特异性靶向Bcl-XL ShRNA抑制Lovo细胞移植瘤生长的实验研究

目的 探讨靶向Bcl-XL shRNA对人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法 构建两个靶向Bcl-XL的shRNA质粒载体XL1、XL2和阴性对照质粒Neg,并将其转入人结肠癌Lovo细胞,分组种植建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.随后观察各组裸鼠的肿瘤生长情况.第8周裸鼠处死,HE染色观察肿瘤细胞的形态,免疫组化方法检测Bcl-XL蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 第8周XL1、XL2实验组裸鼠移植瘤的体积和质量与空白对照组相比均有显著缩小(P<0.05),抑制率约50%.与空白对照组相比,XL1、XL2组移植瘤的Bcl-XL表达均有显著下调,肿瘤细胞凋亡指数均有显著升高(P<0.05).阴性对照组的上述指标与空白对照组相比差异均无统计学意义.结论 靶向Bcl-XL shRNA能够抑制人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长,可能机制为促进肿瘤细胞凋亡.     

沉默SIAH2基因抑制人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤生长实验研究

目的 本研究前期实验发现,靶向SIAH2的shRNA载体能显著抑制HepG2细胞SIAH2 mRNA和蛋白的表达,并抑制细胞体外增殖.本研究从体内水平验证靶向SIAH2的干扰载体对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 转染pGenesil-SIAH2的HepG2细胞作为实验组,命名为HepG2-SIAH2;转染空载体pGenesil-1的HepG2细胞作为阴性对照组,命名为HepG2-neo;未转染任何质粒的HepG2细胞作为空白对照组,通过G418筛选出稳定转染细胞株.将15只裸鼠随机分为3组,接种肿瘤细胞后观察裸鼠成瘤情况.4周后测量肿瘤的体积和瘤体质量,绘制移植瘤生长曲线,并用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤中SIAH2的表达情况.结果 稳定转染pGenesil-SIAH2的细胞株构建成功,3组裸鼠接种癌细胞后均有肿瘤形成.与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减慢,实验组平均瘤体积(261.57±41.141)mm3,明显低于阴性对照组(494.35±93.236) mm3(P=0.015)和空白对照组(418.3±28.576 5)mm3(P=0.012),差异有统计学意义;实验组平均瘤体质量为(0.162±0.02)g,明显低于阴性对照组(0.358±0.12)g(P=0.032)和空白对照组(0.322±0.24)g(P=0.028).实验组瘤体内SIAH2 mRNA相对表达量为0.83±0.35,明显低于阴性对照组2.35±0.96(P=0.003)和空白对照组2.57±0.41(P=0.006),差异有统计学意义.实验组瘤体内SIAH2蛋白表达量为0.72±0.02,明显低于阴性对照组2.61±0.67(P=0.004)和空白对照组2.49±0.91(P=0.007),差异有统计学意义.结论 靶向SIAH2的shRNA干扰载体能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,SIAH2有可能成为肝癌基因治疗新的分子靶.     

Survivin基因沉默抑制结肠癌生长的动物实验研究

目的 探究survivin基因沉默对人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 构建靶向survivin的shRNA载体SUR和阴性对照质粒Neg,并将其转染人结肠癌Lovo细胞,分别种植到裸鼠皮下建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.随后观察各组裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化方法检测移植瘤survivin蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 移植转染细胞8周,与空白对照组比较,SUR组移植瘤的体积和质量均有显著缩小(P<0.05),体积和质量抑瘤率分别为48.9%和51.2%.与空白对照组比较,SUR组移植瘤survivin表达显著下调,表达指数为31.9%;SUR组肿瘤细胞凋亡显著增加,凋亡指数18.47%(P<0.05).阴性对照Neg组的上述指标与空白对照组比较,差异均无统计学意义.结论 Survivin基因沉默能够抑制人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长.     

沉默PLCε基因对人膀胱癌裸鼠移植瘤中Bcl-2及Bax蛋白表达水平的影响

目的:探讨应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默磷脂酶Cε (phospholipase C epsilon,PLCε)基因对人膀胱癌移植瘤生长及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:人膀胱癌BIU-87细胞种植于裸鼠皮下,待移植瘤体积达40 mm3左右时,在肿瘤部位分别直接注射建构有PLCε特异性shRNA的重组表达质粒pGenesil-PLCε、阴性对照重组pGenesil-NP质粒以及0.9%氯化钠溶液;观察肿瘤体积的变化情况,30 d后处死全部裸鼠,取瘤组织,称瘤质量;瘤组织制备病理切片,HE染色观察细胞形态的变化;RT-PCR鉴定瘤组织中PLCε mRNA的表达;Western 印迹法检测瘤组织中PLCε、Bcl-2、Bax、p-Akt1/ Akt1和p-Bad/Bad蛋白的表达.结果:pGenesil-PLCε组小鼠移植瘤生长明显缓慢,瘤组织体积和质量均明显小于对照组;HE染色结果显示,瘤组织中出现细胞核固缩和裂碎等凋亡征象;RT-PCR检测结果显示, PLCε mRNA表达明显降低(P<0.05);Western 印迹法结果提示,PLCε和Bcl-2蛋白表达量明显降低,Bax蛋白表达增加,与2个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而Akt1、Bad蛋白的表达在实验组以及对照组中差异均无统计学意义,p-Akt1和p-Bad在移植瘤中未见表达.结论:沉默PLCε基因可明显抑制PLCε的表达,并下调Bcl-2蛋白以及上调Bax蛋白的表达,促进膀胱癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长.     

米非司酮对子宫内膜癌裸鼠移植瘤细胞凋亡调控的研究

目的探讨抗孕激素米非司酮对人子宫内膜癌HHUA细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的调控作用。方法体外培养人子宫内膜癌HHUA细胞,裸鼠皮下接种HHUA细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,随机分为2组,分别应用米非司酮、精制花生油治疗4周,应用流式细胞术(FCM)检测各组裸鼠移植瘤细胞周期时相和凋亡率;免疫组化技术检测凋亡基因bcl2、Fas和FasL蛋白的表达情况。结果米非司酮治疗组裸鼠移植瘤细胞G0/G1期比例升高,S期细胞比例(SPF)降低(P<0.05),移植瘤细胞凋亡率为15.03%±2.19%,明显高于对照组(3.06%±1.13%)(P<0.01);移植瘤细胞bcl2蛋白表达水平明显下降,而Fas蛋白表达水平升高,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论抗孕激素米非司酮通过调节移植瘤细胞周期分布和凋亡基因,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

转染REGγ基因对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究转染蛋白酶体激活因子REGγ基因的乳腺癌MDA-MB-231细胞在裸鼠体内的成瘤作用及其机制.方法:以脂质体转染法将构建的重组质粒pcDNA3.1-REGγ导入MDA-MB-231细胞,以G418(600 mg/L)筛选获得稳定高表达该基因的细胞株(实验组).以转染空载体及未施加处理因素的细胞作为对照组.将此3组细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况并计算抑瘤率.RT-PCR检测REGγ基因在移植瘤中的表达,FCM检测移植瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)中CD16的表达以及肿瘤细胞周期和细胞凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中p21的表达.结果:与对照组相比,实验组的移植瘤生长速度较快、体积较大,瘤体质量明显增加(P＜0.05);REGγ基因在移植瘤中的表达增加(P＜0.01);FCM检测提示CD16阳性率明显降低(P＜0.05);G0/G1和G2/M期细胞减少,S期细胞明显增多,肿瘤细胞的凋亡率明显降低(P＜0.05);p21的表达明显降低(P＜0.05).结论:REGγ基因在体内具有促进乳腺癌发生、发展的作用,其机制可能与加速细胞周期、抑制细胞凋亡、抑制自然杀伤细胞活化以及对p21的特异性降解有关.     

沉默STAT3基因对人食管癌EC1细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的构建STAT3靶向短发夹RNA（shRNA）质粒,研究其对人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性。方法构建STAT3的siRNA真核表达载体pSUPER-EGFP-STAT3,稳定表达该质粒的细胞为实验组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、免疫组化方法检测STAT3mRNA和蛋白变化。结果裸鼠体内实验显示,实验组肿瘤增长受到明显抑制;HE染色显示对照组肿瘤体积大、异形明显;RT-PCR、免疫组化结果表明实验组STAT3mRNA和蛋白表达下调。结论shRNA沉默STAT3基因能抑制人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调STAT3mRNA和蛋白的表达,为食管癌的基因治疗提供了新的靶点,开辟了新的思路。     

二烯丙基二硫对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖的影响

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)在体外可抑制多种肿瘤细胞增殖,但在体内抗肿瘤作用的研究报道较少.本实验旨在研究DADS对裸鼠体内人结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为DADS组及对照组.观察DADS作用后移植瘤体积和重量的变化,通过光镜和电镜观察移植瘤细胞形态学变化,通过免疫组织化学和形态定量图像分析系统检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达变化,用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布.结果:DADS在体内能明显抑制移植瘤的生长,相对肿瘤增殖率为49.85%;组织学分析显示DADS组瘤细胞异型性降低,核质比下降,胞浆内细胞器丰富,部分胞核呈退行性变,可见凋亡小体;免疫组化示两组移植瘤组织PCNA蛋白均有阳性表达,DADS组(149.02±4.26)与对照组(178.86±7.69)比较,裸鼠移植瘤组织内PCNA蛋白表达明显减弱(P＜0.05);流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞中G2/M期细胞为18.8%,与对照组比较,DADS组G2/M期细胞(38.6%)显著增多.结论:DADS可体内抑制人结肠癌SW480细胞增殖,使癌细胞阻滞于G2/M期.     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞及胆囊癌细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制

目的:探讨Bcl-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用.方法:分别制作人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD细胞株移植瘤模型,随机分为3组,pSilencerTM-EGFP sh515组(实验组)、pSilencerTM-EGFP shCon组(空载体阴性对照组)和对照组.实验组用Bcl-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,对照组不作处理,观察其生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率.6周后,处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达.结果:成功建立裸鼠人胆管癌细胞QBC939,胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型.胆管癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积(mm3)分别为:801.776±59.6,1383.980±78.2,1490.235±89.0.瘤体平均瘤体重量(g)为:0.90±0.11,1.49±0.31,1.63±0.22.平均生长率为:20.558%,35.587%,38.211%.人胆囊癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积(mm3)分别为:729.736±66.6,1493.162±98.9,1548.668±101.0.瘤体平均瘤体重量(g)为:0.82±0.10,1.68±0.21,1.90±0.25.平均生长率为:18.711%,38.286%,39.709%.两组实验组分别和空载体阴性对照组、对照组比较有统计学意义(P<0.05),空载体阴性对照组和对照组比较无统计学意义(P>0.05).结论:针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体通过局部多点注射于移植瘤周围可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内瘤体生长减慢.     

人端粒酶逆转录酶启动子在裸鼠中增强人喉癌对基因放射治疗的敏感性

目的 探索人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)介导自杀基因辣根过氧化酶(HRP)-吲哚乙酸(IAA)系统联合射线,对相同来源而放射敏感性不同的人喉癌移植瘤模型的治疗作用.方法 建立相同来源而放射敏感性不同的人喉癌(Hep-2和Hep-2R细胞)移植瘤模型,并分为联合治疗组(A组和AR组)、基因治疗组(B组和BR组)、单纯放射组(C组和CR组)和对照组(D组和DR组).瘤内注射脂质体包裹的质粒phTERTp-HRP,腹腔内注射IAA从并联合放疗30 Gy,观察对移植瘤生长的抑制作用.应用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞的凋亡情况;应用AP法检测瘤内HRP蛋白的表达.结果 裸鼠移植瘤生长以联合治疗组最慢,以对照组最快.A组的肿瘤抑制率为54.8%,B组为10.0%,C组为31.9%,AR组为52.7%,BR组为24.8%,CR组为17.0%.A组和AR组可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡,凋亡指数分别为16.6%±1.3%和17.6%±1.3%,高于其他组(P<0.05).B组的HRP蛋白表达率(21.9%±5.7%)低于BR组和(33.3%±8.9%),辐射诱导后,A组和AR组的HRP蛋白表达率分别增加2.1和1.6倍(P<0.05).结论 在不同放射敏感性的喉癌移植瘤模型中,hTERTp能被射线诱导,并根据瘤内端粒酶活性增强HRP基因的表达.hTERTp·HRP-IAA系统通过诱导肿瘤细胞凋亡和引起细胞坏死,抑制裸鼠移植瘤生长,并与射线协同作用,起到放射增敏作用.     

弥漫大B细胞淋巴瘤SHP-1、p15和SOCS-1基因异常甲基化的研究

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者SHP-1 、p15和SOCS-1基因异常甲基化在DLBCL的发生、发展中的意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）技术研究DLBCL淋巴组织标本中SHP-1、p15和SOCS-1基因启动子区域CpG岛的甲基化状态.结果 50例DLBCL患者中有48例（96％）存在SHP-1基因启动子区甲基化,26例（52％）有p15基因启动子区域甲基化,28例（56％）有SOCS-1基因启动子区的甲基化,而15例对照（淋巴结良性反应性增生）组则无SHP-1、p15和SOCS-1基因的甲基化现象.结论 在DLBCL患者中存在的SHP-1、p15和SOCS-1基因启动子区甲基化现象,初步表明SHP-1、p15和SOCS-1基因甲基化在DLBCL的发生、发展中具有一定作用,并对DLBCL的去甲基化治疗提供了理论依据.     

急性髓系白血病患者TAK1、p38基因表达及其临床意义

目的了解不同亚型急性髓系白血病（AML）患者TAK1、p38基因的表达差异,并分析TAK1、p38基因不同表达水平患者的临床特征。方法以GAPDH为内参,14名健康人为对照组,采用实时定量聚合酶链反应方法检测87例AML患者骨髓TAK1、p38基因的表达,对结果进行统计学分析。结果AML患者TAK1、p38基因表达均高于对照组（相对表达量：0．194±0．125比0．015±0．008,0．233±0．140比0．010．±0．005,均P〈0．001）。M4患者TAKImRNA表达高于M2、M3、M5（P=0．005、0．000、0．002）,M2高于M3（P=0．022）;M4患者p38mRNA表达高于Ml、M2、M3、M5（P=0．013、0．035、0．000、0．045）,M2高于M,（P=0．001）,M,高于M,（P=0．012）。TAK1高表达组CD56阳性率、外周血白细胞数均高于TAK1低表达组,p38低表达组CDl9阳性率高于p38高表达组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论AML患者TAK1、1338基因表达升高,其表达上调可能在AML发病中起重要作用。     

EphA 2和KAI 1蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其意义

目的：探讨EphA 2蛋白和KAI 1蛋白的表达与膀胱移行细胞癌发生及浸润转移的关系以及两者表达的相关性。方法：采用免疫组织化学SP法,检测EphA 2蛋白和KAI 1蛋白在88例膀胱移行细胞癌组织及76例相应癌旁正常膀胱黏膜中的表达。结果：EphA 2蛋白在癌组织中的表达明显高于其癌旁正常黏膜（P〈0.01）;随着膀胱癌病理分级的升高,EphA 2蛋白的表达逐渐增加（P〈0.05）;在浸润性膀胱癌中的表达明显高于表浅性膀胱癌患者（P〈0.05）;有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组（P〈0.05）。KAI 1蛋白在癌组织中的表达明显低于癌旁正常膀胱黏膜（P〈0.01）;随着膀胱癌病理分级的升高,KAI1蛋白的表达逐渐减少（P〈0.01）;KAI 1在浸润性膀胱癌中的表达明显低于表浅性膀胱癌患者（P〈0.05）;有淋巴结转移组的表达明显低于无淋巴结转移组（P〈0.05）。EphA 2蛋白和KAI 1蛋白的表达在有淋巴结转移的患者中呈显著负相关（P〈0.05）。结论：EphA 2蛋白的高表达和KAI 1蛋白的低表达与膀胱移行细胞癌的发生及浸润转移有关。     

急性髓系白血病患者骨髓涂片FMS样酪氨酸激酶3、NPM1和c-kit基因检测及临床研究

目的：探讨提取贮存骨髓涂片DNA的方法,通过对急性髓系白血病（AML）患者FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）、NPM1及c-kit基因突变进行检测,分析三种基因突变与AML临床特征之间的关系。方法收集55例AML患者骨髓涂片,采用聚合酶链反应（PCR）、DNA测序和分子克隆方法对FLT3-内部串联重复（ITD）、NPM1和c-kit基因突变进行检测及分析,记录患者疾病缓解、进展及生存时间。结果实验证实对于低温冻存、未经瑞特染色、未用化学方法固定的骨髓涂片标本及室温贮存、经瑞特染色脱色后的标本均能用苯酚∶氯仿∶异戊醇法成功提取DNA。从骨髓涂片中提取的DNA可用于PCR、直接测序和分子克隆测序分析。在55例AML患者中,FLT3-ITD阳性10例（18.2%）,其中9例为杂合型突变,1例为纯合型突变。FLT3-ITD阳性组较阴性组完全缓解（CR）率低,无事件生存（EFS）和总生存（OS）时间短（P＜0.05）。NPM1基因杂合型突变9例（16.4%）,全部为A型突变。10个月以内NPM1突变组患者EFS率比野生组高（P＜0.05）,19个月以内NPM1突变组OS率比野生组高（P＜0.05）。9例NPM1突变患者中FLT3-ITD阳性3例,CR率由高到低依次为NPM1+ FLT3-ITD-、NPM1- FLT3-ITD-、NPM1- FLT3-ITD+、NPM1+ FLT3-ITD+（P＜0.05）,且NPM1- FLT3-ITD+是影响OS的危险因素（RR＝1.250,P＝0.005）。55例患者中,c-kit基因突变2例（3.6%）,分别为D816H突变型和D816V突变型;c-kit基因突变患者与FLT3-ITD阳性及NPM1突变患者无重叠。结论 FLT3-ITD突变为AML患者预后不良的分子标志,NPM1基因突变可能提示预后较好,NPM1- FLT3-ITD+是影响OS的危险因素。AML中c-kit基因突变率低,未见其与FLT3、NPM1基因突变重叠。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

 目的 比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法 采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选，免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达，通过细胞生长曲线检测细胞活力，流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析，采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果 转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达；与对照细胞相比，实验组细胞生长受到明显的抑制，G1期细胞数增加，S期细胞减少。与p16INK4a相比，抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加，显示出更强的致凋亡现象，尤其在HL60细胞株。结论 抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长，可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

急性白血病p27基因表达的临床意义

 目的　探讨急性白血病（AL）p27基因mRNA的表达及临床意义。方法　采用RT-PCR检测65例初治AL和41例造血系统非恶性肿瘤患者（对照组）的骨髓单个核细胞中p27 基因mRNA的表达水平,分析p27 mRNA表达与AL的年龄、性别、外周血白细胞计数和髓外浸润临床特征的相关性。结果　AL中p27基因mRNA表达的阳性率为36.9 %（24／65）,显著低于对照组的87.8 %（36／41）,差异有统计学意义（P＜0.05）,急性髓细胞白血病（AML）组和急性淋巴细胞白血病（ALL）组分别为34.2 %（13／38）和37.5 %（9／24）,均低于对照组,差异有统计学意义（均P＜0.05）,但AML组和ALL组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。年龄≥14岁组（52例）和＜14岁组（13例）比较,p27 mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）,男性组（34例）和女性组（31例）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,外周血白细胞计数≥20×109／L组（31例）和＜20×109／L组（34例）比较,与白细胞计数呈负相关（r＝-0.284,P＜0.05）,有髓外浸润组（37例）和无髓外浸润组（28例）比较,与髓外浸润呈负相关（r＝-0.300,P＜0.05）。结论　AL存在p27基因 mRNA的表达缺失,缺失同时存在于AML和ALL中,缺失与患者外周血白细胞计数、髓外浸润呈负相关,这可能是AL发生、发展的机制之一。     

WWOX基因在贲门腺癌中的异常甲基化及其表达

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中WWOX( WW domain-containing oxidoreductase)基因启动子区及第1外显子区的甲基化状态及其对表达的影响,并分析贲门腺癌中WWOX与Smad4(mothers against decapentaplegic homolog 4)蛋白表达之间的关系.方法:分别应用甲基化特异性PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及其相应癌旁组织中WWOX基因的甲基化和蛋白的表达情况:应用免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及其相应癌旁组织中Smad4蛋白的表达.结果:贲门腺癌组织中WWOX基因启动子区(- 382～- 41 bp)及第1外显子区(- 27～+344 bp)的甲基化率[26.4％ (33/125)和23.2％ (29/125)]显著高于其相应的癌旁常组织(0％和0％)(P＜0.01),并与贲门腺癌TNM分期和上消化系统肿瘤家族史有关(P＜0.05).贲门腺癌组织中WWOX蛋白的表达阳性率显著低于相应癌旁组织(P＜0.01),WWOX蛋白的表达与WWOX启动子区和第1外显子区甲基化状态之间呈负相关(r=-0.216,r=-0.255,P＜0.05).贲门腺癌组织中Smad4蛋白表达的阳性率(47.2％)显著低于相应癌旁组织(94.4％)(P＜0.01),且与WWOX在贲门腺癌中的表达呈明显的正相关(r=0.622,P＜0.01).结论:WWOX基因启动子区及第1外显子区的高甲基化导致的基因表达下调可能在贲门腺癌中发挥重要作用.     

含LTR序列的psiTPTE22基因mRNA在肿瘤中的表达

目的：通过检测psiTPTE22基因编码的AK097082及BC031001的mRNA表达情况，确定其是否是基因芯片检测到的在结肠癌组织中高表达的基因，同时探讨该基因在癌症发生发展中的可能作用。方法：应用RT-PCR以及实时荧光定量．PCR法检测psiTPTE22编码的AK097082及BC031001的mRNA在肾、肝、胃、肺、结肠的癌组织和相应癌旁正常组织以及9个肿瘤细胞系和胎盘组织中的表达情况。结果：RT-PCR显示只有psiTPTE22编码的BC031001 mRNA在结肠组织中表达，但实时荧光定量PCR检测及F检验发现其在结肠癌与相应正常组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05），因此psiTPTE22并不是基因芯片检测到的在结肠癌中特异高表达的基因。实时荧光定量．PCR还发现BC031001 mRNA在肾、肝、胃和肺的正常组织中高表达，而在相应的癌组织中表达较低；该mRNA在多个肿瘤细胞系中不表达或表达量很低；在胎盘组织中表达较高。对各组癌组织与相应癌旁正常组织的表达量进行F检验发现，肾、肝、胃、肺的癌旁正常组织和相应癌组织中的表达水平差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：psiTPTE22基因编码的BC031001mRNA表达水平与多种癌症呈负相关性，但其原因及其在肿瘤发生发展过程中的作用还有待进一步研究。     

利用组织微阵列研究RASSF1A和Survivin基因在非小细胞肺癌中的表达

目的探讨RASSF1A和Survivin基因的蛋白表达与非小细胞肺癌（NSCLC）临床病理特征的关系及其临床意义。方法免疫组织化学法检测RASSF1A和Survivin在NSCLC组织微阵列中的蛋白表达。结果RASSF1A蛋白在NSCLC中的阳性率（46．8％〉显著低于正常肺组织（92．9％）（P〈0．001），但Survivin阳性率（75．8％）显著高于正常肺组织（0）（P〈0．001）；RASSF1A蛋白在临床Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC中分别显著高于临床Ⅲ期（P〈0．001，P〈0．001），Survivin在临床I期和临床Ⅱ期NSCLC中的阳性率显著低于临床Ⅲ期者（P=0．003，P=0．001），淋巴结转移性NSCLC的RASSF1A阳性率显著低于无淋巴结转移者（P〈0．05）；RASSF1sA和Survivin蛋白在NSCLC中的表达呈负相关（r=-0．780，P〈0．001）。结论RASSFlA蛋白表达下调、Survivin蛋白高表达及其两者的表达失平衡在NSCLC的发生、发展中可能具有重要作用，RASSF1和Survivin有望成为评估肺癌淋巴结转移和预后预测的重要分子标志。     

WT1在非小细胞肺癌中的表达及其与肺癌细胞增殖的关系

目的:探讨人非小细胞肺癌及其相应癌旁组织中WT1基因(Wilms' tumor gene 1,WT1)的表达,体外研究其与肺癌细胞增殖的关系.方法:应用实时荧光定量PCR法检测79例非小细胞肺癌组织及其相应癌旁组织中WT1 mRNA的表达情况.构建重组质粒pLV-GFP-WT1,并通过脂质体LipofectAMINE 2000将其瞬时转染至非小细胞肺癌H1299细胞中,应用蛋白质印迹法检测转染后H1299细胞中WT1蛋白的表达,CCK-8 (cell counting kit-8)法检测细胞的增殖情况.结果:非小细胞肺癌组织中WT1 mRNA的表达水平高于相应的癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.01).重组质粒pLV-GFP-WT1成功构建,并将其成功转染至H1299细胞中;转染后的H1299细胞中,WT1蛋白的表达水平上调;在pLV-GFP-WT1转染后24、36和48 h时,过表达WT1的H1299细胞增殖率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:WT1 mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于相应癌旁组织,高表达WT1基因能促进非小细胞肺癌H1299细胞的增殖,提示WT1在非小细胞肺癌中扮演癌基因的角色.