNA基因6序列变化形式为：2230^G点突变,2230^AG插入,2243^AG插入及2230^AA插入突变,它们在家族性AmAn耳毒敏感性家系中被发现,且呈母系遗传;在AmAn不敏感家系中未被发现,结论 单纯1555^G或7445^G突变家系表现为无诱因的渐进性遗传性耳聋或先天性聋;1555^G或7445^G突变合并16SrRNA基因突变者对AmAn高度敏感,表现为家族性敏感致聋。ⅠⅠ     

一个母系遗传非综合征耳聋大家系及mtDNA12SrRNA基因突变研究

目的　对一个非综合征母系遗传耳聋大家系的分子遗传学进行探讨。方法　采用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） ,扩增ｍｔ Ｄ Ｎ Ａ 与非综合征耳聋相关位点ｎｔ１５５５ 和ｎｔ７４４５ 的区域,通过 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ, Ｐ Ｃ Ｒ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ, Ｐ Ｃ Ｒ 产物克隆序列测定等技术对该家系进行了系统研究。结果　发现该家系中全部患者和４ 个母系亲属有ｍｔ Ｄ Ｎ Ａ Ａ１５５５ Ｇ 突变,而家系中正常配偶和对照组（１００ 名正常个体） 的ｍｔ Ｄ Ｎ Ａ１５５５ 位点均无突变;该家系ｍｔ Ｄ Ｎ Ａ７４４５ 位点无突变产生。结论　提示ｍｔ Ｄ Ｎ Ａ Ａ１５５５ Ｇ 位点突变可能是导致该家系患者致聋的主要因素之一。     

一个遗传性非综合征型耳聋家系的突变分析

目的分析一个遗传性非综合征型耳聋家系的突变，并探讨缝隙连接蛋白beta2(gap junction protein beta 2，GJB2)基因235delC突变是否会加重线粒体A1555G突变导致的非综合征型耳聋症状。方法对一个母系遗传性非综合征型耳聋核心家系72个成员取外周血提取DNA，经聚合酶链反应扩增后，利用Alw26Ⅰ限制性内切酶酶切及直接测序验证，对其线粒体DNA突变进行研究；利用ApaⅠ限制性内切酶酶切及直接测序验证，筛查核心家系中GJB2基因235delC突变情况，并对GJB2基因235delC和线粒体A1555G突变的关系进行研究。结果在27名母系成员中均发现具有线粒体A1555G突变，呈母系遗传；具有耳聋表型的为21人(77．8％)，家族外显率高；所筛查的包括配偶在内的72名个体中，仅3例具有GJB2基因235delC杂合子突变，且均出现在母系成员中，但3例的耳聋表型却不同。结论线粒体A1555G突变是本家系耳聋遗传易感性的基础，在该家系中GJB2基因的235delC杂合子突变未加重线粒体A1555G突变导致的非综合征型耳聋。     

一个母系遗传非综合征耳聋大家系及mtD12SrRNA基因突变

目的 对一个非综合征母系遗传耳聋大家系的分子遗传学进行探讨。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）,扩增ｍｔＤＮＡ与非综合征耳聋相关位点ｎｔ１５５５和ｎｔ７４４５的区域,通过ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ,ＰＣＲ产物克隆序列测定等技术对该家系进行了系统研究。结果 发现该家系中全部患者和４个母系亲属有ｍｔＤＮＡＡ１５５５Ｇ突变,而家系中正常配偶和对照组（１００名正常个体）的ｍｔＤＮＡ１５５５位点均无突     

12个非综合征型遗传性耳聋家系mtDNA12SrRNA,tRNA~(Leu(UUR)),tRNA~(Ser(UCN))及16SrRNA基因序列分析

目的　探讨 mt DNA突变与遗传性耳聋的关系 ,以及突变家系对氨基糖甙类抗生素(aminoglycoside antibiotic,Am An)耳毒敏感性差异的原因。方法　调查了 12个非综合征型耳聋家系 ;抽取外周血 ,提取 DNA;PCR扩增线粒体 DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)目的片段 ,分别以 Alw2 6 、Apa 及 Xba 限制性内切酶检测 15 5 5 G、32 43G及 744 5 G 点突变 ;行 mt DNA 12 S r RNA、t RNALeu(UUR) 、t RNASer(UCN)及 16 S r RNA基因序列测定。结果　经酶切及测序证实 12个家系具有 mt DNA突变 ,形式为 :15 5 5 G突变家系 10个 ,744 5 G突变家系 2个 ,未发现 32 43G 突变家系。基因测序显示 mt DNA 16 S r RNA基因序列变化形式为 :2 2 30 G点突变、2 2 30 AG插入、2 2 43AG插入及 2 2 30 AA插入突变 ,它们在家族性 Am An耳毒敏感性家系中被发现 ,且呈母系遗传 ;在 Am An不敏感家系中未被发现。结论　单纯 15 5 5 G或 744 5 G突变家系表现为无诱因的渐进性遗传性耳聋或先天性聋 ;15 5 5 G或 744 5 G突变合并 16 S r RNA基因突变者对Am An高度敏感 ,表现为家族性敏感致聋。     

母系遗传耳聋大家系的线粒体基因组全序列分析

目的 在江苏淮阴一母系遗传非综合征型耳聋大家系中，寻找线粒体基因组上可能影响1555（A→G）突变表型的其他位点突变。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）和测序技术。检测了核心分支家系中27名母系成员的线粒体DNA上1555位点和7445位点的碱基变化，进而对该家系2名母系成员的线粒体全基因组和其他25名母系成员线粒体12S rRNA基因MTRNR1和tRNA-Ser^（UCN）基因MTTS1进行了全长测序。结果 再次证明了1555（A→G）突变是该家系成员致聋的分子生物学基础之一；并发现该家系27名母系成员的线粒体基因组中除1555（A→G）突变外，还同时存在有955-960（insC）同质型突变，两突变共分离。另外，新发现一个线粒体DNA突变——7449（insG），但该突变仅在2名母系成员中存在。结论 推测955-960（insC）突变可能通过改变12S rRNA基因的高级结构，并与1555（A→G）突变协同作用，提高了突变携带者对氨基糖甙类药物的敏感性；同时该突变可能也会导致线粒体蛋白质的合成缺陷。从而提高1555（A→G）突变致聋的外显率。     

7个非综合征型耳聋家系患者的mtDNA A1555G突变分析

目的探讨非综合征型耳聋家系患者mtDNA A1555G突变及其临床特征。方法应用聚合酶链反应、限制性核酸内切酶酶切和DNA测序技术对7个非综合征型耳聋家系112个成员的mtDNA A1555G突变进行检测，并分析听力临床资料。结果7个家系中所有受检的母系成员mtDNA A1555G突变均为阳性，突变性质含同质性和异质性二种；非母系成员及配偶该突变为阴性。突变的性质与临床表型的有关。结论mtDNA A1555G突变可导致非综合征型耳聋和氨基糖苷类抗生素致聋，其突变性质含均质性和异质性两种，且与临床表型相关。     

七个非综合征型耳聋家系患者的mtDNA A1555G突变性质与特点

目的 探讨非综合征型耳聋家系患者mtDNA A1555G突变性质及其特点,探索临床表型多样性的分子遗传学基础.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态和实时荧光-扩增阻碍突变系统-定量PCR(real time-amplification refractory mutation system-quantitative PCR,RT-ARMS-qPCR)检测7个非综合征型耳聋家系71个成员的mtDNA A1555G突变,并收集、分析其临床资料.结果 7个家系中所有受检的母系成员mtDNA A1555G突变均为阳性,突变性质含同质性和异质性两种;非母系成员及配偶该突变为阴性.7个家系mtDNA A1555G同质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.341,P=0.022);mtDNA A1555G异质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.85,P=0.015).结论 mtDNA A1555G突变可导致非综合征型耳聋和氨基糖甙类抗生素致聋,其突变性质含同质性和异质性两种,且含mtDNA A1555G位点的突变型与野生型的比例与耳聋的严重程度密切相关.     

Maternally inherited nonsyndromic hearing loss

In this study we characterized clinically and evaluated molecularly a large family with maternally inherited hearing impairment. Relatives were evaluated audiologically and clinically, the most likely pattern of inheritance was deduced, and molecular DNA analysis for the known mitochondrial mutations associated with hearing impairment was performed. Clinical examination of several relatives showed a normal general state of health, but in 14 of the members tested variable degrees of sensorineural hearing loss were noted. The pedigree was established and demonstrated a clear pattern of maternal inheritance, with 34 of 38 offspring of deaf mothers being hearing impaired, but none of 22 offspring of deaf fathers having any hearing impairment. Since by far the most likely explanation of such a maternal inheritance pattern is a mitochondrial mutation, molecular testing for the three known mitochondrial mutations, A1555G, A7445G, and Cins7472, was performed on 27 of the relatives. All of the individuals tested had the normal sequence at the sites tested. This family with nonsyndromic sensorineural hearing loss has an inheritance pattern strongly suggestive of a mitochondrial mutation. However, molecular testing for the three known mitochondrial mutations associated with nonsyndromic hearing impairment was negative, implying that additional molecular defects can lead to the same phenotype. The search for this novel molecular defect is underway. Am. J. Med. Genet. 84:369–372, 1999. © 1999 Wiley-Liss, Inc.     

线粒体DNA A1555G和961 insC双重突变导致的非综合征型遗传性耳聋

目的探讨一个非综合征型遗传性耳聋大家系线粒体DNA(mitoehondrial DNA，mtDNA)突变类型。方法临床听力测试已明确诊断，并收集非综合征型遗传性耳聋分支家系中33人及6例散发聋患者的外周静脉血样本，从白细胞中提取DNA，聚合酶链反应扩增mtDNA目的片段，分别用BsmA I、Apa I及Xba I限制性内切酶检测1555G、3243G和7445G点突变，对相关的扩增片段进行基因测序。结果酶切检测，家系中17例耳聋患者均为1555G点突变阳性，非母系成员及散发聋病例均为阴性。测序结果：6例酶切显示1555G突变阳性病例均发现(nt)1555A→G转换和(nt)961C插入，3243G、7445G点突变阴性。结论在该非综合征型遗传性耳聋大家系中，mtDNA 12SrRNA基因区域A1555G和961insC的双重突变可能共同参与了听力损害的过程。     

五个母系遗传非综合征性耳聋和药物性耳聋的中国汉族家系

目的 通过对母系遗传非综合征性耳聋家系临床和分子遗传学特征分析,进一步探讨线粒体12S rRNA基因对母系遗传药物性耳聋的影响.方法 收集5个非综合征性耳聋患者家系,提取基因组DNA,然后进行线粒体DNA全序列和间隙连接蛋白β2(gap junction protein beta 2,GJB2)基因扩增并测序分析.结果 5个家系内和家系间的母系成员在听力损失、发病年龄和听力曲线上存在较大差异.5个家系耳聋发生的外显率分别为17.6%、50.0%、66.7%、31.3%和23.1%,平均外显率是37.7%.线粒体全序列显示家系间存在已知的1555A＞G突变和不同的多态性位点,分别属于东亚人群D4b2b、B4c1b1、F3、C1、D5a单倍型.这5个家系没有携带已知的线粒体DNA继发突变,但发现了2个保守性较高的ND1L89T和CO3 A200T突变.而且,GJB2基因上未发现与耳聋相关的突变.结论 这5个母系遗传非综合征性耳聋家系中,线粒体DNA继发突变、GJB2基因可能没有影响1555A＞G的表型表达.然而,氨基糖甙类抗生素、线粒体DNA多态性及其他核修饰基因可能对这5个耳聋家系的表型表达起到修饰作用.     

采用SNaPshot技术对苏南地区耳聋患者进行基因突变热点筛查

目的 明确苏南地区非综合征型耳聋患者7个耳聋致病基因突变热点的突变频率,验证中国人群耳聋遗传病因筛查的SNaPshot技术平台的效能.方法 以125例非综合征型耳聋(non-syndromic hearing loss,NSHL)患者为研究对象,应用SNaPshot技术,针对GJB2基因235delC和299-300delAT,SLC26A4基因IVS7-2A＞G和2168 A＞G,线粒体DNA(mtDNA)1555A＞G、7445 A＞G和3243 A＞G共7个突变热点在一个反应管中进行多重PCR后,单碱基荧光延伸标记,再采用ABI 3130遗传分析仪行毛细管电泳进行基因分型,并利用直接测序和聚合酶链反应-限制性片段长度多态(polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法验证基因分型结果.结果 (1)125例样本中,GJB2基因235delC突变频率为24.0%,299-300delAT突变频率为5.6%;SLC26A4基因IVS7-2A＞G突变频率为15.2%,2168 A＞G突变频率为3.2%;线粒体DNA 1555A＞G突变频率为4.8%,7445 A＞G突变频率为0.8%,未发现线粒体DNA 3243 A＞G位点突变,7个热点综合突变频率为53.6%.(2)SNaPshot结果与直接测序或PCR-RFLP结果完全吻合,检测的特异性和敏感性均为100%.结论 (1)苏南地区耳聋患者7个位点突变频率超过半数;(2)用SNaPshot技术筛查耳聋基因,在一个反应管中同时检测到了7个突变热点,其检测效能高,具有临床应用价值.     

Maternally inherited hearing impairment

Mitochondria are intracellular organelles responsible for the majority of a cell's energy production. They have their own small maternally inherited genome which, when mutated, can give rise to a large spectrum of diseases. The phenotype most commonly includes neurological and muscular symptoms, although hearing impairment is an additional feature in some mitochondrial syndromes. Often, syndromic mutations affect only a fraction of all mitochondrial DNA molecules, a condition referred to as heteroplasmy. It is believed that the degree of heteroplasmy in different tissues contributes to the phenotypic heterogeneity that is a hallmark of these syndromes. Five homoplasmic mutations leading to nonsyndromic hearing impairment have been reported (1555A-->G, 7445A-->G, 7472insC, 7510T-->C, 7511T-->C). The 1555A-->G is in the 12S rRNA gene, and in some populations, appears to be a frequent cause of hearing impairment. Carriers of the mutation are abnormally sensitive to aminoglycoside-induced ototoxicity even at 'appropriate' drug levels; in addition, even without aminoglycoside exposure, these persons can develop hearing impairment. The other four nonsyndromic mutations are located in the tRNA(Ser(UCN)) gene. In addition to hearing impairment, with two of these mutations (7445A-->G, 7472insC), other symptoms can be present in some patients. However, why these five mutations preferentially affect the inner ear, despite the crucial role of mitochondria in nearly all cells of the body, is unknown.     

Prevalence of mitochondrial DNA mutations in childhood/congenital onset non-syndromal sensorineural hearing impairment

Genetic factors are the major causes of childhood hearing impairment. Whereas autosomal recessive mutations account for the majority of prelingual non-syndromic sensorineural hearing impairment (NSSHI), the relative contribution of mitochondrial DNA (mtDNA) mutations to childhood onset NSSHI has not been established.
We screened 202 subjects with congenital/childhood onset NSSHI, consisting of 110 sporadic cases, 75 sib pairs, and 17 families with affected subjects in more than one generation, in order to determine the prevalence of mtDNA mutations associated with NSSHI.
mtDNA mutations were found in three of 10 families (30%) in whom the affected members were related through the maternal lineage. One sporadic case (0.9%) was also found to have a known mtDNA mutation but none was found in the sib pairs.
Although the prevalence of mtDNA mutations was low in the group as a whole (2%), we suggest that screening should be considered in cases of childhood hearing impairment when it is progressive and particularly in families where transmission is compatible with maternal inheritance.


Keywords: mitochondrial DNA; point mutation; hearing impairment