TNF-α,G-CSF调节CD3AK细胞诱导的HL-60凋亡

目的 :探讨肿瘤坏死因子α(TNF α) ,粒细胞集落刺激因子 (G CSF)对CD3AK细胞诱导HL 6 0细胞凋亡的影响。方法 :用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖电泳 ,原位末端标记法分别检测HL 6 0自然凋亡率、CD3AK细胞诱导的HL 6 0凋亡率、TNF α和CD3AK诱导的HL 6 0凋亡率、G CSF和CD3AK诱导的HL 6 0凋亡率。结果 :HL 6 0细胞自然凋亡率 (4.6 0± 2 .17) % ;CD3AK细胞诱导HL 6 0细胞凋亡率 (2 7.38± 4 .91) % ;TNF α和CD3AK诱导的HL 6 0凋亡率 (33.0 9± 5 .2 2 ) % ;G CSF和CD3AK(7.35± 2 .2 6 ) % (F =96 .80 ,P <0 .0 1)。结论 :TNF α加强CD3AK细胞诱导的HL 6 0凋亡 ,G CSF抑制CD3AK诱导的HL 6 0凋亡     

细胞因子调节脐血CD3AK细胞诱导HL-60细胞凋亡

目的 :探讨重组肿瘤坏死因子α(rhTNF α,TNF α)、重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF ,G CSF)对脐血CD3AK细胞诱导HL 6 0细胞凋亡的影响。方法 :用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖电泳 ,原位末端标记法检测HL 6 0 ,CD3AK细胞诱导的HL 6 0 ,TNF α诱导的HL 6 0 ,CD3AK与TNF α共同诱导的HL 6 0 ,CD3AK与G CSF共同诱导的HL 6 0进行检查分析。结果 :HL 6 0自然凋亡率 (4.6 0± 1.71) % ,;CD3AK细胞诱导的HL 6 0凋亡率 (15 .6 0±3.2 1) % ;TNF α(5ng/ml)诱导的HL 6 0的凋亡率 (5 .2 0± 2 .0 7) % ;CD3AK与TNF α共同诱导的HL 6 0凋亡率 (36 .70± 4 .4 0 ) % (F =94 ,P <0 .0 1)。CD3AK与G CSF共同诱导的HL 6 0凋亡率 (4.88± 2 .2 3) % (F =5 8,P <0 .0 1)。结论 :TNF α协同CD3AK细胞诱导HL 6 0凋亡 ;G CSF抑制CD3AK细胞诱导HL 6 0凋亡。     

CD3AK细胞诱导白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究

目的探讨CD3AK细胞诱导白血病Jurkat细胞凋亡的效果.方法用细胞形态学观察,DNA琼脂糖电泳,原位末端标记法分别检测Jurkat自然凋亡率和CD3AK细胞诱导的Jurkat细胞凋亡率.结果 Jurkat细胞自然凋亡率为(4.60±2.17)%;CD3AK细胞诱导的Jurkat细胞凋亡率为(27.38±4.91)%,两者之间具有显著性差异(t=15.1P＜0.01).结论 CD3AK细胞能诱导白血病Jurkat细胞凋亡.     

TNF-α对K_(562)细胞细胞毒作用的实验研究

为探讨肿瘤坏死因子 α(TNF- α)对 K5 6 2 细胞的细胞毒作用 ,应用原位末端标记法、细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳检测分析 K5 6 2 ,经 TNF- α(5 0 ng/ml、1 0 0 ng/ml、1 0 0 0 ng/ml)诱导的 K5 6 2 。结果显示 ,K5 6 2 细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ,TNF- α(5 0 ng/m l、1 0 0 ng/ml)诱导的 K5 6 2 细胞凋亡率分别是 (2 1 .35± 4.46 ) %、(2 7.38±4.91 ) % ,差异有显著性 (P<0 .0 1 ) ;TNF- α(1 0 0 0 ng/ml)诱导 K5 6 2 细胞坏死。说明小剂量 TNF- α诱导 K5 6 2 细胞凋亡 ,大剂量 TNF- α诱导 K5 6 2 细胞坏死     

Wortmannin抑制PI3K途径对K562细胞增殖和Ara-C诱导的细胞凋亡的影响

目的 :探讨磷酰肌醇 - 3激酶 (PI3K)途径在K5 6 2、NB4和HL6 0细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用 .方法 :用磷酰肌醇 - 3激酶 (PI3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K活性 ,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V (Annexin -V -Flous)标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数 .观察K5 6 2、NB4和HL6 0细胞增殖能力及凋亡抗性的变化 .结果 :K5 6 2、NB4和HL6 0细胞在 2 4、 4 8、 72h的增殖抑制率分别为 4 1 33%、 5 7 4 6 %、 6 5 85 %和 2 6 2 9%、 5 5 1%、 2 10 %及 32 14 %、 17 14 %、13 14 % .生长曲线显示Wortmannin抑制PI3K途径可显著抑制K5 6 2细胞的增殖 (P <0 0 5 ) ,而对NB4和HL6 0细胞增殖无明显影响 (P >0 0 5 ) .K5 6 2、NB4和HL6 0细胞加和不加Wortmannin ,培养 14d后的集落形成率分别为 :16 15 %和 7 6 0 % ,5 90 %和 6 10 % ,6 6 0 %和 6 4 0 % .集落形成抑制率为 5 2 94 %、3 39%和 3 0 3% .Wortmannin抑制PI3K途径可显著抑制K5 6 2细胞的集落形成 (P <0 0 5 ) ,而对NB4和HL6 0细胞集落形成无明显影响 (P >0 0 5 ) .K5 6 2、NB4和HL6 0细胞加WT、AraC、WT +AraC作用 2 4h后的凋亡细胞百分比分别为 (17 2 7± 1 94 ) %、 (2 3 2 5± 14 12 ) %、 (17 6     

从脐血单个核细胞诱导树突状细胞

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪分析细胞表面标志 CD83及 HLA- DR。发现用 GM- CSF+TNF-α+IL - 4可获得 ( 3 6 .79± 3 .1 5 ) % CD1 a+ 细胞 ,LPS可使 CD83及 HLA- DR的比例从 ( 0 .5 7± 0 .5 6 ) %及 ( 40 .2 7± 6 .3 3 ) %分别升至 ( 3 2 .79± 1 2 .90 ) %及 ( 95 .5 2± 3 .45 ) %。实验证明脐血单个核细胞作为另一种主要来源 ,经特定细胞因子诱导可生成大量 DC,并能通过 LPS刺激 DC成熟     

再生障碍性贫血血清抑制物诱导脐血造血细胞凋亡

目的 :研究再生障碍性贫血血清抑制物诱导人脐血造血细胞凋亡的作用。方法 :提纯的再障血清抑制物加到人脐血造血细胞培养体系中 ,采用形态学观察及 TUNNL 法测定细胞凋亡。结果 :2 0例脐血造血细胞分别与 0 .1μg/m l,1μg/m l,10 μg/m l的再障血清抑制蛋白组份共同培养后 ,凋亡细胞发现率分别为 3.5± 1.6 % (P>0 .0 5 ) ,41± 9.8 (P<0 .0 1) ,6 0 .3± 18.2 (P<0 .0 1) ,而对照组为 2 .6± 1.5 %。结论 :再障血清抑制蛋白组分量与脐血造血凋亡细胞数量呈正相关。证明再障血清抑制蛋白组份与造成血细胞凋亡有一定的量效关系 ,推测造血细胞凋亡增加可能是再障发病的主要机制     

人脐血CD56^＋胞毒性淋巴细胞的扩增研究

目的从人脐血单个核细胞(CBMC)中高效扩增CD56+细胞毒性淋巴细胞.方法以干细胞生长培养基(SCGM)为基础培养基,设计不同浓度抗CD3单抗、IL-2的培养条件,从CBMC中诱导扩增CD56+细胞毒性淋巴细胞,用四甲基氮唑蓝(MTI)法检测其对肿瘤细胞株K562和Raji的杀伤活性,并与抗CD3单抗激活的杀伤细胞(CD3AK)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)进行比较.结果在以SCGM为基础培养基时,CBMC经500ng/ml抗CD3单抗、500U/ml IL-2作用获得大量增殖,在12天时扩增(14.7±4.0)倍,(56.4±2.8)%为CD56+细胞,其中CD3-CD56+NK细胞和CD3+CD56+T细胞分别占细胞总数的(24.9±5.3)%和(30.0±4.7)%在效/靶比101时,对K562和Raii的杀伤率分别为80.5%和55.3%,均显著高于CD3AK和CIK细胞.结论在抗CD3单抗和IL-2作用下可使用SCGM,获得以CD56+淋巴细胞为主的强细胞毒性免疫效应细胞,为进行肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单的扩增脐血CD56+细胞毒性淋巴细胞的方法.     

20(R)-人参皂甙Rg3对K562/ADM细胞凋亡诱导的研究

目的 :探讨抗癌药物 2 0 (R) -人参皂甙Rg3(2 0 (R) -GinsenosideRg3)对肿瘤细胞凋亡的诱导。方法 :采用人红白血病耐阿霉素 (adriamycin ,ADM)细胞株K5 6 2 /ADM细胞作为实验模型 ,用ADM作阳性对照。结果 :MTT法细胞毒实验显示 ,Rg3对K5 6 2 /ADM细胞的IC 5 0为 10 4 9± 0 30 μg/ml;流式细胞仪法测定该细胞与浓度为 1 0 μg/ml(无毒剂量 )和 5 0 μg/ml(低毒剂量 )的Rg3共同培养 4 8h的细胞凋亡率分别为 3 39± 0 2 5 %和 9 36± 0 6 1% ;电镜下 ,可见凋亡的K5 6 2 /ADM细胞及凋亡小体。结论 :Rg3具有较强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,其诱导强度与其浓度呈正相关 ,对作用时间有依赖性。     

人脐血CD56+细胞毒性淋巴细胞的扩增研究

目的:从人脐血单个核细胞(CBMC)中高效扩增CD56+细胞毒性淋巴细胞.方法:以干细胞生长培养基(SCGM)为基础培养基,设计不同浓度抗CD3单抗、IL-2的培养条件,从CBMC中诱导扩增CD56+细胞毒性淋巴细胞,用四甲基氮唑蓝(MTI)法检测其对肿瘤细胞株K562和Raji的杀伤活性,并与抗CD3单抗激活的杀伤细胞(CD3AK)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)进行比较.结果:在以SCGM为基础培养基时,CBMC经500ng/ml抗CD3单抗、500U/ml IL-2作用获得大量增殖,在12天时扩增(14.7±4.0)倍,(56.4±2.8)％为CD56+细胞,其中CD3-CD56+NK细胞和CD3+CD56+T细胞分别占细胞总数的(24.9±5.3)％和(30.0±4.7)％:在效/靶比10:1时,对K562和Raii的杀伤率分别为80.5％和55.3％,均显著高于CD3AK和CIK细胞.结论:在抗CD3单抗和IL-2作用下可使用SCGM,获得以CD56+淋巴细胞为主的强细胞毒性免疫效应细胞,为进行肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单的扩增脐血CD56+细胞毒性淋巴细胞的方法.     

MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86及对混合淋巴细胞反应的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。方法流式细胞仪检测MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析CD80和CD86mRNA表达情况;75Gy照射MG132诱导的HL-60细胞后,用CCK-8检测提高共刺激分子表达后,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果MG132上调HL-60细胞表达CD86,高浓度的MG132对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,对健康人单个核细胞起增殖作用。结论MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,促进对健康人单个核细胞的增殖作用。     

邻苯二甲酸正丁酯对白血病细胞增殖与凋亡的影响

应用细胞培养、形态学观察、ＤＮＡ断裂百分率测定及ＤＮＡ片段凝胶电泳，观察了邻苯二甲酸正丁酯对ＨＬ－６０与Ｋ５６２细胞增殖与凋亡的影响。结果表明，邻苯二甲酸正丁酯在抑制白血病细胞增殖的同时，也诱导其凋亡，但对Ｋ５６２细胞作用相对较弱。     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的：研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法:采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果:10和30mmol／L SeO2能抑制3种细胞增生。30mmol／L SeO2作用48h能使54．0％的NB4细胞、46．5％的K562细胞和49．6％的HL-60细胞发生凋亡；能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论:SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用，在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

Effect of WT1 gene expression on cell growth and proliferation in myeloid leukemia cell lines

Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒ（ＷＴ１）ｇｅｎｅｉｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎＷｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒｐａｔｉｅｎｔｓＩｔｉｓｌｏｃａｔｅｄｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１１ｐ１３１　ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆＷＴ１ｇｅｎｅｉｓａｂｏｕｔ５０ＫｂＴｈｅｒｅａｒｅ２ｓｐｌｉｃｉｎｇｅｘｏｎｓｏｕｔｏｆｉｔｓ１０ｅｘｏｎｓ：ｅｘｏｎ５（ｓｐｌｉｃｅⅠ）ａｎｄｅｘｏｎ９（ｓｐｌｉｃｅⅡ）Ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｔｗｏａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｐｌｉｃｅｓｒｅｓｕｌｔｓｉｎｆｏ…     

依维莫司和LBH589对耐药急性髓系白血病细胞增殖、凋亡及多药耐药相关蛋白表达的影响

目的 探讨雷帕霉素衍生物依维莫司(RAD001)或联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对耐药急性髓系白血病细胞株HL-60/ADM细胞增殖、凋亡和逆转耐药的影响.方法 采用不同浓度RAD001或联合LBH589处理HL-60/ADM细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活力,Hoechst33342染色法和AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡、阿霉素摄取率和多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达评估逆转耐药效应.进一步检测处理前后细胞信号通路蛋白变化,探讨其机制.结果 10～50 μmol/L RAD001均能够抑制HL-60/ADM细胞增殖、诱导凋亡,在作用48和72 h时30 μmol/L药物浓度达到最大抑制效果,进一步增加药物浓度细胞增殖抑制率并没有明显增加(P＜0.05).不同浓度RAD001和LBH589联合处理HL-60/ADM细胞,没有明显的协同抑制增殖作用[协同指数(CI)≥1.0].10 μmol/LRAD001处理HL-60/ADM细胞可以明显下调细胞表面MRP1表达(93.90%±4.20%比79.10%±3.28%,P＜0.05),提高HL-60/ADM细胞阿霉索蓄积率(8.53%±0.68%比15.37%±1.46%,P＜0.01).深入机制研究表明,RAD001可以阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路活性,通过上调P53抑制MRP1蛋白的活性.结论 RAD001与LBH589联合没有协同抑制HL-60/ADM细胞增殖作用.但RAD001单药能够有效抑制HL-60/ADM细胞增殖,诱导凋亡,通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制细胞MRP1蛋白的表达,提高细胞阿霉素摄取率而逆转耐药.

Abstract：

Objective To investigate the effects of everolimus ( RAD001 ) or plus panobinostat (LBH589) on the proliferation, apoptosis and drug resistance in chemoresistant acute myeloid leukemic cells.Methods HL-60/ADM cells were treated with RAD001 alone or with LBH589.Proliferation and apoptosis were evaluated by 3-( 4, 5 ) -dimethylthiahiazo ( -z-y1 )-3, 5-di-phenytetrazoliumromide ( MTT )assay, Hoechst33342 and AnnexinV-FTTC/PI stain.The altered expressions of multidrug resistance-associated protein 1 ( MRP1 ) and intercellular adriamycin accumulation were analyzed by flow cytometry.The change in protein level was analyzed by Western blot.Results Effective proliferative inhibition and apoptotic induction in HL60/ADM cells were observed in the treatment of 10 -50 μmol/L RAD001.The maximal effect was shown for the concentration of 30 μmol/L RAD001 at 48 and 72 hours.The inhibition ratio remained unchanged with the adjustment of drug doses (P ＜0.05).Moreover, there was no synergistic effects in the treatment with different concentration of RAD001 and LBH589 (CI ≥ 1.0).A down-regulation of MRP1 (93.9% ±4.2% vs 79.10% ± 3.28% ) and an up-regulation of adriamycin ( 8.53% ± 0.68% vs 15.37% ± 1.46% ) were induced by the treatment with 10 μmol/L RAD001 ( both P ＜ 0.01 ).RAD001 inhibited the p53-dependent expression of MRP1 via an inhibition of phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/AKT/mTOR signaling pathway.Conclusion The combined treatment of RAD001 and LBH589 has no synergistically inhibitory effect on HL60/ADM cells.But the sole treatment of RAD001 may inhibit proliferation, induce apoptosis and accumulate intercellular adriamycin through a down-regulated expression of MRP1 in HL60/ADM cells via an inhibition of PI3K/AKT/mTOR signaling pathway.     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的 研究SeO₂对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法 采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果 10和30mmol/LSeO2能抑制3种细胞增生。30mmol/LSeO₂作用48h能使54.0%的NB4细胞、46.5%的K562细胞和49.6%的HL-60细胞发生凋亡;能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论 SeO₂对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用,在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

SPARC和Tiam1基因在HL-60与K562髓系白血病细胞株中的表达及其意义

目的：探讨SPARC和Tiam1基因在人早幼粒细胞白血病细胞株（HL-60）与人慢性粒细胞白血病细胞株（K562）中的表达的水平及其意义.方法：常规细胞培养,取在对数生长期的HL-60、K562细胞进行mRNA抽提;以HUVEC细胞的mRNA作为对照组,逆转录后采用实时荧光定量PCR（RTFQ-PCR）法检测SPARC和Tiam1在HL-60、K562细胞中mRNA的表达水平.结果：①SPARC和Tiam1在HL-60、K562细胞中均为低表达;②SPARC和Tiam1在HL-60、K562细胞中的表达差异均有统计学意义（P＜0.05）;③SPARC与Tiam1在HL-60细胞中的表达呈负相关（r=-0.886,P＜0.01）;SPARC与Ti-am1在K562细胞中的表达无相关关系（r=-0.086,P=0.872）.结论：在髓系白血病中,评价SPARC与Tiam1的表达水平可能具有一定的预后价值;在急性早幼粒细胞白血病中,SPARC和Tiam1可能通过共同的信号通路调控下游基因.     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。