HBsAg阳性孕妇新生儿外周血单个核细胞乙型肝炎病毒感染状况及意义的研究

目的了解乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性孕妇新生儿外周血单个核细胞(PBMC)乙型肝炎病毒(HBV)感染状况及其在HBV宫内感染中的意义.方法用原位杂交(ISH)和原位PCR(IS PCR)法对HBsAg阳性孕妇新生儿PBMC进行HBV DNA检测.用随机引物法进行地高辛-HBVDNA探针的标记和定量.结果ISH及IS PCR检测PBMC HBV DNA,探针浓度以0.6μg/ml、蛋白酶K浓度以10μg/ml、IS PCR以20个循环数为佳.HBsAg阳性孕妇新生儿中,血清HBsAg、HBVDNA均阳性者有72.73%PBMC HBV DNA阳性;HBsAg阴性、HBV DNA阳性者中,有65.91%PBMC HBV DNA阳性;血清HBsAg、HBV DNA均阴性者中,仍有15.79%PBMC中HBV DNA阳性.结论IS PCR检测对低丰度PBMC HBV DNA具有细胞内定性和定位的特点.血清HBV DNA阳性新生儿多数可检出PBMC HBV DNA,而血清HBV DNA阴性新生儿也可呈PBMC HBV DNA阳性.提示PBMC HBV感染应作为HBV宫内感染的诊断指标之一.     

荧光定量PCR检测HBV DNA

目的：探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBV M)表现模式的关系。方法：对1207例慢性乙型肝炎患者进行血清HBV DNA荧光定量PCR分析，HBV M检测采用ELISA法。结果：血清HBV DNA水平与HBV M表现模式有关，HBsAg与HBeAg的存在影响HBV DNA水平变化。结论：HBbAg和HBV DNA有明显的相关，抗—HBe、抗HBc阳性者病毒末完全停止复制，只是复制水平降低。     

乳汁样本乙型肝炎病毒DNA提取方法探讨

目的 探讨不同样本处理方法对乳汁样本中HBV DNA定量结果的影响,筛选出适合临床实验室检测病毒DNA的样本前处理方法.方法 分别采用专用DNA提取液法、碱裂解法、酸化法、无水乙醇法和冷藏法,提取不同HBV DNA载量的乳汁样本中的HBV DNA,然后进行荧光定最PCR检测.结果乳汁样本中的HBV DNA>10~4 IU/mL时,以专用DNA提取液法、碱裂解法、冷藏法处理的乳汁样本HBV DNA结果阳性率达100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞分泌IL-12功能的初步研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染状态下树突状细胞(DCs)的免疫功能。方法运用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,对12例慢性乙型肝炎血清HBV DNA阳性及10例血清HBV DNA阴性患者外周血来源DCs内的HBV DNA进行检测,并比较不同HBV滴度时DCs分泌白细胞介素(IL)-12的功能,同时收集肝炎病毒标志物阴性,肝功能正常的健康志愿者10例作对照。结果 12例血清HBV DNA阳性患者中有7例DCs内可检测到HBV DNA,检出率为58.33%。血清HBV DNA阳性组DCs培养上清IL-12水平明显低于血清HBV DNA阴性组及对照组(均P0.01);而IL-12的表达水平在DCs HBV DNA阳性组明显低于DCs HBV DNA阴性组及对照组(均P0.01)。结论慢性乙型肝炎患者外周血I)Cs亦能受到HBV的感染,感染了HBV的DCs,其IL-12分泌功能明显下降。     

外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒对新生儿宫内感染的影响

目的探讨HBsAg、HBeAg阳性孕妇外周血单个核细胞(PBMC)内乙型肝炎病毒(HBV)DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用.方法对HBsAg/HBeAg双阳性共67对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯PBMC后,经抽提、纯化后的DNA进入PCR扩增反应,引物为HBV C区基因序列.结果67例HBsAg及HBeAg双阳性的孕妇中有35例(52.2%)PBMC中HBV DNA阳性,25例孕妇在血清及PBMC中均发现HBV DNA.67例新生儿有22例感染HBV DNA,感染率32.8%,其中血清HBV DNA阳性者10例,PBMC HBV DNA阳性者19例,二者均阳性者7例.结论母亲PBMC内HBV DNA阳性可能导致新生儿PBMC中HBV DNA阳性,PBMC内的HBV DNA可能是HBV母婴垂直传播的一条重要途径,同时,HBsAg及HBeAg阳性母亲若血清HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染HBV的危险性.     

HBV—DNA定量与HBV血清学标志物的相关性探讨

目的探讨HBV—DNA定量与HBV血清学标志物（HBV—M）的相关性。方法采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测449例乙肝感染者血清的HBV—DNA含量,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）对其血清学标志物进行检测。结果在不同HBV—M模式中,HBV—DNA与preS1总检出率无显著差异。在模式HBsAg（＋）、HBeAg（＋）和HBcAb（＋）中血清HB—DNA含量明显高于其他模式。在278例HBV—DNA阳性的标本中,HBV—DNA与preS1检出率无显著差异（P〉0．05）,HBV—DNA与HBeAg检出率有显著差异（P〈0．01）,同时preS1阳性组HBV～DNA定量值显著高于preS1阴性组。结论HBV—DNA或preS1与HBV复制密切相关,preS1较HBeAg更能敏感反映HBV在体内的复制状况,联合检测HBV—DNA与HBV血清学标志物,在乙型肝炎的诊断治疗中更有重要的临床指导价值。     

ABI-7000 PCR仪对血清HBV DNA含量的定量分析

目的检验ABI-7000荧光定量PCR仪对血清HBV DNA检测的灵敏性和重复性,探讨HBV DNA定量与血清标志物的关系,比较荧光定量PCR与定性PCR的敏感性差异。方法对乙肝标志物已明确的305例血清进行HBV DNA定量检测,其中67例同时做HBV DNA定性,并对结果进行统计分析。结果ABI-7000荧光定量PCR仪检测HBV DNA的灵敏性高,可检测低至1000copies/ml血清,批内及批间cv值分别为9.16%及12.66%;各种血清标志物组合HBV DNA含量分布情况表明:HBeAg阳性组HBV DNA阳性率高于其它组合(p<0.05);荧光定量PCR组HBV DNA阳性率与定性PCR组比较,有显著性差异(p<0.05)。结论ABI-7000PCR仪定量检测HBV DNA,灵敏度高,重复性好,优于传统定性PCR;HBV DNA定量可准确反映体内HBV复制情况,具有重要临床意义。     

外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒对新生儿宫内感染的影响

目的 :探讨 HBs Ag、 HBe Ag阳性孕妇外周血单个核细胞 ( PBMC)内乙型肝炎病毒 ( HBV) DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用。方法 :对 HBs Ag/ HBe Ag双阳性共 6 7对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯 PBMC后 ,经抽提、纯化后的 DNA进入 PCR扩增反应 ,引物为 HBV C区基因序列。结果 :6 7例 HBs Ag及 HBe Ag双阳性的孕妇中有 35例 ( 5 2 .2 % )PBMC中 HBV DNA阳性 ,2 5例孕妇在血清及 PBMC中均发现 HBV DNA。6 7例新生儿有 2 2例感染 HBV DNA,感染率 32 .8% ,其中血清 HBV DNA阳性者 10例 ,PBMC HBV DNA阳性者 19例 ,二者均阳性者 7例。结论 :母亲 PBMC内 HBV DNA阳性可能导致新生儿 PBMC中 HBV DNA阳性 ,PBMC内的 HBV DNA可能是 HBV母婴垂直传播的一条重要途径 ,同时 ,HBs Ag及HBe Ag阳性母亲若血清 HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染 HBV的危险性     

不同分娩方式对不同HBV DNA载量乙型肝炎母婴垂直传播的影响

目的探讨不同分娩方式对不同HBV DNA载量乙型肝炎母婴垂直传播的影响。方法选取2015年1月-2016年5月乙肝表面抗原阳性产妇281例,将产妇分为低HBV DNA拷贝组(<106 copies/ml)169例(包括剖宫产分娩92例,经阴分娩77例)和高HBV DNA拷贝组(≥106 copies/ml)112例(包括剖宫产分娩62例,经阴分娩50例),统计分析婴儿出生后的HBV抗原、HBV DNA阳性率和免疫阻断效果。结果低HBV DNA拷贝组不同分娩方式新生儿出生时的HBsAg阳性率、HBeAg阳性率以及HBV DNA阳性率比较,差异无统计学意义;高HBV DNA拷贝组剖宫产分娩组新生儿的HBsAg阳性率和HBV DNA阳性率明显低于经阴分娩组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论高HBV DNA拷贝孕妇采用经阴分娩的HBV垂直感染机会较大,后期可采取母婴阻断措施对其进行阻断。     

乙肝病毒DNA和血清标志物的相关性

目的研究HBV血清学标志物和HBV—DNA两者之间的相关性，为确定乙肝检测项目提供科学依据。方法对福州市整群抽样调查的健康人群用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测HBV血清学标志物，采用核酸扩增（PCR）荧光定量检测法检测HBV—DNA，并采用SPSS13．0软件进行统计分析。结果498例HBsAg阳性血清中，HBV—DNA阳性327例，阳性率为65．66％；乙肝大三阳HBV—DNA阳性率为90．35％，小三阳HBV—DNA阳性率为59．07％，两者差异有统计学意义（P〈0．01）；HBeAg阳性标本中HBV—DNA阳性率为90．00％，HBeAg阴性标本中HBV—DNA阳性率为57．94％，两者差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HBV血清学标志物和HBV—DNA二者之间互有联系但又有所不同，不能只以HBeAg的检测结果作为判断HBV传染性和复制的指标，而应选择检测HBV—DNA作为补充。     

Detection of hepatitis B virus DNA in asymptomatic hepatitis B surface antigen carriers: relation to sexual transmission

The authors tested, by molecular hybridization, for hepatitis B virus DNA in serum specimens of 182 asymptomatic hepatitis B surface antigen (HBsAg) Greek carriers who were heterosexual partners of patients with acute hepatitis B (group A: 96 cases) or healthy subjects who were susceptible to hepatitis B (group B: 86 cases). The mean age (34.1 +/- 10.4 vs. 33.9 +/- 8.4 years) and the mean duration of sexual contact (6.9 +/- 8.9 vs. 7.2 +/- 6.3 years) were similar in the two groups of carriers. Hepatitis B virus DNA was detected significantly more frequently in group A than in group B (59.4% vs. 11.6%, p less than 0.001). In particular, in group A, hepatitis B virus DNA was detected in 96.9% of hepatitis B e antigen (HBeAg)-positive and 41% of antibody to HBeAg (anti-HBe)-positive carriers. In contrast, in group B, hepatitis B virus DNA was identified in only 10.8% of anti-HBe-positive carriers (p less than 0.001). These differences were especially significant in the young and middle-aged carriers (16-49 years old) and during the first four years of sexual contact. These data suggest that 1) there is a positive correlation between the presence of hepatitis B virus DNA in serum and the epidemiologic evidence of sexual transmission of hepatitis B virus, 2) hepatitis B virus DNA is a better indicator of infectivity than HBeAg/anti-HBe, and 3) the detection of hepatitis B virus DNA in serum probably identified carriers with high infectivity and potentially higher risk of transmitting hepatitis B virus to their sexual partners.     

Hepatitis B virus infection in an institution for the mentally retarded

A cross-sectional survey on the prevalence of hepatitis B serologic markers and hepatitis B virus DNA was performed in a population of 493 mentally handicapped males. Special interest was focused on age-related variables such as age at entry into the institution and on duration of residency. Furthermore, the differences with regard to the prevalence of hepatitis B markers found in Down's syndrome residents and other mentally retarded persons were analyzed. In a longitudinal study, the impact of the presence of hepatitis B virus DNA in serum was studied. Overall, 62.1 per cent of residents had serologic evidence of infection with hepatitis B virus, while 16.7 per cent of those residents with markers of infection were positive for hepatitis B surface antigen (HBsAg). Hepatitis B virus DNA was found in 24 per cent of HBsAg carriers (all positive for hepatitis B e antigen (HBeAg). In residents whose age at entry was less than 15 years, those with Down's syndrome were more often carriers of HBsAg than other mentally retarded residents. In addition, Down's syndrome residents more often had serum hepatitis B virus DNA compared with residents with other forms of mental retardation. A young age at entry was recognized as an important factor with regard to the prevalence of hepatitis B markers. From the longitudinal studies, it appeared that loss of hepatitis B virus DNA from serum indicated imminent loss of HBeAg and normalization of alanine aminotransferase values. Knowledge of the hepatitis B virus DNA status of HBsAg carriers in these institutions may therefore provide a valuable tool in attempts to reduce the transmission of this infection.     

乙型肝炎表面抗原阴性、核心抗体阳性样本的临床意义

[目的]探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)表面抗原阴性而核心抗体筛查阳性与乙型肝炎病毒DNA含量及乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre-S1-Ag)的关系及临床意义。[方法]采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测乙型肝炎病毒标志物(HBV-M),其中核心抗体阳性的标本采用酶联免疫吸附试验检测Pre-S1-Ag和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定乙型肝炎病毒DNA含量,对检测结果进行比较分析。[结果]290例乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)阳性标本中单独抗-HBc阳性28例,占9.7%;乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)、抗-HBc两项阳性54例(18.6%);乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)、抗-HBc阳性78例(26.9%);抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性130例(44.8%)。前S1抗原有2例阳性,占0.7%。HBV-DNA阳性3例,占1.0%。抗-HBc阳性血液中,单独抗-HBc阳性的血液中检出1例HBV DNA及前S1抗原阳性的血液,占单独抗-HBc阳性血液的3.6%。HBeAb、HBcAb同时阳性的血液中检出2例HBV DNA阳性及1例前S1抗原阳性,分别占其2.6%、1.3%。在所有抗-HBc阳性血液中检出3例HBV DNA阳性及2例前S1抗原阳性,阳性率分别为1.0%、0.7%。[结论]虽然在HBsAg阴性、抗-HBc阳性血液中HBV-DNA阳性率并不高,但是对于受血者来说,输注这种血液将会有很高的感染风险,如果在献血者检查中加入抗-HBc和前S1抗原检测,既不用增加太多成本,同时操作比较容易,这样就能筛选出绝大部分的HBV-DNA阳性标本,从而减少输血感染HBV的风险。     

乙型肝炎病毒感染者不同病毒载量与细胞免疫应答关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者体内病毒载量与TH1/TH2细胞应答的关系。方法选取经实时荧光定量PCR检测HBV DNA载量的90例HBV感染者,根据血清HBV DNA载量将其分为3组,每组30例(A组为HBVDNA载量<103copies/ml、B组为HBV DNA量103～105copies/ml、C组为HBV DNA>106copies/ml,同时,各组内根据ALT结果分为ALT正常和异常组),抽取外周血,以特异性刺激因子HBcAg刺激这3组感染者及对照组外周血单个核细胞(PB-MC),以双抗体夹心法检测各组HBV感染者及对照组PBMC在HBcAg刺激后的IL-2和IL-10量。结果对照组PBMC在HBcAg刺激后IL-2显著高于HBV感染组(p<0.01),IL-10则相反(p<0.05);而三组HBV感染者中,IL-2检测值依次为:A组>B组>C组(p<0.01或p<0.05),IL-10则相反(p<0.01或p<0.05);A、B和C组内,ALT异常组和正常组比较,异常组的IL-2显著高于ALT正常组(p<0.01或p<0.05);而ALT异常组的IL-10和正常组比较,无显著差异(p>0.05)。结论高病毒载量的HBV感染者体内可能以TH2细胞应答占主导,而低病毒载量时则可能以TH1细胞应答为主。     

乙型肝炎病毒复制特点及其重要基因变异

HBV复制周期包括两个重要的过程:一是自共价闭合环状DNA(cccDNA)产生转录模板,二是以前基因组RNA(pgRNA)为模板逆转录生成HBVDNA基因组。由于病毒以逆转录方式进行基因组的复制,所以时常产生病毒突变体。特定的选择压力,包括内源性的(宿主免疫清除)和外源性的(疫苗和抗病毒药物)易于选择出逃逸突变株。文章就HBV复制特点及其重要的基因变异进行综述。     

乙型肝炎病毒基因型检测及其临床意义

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基因型与抗病毒治疗前后患者HBV DNA载量、肝功能和HBeAg的相关性及其临床意义。方法采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法对87例慢性乙型肝炎患者HBV进行基因分型,分别用连续监测法、荧光定量PCR法和ELISA法检测患者治疗前、治疗6、12个月后的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBV DNA载量和乙型肝炎两对半。结果 87例慢性乙型肝炎患者感染的HBV中B型58例,占66.7%,C型24例,占27.6%,B、C混合型3例,占3.4%,未分型2例,占2.3%;抗病毒治疗前,B基因型患者的ALT[(151.3±5.6)U/L]低于C基因型患者的ALT[(232.5±7.3)U/L],差异有统计学意义(P<0.05);B、C基因型患者HBV DNA载量分别为7.3±1.0和7.6±1.1,差异无统计学意义;抗病毒治疗后,B、C基因型患者ALT和HBV DNA载量均比治疗前降低,且B基因型患者HBV DNA载量显著低于C基因型患者,P<0.05;B基因型的HBeAg阴转率(62.1%)和HBV DNA阴转率(44.8%)显著高于C基因型,分别为29.2%和20.8%,P<0.05。结论广州地区HBV基因型以B型占显著优势,其次是C型,B基因型的临床表现轻于C基因型,对抗病毒治疗的应答反应更好,且较C基因型有更高的HBeAg阴转率。     

乙肝病毒外膜大蛋白及其在出国人员健康体检中的应用价值

〔目的〕探讨乙肝病毒外膜大蛋白监测应用在健康体检中的价值及意义,为今后应用在出国劳务人员健康体检中探寻理论依据。〔方法〕通过对乙肝病毒外膜大蛋白的结构和功能的阐述,分析其检测技术的发展,探讨其在健康体检中的应用价值。〔结果〕乙肝病毒外膜大蛋白与DNA检测结果具有高度的正相关性,比现在使用的乙肝两对半指标更能反应慢性无症状乙肝病毒携带者体内病毒的复制状态。〔结论〕乙肝病毒外膜大蛋白检测可以作为判断肝内病毒继续复制或复制活跃程度的指标,在出国劳务人员健康体检中具有较高的应用价值,有助于体检单位评价体检者的健康状态。     

基因芯片技术在呼吸道病毒检测中的应用

目的建立一种直接检测呼吸道病毒及其相关亚型的方法.方法通过合成一系列呼吸道病毒相关序列的寡核苷酸序列,构建检测芯片.对待检样品进行随机逆转录和扩增,荧光标记,杂交,扫描分析.结果广谱地鉴定出流感病毒的相关亚型.结论此方法可以正确检测到细胞培养所获得的甲1型和乙型流感病毒.     

乙型肝炎病毒患者血清腺苷脱氨酶的应用价值探讨

目的探讨检测乙型肝炎病毒(HBV)标志物不同阳性类型患者的血清腺苷脱氨酶(ADA)的临床应用价值。方法用速率法测定血清ADA水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定乙型肝炎病毒血清标志物(俗称“二对半”);用荧光定量PCR检测HBVDNA。按HBV标志物阳性情况将患者分为3组:A组50例,为HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性(俗称“大三阳”),HBVDNA阳性;B组54例,为HBsAg、HBcAb阳性,HBVDNA阳性或阴性;C组94例,为HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性(俗称“小三阳”),HBVDNA阳性或阴性。全部患者均检测其血清ADA水平。正常对照组60例。结果血清ADA水平由高到低依次为A组、B组、C组、正常对照组,差异有显著性(P<0.05),B组和C组中的HBVDNA阳性患者均高于HBVDNA阴性患者,有显著性差异(P<0.05),A组的血清ADA水平略高于B组中的HBVDNA阳性患者,无显著性差异(P>0.05)。结论血清ADA水平是反映肝细胞损害的一个良好指标,乙型肝炎病毒患者或携带者血清ADA在一定程度上反映HBV的复制情况,其水平测定对指导临床治疗有重要意义。