神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨神经生长因子（NGF）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法将120只雄性Wistar大鼠随机分为脑缺血组、NGF组及对照组各40只。脑缺血组、NGF组采用大脑中动脉内栓线阻断法造成大鼠局灶性损伤模型,NGF组术后即刻肌注NGF1000BU,脑缺血组和对照组注射等量生理盐水。观测三组不同时间点神经学评分改变及一氧化氮合酶（NOS）水平变化。结果与脑缺血组比较,NGF组神经学评分及NOS水平明显降低（P〈0．05）。结论NGF对脑缺血再灌注损伤有保护作用,可能机制为抑制NOS活性。     

黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织神经生长因子表达的影响

目的 观察黄体酮对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后缺血区皮层神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)在mRNA与蛋白质水平表达的影响,探讨黄体酮在脑缺血-再灌注损伤中的脑保护作用机制. 方法 采用SD雄性大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型.将96只大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、溶剂组和黄体酮组各24只.应用Real time-PCR和Western blot技术分别对缺血区皮层NGF和BDNF mRNA与蛋白表达情况进行测定. 结果 在缺血区皮层,缺血2h再灌注6h后,缺血再灌注组NGF和BDNF的mRNA及蛋白质表达达高峰,再灌注24 h后,回复到假手术组水平;缺血2h再灌注12 h后,黄体酮组NGF和BDNF mRNA及蛋白表达达高峰,再灌注24 h后,表达仍高(P＜0.05). 结论 黄体酮可以使脑缺血-再灌注损伤后NGF和BDNF的mRNA表达上调,促进脑内NGF和BDNF蛋白的合成,从而发挥脑保护作用.     

神经生长因子对脑缺血再灌注大鼠突触素表达的影响

为研究大鼠脑缺血再灌注后突触素p38表达的变化规律及其与神经生长因子的关系,取大鼠72只,随机分为假手术组,人工脑脊液组和神经生长因子治疗组,采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法观察P38的表达,结果发现,脑缺血再灌注3天后P38表达增高,第7天达高峰,之后逐渐降低,第21天降至对照组水平,应用外源性神经生长因子后,P38表达较对照组无明显升高（P＞0．05）,提示中枢神经系统损伤后,神经元具有再生和修复的可塑性,外源性神经生长因子对P38的调节有待于进一步研究。     

异丙嗪对大鼠急性前脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察异丙嗪对急性脑缺血再灌损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法 采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ四动脉结扎法制作大鼠急性前脑缺血再灌注损伤的模型,测定几种生化指标、脑电图及形态学的变化。结果 缺血再灌注使脑水份及ＭＤＡ含量显著升高、脑组织ＬＤＨ和ＳＯＤ活性明显下降,并出现脑电图及形态学异常,异丙嗪可逆转上述变化。结论 异丙嗪具有脑保护作用,其机制可勇与其减轻脑水肿、对抗脂质过氧化作用有关。     

丹星通络汤对脑缺血再灌注大鼠神经生长因子表达的影响

目的 观察丹星通络汤( DXTLD)治疗脑缺血再灌注大鼠后脑组织神经生长因子(NGF)的变化,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护机制. 方法 SD大鼠40只随机分为5组(n=8):假手术组、缺血再灌注组(模型组)、尼莫地平组、DXTLD预处理小剂量组、DXTLD预处理大剂量组.线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.应用免疫组织化学染色、灰度分析等方法检测缺血2h再灌注24 h后脑组织海马区NGF的表达. 结果 各治疗组缺血侧海马区的NGF表达显著增加,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 DXTLD通过上调脑缺血再灌注损伤后脑组织内NGF的表达,起到保护脑的作用.     

神经生长因子对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的修复和保护作用

目的探讨神经生长因子(NGF)对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用。方法将40只SPF级Wistar大鼠随机分为4组,正常组、模型组和治疗组(NGF 500 BU组和NGF 1 000 BU组),建立大鼠视网膜缺血-再灌注模型,以NGF或生理盐水干预,通过免疫组织化学法检测各组实验大鼠视网膜萎缩和视神经节细胞缺血坏死情况。结果模型组大鼠右眼在发生缺血-再灌注损伤后5 d时,可见明显视网膜萎缩变化,具体表现为视网膜厚度比减少,内核层变薄。经过NGF治疗后,各治疗组大鼠右眼损伤情况得到明显修复,修复损伤的程度与NGF剂量呈正相关;治疗组大鼠右眼视网膜厚度比增加,内核层厚度也明显增加,与模型组大鼠比较差异均有统计学意义(P0.01)。NGF 500 BU组大鼠视网膜神经节变性和坏死得到明显修复,坏死神经节细胞数与模型组比较差异有统计学意义(P0.01);NGF 1 000 BU组大鼠视网膜坏死和变性神经节细胞数与模型组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论 NGF球旁注射可扩散到视网膜,对视网膜缺血-再灌注损伤产生保护作用。     

降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的　探讨降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法　健康雄性Wistar大鼠 15 6只 ,随机分为降纤酶组和生理盐水组 ,采用大脑中动脉线栓模型 ,腹腔注射降纤酶 8U kg ,应用氯化三苯四氮唑染色、SP免疫组织化学检测胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) ,观察缺血不同时间大鼠脑梗死体积比、神经元改变和星形胶质细胞数量、周长和积分光度值改变。结果　降纤酶治疗组大鼠脑梗死体积明显小于生理盐水组 ;反应性星形胶质细胞数量、周长、染色强度均明显高于生理盐水组 ;出血梗死明显少于生理盐水组。结论　降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用 ,反应性星形胶质细胞增生 ,血管内皮细胞损伤的减轻是其脑保护机制之一     

神经生长因子对脑缺血再灌注后大鼠内耳毛细胞凋亡的抑制作用研究

目的观察脑缺血再灌注大鼠内耳细胞损伤与内源性耳蜗干细胞的激活状态以及神经生长因子(NGF)对内耳毛细胞凋亡的抑制作用及其发生机制。方法采用四动脉闭塞法制作大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,将72只SD大鼠随机分为3组:A组:假手术组,B组:生理盐水组和C组:NGF组,每组再分24 h和72 h 2个时间段。在C组,我们用人NGF对脑缺血再灌注大鼠进行干预,用免疫荧光染色法检测耳蜗细胞巢蛋白(nestin)、酪氨酸激酶A(trkA)和NGF的表达,用原位末端标记法(TUNEL法)检测耳蜗毛细胞凋亡。用均数±标准差(x珋±s)表示计量资料,用单因素方差分析和LSD-t检验进行统计学分析。结果 (1)与假手术组相比,生理盐水组内耳nestin阳性细胞数在再灌注24 h后增加,再灌注72 h后,耳蜗细胞nestin表达明显增强(t=6.030、12.516,均P0.05),但trkA和NGF表达减低(t=-6.667、-2.415,均P0.05),再灌注72 h后的耳蜗毛细胞凋亡率升高(t=40.836,P0.05)。(2)与生理盐水组相比,NGF组在再灌注24 h和72 h后,耳蜗细胞nestin表达明显减低(t=-4.732、-11.272,均P0.05),再灌注72 h后的trkA和NGF表达均显著增强(t=15.663、17.932,均P0.05),再灌注72 h后毛细胞凋亡率明显下降(t=-35.284,P0.05)。(3)与假手术组相比,NGF组在再灌注24 h和72 h后,nestin表达水平与假手术组接近(P0.05),但在再灌注72 h后的trkA和NGF表达均显著增强(t=8.996、15.517,均P0.05)。结论脑缺血再灌注可引起大鼠耳蜗毛细胞凋亡,促进成熟大鼠内耳细胞nestin阳性表达,诱导内源性耳蜗干细胞的激活;给予NGF可下调nestin表达,明显抑制耳蜗毛细胞的凋亡,其机制可能与上调trkA和NGF的表达有关。     

增龄对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响

目的 观察增龄对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)的影响.方法 应用线栓的方法,对10、16周龄的雄性SD大鼠作局部脑缺血2 h、再灌24 h模型,观察增龄对大鼠神经症状缺失评分、脑损伤面积、病理形态、脑组织乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)及血清中LDH和肌酸激酶(CK)的影响.结果 CI/RI 24 h, 两个年龄组神经症状缺失评分及脑损伤面积明显增大,病理形态改变严重、脑组织LD及LDH明显下降,血清中LDH和CK明显升高,以16周龄更为严重.结论 CI/RI随年龄增长损伤程度增加,可能与脑的老龄化相关.     

党参对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 研究党参(Codonopsis pilosula．)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并从改善能量代谢角度探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为假手术组，缺血再灌注 生理盐水组，缺血再灌注 党参组，缺血再灌注 CoQ10组。其中缺血再灌注 生理盐水组、缺血再灌注 党参组、缺血再灌注 CoQ10组分别连续5d灌胃口服生理盐水、党参浸提液、CoQ10混悬液。采用阻断大鼠双侧颈总动脉和尾部放血，并重复缺血再灌注的脑缺血模型，分别于缺血后3，6，12h断头取脑，采用高效液相法测定脑组织中ATP含量、比色法测定Na^ ，K^ —ATPase活性。结果 生理盐水对照组中大鼠脑组织ATP含量、Na^ ，K^ —ATPase活性明显低于假手术组(P＜0．05)，党参组、CoQ10组中大鼠脑组织ATP含量、Na^ ，K^ —ATPase活性明显高于生理盐水对照组(P＜0．05)，且二者间无显著性差异。结论 党参可改善缺血再灌注脑细胞能量代谢，具有脑保护作用，作用效果与CoQ10相近。     

心肌梗死后神经生长因子的动态表达及其与交感神经重构的关系

目的 探讨心肌梗死后心肌中神经生长因子(NGF)的动态表达及其在交感神经重构中的作用。方法 从心肌梗死大鼠的梗死周边、室间隔和右心室取材,通过免疫组化染色并结合计算机图像处理技术对心肌中NGF蛋白表达及交感神经支配进行研究。结果 心肌梗死后3天,NGF蛋白的表达在梗死周边心肌中明显减少(P<0.05),在室间隔和右心室中增加;交感神经支配密度在梗死周边和室间隔中明显降低,在右心室中明显增加(P<0.05);室间隔和右心室中交感神经支配与NGF蛋白的表达相关(P<0.05)。心肌梗死后7天,梗死周边心肌中NGF蛋白的表达与交感神经支配密度相关(P<0.01),并均明显高于假手术组(P<0.05)及心肌梗死后3天组(P<0.01);室间隔和右心室中NGF蛋白的表达、交感神经支配密度及范围均明显高于假手术组。心肌梗死后30天,NGF蛋白的表达在梗死周边和室间隔中略有降低,交感神经支配范围及密度在各处心肌中均明显高于心肌梗死后3天、7天(P<0.01)。结论 心肌梗死后心肌中NGF蛋白的表达具有动态过程,并与交感神经失支配、再生和过度支配相关,提示NGF可能在心肌局部发挥神经营养作用进而参与神经重构及神经内分泌的调节过程。     

通心络对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨通心络对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法将31只雄性Wistar大鼠,根据不同给药方案随机分为24h对照组(7只)、24h通心络组(7只)、5d对照组(7只)、5d通心络组(7只)以及假手术组(3只)。各组在造模前用等渗盐水或通心络灌胃预处理7d。依据线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞90min脑缺血再灌注模型。观察不同时间点的神经功能缺失评分,计算2,3,5氯化三苯基四氮唑染色下的梗死体积。结果脑缺血再灌注24h后的梗死体积对照组为(94.4±19.9)mm3,通心络组为(72.1±13.4)mm3;神经功能缺失评分对照组为(3.3±0.6)分,通心络组为(2.6±0.6)分。再灌注5d后的梗死体积对照组为(123.9±18.6)mm3,通心络组为(100.2±12.8)mm3;神经功能缺失评分,对照组为(2.1±0.4)分,通心络组为(1.2±0.4)分,两组比较,差异均有显著意义(P<0.01～0.05)。结论通心络对大鼠大脑中动脉阻塞后的脑缺血再灌注损伤可能具有保护作用。     

纳洛酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用

目的：探讨纳洛酮对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：24只Wister大鼠随机分为3组,采用腔内线栓法制备动物模型,检测纳洛酮治疗组及对照组髓过氧化物酶（MPO）含量。结果：大鼠脑缺血再灌注后脑组织MPO含量明显增加（P〈0.05）,应用纳洛酮后缺血侧脑组织MPO含量显著下降（P〈0.05）。结论：纳洛酮可以减轻脑缺血再灌注损伤,纳洛酮具有神经保护作用。     

坎地沙坦预处理对脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨坎地沙坦预处理对脑缺血大鼠的血管保护作用.方法 48只雄性SpragurDawley大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组以及坎地沙坦小剂量组[0.1 mg/(kg·d)]和大剂量组[1 mg/(kg·d)],每组12只;各组又随机分为缺血2 h后再灌注24 h和再灌注72 h亚组(每组6只).药物灌胃4周后,采用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,术前测量血压,分别在再灌注24 h和72 h后进行神经功能评分,然后断头取脑,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积,通过免疫组化染色和Western印迹分析检测缺血区脑组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达.结果 坎地沙坦小剂量组和大剂量组再灌注24 h和72 h神经功能评分均显著优于缺血再灌注组(P分别为0.008和0.001),脑梗死体积显著缩小(P分别为0.010和0.000).坎地沙坦大剂量组在干预后第2周血压明显下降,小剂量组无明显降压作用.VEGF阳性表达主要分布于梗死灶周围区血管内皮细胞,其表达随时间推移进一步上调,再灌注72 h达峰值.Western印迹分析与免疫组化染色结果一致.结论 坎地沙坦可能通过上调缺血区VEGF表达缩小脑梗死体积,改善神经功能评分.     

脉络宁对大鼠脑缺血-再灌注损伤及血管内皮生长因子的影响

目的探讨脉络宁注射液对大鼠脑缺血一再灌注损伤的治疗作用以及可能的机制。方法将54只sD大鼠按随机数字表法分为假手术组、缺血一再灌注组（IR组）及治疗组,每组各9只。造模后6h进行神经功能缺损评分。治疗组分别在不同时间点（6、24、48h和7d）经尾静脉注射脉络宁注射液（40g·kg-1·d-1）,连用7d。注射体积为1．5m1。假手术组及IR组在相应时间点给予等体积的等渗盐水。疗程结束后（第14天）进行神经功能缺损评分、取材。电镜观测海马CA1区细胞形态,免疫组化检测血管内皮生长因子阳性细胞。结果①第14天疗程结束后,治疗组6、24、48h和7d亚组大鼠神经功能缺损评分分别为3．2±0．8、3．3．±0．5、3．5±0．8、4．5±0．8,均低于IR组评分5．5±1．1;而治疗组48h及48h以内给药亚组大鼠的神经功能缺损评分低于7d亚组。差异均有统计学意义（P〈0．05）。②治疗组（6、24、48h和7d亚组）大鼠海马超微结构较IR组明显改善,其中6h亚组恢复最好。③治疗组（6、24、48h和7d亚组）大鼠脑组织血管内皮生长因子（VEGF）阳性细胞率分别为（19．4±1．3）％、（17．6±1．3）％、（17．2±1．5）％和（12．6±1．6）％,均高于IR组的（6．1±1．3）％,差异有统计学意义（P〈0．01）。尤以6h亚组VEGF的表达水平最高,为（19．4±1．3）％。结论脉络宁注射液对大鼠脑缺血-再灌注损伤早期具有较好的治疗作用,48h以内给药效果更好,可能通过增加血管内皮生长因子的表达而发挥作用。     

远程缺血后适应对大鼠脑缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨远程缺血后适应对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及对内质网应激诱导的凋亡蛋白C／EBP同源蛋白（CHOP）的影响。方法将56只雄性SD大鼠,随机分为假手术组,单纯缺皿组,插栓即刻行缺血后适应组（后适应1组）,再灌注即刻行缺血后适应组（后适应2组）,每组14只。线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2h模型。远程缺血后适应的实行：在插栓后即刻（后适应1组）及再灌注即刻（后适应2组）夹闭双侧股动脉10min,放开10min,此为一次缺血后适应,共进行3次。于再灌注后24h处死大鼠,测定脑梗死体积;免疫组化测定脑组织皮质和基底核CHOP的表达。结果①假手术组大鼠脑组织未见梗死灶,单纯缺血组、后适应1组、后适应2组脑梗死体积百分比分别为（48±10）％、（22±11）％及（26±12）％。与单纯缺血组比较,两缺血后适应组的梗死灶体积均明显减小,差异有统计学意义（P〈0．01）;两缺血后适应组间差异无统计学意义。②在皮质和基底核区,假手术组仅见少量的CHOP阳性表达细胞,单纯缺血组阳性表达细胞明显增多（P〈0．05）;而两后适应组CHOP阳性表达细胞明显减少,与单纯缺血组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。两缺血后适应组间比较,差异无统计学意义。结论远程缺血后适应对大鼠脑缺血有保护作用。其保护作用可能与减少脑组织中CHOP含量有关。     

胡黄连对脑缺血大鼠神经生长因子表达的影响

目的 观察缺血再灌注(I/R)模型大鼠脑内神经生长因子(NGF)的变化,探讨胡黄连对神经元的保护作用.方法 参照线栓法制作大鼠脑I/R模型,胡黄连干预,免疫组化方法观察皮层、纹状体NGF表达.结果 模型组缺血侧皮层区、纹状体区于I/R 3 d时NGF表达至高峰,7 d后逐渐下降,但各时间点与假手术组比较,均有显著差异(P<0.01);胡黄连治疗组大鼠脑皮层与纹状体NGF明显高于正常组和模型组(P<0.01).结论 胡黄连对脑I/R损伤神经元有保护作用,其机制可能与上调脑内NGF表达有关.     

The effect of nerve growth factor and antibodies to nerve growth factor on ethylnitrosourea carcinogenesis in mice

Summary The specific induction of neural tumors by the carcinogen, ethylnitrosourea (ENU), can be enhanced by reducing the in vivo nerve growth factor (NGF) levels in mice using IgG directed against the biologically active subunit of NGF (anti-NGF). This effect is reversible, confirming that the altered endogenous NGF levels do return to normal following injection with anit-NGF. Correspondingly, no neural tumors were observed when in vivo NGF levels were elevated by administering exogenous NGF with ENU. The higher physiological levels of NGF in control mice when compared to control rats might explain why fetal administration of ENU to rats results in a greater percentage of neural tumors. This would suggest that the long studied maturation effect that NGF has on developing neural cells of the peripheral nervous system may also influence neural oncogenesis.Submitted in partial fulfillment of PhD at Zoology Department, University of Texas at Austin, TX, USAThis research was supported by NIH 5 T01 GM 00337-15 and CA 09182-01 for S.A.V. and NINDS grants NS 14034 and NS15324, and Welch grant H 698 to J.R.P.