TRAF6敲低对低氧状态下IL⁃17调控人牙周膜成纤维细胞表达OPG及RANKL的影响

目的：探讨敲低肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor?associated factor 6,TRAF6）对人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）在低氧状态经白介素17（interleukin 17,IL?17）刺激表达骨保护素（osteoprotegerin,OPG）及核因子κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor?κB ligand,RANKL）的影响。方法：将hPDLCs细胞设为常氧加IL?17组、低氧加IL?17组以及单纯低氧组,每组内分为阴性对照组（TRAF6?NC组）和干扰组（TRAF6?shRNA组）。将靶向TRAF6基因的shRNA慢病毒载体（TRAF6?shRNA）感染hPDLCs,通过倒置显微镜观察病毒感染效率并用RT?PCR方法验证,用Western blot及RT?PCR方法检测分析hPDLCs低氧诱导因子（hypoxia inducible factor?1,HIF?1）、OPG及RANKL的表达变化。结果：低氧加IL?17组RANKL与OPG蛋白相对表达量的比值RANKL/OPG高于常氧加IL?17组及低氧组。在低氧加IL?17条件下,与TRAF6?NC组相比,TRAF6?shRNA组RANKL表达减少,RANKL与OPG相对表达量的比值RANKL/OPG减少。结论：TRAF6参与低氧状态下IL?17刺激hPDLCs表达骨吸收分子的调控,敲低TRAF6可使低氧状态下IL?17诱导的hPDLCs表达骨吸收分子减少。     

白细胞介素-17对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL、OPG的影响

目的 研究白细胞介素17(IL-17)水平对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)表达的影响,探讨IL-17与正畸牙根吸收的相关性.方法 采用组织块培养法,在体外建立人牙周膜成纤维细胞系.以不同水平(0、5、10、20、40 ng/mL)的IL-17作用HPDLF 24 h.采用RT-PCR和ELISA法,分别检测RANKL和OPG的mRNA、蛋白的表达.结果 (1)在0 ng/mL组中,HPDLF表达RANKL、OPG.(2)0～20 ng/mL各组中,HPDLF中RANKL的mRNA、蛋白表达量与IL-17水平呈正相关性.(3)5～20 ng/mL各组中,OPG的mRNA、蛋白表达量与IL-17水平呈负相关性.(4)0～20 ng/mL组中,RANKL/OPG的mRNA、蛋白的比值与IL-17水平呈正相关性.结论 在无IL-17刺激时,HPDLF可表达RANKL、OPG.IL-17能够促进HPDLF表达RANKL,同时抑制HPDLF表达OPG,上调RANKL/OPG的比值.     

大鼠正畸牙移动过程中白介素-10对RANKL／OPG因子表达的影响

目的研究白细胞介素-10（IL-10）在大鼠正畸牙移动进程中,对核因子KB配体受体激活子（RANKL）／护骨素（OPG）表达的影响。方法SD大鼠32只随机分为对照组（局部注射PBS缓冲液圾实验组各16只,实验组分为4个小组,每小组4只,局部注射IL～10,剂量分别为0．4μg／mL、0．8μg／mL、0．16μg／mL、0．032μg／mL;应用免疫组织化学染色法及ELISA法分析牙周组织中的RANKL及牙周膜细胞中的OPG的表达情况。结果与对照组及0．032μg／mL组相比,4μg／mL、0.8μg／mL、0．16μg／mL各小组RANKL的阳性表达面积比显著降低;而OPG（4μg／mL）组呈现出逐渐增加的趋势。结论IL—10能抑制牙周组织RANKL的表达及增加大鼠牙周膜细胞OPG表达,减弱破骨／破牙骨质细胞的作用。     

TNF-α对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）的核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）及其饵受体骨保护素（OPG）mRNA表达的影响,了解TNF-α在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法 将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的TNF-α处理24h,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达强度变化。结果 TNF-α上调人牙周膜成纤维细胞的RANKLmRNA表达,RANKL／OPG比率呈上升趋势。结论TNF-α通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL／OPG的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性,从而影响骨代谢。     

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的：研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响，探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子机制。方法：3月龄wistar（雌雄各半）30只，随机分为阿胶强骨口服液，雌激素，及生理盐水对照组，灌胃7d后，制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞，制成单细胞悬液，消化传代，取二代培养的成骨细胞，制成细胞悬液。培养细胞分为5组，分别加同体积药液，对照组仅加培养液，继续培养。采用MTT比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷（3H—TdR）渗入法测定成骨细胞增殖，用放免法测定细胞内BGP含量，RT—PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。蛄果：阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖，与对照组相比，差异显著（P〈0．05）。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清1000ml／L时最强，与雌激素组比较无显著性差异（P〉0．05），且明显高于对照组（P〈0．05）。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异（P〉005），且明显低于对照组（P〈0．05）。结论：阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂，分子水平上调节OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。     

神经元特异性烯醇化酶和U266细胞株对破骨样细胞作用的研究

目的：探讨神经元特异性烯醇化酶（NSE）和人多发性骨髓瘤细胞U266对人破骨样细胞（OLC）功能的影响。方法采用正常人外周血单个核细胞加用细胞核因子κB受体激治蛋白配体（RANKL）＋巨噬细胞集落刺激因子（M‐CSF）的方法诱导培养OLC ;实验分3组,NSE组：将6孔培养板中培养14 d的OLC ,分别加入100 ng／mL重组人NSE培养24、48、72 h;共培养组：将6孔Transwell小室下室中培养14 d的OLC ,各上室分别加入1×105／孔U266细胞进行共培养24、48、72 h;对照组：单独培养的OLC。通过实时荧光定量PCR比较NSE和U266细胞株对OLC的RANKL、扩胃蛋白（OPG）、IL‐6和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP） mRNA转录水平的影响。结果共培养组、NSE组和对照组RANKL、OPG、IL‐6 mRNA在OLC均不表达;与对照组相比,共培养组、NSE组的TRAP mRNA表达水平升高,差异有统计学意义（P＜0．01）;TRAP mRNA表达水平的升高尤其以48 h和72 h明显。结论本试验中OLC表达TRAP ,NSE是促进骨髓瘤骨病中OLC分化和成熟的因素,提示NSE能增强OLC的活性。     

Effects of Serum Containing Jiangu Granules on Expression of OPG and RANKL mRNA in Osteoblast-like Cells

目的 观察健骨颗粒含药血清对OPG、RANKL mRNA表达的影响.方法 制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的成骨样细胞ROS17/2.8,干预48 h后,用MTT法检测细胞增殖,荧光定量PCR检测OPG、RANKL mRNA表达.结果 中药血清组对OPG mRNA表达较生理盐水血清组上升,对RANKL mRNA表达较生理盐水血清组降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 健骨颗粒含药血清能促进成骨样细胞的OPG mRNA表达并抑制其RANKL mRNA表达.     

TRAF6敲低对低氧状态下IL-17调控人牙周膜细胞表达OPG及RANKL的影响

目的：探讨TRAF6敲低对人牙周膜细胞在低氧状态经IL-17刺激表达OPG及RANKL的影响。方法：将实验设为常氧加IL-17组、低氧加IL-17组以及单纯低氧组,每组内分为空载组(TRAF6-NC组)和干扰组(TRAF6-shRNA组)。将靶向TRAF6基因的shRNA慢病毒载体(TRAF6-shRNA)感染人牙周膜细胞,通过倒置显微镜观察病毒感染效率并用RT-PCR方法验证,用Western blot 及RT-PCR方法检测分析人牙周膜细胞表达HIF-1α、OPG及RANKL的变化。结果：低氧加IL-17组RANKL与OPG蛋白相对表达量的比值RANKL/OPG高于低氧组。在低氧加IL-17条件下,与TRAF6-NC组相比,TRAF6-shRNA组RANKL表达减少,RANKL与OPG相对表达量的比值RANKL/OPG减少。结论：TRAF6参与低氧状态下IL-17刺激人牙周膜细胞表达骨吸收分子的调控,敲低TRAF6可使低氧状态下IL-17诱导的人牙周膜细胞表达骨吸收分子减少。     

含利塞膦酸骨水泥对SD大鼠成骨细胞OPG、RANKL和OC表达的影响

目的 利用大鼠胎鼠分离提取成骨细胞,观察含15％磷酸二氢钙＋0.5％利塞膦酸骨水泥和1％利塞膦酸骨水泥对体外培养的大鼠成骨细胞OPG、RANKL和OC基因表达的作用.方法 实验分成空白对照组、15％磷酸二氢钙＋0.5％利塞膦酸骨水泥浸提液组和1％利塞膦酸骨水泥浸提液组.实验组细胞培养基中加入相对应的磷硅酸钙骨水泥的PBS浸提液,浸提液以1：7与DMEM培养基混合作为细胞培养基;空白对照组成分以无菌PBS与DMEM培养基混合作为细胞培养基,每组6个平行,培养72 h后,提取细胞总RNA,应用RT·PCR法检测细胞中OPG、RANKL和OC的mRNA表达.结果 实验组成骨细胞中OPG和OC的mRNA表达较对照组的表达明显升高,RANKL的表达明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 含15％磷酸二氢钙的0.5％利塞膦酸骨水泥和1％利塞膦酸骨水泥浸提液对SD大鼠胎鼠成骨细胞OPG和OC的表达具有促进作用,同时降低了RANKL的表达.     

肾小管上皮细胞对成骨细胞骨代谢相关基因表达的体外调节

目的观察近端肾小管上皮细胞对成骨细胞骨代谢相关基因表达的直接调节作用。方法体外分离培养大鼠近端肾小管上皮细胞与头盖骨成骨细胞;用甲状旁腺激素（PTH）、137^Cs-γ线及25（OH）D3预作用前者,再与后者分为4组共培养：①单培养组（成骨细胞单培养）、②共培养组（肾小管上皮细胞与成骨细胞共培养）、③刺激共培养组（肾小管上皮细胞经PTH＋25（OH）D3处理,再与成骨细胞共培养）、④抑制共培养组（肾小管上皮细胞经137^Cs-γ线照射＋25（OH）D3处理,再与成骨细胞共培养）;并用RT-PCR方法检测共培养体系中成骨细胞的BGP、ALP、ColI、RANKL与OPG mRNA表达。结果共培养组成骨细胞的骨形成相关基因BGP、ALP、Col I mRNA表达较单培养组显著降低（P〈0．001）;刺激共培养组各基因表达较共培养组显著上升（P〈0．05-P〈0．001）;抑制共培养组ALP表达水平较共培养组显著降低（P〈0．001）,BGP与Col I mRNA表达无显著变化。共培养组与单培养组比较,RANKL与OPC;mRNA表达显著降低（P〈0．001）,但RANKL／OPG比值显著高于后者（P〈0．01）;刺激共培养组与共培养组比较,OPG mRNA表达明显上调（P〈0．01）, RANKL mRNA表达变化无显著意义。RANKL／OPG比值显著降低（P〈0．05）;抑制共培养组与共培养组比较, OPG表达显著下降（P〈0．01）,RANKL/OPG比值则显著增高（P〈0．01）。结论培养的近端肾小管上皮细胞对成骨细胞骨代谢相关基因表达具有直接的调节作用。建立的共培养体系可用于骨代谢相关药物筛选及作用机制研究。     

骨髓基质干细胞移植联合低频振动刺激治疗骨缺损中OPG/RANKL基因表达

目的 通过活体动物实验,探究低频振动对骨髓基质干细胞(BMSC)骨向分化调控能力及其OPG、RANKL基因表达的影响.方法 BMSC结合骨基质明胶(BMG)移植联合低频振动刺激治疗骨缺损,随机分为非振动对照组和不同频率振动组,振动组于第7天开始接受振动干预5周,振动结束后对不同频率振动组别BMSC OPG、RANKL mRNA进行检测.结果 振动组BMSC OPG、RANKL基因表达明显上调(P＜0.05),以25 Hz显著(P＜0.01);100 Hz振动组BMSC OPG、RANKL基因表达下调(P＜0.05).结论 低频振动可调控BMSC的骨向分化,可能通过调节OPG/RANKLmRNA的表达直接促进骨形成,抑制骨吸收.

Abstract：

Objective To explore the effect of low frequency vibration (LFV)on the osteogenic differentiation regulating capability of bone marrow stromal cell (BMSC) and the expressions of OPG (osteoprotegerin) mRNA and RANKL (nuclear factor kappa B ligand) mRNA through living animal experiment. Methods Both BMSC transplantation and low-frequency vibration were employed to treat bone defects. The groups were randomized into non-vibration and vibration of different frequencies. The vibration group received vibrating interventions at Day 7 for 5 weeks. After vibrations, the BMSC OPG and RANKL mRNA of different frequency groups were detected. Results The BMSC OPG and RANKL gene expressions significantly increased ( P ＜ 0. 05 ), especially at 25 Hz (P ＜ 0. 01 ). And for the vibration group at 100 Hz,the BMSC OPG and RANKL gene expressions decreased ( P ＜ 0. 05). Conclusion Low-frequency vibration may promote the osteogenic differentiation capability of BMSC probably through regulating the OPG/RANKL mRNA expression, directly promoting bone formation and inhibiting bone resorption.     

17-β雌二醇对人牙周膜细胞骨向分化时核因子κB受体激动子配体和骨保护因子表达的影响

目的:探讨17-β雌二醇(E2)对人牙周膜细胞(hPDLCs)骨向分化时核因子κB受体激动子配体(RANKL)和骨保护因子(OPG)表达的影响.方法:采用剂量对照设计,评价四代hPDLCs分别在含有0.1%无水乙醇(对照组)、10^-10mol/L E2(生理剂量组)或10^-7mol/L E2(高剂量组)的矿化诱导培养基中培养至72 h,时间点的观察荧光定量RT-PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平.结果:高剂量和生理剂量E2均下调hPDLCs的RANKLmRNA的表达水平.高剂量组随时间增加RANKL的表达水平逐渐降低,第24,48和72小时的表达水平分别为对照组的31.0%,23.6%和15.4%;生理剂量组各时间点分别为对照组的28.4%,87.3%和22.6%.不同剂量E2均上调hPDLCs的OPG mRNA的表达水平,尤以第72小时作用明显,生理剂量组表达水平为对照组的210.1%;高剂量组为对照组的171.3%.结论:17-β雌二醇可能通过下调hPDLCs骨向分化时RANKL的表达并上调OPG的表达抑制破骨细胞的分化和牙槽骨的吸收,从而发挥对牙周组织的保护作用.     

重组人骨保护素对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL 、OPG蛋白表达的影响

目的：探讨重组人骨保护素（rhOPG）对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG蛋白表达的影响,为rhOPG应用于牙周炎的治疗提供实验依据。方法选择22只Wistar大鼠,采用随机数字表法选择2只健康大鼠作为健康组;其余20只作为实验组,建立牙周炎大鼠模型,再将其分为实验对照组（n＝10）和rhOPG组（n＝10）,rhOPG组大鼠于上颌第2磨牙牙周袋间隙局部注入10 mg／kg rhOPG治疗。实验对照组大鼠于相同部位注射等体积灭菌注射用水。采用链霉素抗生物素蛋白‐过氧化物酶（SP）检测牙槽骨RANKL、OPG蛋白的表达。结果与健康组比较,实验组大鼠牙槽骨OPG表达水平较低,差异有统计学意义（P＜0．05）,而RANKL表达水平两组差异无统计学意义（P＞0．05）。与实验对照组比较,rhOPG组大鼠牙槽骨组织OPG蛋白的表达水平明显上调,而RANKL蛋白的表达明显下调（P＜0．05）。治疗后rhOPG组大鼠牙槽骨中OPG表达水平明显高于治疗前,而RANKL表达水平明显低于治疗前,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 rhOPG能调节牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG的表达。     

慢性间歇低氧对小鼠骨密度和骨代谢的影响

目的：探讨慢性间歇低氧（CIH）对骨密度（BMD）和骨代谢的影响。方法将16只12周龄C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为慢性间歇低氧组（CIH组）和正常对照组（CON组）,每组8只。CON组小鼠在正常环境下饲养,CIH组小鼠在间歇低氧环境下饲养,低氧暴露时间为每日9：00-17：00,6d/周,共8周。于8周末取血,用ELISA法测定血清抗酒石酸酸性磷酸5b （TRACP-5b）、骨钙素（OC）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;取右侧股骨检测其BMD;取左侧股骨观察骨组织形态学改变,并分别采用免疫组化和real- time qPCR法检测骨保护蛋白（OPG）和核因子-κβ受体活化因子配体（RANKL）和其mRNA表达。结果与CON组相比,CIH组小鼠BMD、血清OC水平及OPG/RANKL mRNA比值均明显下降（P＜0.05或0.01）,而血清TRACP-5b、IL-6和TNF-α水平、骨组织内RANKL和mRNA表达均明显升高（P＜0.05或0.01）;但骨组织内OPG和mR-NA表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）;小鼠股骨干骺端骨小梁分布稀疏,变细及断裂。血清IL-6水平与BMD呈负相关（P＜0.05）,与骨组织RANKL mRNA呈正相关（P＜0.01）;血清TNF-α水平与BMD呈负相关（P＜0.01）,与骨组织RANKL mRNA呈正相关（P＜0.05）。结论 CIH能导致骨吸收增加、骨形成下降和BMD下降,与低氧以及CIH引起的IL-6、TNF-α水平升高导致RANKL升高有关。     

核因子-κB受体活化因子配体和骨保护素在慢性根尖周炎病损组织中的表达

目的:检测核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)这两个调控骨吸收的关键因子,在人类根尖肉芽肿(periapical granuloma,PG)和根尖囊肿(radicular cyst,RC)病损组织中的表达.方法:选择小鼠单克隆抗体为一抗,采用免疫组织化学Envison法检测20例根尖肉芽肿和20例根尖囊肿组织中RANKL和OPG的表达.选择6例因正畸需要拔除的健康牙齿的牙周膜组织作为对照.结果:在根尖肉芽肿和根尖囊肿组织中的RANKL蛋白表达均明显强于对照组中的RANKL表达[(43.74±8.40)vs(15.47±2.59),(40.33±7.53)vs(15.47±2.59),均P=0.000],但根尖肉芽肿和根尖囊肿组织之间的RANKL表达差异无统计学意义.在根尖肉芽肿、根尖囊肿和对照组中的OPG蛋白表达水平分别为27.81±5.17,26.35±3.86和24.33±3.50,3组间的OPG表达差异无统计学意义.根尖肉芽肿和根尖囊肿组织中的RANKL/OPG比率与对照组相比,均有显著上升[(1.59±0.26)vs(0.64±0.10),(1.54±0.24)vs(0.64±0.10),均P=0.000],但RANKL/OPG的比率在根尖肉芽肿和根尖囊肿两组间的差异无统计学意义.结论:RNAKL和OPG均能表达于慢性根尖周炎病损组织中.RANKL可能与慢性根尖周炎骨吸收活动关系密切,同时RANKL和OPG可能在根尖周病的疾病进展中发挥了重要作用.     

骨破坏因子RANK RANKL OPG在口腔领域研究进展

OPG/RANKL/RANK系统信号通路对调节破骨细胞分化与骨吸收过程中具有至关重要的作用。成骨细胞及骨髓基质细胞表达RANKL与破骨细胞前体细胞或破骨细胞表面上的RANK结合后,促进破骨细胞的分化与激活,并抑制破骨细胞的凋亡;另一方面成骨细胞及骨髓基质细胞则分泌表达OPG与RANKL竞争性结合,阻止RANKL与RANK的结合。作为破骨细胞形成、分化和骨吸收调节的关键调节物OPG/RANKL/RANK系统信号通路在口腔领域中乳牙的萌出及替换、正畸牙的移动、牙周炎等生理性及病理性过程中的改建发挥功能。     

Receptor activator of nuclear factor kappa B ligand and osteoprotegerin expression in chronic apical periodontitis: possible association with inflammatory cells

Background  Receptor activator of nuclear factor kappa B (NF-κB) ligand (RANKL) and osteoprotegerin (OPG) have been recently shown to play important roles in bone resorption. The aim of this study was to investigate the possible association between the expression of bone resorption regulators (RANKL and OPG) and inflammatory cell infiltration in chronic apical periodontitis.

Methods  The samples of chronic periapical lesions (n=40) and healthy periapical tissues (n=10) were examined for immunohistochemical analysis of RANKL and OPG. Lesion samples were further analyzed for the inflammatory infiltration condition. The inflammatory cell infiltration was scored in relation to immunohistochemical reactivity for CD3, CD20 and CD68.

Results  The number of RANKL-positive cells and the ratio of RANKL/OPG in chronic apical periodontitis were significantly higher than those in healthy periapical tissues (P <0.001). The number of RANKL-positive cells was higher in lesions with severe inflammatory infiltration than in those with light inflammatory infiltration (P <0.05). Significantly increased RANKL expression was found with T lymphocytes (CD3⁺), macrophages (CD68⁺) and B lymphocytes (CD20⁺) infiltration (P <0.05). No association was found between the ratio of RANKL/OPG and inflammatory cell infiltration.

Conclusions  RANKL expression was increased with T, B lymphocytes and macrophages infiltration, respectively in chronic periapical lesions. RANKL appears to be closely related to periapical inflammatory infiltrates. The relative ratio of RANKL/OPG may be a key determinant of RANKL-mediated bone resorption.

     

低氧/低氧诱导因子-1α通路对成骨细胞与破骨细胞耦联的调控作用

目的 探讨低氧/低氧诱导因子(HIF) -1α通路对成骨细胞与破骨细胞耦联的调控作用.方法 取出生2～3d条件性基因敲除小鼠颅盖骨的成骨细胞与4～8周龄C57BL/6小鼠股骨破骨细胞的前体细胞,建立基因敲除小鼠成骨细胞与破骨细胞前体细胞共培养体系(野生型、HIF-1α-/-、Vhl-/-、HIF - 1α-/-/Vhl -/-共培养).采用RT-PCR技术检测成骨细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL) mRNA和骨保护素(OPG) mRNA的表达以及破骨细胞中标志酶基因TRAP mRNA的表达,甲苯胺蓝染色观察破骨细胞溶骨形成的骨陷窝.结果 RT-PCR检测结果显示:与野生型共培养比较,HIF-1α-/-共培养的成骨细胞中RANKL mRNA表达上调、OPG mRNA表达下调(均P＜0.05),破骨细胞TRAP mRNA表达上调;Vhl-/-共培养和HIF-1α-/-/Vhl-/-共培养的成骨细胞中RANKL mRNA表达下调、OPG mRNA表达显著上调(均P＜0.05),破骨细胞TRAP mRNA表达下调;随着共培养时间的延长,成骨细胞中RANKL mRNA和OPG mRNA表达均逐渐减少,而破骨细胞TRAP mRNA表达均逐渐增加.甲苯胺蓝染色倒置显微镜观察显示:共培养第9天,破骨细胞骨吸收陷窝出现;随着共培养时间的延长,骨吸收陷窝面积和深度逐渐增加;与野生型共培养比较,HIF-1α-/-共培养的破骨细胞骨吸收陷窝较大且较深,Vhl-/-和HIF-1α-/-/Vhl-/-共培养的破骨细胞骨吸收陷窝较小且较浅.结论 低氧/HIF-1α通路激活后,成骨细胞抑制破骨细胞的分化功能;低氧/HIF-1α通路阻断后,成骨细胞促进破骨细胞的分化功能.