肝癌特异性细胞毒 T 淋巴细胞的实验及临床研究

诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＴＳ－ＣＴＬｓ），观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其抗肝癌术后复发的临床应用价值。方法：用细胞因子体外短期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８单抗共刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化并随访其术后复发情况。结果：体外研究表明，肝癌细胞经ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＩ类分子，ＩＣＡＭ－１及Ｂ７分子的表达增高，用此细胞辅以ＣＤ２８单抗刺激诱导产生的ＴＳ－ＣＴＬｓ体现了高度的对自体肝癌的杀伤活性及特异性，其杀伤活性由ＴＣＲ－ＣＤ３复合物、ＣＤ８、ＬＦＡ－１、ＩＣＡＭ－１及ＭＨＣＩ类分子所介导。体内研究的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬｓ对ＳＣＩＤ小鼠人肝癌模型具有显著的抑瘤作用。１２例初步临床应用的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬ对于提高机体的Ｔ细胞免疫功能，对于预防肝癌术后复发均具有良好作用，值得进一步深入研究和应用。结论：ＴＳ－ＣＴＬｓ作为一种新的肿瘤特异性免疫治疗方法可望进一步提高肝癌和其它实体肿瘤的外科综合治疗水平。     

原发性肝癌经无水酒精瘤内注射治疗后血液AFPmRNA变化的研究

目的探讨在Ｂ型超声引导下,以无水酒精行肝癌局部注射对原发性肝癌的治疗作用。方法应用巢式逆转录多聚合酶链反应检测无水酒精局部注射治疗前后,肝癌患者周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ变化。结果９例肝癌患者中术前有４例血液ＡＦＰｍＲＮＡ阳性（４／９）;无水酒精瘤内注射治疗３～５次后（２周）,血液ＡＦＰｍＲＮＡ阳性者减至１例（１／９）。结论无水酒精瘤内注射治疗原发性肝癌可以预防或阻止肝癌远处器官转移的发生。     

肝癌病人树突状细胞诱导高效而特异的抗肝癌免疫

目的 以肝癌病人树突状细胞（ＤＣ）体外诱导抗肝癌免疫。方法 自肝癌病人外周血中分离出单个核细胞（ＰＢＭＣ０;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ－４）联合刺激ＰＢＭＣ中ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖,分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２,ＢＥＬ－７４０２,ＬＯＶＯｅｙ ＨＯＳ－８６     

肝癌细胞血行播散与术后复发或转移的关系

目的探讨血液甲胎球蛋白信使核糖核酸（ａｌｐｈａｆｅｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｍｅｓｅｎｇｅｒＲＮＡ,ＡＦＰｍＲＮＡ）阳性肝癌患者与术后复发或转移的联系。方法应用巢式逆转录多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ）检测术后２４小时,４８小时及１周肝癌患者周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ,并随访１～２年。结果术前及术后１周内血液ＡＦＰｍＲＮＡ持续阳性的肝癌患者１２例中,术后１年内出现复发或转移性癌灶６例,术后２年内复发或转移９例;而随访的血液ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的肝癌患者１９例中仅有５例在术后１年内复发,在２年内复发８例,无肝外远处器官转移（１年时,二者差异无显著意义,Ｐ＞００５;２年时,二者差异有显著意义,Ｐ＜００５）。结论术后血液ＡＦＰｍＲＮＡ持续阳性的肝癌患者更容易复发或产生远处转移。     

肝癌切除手术前后周围静脉血液中AFPmRNA的变化及其意义

目的 探讨肝癌革除手术前后周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ的变化及其意义。方法 应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测术后４８小时、７２小时及术后１周肝癌患者周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ，并观察变化。结果 ２８例术前血液中ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的肝癌患者中有４例术后４８小时转为阳性（１４．３０％），但术后１周时复转阴性；而１６例术前血液中ＡＦＰｍＲＮＡ阳性的肝癌患者中有４例（２５．００％）术后７２小时转为阴性。结论 手     

肝癌术后检测血液AFP mRNA及AFP的临床意义

探讨检测患者血液甲种胎儿蛋白信使核糖核酸及甲种胎儿蛋白对判断肝癌术后复发或转移的临床意义。方法 应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测３４例肝癌患者术后２周，４周及６周时周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ及ＡＦＰ的变化，并随访１年。结果 ３４例手术切除的肝癌患者中，术后６周时周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ及仍呈阳性１３例，术后６周内血流ＡＦＰ持续阳性２１例。     

巢式逆转录多聚酶链反应检测循环性肝癌细胞及其临床意义

目的应用巢式逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测血液中播散的循环性肝癌细胞并探讨其意义。方法抽取９３例肝癌患者及３７例对照组患者（１５例肝炎后肝硬变患者,１２例慢性肝炎患者,１０例健康人）周围静脉血液各５ｍｌ,应用巢式ＲＴＰＣＲ检测其周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ。结果共有５０个肝癌血液标本被检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（５３．８％）,而对照组中无一例血液中检测到ＡＦＰｍＲＮＡ,ＡＦＰｍＲＮＡ检出率与肝癌分期（ＴＮＭ）、血清ＡＦＰ浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显联系（Ｐ＜００５）。２１例伴有肝外远处转移的原发性肝癌血液标本均被检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（１００％）,没有远处转移的７２例肝癌血液标本中２９例检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（４０３％）。结论ＡＦＰｍＲＮＡ可以作为肝癌细胞血液转移的标志,也可作为肝癌远处转移的预测性指标之一。     

复发性肝癌血液AFP mRNA的变化

我们通过本研究探讨复发性肝癌血液ＡＦＰｍＲＮＡ表达情况及其与肝癌复发来源的联系,现将结果报道如下。一、对象与方法１．实验对象　选择在１９９５年１１月～１９９６年１０月收入我院及长海医院康复部的复发性肝癌１９例,其中男性１７例,女性２例,年龄在４５～６２岁,平均年龄５２．５岁,其血清ＡＦＰ在４００～３００００μｇ／Ｌ（酶联法测定）。以上患者均经Ｂ超,ＣＴ或ＭＲＩ检查及血清ＡＦＰ检测证实为肝癌术后复发,且术前血液ＡＦＰ均为阳性,肝癌复发时肿瘤直径在２～６ｃｍ之间。同期５３例手术切除１年未复发的肝癌患…     

肝癌特异性细胞毒T淋巴细胞的实施及临床研究

诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞，观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其扩上癌术后复发的临床应用价值。方法用细胞因子体外周期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８产市民人刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化随访其术后复发情况。结果，体外研究表明，肝癌细胞经ＩＮＦ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＯＤ     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对肝癌血管形成的抑制作用

本研究旨在通过人工合成的血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)反义寡核苷酸片段 ,在细胞水平检测其对肝癌细胞ＶＥＧＦ表达的抑制作用 ,探求一种新的抑制肝癌血管形成的基因治疗方法。一、材料和方法1.寡核苷酸 (ＯＤＮ)为上海生物工程公司利用美国ＰＥ公司 391型ＤＮＡ自动合成仪合成 ,ＰＡＧＥ电泳纯化 ,碱基序列为 :反义ＯＤＮ 5′ ＧＣＡＧＴＡＧＣＴＧＣＧＣＴＣＡＴＡＧＣＧＣ 3′,正义ＯＤＮ5′ ＣＴＡＴＣＡＧＣＧＣＡＧＣＴＡＣＴＧＣ 3′ ;人肝癌细胞系 772 1由第四军医大学病理86 3课题组提供。2 .以 1ｇ/ＬⅣ型胶原酶 (Ｓｉｇｍａ公司…     

人肝癌裸鼠转移模型中纤溶酶原激活物抑制剂变化与肝癌生物学特性

目的研究纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ１）与肝细胞癌（ＨＣＣ）生物学特性的关系。方法构建ＬＣＩＤ２０人肝细胞癌裸鼠转移模型（肝癌转移模型）４０例,用ＰＡＩ１试剂盒和ＰＡＩ１单抗分别做酶活性检测和免疫组化,观测肝癌转移模型发展过程中ＰＡＩ１的变化。结果肝癌转移模型从肿瘤发生早期（２周）至晚期（５周）,血浆ＰＡＩ１从６２±１８Ａｕ／ｍｌ增至１５４±０７Ａｕ／ｍｌ,Ｐ＜００５。肿瘤组织中ＰＡＩ１从０４±０１Ａｕ／ｍｇ增至０８±０３Ａｕ／ｍｇ;血浆中ＰＡＩ１改变与肿瘤大小和ＡＦＰ变化相关（ｒ＝０９６４８和ｒ＝０９５４４,Ｐ＜００５和Ｐ＜００５）。结论肝癌转移模型肿瘤组织及血浆中ＰＡＩ１随ＨＣＣ病程进展逐步升高。ＰＡＩ１与ＨＣＣ肿瘤增长和ＡＦＰ升高有良好的相关性。ＰＡＩ１与ＨＣＣ侵袭性及预后密切相关     

卡培他滨抑制高转移性人肝癌LCID20生长和转移的研究

目的 观察５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）前体物质卡培他滨对高转移潜能肝癌ＬＣＩＤ２０生长和转移的抑制作用。方法 用免疫组织化学方法检测６１例人肝癌组织中血小板衍化内皮细胞生长因子（ＰＤ－ＥＣＧＦ）蛋白水平。１８只裸鼠人肝癌高转移模型ＬＣＩＤ２０于肿瘤种植后第３天分别采用ＣＡＰ和５－Ｆｕ治疗。停药后３天处死裸鼠,测量肿瘤的长短径,检测裸鼠肝功能和血浆甲胎蛋白（ＡＦＰ）水平;苏木素－伊红（ＨＥ）染色检测肺转     

抗人甲胎蛋白异质体单克隆抗体放射免疫检测原发性肝癌的临床研究

为了探讨抗人小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白异质体单克隆抗体（ＡＦＰ－Ｒ－ＬＣＡＭｃＡｂ）对甲胎蛋白阳性肝癌细胞的特异性及亲和力，作者经周围静脉应用放射性核素１３１Ｉ标记的ＡＦＰ－Ｒ－ＬＣＡ－ＭｃＡｂ对原发性肝癌及肝炎后肝硬变患者进行了放免显像研究。结果显示：１３１Ｉ标记的ＡＦＰ－Ｒ－ＬＣＡＭｃＡｂ能选择性地在６例甲胎蛋白阳性肝癌患者肿瘤组织内积聚，而６例甲胎蛋白阴性肝癌患者及４例肝炎后肝硬变患者肿瘤区及肝内均无放射性积聚。作者认为ＡＦＰ－Ｒ－ＬＣＡＭｃＡｂ对甲胎蛋白阳性原发性肝癌细胞具较强的特异性亲和力，有希望成为肝癌放免检测及治疗的理想载体。     

微波透热致肝癌血管破裂大出血一例

病人，男，４８岁。患乙型肝炎２０年，２年前ＣＴ发现肝右叶及肝门有占位病变，查ＡＦＰ１０μｇ／Ｌ，肝穿活检证实为：①结节性肝硬化；②肝细胞癌及血管内癌栓。在我院行ＴＡＣＥ治疗共４次。４个月前再入院，ＣＴ见右肝癌灶碘油积聚好，但周边出现３个直径３４ｃｍ子灶，肝固有动脉闭塞，经胃网膜右静脉植入ＤＤＳ，同时行巨脾切除术。术后经泵ＡＭＦ方案化疗２次，结合免疫治疗。因右上腹痛合并黄疸入院行肝区微波透热治疗，以改善症状。用ＺＭＴ１型微波治疗仪（北京科跃机电控制工程研究中心生产），频率９１５ＭＨｚ，设定温度…     

原发性肝癌病人手术前后细胞免疫功能的动态观察

观察２２例原发性肝癌病人手术前后的ＮＫ细胞活性和Ｔ细胞亚群的动态变化。结果：（１）与对照组比较，肝癌病人枚前ＮＫ细胞活性、ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋、ＣＤ４＾＋／ＣＤ６＾＋显著降低，而ＣＤ８＾＋明显升高；（２）肝癌病人细胞免疫功能在手术后１周明显受抑制，术后２周开始有改善，术后４周后恢复至正常水平；（３）病人一旦有复发或转移，其细胞免疫功能可再次呈现受抑制状态，原发性肝癌病人以抑制是由于肿瘤负荷，彻底     

体外诱导骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞的实验研究

研究诱导骨肉瘤特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞,及其体内外的抗肿瘤作用。方法：通过生化方法提取纯化骨肉瘤相关抗原,并与低剂量ＩＬ２、ＣＤ３ＭｃＡｂ协同刺激骨肉瘤致敏的淋巴细胞诱导产生ＯＳＳ－ＣＴＬ。结果：ＯＳＳ－ＣＴＬ表型特征为以ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＴＬ为主的异质细胞群;对ＯＳＡＡ相关的肉瘤细胞显示高亲和杀伤活性。     

多项肿瘤标志物联合检测早期诊断原发性肝癌的研究

目的 探讨贩发性肝癌（ＰＨＣ）的检出率,早期诊断原发性肝癌的方法。方法 对５０例ＰＨＣ患者,３０例肝外恶性肿瘤９ＮＨＣ）患者及３０例肝硬化（ＬＣ）患者以甲胎蛋白（ＡＦＰ）的检测为主体,配合谷氨酰转肽酶、α－Ｌ岩藻糖苷酶（ＡＦＵ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）和ＤＲ－７０＾ＴＭ检测,比较优化组合,联合检测的结果。结果 ＡＦＰ阴性的ＰＨＣ患者中,ＡＦＵ、γ－ＧＴ、ＴＮＦ－α和ＤＲ－７０＾ＴＭ５项指标联合     

细胞分化诱导剂防治裸鼠肝癌转移复发的疗效

目的研究ＣＤＡ－Ⅱ对裸鼠早期（转移前）和晚期（转移后）肝癌切除术后转移复发的防治效果。方法裸鼠人肝癌高转移模型肿瘤接种后,于转移发生前后分别行肝癌切除术,术后皮下注射ＣＤＡ－Ⅱ。肿瘤接种后３５天处死动物,记录动物体重、切缘复发、肝内转移、和远处转移情况。结果早、晚期肝癌切除术后应用ＣＤＡ－Ⅱ组动物体重较高,肝内转移和远处转移累及脏器数均少于对照组,局部复发灶也小于对照组。结论ＣＤＡ－Ⅱ对裸鼠早期和晚期肝癌切除术后的转移复发有防治作用。     

快速ACTH刺激试验及其对女性多毛症的诊断价值

本研究以血皮质醇（Ｆ）、１７α－羟孕酮（１７αＯＨＰ）、脱氢表雄酮（ＤＨＥＡ）及睾酮（Ｔ）为指标，观察快速１一２４促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）刺激试验时正常妇女及女性多毛症病人，包括２１－羟化酶缺陷的先天性肾上腺皮质增生症（ＣＡＨ）、多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）、特发性多毛症（ＩＨ）及迟发型ＣＡＨ（ＬＯＡＨ）等对１一２４ＡＣＴＨ的反应。１０名正常妇女静注１－２４ＡＣＴＨ２５０ｕｇ后，血Ｆ、ＤＨＥＡ、１７α－ＯＨＰ明显升高，血Ｔ对１－２４ＡＣＴＨ刺激无反应。６例ＣＡＨ病人血１７αＯＨＰ及ＤＨＥＡ基础值均较正常人明显增高（Ｐ＜０００１）。２０例ＰＣＯｓ及１１例ＩＨ病人血１７αＯＨＰ基础值较正常女性为高（Ｐ＜０．０５）。１－２４ＡＣＴＨ刺激后，血１７αＯＨＰ净增值（△１７αＯＨＰ）与正常女性无明显差别（Ｐ＞０．０５）。２例ＬＯＡＨ病人血１７αＯＨＰ基础值较高，刺激后有效大幅度升高，呈高反应。根据以上结果，我们认为，以１７αＯＨＰ为指标进行快速１－２４ＡＣＴＨ刺激试验有助于鉴别各种原因的女性多毛     

肝癌和肝硬化组织中凋亡信号蛋白的表达

凋亡信号蛋白表达异常 ,往往会影响肝细胞凋亡 ,从而引起肝癌。众所周知 :肝硬化同肝癌关系密切。我们采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ免疫印迹法检测凋亡信号蛋白 :Ｆａｓ相关死亡区域蛋白 (ＦＡＤＤ)、肿瘤坏死因子受体相关死亡区域蛋白(ＴＲＡＤＤ)、ＦａｓＬ、Ｆａｓ和核因子 κＢ (ＮＦ κＢ)在肝癌 (ＨＣＣ)和肝硬化 (ＬＣ)组织中的表达 ,探讨它们的表达同ＨＣＣ和ＬＣ的关系。一、对象和方法1.标本 :本院 2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 1年4月间 35例原发性肝癌手术切除标本 ,病理诊断均为肝细胞性肝癌。 35例门静脉高压症患者术中肝硬化活检标…