抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备特异性抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）并检测其特异性、敏感性。 方法 用日本血吸虫SEA经翅膀下静脉和皮下免疫25周龄海兰母鸡4次（首次剂量为60 μg/只，加强剂量为30 μg/只），每次间隔10 d。取免疫前和首次免疫后35 d的鸡蛋卵黄，分别用水稀释法提取IgY，BCA法测定蛋白含量，并进行十二烷基磺酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析，ELISA检测纯化后IgY特异性和敏感性。分别提取免疫后不同时间的卵黄抗体，观察抗体效价的变化。 结果 海兰母鸡经SEA首次免疫后35 d，每枚蛋经提纯后可得到约61 mg抗体，经SDS-PAGE和Western blotting分析，纯化的IgY有1条主要蛋白带，相对分子质量（Mr）为130 000，并可被SEA识别。母鸡初次免疫后第10天，经SDS-PAGE和ELISA分析，鸡蛋卵黄内即有抗体产生，初次免疫后31 d效价可达1∶1 600。双抗体夹心ELISA结果显示纯化后的IgY有较高的敏感性，可检测到的SEA达2.4 ng/ml。 结论 制备的抗SEA鸡卵黄抗体的特异性和敏感性均较高。     

树突状细胞和巨噬细胞诱导抗日本血吸虫保护性免疫作用比较(英文）

目的 比较树突状细胞(DCs)和巨噬细胞诱导抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用。方法 用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)体外分别负载DCs和巨噬细胞,将负载和未负载的DCs和巨噬细胞分别免疫BALB/c小鼠3次,血吸虫尾蚴攻击感染42 d后门静脉灌注法收集成虫,计数肝脏中的虫卵,比较各组小鼠血吸虫成虫负荷和雌虫生殖能力,以评估DCs和巨噬细胞诱导抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用.ELISA检测血清特异性抗体水平。结果 SEA负载的DCs免疫组小鼠减虫率为26.3%,减卵率为37.9%,明显高于SEA负载的巨噬细胞组(22.0%和30.7%)和未负载的DCs及巨噬细胞对照组(16.3%,17.3%和11.7%,12.0%),攻击感染后42 d各组小鼠血清特异性抗体水平均升高,以负载的DCs免疫组小鼠最为明显。结论 体外抗原负载后,DCs诱导的抗日本血吸虫感染的保护性免疫力高于巨噬细胞.     

不同免疫途径对Sj童虫细胞型免疫原诱生的保护性效果及抗体应答差异

目的比较研究小鼠经不同途径接种日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)童虫原代细胞(primary juvenile worm cells,pJCs)后所诱导的免疫保护效果,寻找其合适的免疫途径。方法将pJCs经皮下或静脉注射途径免疫昆明小鼠,间隔2w共免疫3次,末次免疫后第4w,与对照组同时经腹部皮肤感染尾蚴30±2尾/鼠,比较三组小鼠的肝脏虫卵数及虫卵肉芽肿的大小、成虫数、虫体大小。同时在第2、3次免疫前及攻击感染前1d,小鼠尾静脉采血,用ELISA法检测抗pJCs-IgG水平。结果 pJCs免疫小鼠后,与PBS对照组比,静脉免疫组的减虫率为48.53%、肝卵减少率为54.54%、虫体平均重量减少率为29.62%(P0.01)、虫卵肉芽肿面积减少率为36.8%,而皮下免疫组分别为41.28%、43.19%、23.08%、31.2%。IgG抗体水平也是静脉注射组高(PBS组,P0.01;皮下注射组,P0.05)。结论日本血吸虫童虫细胞免疫原通过皮下和静脉注射均可诱导小鼠产生对日本血吸虫的免疫保护力,其中静脉注射诱导的免疫保护效应最强,提示通过静脉注射日本血吸虫童虫细胞是可行有效的免疫途径。     

Sj26和Sj23基因转染树突状细胞联合抗血吸虫感染的研究

目的探讨Sj26和Sj23基因转染树突状细胞(DC)联合抗日本血吸虫感染保护性免疫机制。方法BALB/c小鼠耳廓分别注射Sj26和Sj23基因转染DC(A组)、Sj26基因转染DC(B组)、Sj23基因转染DC(C组)、pcDNA3转染DC(D组)、未处理DC(E组)和RPMI-1640(F组),免疫3次,间隔2周,末次免疫后2周,每鼠经皮肤感染40条日本血吸虫尾蚴。ELISA法检测血清特异性IgG抗体、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经ConA和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4水平,噻唑蓝(MTT)法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果末次免疫后第2周,A组小鼠血清IgG抗体水平显著升高(P<0.001)。血清IL-4的水平,各组免疫前、后无明显变化。血清IFN-γ水平,A组小鼠免疫后明显升高(P<0.01)。经ConA和SEA刺激后,A组小鼠脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平显著增高,而IL-4水平显著降低(与F组比较,P<0.001)。A组小鼠脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后的刺激指数均高于其他各组(与F组比较,P<0.001)。结论体液免疫和细胞免疫共同参与了Sj26和Sj23基因转染DC诱导的保护性免疫作用,其中Th1型免疫应答在抗日本血吸虫感染的保护性免疫中起主要作用。     

抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原IgY的制备及初步应用

目的 目的 制备抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原 （Soluble egg antigen, SEA） 鸡卵黄免疫球蛋白 （Egg yolk immunoglobu? lin, IgY）, 探讨其应用于血吸虫病流行区查病的可行性。 方法 方法 在血吸虫病流行区采集间接红细胞凝集试验 （IHA） 阳性 者尿液, 在非流行区采集健康人尿液。以SEA经皮下注射免疫莱杭母鸡获得anti?SEA IgY, 以十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰 胺凝胶电泳 （SDS?PAGE） 测定其相对分子量; 并以anti?SEA IgY作为捕捉抗体, 采用双抗体夹心法ELISA检测IHA阳性者 和健康人尿液中的血吸虫循环可溶性虫卵抗原 （Circulating soluble egg antigen, CSEA）。 结果 结果 成功制备并纯化anti? SEA IgY。共检测IHA阳性者尿液48份, 在尿液中检出CSEA阳性26例, 检出率为54.17%; 检测健康人尿液10份, 均为阴 性。 结论 结论 基于IgY的免疫诊断技术可有效检出人尿液中CSEA, 其作为一种便捷、 无创伤的新方法可应用于血吸虫病 查病工作中。     

日本血吸虫糖基诱导抗体类型与感染状态的关系研究

目的以日本血吸虫感染猪为模型,研究不同感染状态下针对糖基产生的抗体在宿主免疫应答中的作用。方法建立日本血吸虫感染猪模型,分别检测不同感染状态下猪血清中针对LNFPIII、N-糖苷水解酶F(PNGaseF)处理可溶性虫卵抗原(SEA)前后及过碘酸处理SEA前后的抗体水平。结果辐照致弱尾蚴单纯免疫组、正常尾蚴单纯感染组和免疫后予以感染的免疫攻击组的猪均针对LNFPIII产生了相应的IgM抗体应答。3组猪血清中针对PNGaseF处理SEA的特异性抗体IgG、IgM水平较未处理组略低,但抗体IgG和IgM水平差异均无统计学意义(P均0.05)。在单纯免疫组,猪血清中针对过碘酸处理SEA的特异性IgG、IgM、IgA抗体水平均较未处理组有所下降,差异有统计学意义(P均0.01),但辐照致弱日本血吸虫糖基成分所诱导的抗体水平均较低。在单纯感染组,猪血清中针对过碘酸处理SEA的抗体IgG、IgM水平在感染后第8周下降极为显著,抗体水平差异有统计学意义(P均0.01),其中糖基所诱导的抗体亚型以IgG1为主。此时,在虫负荷显著降低的免疫攻击组,日本血吸虫糖基成分能够显著增强IgG、IgM、IgA,特别是IgG2的表达。结论日本血吸虫糖基成分能够诱导宿主产生多种类型的抗体应答;且抗体亚型的表达与宿主的感染状态相关,即IgG1亚型的表达与日本血吸虫急性感染期的虫负荷和卵负荷一致;而具有免疫保护力的宿主能够针对日本血吸虫糖基成分产生IgG2应答。     

日本血吸虫不同抗原检测家兔感染及治疗前后IgG/IgM抗体动态

目的探索特异性抗体检测在日本血吸虫病诊断和疗效考核中的潜在应用价值。方法ELISA方法采用可溶性虫卵抗原(SEA)、成虫抗原(AWA)检测人工感染家兔治疗前后血清中特异性IgGI、gM抗体,评价特异性抗体检测的诊断和疗效考核价值。结果用SEA抗原检测IgM抗体,发现感染后7周不管治疗与否,抗体水平均快速下降。与SEA相比,感染后AWA特异性IgM抗体上升时间早,且治疗后5个月仍为阳性。SEA特异性IgG抗体水平最高,但治疗后5个月仍为阳性。结论采用SEA抗原检测IgG用于血吸虫病诊断效果较好;对早期感染的诊断可以考虑SEA抗原检测IgM抗体作辅助。AWA抗原检测IgM,对急、慢性血吸虫感染均有较好诊断效果。采用这两种抗原检测IgG和IgM,均无考核疗效意义。     

日本血吸虫虫卵单克隆抗体的初步研究

将血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫 BALB/C 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞 SP 2/0杂交融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测特异性抗体,获得一株稳定地分泌单克隆抗体的细胞株 SM21-8。该 SM21-3的免疫球蛋白型为 IgM,其靶抗原为血吸虫卵,能识别分子量20～67kD 多个重复表位的虫卵糖蛋白。用 SM21-3 ELIS A 双抗体法检测 SEA,湖南重疫区粪检阳性的慢性血吸虫病人血清的阳性率为80.0%(44/55),正常人血清阳性率为5.0%(1/20)。纯化的 SM21-3经荧光素标记后用直接荧光抗体法定位地检出肉芽肿组织中的虫卵抗原。结果表明,用 SM21-3 ELISA 双抗体法可检出部分重感染病人血清中的微量抗原,该抗原也是肝肉芽肿形成的主要因素。     

树突状细胞DNA多价疫苗抗日本血吸虫感染作用机制的研究

摘 要：目的 探讨树突状细胞（DC）DNA混合多价疫苗抗日本血吸虫感染保护性免疫作用机制。方法 BALB/c小鼠耳廓分别注射Sj26、Sj23和Sj14基因转染DC（A组）、Sj26基因转染DC（B组）、Sj23基因转染DC（C组）、Sj14基因转染DC（D组）、pcDNA3转染DC（E组）、未处理DC（F组）和RPMI-1640（G组）,共免疫3次,间隔2周,末次免疫后第2周,每鼠经皮肤感染40条日本血吸虫尾蚴。ELISA法检测血清特异性IgG抗体、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）水平,双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经ConA和可溶性虫卵抗原（SEA）刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4水平,噻唑蓝（MTT）法检测脾淋巴细胞的增殖。结果 A组小鼠末次免疫后第2周血清特异性IgG抗体水平显著升高（与G组比较,P<0.001）。A组小鼠免疫后血清IFN-γ水平明显升高(P<0.01),而血清IL-4的水平,各组小鼠免疫前、后无明显变化。A组小鼠脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后诱生的IFN-γ水平显著增高,而IL-4水平显著降低(与G组比较,P<0.001)。A组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数高于其他各组（与G组比较,P<0.001）。结论 体液免疫和细胞免疫共同参与了DC DNA混合多价疫苗诱导的保护性免疫作用,其中Th1型免疫应答在抗日本血吸虫感染的保护性免疫中起主要作用。 关键词：日本血吸虫;树突状细胞;DNA疫苗;保护性免疫     

抗旋毛虫肌幼虫ES抗原IgY的制备及鉴定

目的制备抗旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),测定其效价及用于检测抗原的敏感性。方法 4只24w龄罗曼母鸡用旋毛虫肌幼虫ES抗原经大腿外侧与胸部肌肉免疫4次(首次剂量为500μg/只,加强剂量为250μg/只),每次间隔10d。取免疫前和首次免疫后42d的鸡蛋卵黄,用水稀释法提取IgY,考马斯亮蓝法测定蛋白含量,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blot)及间接荧光抗体试验(IFAT)对IgY进行分析,ELISA检测纯化后IgY的效价及检测抗原的敏感性。结果罗曼鸡经ES抗原免疫后,每枚鸡蛋经提纯后均可得到约70mg抗体,SDS-PAGE表明纯化的IgY有2条主要蛋白带,分子量为67kDa、23kDa,Western blot与IFAT发现提纯的IgY可识别肌幼虫虫体与ES抗原。IgY的抗体效价为1∶107,IgY-夹心ELISA检测旋毛虫抗原的敏感性为1.17ng/mL。结论制备的抗旋毛虫ES抗原的IgY具有较高的效价与敏感性。     

细粒棘球蚴Eg10基因的克隆、表达及免疫特性研究

目的克隆、表达细粒棘球蚴分离株Eg10基因,并研究其重组蛋白的免疫特性。方法将细粒棘球蚴Eg10基因亚克隆于表达载体pET28a,转化重组质粒至大肠埃希菌BL21进行融合表达,His-bind树脂纯化系统纯化重组融合蛋白,以之作为抗原免疫小鼠。48只ICR小鼠随机均分为4组,A、B组为对照组,分别注射不含抗原的磷酸盐缓冲液(PBS)和福氏佐剂+PBS,每鼠皮下注射100μl。C、D组为免疫组,注射用福氏佐剂乳化的重组抗原Eg10,抗原量分别为0.1mg/μl和0.5mg/μl,每鼠皮下注射100μl。各组小鼠每隔2周免疫1次,共免疫3次。于免疫前和免疫后2、4、6、8和10周采血以获得抗血清。通过蛋白质印迹(Westernblotting)分析和ELISA检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建含目的片段Eg10的基因工程菌株。Westernblotting分析结果表明,免疫血清能识别重组抗原Eg10。ELISA检测结果显示,用重组蛋白免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。统计学分析表明,免疫后C、D组抗体水平逐渐升高,至第8周抗体滴度达最高值,分别为(1.143±0.253)和(1.254±0.070);A、B组抗体一直维持在较低水平。第2、4、6、8和10周,A、B与C、D组间抗体水平差异有统计学意义(均P0.05),C、D组间差异无统计学意义(P0.05)。结论成功表达细粒棘球蚴重组蛋白Eg10,该蛋白有一定的免疫原性。     

弓形虫ROP2-SAG1重组复合蛋白及其重组质粒的免疫效应

目的研究弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(SAG1)重组复合抗原(ROP2-SAG1)的核酸和蛋白两种疫苗的免疫效应。方法 60只雌性BALB/c小鼠随机均分为4组(每组15只),即rROP2-SAG1蛋白组、无菌生理盐水组、pcROP2-SAG1质粒组和pcDNA3.1质粒组,rROP2-SAG1组以2.5μgrROP2-SAG1重组蛋白与等体积佐剂乳化后,背部皮下多点免疫小鼠;无菌生理盐水组以等体积无菌生理盐水替代重组蛋白,首次免疫使用福氏完全佐剂,其余使用福氏不完全佐剂。pcROP2-SAG1组和pcDNA3.1组分别以pcROP2-SAG1和空质粒pcDNA3.1腿部肌肉注射免疫,剂量为100μg/次;以上各组小鼠共免疫3次,每次间隔2周。采用间接ELISA方法检测免疫后25、45和70d小鼠血清中特异性IgG抗体,及末次免疫后2周小鼠血清特异性IgG1和IgG2a抗体。用CCK-8细胞增殖法检测小鼠脾细胞增殖,间接ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)和白介素2(IL-2)表达水平。结果 rROP2-SAG1组小鼠血清特异性IgG抗体水平随着免疫时间的延长持续升高,pcROP2-SAG1质粒组抗体则随着免疫时间的延长相对稳定。末次免疫后2周,rROP2-SAG1组小鼠血清IgG1抗体水平(1.538±0.183)显著高于IgG2a(0.618±0.122)(P0.05),而pcROP2-SAG1组IgG1抗体水平(1.107±0.137)与IgG2a(0.830±0.185)间的差异无统计学意义(P0.05)。以特异性抗原rROP2-SAG1为刺激物时,rROP2-SAG1组小鼠脾细胞受特异性抗原刺激的增殖效果(A450值=0.348±0.042)显著高于pcROP2-SAG1组(0.123±0.018)(P0.05)。rROP2-SAG1组小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ含量[(149.37±30.51)pg/ml]、IL-2含量[38.58±9.10)pg/ml],分别与pcROP2-SAG1组IFN-γ[(138.58l±29.92)pg/ml]、IL-2[37.47l±9.26)pg/ml]比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论 ROP2-SAG1重组复合蛋白诱导的抗体水平、脾细胞增值效应显著高于重组质粒pcROP2-SAG1。     

Detection of circulating antigen in serum of mice infected with Schistosoma japonicum by immunomagnetic bead ELISA based on IgY

We developed a novel immunomagnetic bead ELISA based on IgY (egg yolk immunoglobulin) for detection of circulating antigen (CA) in sera of mice infected with Schistosoma japonicum. The assay involved the use of chicken polyclonal antibodies IgY against soluble egg antigens (SEA) of S. japonicum as a capture antibody and anti-SEA mouse monoclonal antibody NP28-5B labeled horseradish peroxidase (HRP) as a detecting antibody. Two groups of BALB/c mice infected with S. japonicum cercariae were used: lightly infected mice (infected with 10 S. japonicum cercariae) and heavily infected mice (infected with 30 S. japonicum cercariae). The CA was detectable as early as 4 and 5 weeks after infection in the sera of heavily and lightly infected mice, respectively. The CA levels rose rapidly and reached a peak in 8 weeks after infection and then remained a plateau for at least another 6 weeks in both groups. Moreover, the effect of praziquantel on the CA levels was also investigated. The heavily infected mice were treated with praziquantel and the CA levels in sera increased dramatically in the first week post-treatment and then decreased to the control level by 6 weeks after treatment. The novel assay appears to be sensitive for detection of schistosomal antigenemia and valuable to judge the efficacy of chemotherapy in murine schistosomiasis.     

日本血吸虫TPI DNA疫苗基因密码子优化增强免疫保护作用的研究

目的　 研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶基因（TPI基因）密码子优化后的DNA疫苗增强免疫保护作用的效果。 方法　 60只BALB/c雌性小鼠随机均分为A（pcDNA3.1空质粒对照组）、B（pcDNA3.1-TPI组）、C （pcDNA3.1-TPI-mHSP70组）、D（pcDNA3.1-TPI.opt组）、E（pcDNA3.1-TPI.opt-mHSP70组）等5组。每鼠肌肉注射相应的纯化质粒DNA 100 μg,每隔3周免疫1次,共3次。末次免疫后4周,每鼠经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴（40±1）条,42 d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2 d及感染前2 d经尾静脉采血,检测IgG及IgG₁、IgG_2a的水平。攻击感染前2 d取脾脏,制备单个脾细胞,用流式细胞仪检测白细胞介素2（IL-2）、IL-4、IL-5、γ干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子（TNF）的水平。 结果　 B、C、D、E组小鼠血清均检测到特异性IgG及IgG_2a与IgG₁抗体,IgG_2a/IgG₁的比值分别为1.73、2.06、2.44、3.09。D、E组的IL-2、IFN-γ、TNF含量较B、C组均有不同程度地升高。D、E组减虫率分别为36.03%、39.03%,减卵率分别为41.71%、46.85%,均显著高于B、C组（P<0.01）。 结论 TPI基因密码子优化后的DNA疫苗相对于未优化TPI DNA疫苗能诱导小鼠产生较高的免疫保护作用,且诱导宿主产生较强的,及以Th1为主的免疫应答。     

日本血吸虫重组抗原SjPGAM-SjEnol的保护性免疫效果评价

目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌(E.coli BL21)中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源(HLA)Ⅱ类、鼠源(H2-d)Ⅱ细胞结合表位且与宿主同源性较小的肽段,将对应编码的核苷酸序列进行拼接,构建重组质粒pET32a(+)-SjPGAM-SjEnol,并在E.coli BL21中表达。用蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组抗原的抗原性。用小鼠实验评估重组抗原的免疫保护效果,即将55只雄性BALB/c小鼠均分成5组,其中3个试验组分别用重组抗原pET32a-SjPGAM-SjEnol(A组)、pET28a-SjPGAM(B组)、pET28a-SjEnol(C组)(各27μg)与206佐剂混合后免疫小鼠,每次间隔2周,共免疫3次。同时设佐剂对照组(D组)和空白对照组(E组)。末次免疫后2周,每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴40±2条,感染后6周,经肝门静脉灌注法收集成虫和检测每克肝虫卵数(EPG),计算减虫率和肝脏减卵率。各组小鼠分别于免疫前、各次免疫后1周尾部取血和剖杀时收集血清,应用ELISA检测血清特异性IgG抗体水平。结果确定SjPGAM的96~147、SjEnol的233~312肽段为重组片段。PCR扩增出一条含编码这两个肽段的核苷酸序列的重组DNA序列,大小447bp。获得的重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol相对分子质量(Mr)为33000。Westernblotting结果显示,该重组蛋白可被日本血吸虫成虫抗原免疫兔血清识别,具有良好的抗原性。小鼠免疫实验结果显示,与空白组相比,A组获得39.7%的减虫率和64.9%的肝减卵率,其减虫率与B组(18.5%)、C组(14.7%)比较,差异有统计学意义(均P0.05);肝减卵率与B组(47.5%)、C组(30.5%)比较,差异也有统计学意义(P0.05,P0.01)。ELISA结果显示,第3次免疫后A组的特异性IgG抗体达到较高水平(2.372±0.268),与D组(0.490±0.138)、E组(0.220±0.088)间的差异有统计学意义(P0.01)。结论成功构建了重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol,多表位重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol在小鼠抗血吸虫感染中比单一重组抗原pET28a-SjPGAM和pET28a-SjEnol诱导了更高的免疫保护作用。     

抗旋毛虫鸡卵黄抗体的活性检测

目的制备特异性抗旋毛虫的鸡卵黄免疫球蛋白,研究其免疫应答规律及其稳定性。方法用纯化的旋毛虫幼虫免疫育龄种鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后获得卵黄抗体。应用酶联免疫吸附试验检测卵黄抗体的效价及其敏感性和稳定性。结果通过免疫可成功诱导出高效价的抗旋毛虫抗体,效价可达1∶106以上,免疫应答持续时间可达34周以上。免疫后卵黄抗体敏感性和血清抗体敏感性无显著性差异(P>0.05)。稳定性试验表明IgY敏感性高,在pH4～10及温度不超过60℃条件下活性稳定。结论成功制备出高效价的特异性抗旋毛虫卵黄抗体,其敏感性高,有一定的耐热、耐酸碱性,可进一步用于旋毛虫感染的研究。     

应用磁分离酶联免疫技术检测抗日本血吸虫虫卵抗体

目的 建立检测日本血吸虫病患者血清中特异性虫卵抗体的磁微粒分离酶联免疫法（MPAIA）。方法 采用异硫氰酸荧光素（FITC）标记日本血吸虫可溶性虫卵抗原（Sj-SEA）为检测抗原, 标记羊抗FITC抗体的磁微粒为固相载体, 碱性磷酸酶（ALP）标记羊抗人免疫球蛋白G（IgG）作为酶标二抗, 以单磷酸酚酞溶液为底物, 检测日本血吸虫病患者血清中虫卵特异性抗体。 结果 用磁微粒分离酶联免疫法检测日本血吸虫虫卵抗体, 阳性检出率为96.7%（116/120）, 与旋毛虫、并殖吸虫、嚢尾蚴等其他寄生蠕虫抗体无交叉反应现象, 检测试剂4 ℃可保存12个月。灵敏度参考品的灵敏度为1 ∶ 1 600, 精密度参考品的精密度（CV）＜10%。 结论 磁微粒分离酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、技术先进, 试剂保存时间长等特点。     

日本血吸虫体表蛋白rSj29的保护性效果

目的 克隆表达日本血吸虫体表蛋白Sj29基因,分析其表达特性和免疫保护效果。 方法 根据日本血吸虫体表蛋白Sj29基因序列（GenBank登录号为AY814537）设计引物,PCR扩增目的基因,生物信息技术分析序列特性。将目的基因部分片段亚克隆到原核表达载体pET28c中,构建重组质粒pET28c-Sj29,将其转至大肠埃希菌后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,组氨酸（His）柱亲和层析法纯化重组蛋白;蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。30只雌性BALB/c小鼠均分3组,实验组每鼠皮下多点注射重组蛋白rSj29共100 μl（0.1 mg/ml,用206佐剂配制）、佐剂对照组和空白（PBS）对照组,分别免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后2周用血吸虫尾蚴攻击感染小鼠,每鼠40±2条,感染后第53天剖杀,收集虫体计算减虫率;取肝脏和粪便计算减卵率。ELISA法检测实验鼠血清特异性IgG抗体水平,免疫组织化学法检测rSj29蛋白在各期虫体的定位,荧光定量PCR法分析各期虫体及攻击感染后42 d虫体Sj29基因表达水平。 结果 获得576 bp的Sj29基因。重组蛋白的相对分子质量（Mr）为22 900,以包涵体形式存在。Western blotting表明,重组蛋白可被免疫小鼠血清和感染日本血吸虫的小鼠血清识别。攻击感染后42 d,小鼠体内Sj29基因转录水平分别为佐剂对照组和空白对照组虫体的9.1倍和51.8倍。实验组小鼠成虫数（15.4±5.9）、肝组织虫卵数（40 143.3±2 995.9）和粪便虫卵数（3 803.9±110.9）与空白对照组相比,差异均有统计学意义（P<0.05）。ELISA结果显示,免疫小鼠可产生高滴度（1 ∶ 32 000）特异性IgG抗体。免疫组织化学结果表明,重组蛋白rSj29可在7、14 d童虫,28、32 d成虫和42 d雄、雌虫的体表表达。荧光定量PCR结果表明,虫龄为32 d的日本血吸虫成虫Sj29基因转录水平最高。 结论 重组蛋白rSj29有一定的免疫保护效果。