p27在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其意义

目的 探讨涎腺腺样囊性癌(SACC)中p27的表达及其意义.方法 采用免疫组化Envision法和原位杂交法对20例正常涎腺组织和46例SACC组织中p27蛋白和p27 mRNA表达进行检测.结果 正常组织中p27蛋白表达阳性率为100.0%,SACC组织中p27蛋白表达阳性率为65.2%,两者之间表达差异具有显著统计学意义(P<0.01);正常组织中p27 mRNA表达阳性率为100.0%,SACC组织中p27 mRNA表达阳性率为87.0%,两者之间表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 p27蛋白表达与腺样囊性癌组织的发生、发展密切相关;p27基因与肿瘤的关系则主要体现于p27蛋白水平而非基因水平的改变.     

p16基因在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

目的 为了探讨p16基因在涎腺腺样囊性癌吕的表达及其与肺转移的关系。方法 应用ABC免疫组化染色方法,研究转移抑制基因p16表达产物在36例涎腺腺样囊性癌（ACC）组织中的表达。结果 p16在ACC中有较高表达,阳性率为58．3％（21／36）;其中有肺转移者阳性率为36．6％（4／11）,临床元肺转移者阳性率76％（19／25）,差异有极显著意义（P＜0．01）;p16表达与临床分期有关,分期越高,阳性率越低,早期100％（17／17）和Ⅲ、Ⅳ期47．3％（9／19）相比则有极显著性差异（P＜0．01）。与病理分型本组无显著相关（P＞0．05）。结论 本实验结果表明p16基因在人ACC肺转移过程中起到抑制转移的作用,可作为临床预测ACC患者转移和预后的指标。     

沉默SIAH2基因抑制人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤生长实验研究

目的 本研究前期实验发现,靶向SIAH2的shRNA载体能显著抑制HepG2细胞SIAH2 mRNA和蛋白的表达,并抑制细胞体外增殖.本研究从体内水平验证靶向SIAH2的干扰载体对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 转染pGenesil-SIAH2的HepG2细胞作为实验组,命名为HepG2-SIAH2;转染空载体pGenesil-1的HepG2细胞作为阴性对照组,命名为HepG2-neo;未转染任何质粒的HepG2细胞作为空白对照组,通过G418筛选出稳定转染细胞株.将15只裸鼠随机分为3组,接种肿瘤细胞后观察裸鼠成瘤情况.4周后测量肿瘤的体积和瘤体质量,绘制移植瘤生长曲线,并用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤中SIAH2的表达情况.结果 稳定转染pGenesil-SIAH2的细胞株构建成功,3组裸鼠接种癌细胞后均有肿瘤形成.与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减慢,实验组平均瘤体积(261.57±41.141)mm3,明显低于阴性对照组(494.35±93.236) mm3(P=0.015)和空白对照组(418.3±28.576 5)mm3(P=0.012),差异有统计学意义;实验组平均瘤体质量为(0.162±0.02)g,明显低于阴性对照组(0.358±0.12)g(P=0.032)和空白对照组(0.322±0.24)g(P=0.028).实验组瘤体内SIAH2 mRNA相对表达量为0.83±0.35,明显低于阴性对照组2.35±0.96(P=0.003)和空白对照组2.57±0.41(P=0.006),差异有统计学意义.实验组瘤体内SIAH2蛋白表达量为0.72±0.02,明显低于阴性对照组2.61±0.67(P=0.004)和空白对照组2.49±0.91(P=0.007),差异有统计学意义.结论 靶向SIAH2的shRNA干扰载体能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,SIAH2有可能成为肝癌基因治疗新的分子靶.     

涎腺腺样囊性癌的放射治疗──附75例分析

１９７５年至１９８７年我院收治腺样囊性癌７５例。腮腺１２例，颌下腺１４例，舌下腺１例和小涎腺４８例。综合治疗５４例（７２％），单纯放疗１６例和单纯手术５例。５年随访率８７．９％，３、５和１０年生存率分别为７７．３％（５８／７５），６５．５％（３８／５８）和４５．２％（１４／３１）。单纯放疗、单纯手术和综合治疗５年生存率分别为３８．５％（５／１３），５０％（２／４）和７５．６％（３１／４１）（Ｐ＜０．０１），Ⅰ～Ⅳ期５年生存率分别为８１．３％（１３／１６）、７０％（１４／２０）、５３．３％（８／１５）和４２．９％（３／７）（Ｐ＜０．０５）。     

Bcl-2反义寡核苷酸对裸鼠人肺癌移植瘤抑制作用的研究

目的探讨Bcl-2反义寡核核苷酸(ASODN)对裸鼠人肺癌移植瘤的成瘤能力和生长的抑制作用。方法将经硫代修饰的Bcl-2ASODN导入非小细胞肺癌。NCI-H460细胞内,然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时采用未经处理的NCI-H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待长出瘤结节直径为≥5mm后,分为Bcl-2ASODN实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组3组。实验组用15mg/kgASODN两天一次直接瘤内注射,连用3周,测肿瘤大小变化和组织形态学改变。结果Bcl-2ASODN作用后的NCI-H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低,最大抑瘤率达87.5%(P相似文献   

Bcl-2反义寡核苷酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

背景与目的：研究表明,靶向bcl-2 mRNA的反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynuelectide, ASODN）在体内外可产生抗肿瘤效应。我们已经在bcl-2 mRNA蛋白编码区发现了一个新的有效反义作用靶点,同时证实这个靶点的ASODN能增强白血病及肺癌细胞对化疗药物、放射线的敏感性。本研究进一步探讨bcl-2 ASODN对裸鼠非小细胞肺癌NCl—H460细胞移植瘤的成瘤能力和移植瘤的抑制作用。方法：将经硫代修饰的bcl-2ASODN直接加入到培养的NCl—H460细胞内,MTF法检测细胞生长抑制率．然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时取未经处理的NCl—H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分为bcl-2ASODN实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组。实验组用15mg／kgASODN两天一次直接瘤内注射．连用3周,测肿瘤大小和组织形态学改变。结果：bcl-2ASODN显著抑制NCl—H460细胞的生长,并呈时间依赖性,与无义寡核苷酸组相比．有显著性差异（P〈0．05）。bcl-2ASODN作用后的NCl—H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低。平均成瘤时间延长为12．6天（P〈0．01）,最大抑瘤率达87．5％（P〈0．01）。在处理NCl—H460细胞裸鼠移植瘤过程中．生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组的瘤体进行性增大．而bcl-2ASODN组的瘤块生长缓慢,ASODN处理组与两个对照组相比均有显著性差异（P〈0．05）。处理后第30天剥离瘤块．ASODN处理组分别与两个对照组瘤重相比均有显著性差异（P〈0．01）。bcl-2ASODN处理组裸鼠NCl—H460细胞移植瘤的生长受到明显抑制,抑瘤率为71．0％。病理学检查可见．bcl-2ASODN处理组瘤块内有大片的变性坏死灶．结缔组织增生．炎性细胞浸润：而两个对照组瘤体内癌细胞呈弥漫性密集分布。结论：bcl-2ASODN能降低NCl—H460细胞的成瘤能力．抑制移植瘤生长。     

沉默STAT3基因对人食管癌EC1细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的构建STAT3靶向短发夹RNA（shRNA）质粒,研究其对人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性。方法构建STAT3的siRNA真核表达载体pSUPER-EGFP-STAT3,稳定表达该质粒的细胞为实验组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、免疫组化方法检测STAT3mRNA和蛋白变化。结果裸鼠体内实验显示,实验组肿瘤增长受到明显抑制;HE染色显示对照组肿瘤体积大、异形明显;RT-PCR、免疫组化结果表明实验组STAT3mRNA和蛋白表达下调。结论shRNA沉默STAT3基因能抑制人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调STAT3mRNA和蛋白的表达,为食管癌的基因治疗提供了新的靶点,开辟了新的思路。     

WT1反义寡核苷酸对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用

目的:观察WT1反义寡核苷酸作用后的人卵巢癌细胞株SKOV3在裸鼠皮下的成瘤能力.方法:应用反义寡核苷酸(ASODN)技术,将WT1反义寡核苷酸转染到SKOV3细胞中,然后将这种被转染的细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率.结果:脂质体介导的WT1反义寡核苷酸作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低...     

涎腺腺样囊性癌中Runx3基因启动子区5'-CpG岛的甲基化演进规律

目的 研究涎腺腺样囊性癌(SGACC)中Runx3基因启动子区5'-CpG岛甲基化的关键位点和演进规律.方法 以定量甲基化特异性PCR(qMSP)检测41例SGACC及配对的癌旁正常涎腺组织中Runx3基因启动子区5'-CpG岛(3478 bp)10个位点的甲基化状态,分析Runx3基因甲基化与SGACC临床病理特征的关系,用Logistic模型分析Runx3基因及各位点甲基化在SGACC中发生的危险度.用Western blot法检测19例SGACC及其相应癌旁正常涎腺组织中Runx3蛋白的表达,分析Runx3基因甲基化对Runx3蛋白表达的影响.结果 SGACC及其相应癌旁正常涎腺组织中,Runx3基因启动子区CpG岛(3478 bp)第1～10个位点的甲基化阳性率分别为42.69%～85.69%和22.17%～59.43%,正常涎腺组织中Runx3基因各位点的甲基化率均显著低于SGACC(P＜0.01).其中第1、2位点甲基化程度最高,向转录起始点方向甲基化程度逐渐减弱,在转录起始点位置(第7、8位点)甲基化程度最低,向3'端方向甲基化程度又略微升高.Logistic模型分析结果显示,Runx3甲基化是SGACC发生的一个重要因素,Runx3甲基化从5'端向转录起始点方向演进,转录起始点区可能是Runx3甲基化的关键位点.Western blot检测结果显示,SGACC组织中Runx3蛋白的表达量显著低于相应的癌旁正常涎腺组织(P＜0.01).结论 SGACC组织中Runx3基因甲基化从5'端向转录起始点方向演进,转录起始点部位可能是Runx3基因甲基化的关键位点.Runx3基因甲基化是引起Runx3蛋白表达下调的原因之一,与SGACC的发生有关.     

HIF-1α基因沉默对裸鼠人肺癌移植瘤放射敏感性影响的观察

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默对裸鼠肺癌移植瘤放射敏感性的影响。方法:采用A549和A549/HIF-1α(-)细胞株建立人肺癌移植瘤模型,分别给予5、10、15和20Gy单次剂量X射线照射,观察放射治疗对肿瘤的抑制作用,根据肿瘤生长延缓和照射剂量分析肿瘤剂量效应及HIF-1α基因沉默对在体肿瘤放射敏感性的影响。结果:放射治疗能明显抑制肿瘤生长,并观察到随照射剂量的增加肿瘤生长延缓愈显著,接受等剂量照射HIF-1α基因沉默肿瘤生长延缓更明显,根据肿瘤剂量效应曲线计算放射增敏比分别为1.40、1.34和1.31。结论:放射治疗能显著抑制A549和A549/HIF-1α(-)肿瘤生长,A549/HIF-1α(-)肿瘤对放射治疗更敏感。     

涎腺腺样囊性癌的复发、转移及治疗初析

目的探讨影响涎腺腺样囊性癌的复发及转移的因素.方法对61例涎腺腺样囊性癌做临床病理分析.结果临床分期晚期位于颌下腺、舌下腺肿瘤神经受侵率高,复发率高;肿瘤复发是死亡的主要原因;局部总复发率为47.5%,远地转移率为29.5%,颈淋巴结转移率为9.8%.结论复发率与发病部位、临床分期及治疗方法等相关,外科是主要的治疗方法,放射治疗可以有效地控制病变的发展.     

腺病毒介导VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察腺病毒介导的VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤细胞株MG63裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将Ad-VEGF-siRNA感染MG63,用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测细胞体外增殖活力,反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-poly-merase chain reaction,RT-PCR)法检测VEGF抑制效果。建立裸鼠移植瘤模型,定期瘤内注射Ad-VEGF-siRNA,观察裸鼠致瘤率、肿瘤体积、抑瘤率及免疫组化法检测肿瘤组织中bcl-2的表达。结果:感染Ad-VEGF-siRNA能明显抑制MG63细胞的生长,瘤灶内注射Ad-VEGF-siRNA后裸鼠移植瘤的质量和体积均显著低于对照组(P<0.01)。TUNEL染色显示肿瘤细胞凋亡增加,免疫组化结果提示肿瘤组织中bcl-2表达明显减少(P<0.01)。结论:Ad-VEGF-siRNA可有效而特异地阻断VEGF基因表达,抑制裸鼠移植瘤生长,促进肿瘤细胞的凋亡。     

植入式丝裂霉素控释膜剂的抑瘤作用

目的研究植入式丝裂霉素（mitomycin C-loaded collagen，MMC）控释膜剂对人肝癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用。方法：将0．06、0．12、0．18mg三种不同剂量的MMC控释膜剂植入荷人肝癌裸小鼠皮下移植瘤内，并与用相同剂量的瘤内注射、腹腔注射及对照组比较，观察其抑瘤作用。结果：0．18mgMMC瘤内植入组抑瘤率明显高于对照组（P〈0．01）及0．06mgMMC瘤内植入组（P〈0．05）；0．18mgMMC控释膜剂瘤内植入组抑瘤率也明显高于0．18mgMMC腹腔注射组（P〈0．01）。结论：植入式MMC控释膜剂可能是一种有效治疗原发性肝癌的药物新剂型。     

RNA干扰H-ras基因对鼻咽癌细胞西妥昔单抗敏感性的影响

目的 探讨RNA干扰H-ras基因对鼻咽癌细胞西妥昔单抗敏感性的影响.方法 采用逐步增加剂量法诱导建立西妥昔单抗耐药人鼻咽癌细胞系5-8F/Erbitux.Western blot法检测H-ras和K-ras蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测H-ras和K-ras基因的表达量.构建靶向H-ras基因的shRNA真核表达载体,转染5-8F/Erbitux细胞,分别检测转染后5-8F/Erbitux细胞中H-ras蛋白及基因的表达以及对西妥昔单抗敏感性的改变.结果 西妥昔单抗作用3 d和5 d,5-8F/Erbitux细胞的耐药指数(RI)分别为1.2和1.1.5-8F/Erbitux细胞中,H-ras和K-ras蛋白表达水平分别为0.798±0.019和0.190±0.011,显著高于5-8F细胞(0.075±0.005和0.079±0.009,P＜0.001);5-8F/Erbitux细胞中,H-ras和K-ras基因表达量分别为1.260±0.114和0.850±0.006,与5-8F细胞比较,H-rqs基因表达量显著升高(P=0.016),K-ras基因表达量显著下降(P=0.000).H-ras-shRNA转染后,5-8F/Erbitux细胞中H-ras蛋白及基因表达均下降,细胞凋亡率及西妥昔单抗细胞增殖抑制率均显著升高(P＜0.001).结论 通过下调H-ras基因的表达可以逆转5-8F/Erbitux细胞对西妥昔单抗的耐药,5-8F/Erbitux细胞耐药性的产生与H-ras基因扩增与过表达有关.

Abstract：

Objective To explore the changes of the sensitivity of cetuximab-resistant human nasopharyngeal carcinoma ( hNPC ) cells 5-8F/Erbitux to cetuximab by silencing H-ras gene with RNA interference (RNAi). Methods The 5-8F/Erbitux cells were induced by stepwise exposure to increasing doses of cetuximab. Western blot was conducted to detect the protein levels of H-ras and K-ras. Real-time PCR was employed to detect the expression of H-ras and K-ras. H-ras-shRNA plasmids ( shRNA vector carrying the H-ras gene) were constructed and transferred into 5-8F/Erbitux cells. The gene and protein expression levels of H-ras and the changes of the sensitivity of 5-8F/Erbitux cells to cetuximab after transfection were measured, respectively. Results After treatment with cetuximab for 3 and 5 days, the resistance index (RI) of the 5-8F/Erbitux cells was 1.2 and 1.1, and the protein levels of H-ras and K-ras in 5-8F/Erbitux cells were 0. 798 ± 0. 019 and 0. 190 ± 0.011, respectively, significantly higher than that in the 5-8F cells (P ＜0.001 ). The gene expressions of H-ras and K-ras in 5-8F/Erbitux cells were 1. 260 ±0. 114 and 0. 850 ±0. 006, respectively. Compared with 5-8F cells, the former was higher ( P =0. 016) and the latter was lower (P =0. 000). After transfection with H-ras-shRNA plasmid, the 5-8F/Erbitux cells showed reduced levels of H-ras gene and protein, and the cell apoptosis and inhibition rates increased significantly (P ＜ 0.001 ). Conclusions H-raa siRNA can reverse cetuximab-resistance of 5-8F/Erbitux cells through down-regulation of H-ras gene expression, indicating that the generation of cetuximab-resistance in 5-8F/Erbitux cells is associated with amplification and overexpression of the H-ras gene.     

Pim-1 acts as an oncogene in human salivary gland adenoid cystic carcinoma

Background

Pim-1 (Provirus integration site for Moloney murine leukemia virus 1) belongs to the Ser/Thr kinase family and plays a pivotal role in occurrence and development of oncogenesis. Recent studies have demonstrated that Pim-1 phosphorylates RUNX3 and alters its subcellular localization. However, few studies have concerned the implications of Pim-1 in the salivary gland adenoid cystic carcinoma (ACC). In this study, we aimed to clarify the function of Pim-1 in ACC in vitro. Meanwhile, we measured the levels of Pim-1 and RUNX3 in the ACC tissues. The correlations between Pim-1/RUNX3 levels and clinical parameters were also analyzed.

Methods

SACC-83 and SACC-LM cells were transfected with the Pim-1 siRNA. Pim-1 mRNA and protein expression were measured using real-time PCR and immnuoblot, respectively. Cell proliferation was analyzed by CCK-8 assay. Cell cycle, apoptosis, and mitochondrial membrane potential were detected by flow cytometry. Effects of Pim-1 on cells’ invasion were evaluated by transwell migration assay. Pim-1 and RUNX3 levels in ACC tissues were examined by immunohistochemistry.

Results

Pim-1 siRNA reduces cell proliferation, induces apoptosis, causes cell cycle arrest through cell cycle related proteins (Cyclin D1 and CDK4), mitochondrial depolarization, and decreases invasive ability in SACC-83 and SACC-LM cells. Pim-1 and RUNX3 levels are significantly relevant and associated with T-stage and nerve invasion in the ACC tissues.

Conclusions

This study demonstrates the oncogenic role of Pim-1 in ACC. The findings also suggest that Pim-1 may serve as a neoteric therapeutic target and potential prognostic marker for ACC cancer.

     

全反式维甲酸对EC9706荷瘤裸鼠抑瘤作用的实验研究

目的：观察全反式维甲酸的体内抗肿瘤作用，探讨其体内抑瘤的作用机制。方法：采用裸鼠EC9706人食管癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验研究，应用全反式维甲酸10d后处死裸鼠，观察荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况，测定肿瘤生长抑制率；HE染色对肿瘤组织进行细胞形态学观察，TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡，免疫组织化学法检测凋亡相关基因bax及bcl-2蛋白的表达情况。结果：全反式维甲酸对裸鼠EC9706人食管癌细胞实体瘤生长具有明显的抑制作用，抑瘤率达60％以上。组织学观察及TUNEL检测结果显示，肿瘤组织中散在凋亡细胞和凋亡小体。免疫组织化学检测结果显示，凋亡相关基因bax蛋白表达增加，bcl-2蛋白表达下降。结论：全反式维甲酸具有较强的体内抗肿瘤作用，作用机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

细丝蛋白A抑制荷人结肠腺癌细胞SW480裸鼠移植瘤的生长

目的:探讨细丝蛋白A(fi lamin A,FLNa)基因对人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内成瘤的影响及其可能的机制。方法:将重组载体质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa通过脂质体介导的方式转染到SW480细胞中,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW480/FLNa细胞中FLNa mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的体外增殖能力。将SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况,计算抑瘤率,HE染色观察移植瘤组织的形态学变化,RT-PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)mRNA和蛋白的表达水平。结果:FLNa基因在SW480细胞中获得稳定表达,SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞的体外增殖能力相似;SW480/FLNa组移植瘤的生长速度和质量低于SW480组,抑瘤率为(88.7±3.5)%(P=0.000);SW480/FLNa组移植瘤组织出现退变坏死,MMP-9mRNA和蛋白的表达水平(0.11±0.02和0.02±0.00)均低于SW480组(1.12±0.02和1.25±0.05),差异均有统计学意义(P=0.012,P=0.025)。结论:FLNa基因具有抑制人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内的生长作用,其作用机制可能与下调MMP-9的表达有关。