Effect of 5-fluorouracil (5-FU) Joint Arsenic Trioxide (As2O3) on Growth Inhibition of Liver Cancer Cell BEL-7402 During Hypoxia in Vitro

目的 探讨缺氧条件下,不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU)联合0.5 μmol/L浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株BEL-7402生长抑制的影响.方法 用二氯化钴(CoCl2)诱导细胞培养的化学性缺氧条件,及四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定缺氧条件下不同浓度5-FU及5-FU联合As2O3对肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用.结果 在化学性缺氧条件下,不同浓度5-FU联合As2O3对肝癌细胞株BEL-7402生长抑制作用比单用5-FU有统计学差别(P﹤0.05),呈剂量-效应依赖关系.结论 在CoCl2诱导的化学缺氧条件下,非细胞毒剂量As2O3具有改善缺氧状态下5-FU对人肝癌细胞BEL-7402化疗敏感性下降的作用.     

缺氧时三氧化二砷对5-氟尿嘧啶抗肝癌细胞株BEL-7402敏感性的影响

目的探讨缺氧条件下,不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU)联合0.5μmol/L浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株BEL-7402生长抑制的影响。方法用二氯化钴(CoCl2)诱导细胞培养的化学性缺氧条件,及四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定缺氧条件下不同浓度5-FU及5-FU联合As2O3对肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用。结果在化学性缺氧条件下,不同浓度5-FU联合As2O3对肝癌细胞株BEL-7402生长抑制作用比单用5-FU有统计学差别(P﹤0.05),呈剂量-效应依赖关系。结论在CoCl2诱导的化学缺氧条件下,非细胞毒剂量As2O3具有改善缺氧状态下5-FU对人肝癌细胞BEL-7402化疗敏感性下降的作用。     

三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长及抑制率的影响;凋亡电泳检测电泳条带,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率变化。结果在0.1~50.0μmol/L的浓度范围内As2O3对BEL-7402、HepG2细胞的生长均有明显的抑制作用,且有时间和浓度的依赖性;凋亡电泳显示5μmol/L As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402凋亡率分别是46.7%和53.1%;流式细胞仪DNA组方图上可见细胞G1前期出现亚二倍峰。结论As2O3可抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的生长,且在一定的范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性;As2O3对BEL-7402细胞株的生长抑制作用大于HepG2;As2O3抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长的作用与细胞凋亡有关。     

姜黄素单体影响肝癌BEL-7402细胞凋亡及其周期蛋白D表达的研究

目的 采用细胞学实验观察3种姜黄素单体对肝癌细胞株BEL-7402的抑制增殖及诱导细胞凋亡的作用强度和机制.方法 以四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Annexin Ⅴ-FITC双标记及流式细胞术(FCM)实验观察3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用与细胞周期变化,采用 Western blot实验分析3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402细胞周期蛋白D表达的影响.结果 (1)3种姜黄素均可通过诱导肝癌细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞生长增殖,存在时间与剂量效应,以姜黄素Ⅲ抑制效果最强.(2)3种姜黄素通过影响细胞周期生长的调控信号、降低细胞周期蛋白D表达量致使肝癌细胞停滞于G1/S期.结论 3种姜黄素均可通过抑制肝癌细胞周期蛋白D表达而诱导细胞凋亡,有效地抑制肝癌细胞生长增殖,具有很高的临床治疗价值.     

抗坏血酸与三氧化二砷联合应用诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨抗坏血酸(ascorbic acid,AA)与三氧化二砷(As2O3)联合应用增强肝癌细胞凋亡的作用。方法肝癌细胞株BEL-7402及SMMC-7721细胞分别用As2O3(1 μmol/L)、AA(62.5 μmol/L)、As2O3(1 μmol/L) AA(62.5 μmol/L)处理24～96 h,流式细胞仪上检测细胞凋亡百分率;用试剂盒法测定细胞内谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量。结果1 μmol/As2O3作用24～96 h有诱导BEL-7400及SMMC-7721细胞凋亡的作用,从(62.5 μmol/L) As2O3(1 μmol/L)作用72 h BEL-7402细胞凋亡百分率为(61.7±0.8)%,SMMC-7721细胞为(26.8±0.9)%,较单独应用As2O3(1 μmol/L)的凋亡百分率[(40.2±0.8)%;(11.4±0.5)%]明显增高。As2O3(1 μmol/L)单独作用对SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响。从(62.5 μmol/L)单独作用对BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响,但可明显降低SMMC-7721细胞内GSH的含量(P<0.05)。AA(62.5 μmol/L)与As2O3(1 μmol/L)联合作用可明显降低SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量(P<0.05),SMMC-7721细胞内GSH的含量降低更显著(P<0.01)。结论AA及As2O3联合应用能增强肝癌细胞株BEL-7402及SMMC- 7721细胞凋亡作用,尤其是对As2O3不敏感细胞株SMMC-7721细胞作用更显著。     

黄芪总黄酮对BEL-7402细胞的体外抑制作用

目的：探讨黄芪总黄酮（total flavonoids of Astragalus，TFA）在体外实验条件下对人肝癌细胞（BEL-7402）生长、繁殖的影响。方法：以BEL-7402细胞为实验对象，5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照，比较观察了不同浓度的TFA与BEL-7402细胞共同培养不同时间后，TFA对BEL-7402细胞的形态学、细胞存活曲线、细胞生长曲线和细胞有丝分裂指数的影响。结果：数据表明TFA处理48h半数抑制浓度（IC50）为40μg／ml，5-FU为0．3μg／ml；TFA浓度达80μg／ml时可使BEL-7402细胞生长明显受挫（P〈0．05），有丝分裂指数下降；与对照比较细胞形态主要表现为胞浆中颗粒明显增多，胞浆出现大量空泡，核固缩。结论：TFA对BEL-7402细胞生长繁殖具有抑制作用。     

紫花茄皂苷Ⅰ-2对人肝癌细胞的细胞毒影响

目的 探讨紫花茄皂苷Ⅰ-2对人肝癌BEL-7402细胞的细胞毒作用.方法 用酸性磷酸酶(APA)法测定不同浓度紫花茄皂苷Ⅰ-2处理人肝癌BEL-7402细胞后的增殖抑制率和IC50.结果 紫花茄皂苷Ⅰ-2对BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,在皂苷作用72 h后,实验组与对照组的A405比较差异有显著性(P＜0.05),半数抑制浓度IC50为6.2 μg/ml.结论 紫花茄皂苷Ⅰ-2对人肝癌细胞的细胞毒作用呈明显的浓度依赖性.     

绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞株BEL-7402的杀伤效应

目的探索绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402的杀伤效应。方法采用MTT法检测不同浓度的绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402增殖的作用,同时利用电子显微镜、透射电镜观察细胞BEL-7402的形态学变化。结果MTT检测表明：绿脓杆菌制剂为10×107/mL、5×107/mL、2.5×107/mL时对肝癌细胞生长杀伤作用与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）;电子显微镜、透射电镜观察发现肝癌细胞BEL-7402于12、24 h出现凋亡形态学改变,40 h形态学表现为凋亡与坏死并存。结论绿脓杆菌制剂对肝癌细胞BEL-7402生长有抑制作用,诱导细胞凋亡及坏死可能是主要作用机制。     

羟基喜树碱诱导人肝癌BEL-7402凋亡的研究

目的 研究羟基喜树碱(HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用.方法 用HCPT以不同终浓度诱导BEL-7402人肝癌细胞,用MTT法观察其细胞毒性.分别以倒置显微镜、电镜、荧光显微镜观察其改变.结果 HCPT以剂量依赖的方式抑制BEL-7402细胞的生长.荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征的形态学改变.结论 羟基喜树碱既能抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖,又能诱导其凋亡显示出较强的细胞毒性.     

肝力注射液逆转人肝癌细胞获得性多药耐药的体外研究

目的研究肝力注射液体外逆转人肝癌细胞5-Fu获得性多药耐药的作用。方法MTT法检测肝力注射液对人肝癌BEL-7402/5-Fu耐药细胞株的增殖抑制率及对5-Fu获得性多药耐药的逆转指数,倒置显微镜及Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞内阿霉素荧光强度。结果人肝癌BEL-7402/5-Fu细胞株对临床常用化疗药物显示出不同程度的交叉抗药性,肝力注射液(以苦参碱计)在0.230、0.115、0.058mg/mL3个质量浓度对人肝癌BEL-7402耐药细胞株72h的增殖抑制率分别为(9.25±2.38)%、(8.46±1.90)%、(4.23±2.05)%,对5-Fu的逆转指数分别为5.50、3.83、2.25,肝力注射液在0.230mg/mL质量浓度预处理细胞2h能提高细胞内阿霉素的量约38.61%。结论肝力注射液在体外具有逆转人肝癌细胞5-Fu获得性多药耐药的作用。     

家蝇抗菌肽Cecropin对人源性肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的分析家蝇抗菌肽Cecropin对人源性肿瘤细胞体外生长增殖与凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）MTT比色法测定家蝇抗菌肽Cecropin对人肺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7、人宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株BEL-7402和人正常肝细胞株Changs,Liver生长增殖情况的影响,采用流式细胞术检测家蝇抗菌肽Cecropin作用后4株肿瘤细胞凋亡的情况,对照组不加家蝇抗菌肽Cecropin。结果家蝇抗菌肽Cecropin对4株人源性肿瘤细胞的生长均有抑制作用,并能诱导肿瘤细胞发生凋亡,但对人肝癌细胞BEL-7402作用效果相对较强。结论家蝇抗菌肽Cecropin能够影响人源性肿瘤细胞的生长与凋亡,作用机制需进一步研究。     

亚砷酸抗裸鼠人肝癌作用及机制研究

目的：探讨亚砷酸体内对人肝癌细胞的作用、毒副作用及机制。方法：人肝癌细胞BEL-7402体外培养，取指数生长期细胞裸鼠皮下接种，成瘤后腹腔分别连续注射不同浓度亚砷酸、5—Fu及生理盐水，观察不同浓度亚砷酸治疗组及对照组瘤块大小、抑癌率和裸鼠一般状态的变化，光镜下观察肝肾结构的改变，并进行血常规检测。结果：亚砷酸可明显抑制瘤块增长，2．5mg／Lg亚砷酸10天的抑瘤率为53．42％，5mg/kg亚砷酸5天、10天的抑瘤率分别为79．28％、96．58％，而且无明显肝肾损害，对造血系统无影响。结论：亚砷酸可抑制体内肝癌结节生长，而且对肝、肾及造血系统没有明显的毒副作用。     

反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生及凋亡的影响

为研究胰岛素样生长因子 I(IGF I)反义寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响 ,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性 ,利用反义核酸技术 ,合成针对IGF I的寡核苷酸片段 ,利用脂质体包裹反义IGF I寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞 ,MTT法检测细胞增生 ;放免法检测培养细胞上清中AFP、CEA的分泌量 ;采用末端标记 (Tunel)法检测细胞凋亡的变化。结果发现转染反义IGF I寡核苷酸可使人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞增生下降 ,AFP、CEA表达降低 ,凋亡细胞数量增多。反义IGF I寡核苷酸转染人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞可以降低细胞增生、减少细胞去分化并诱导肝癌细胞凋亡     

Bcl-2短发夹状RNA对BEL-7402、Caco2细胞的生长抑制作用

目的:研究Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体对肝癌细胞系BEL-7402和结肠癌细胞系Caco2生长的抑制作用.方法:将Bcl-2 shRNA序列克隆到携带绿色荧光蛋白基因的质粒Pgenesil-1载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的Bcl-2shRNA表达质粒转入BEL-7402、Caco2细胞,同时设立阴性shRNA组、空载体组、脂质体组、空白组作为对照.通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察细胞的转染效率,Western印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖情况.结果:Bcl-2 shRNA转染组、阴性shRNA组、空载体组的转染效率无显著差异.转染Bcl-2 shRNA后BEL-7402、Caco2细胞Bcl-2蛋白表达水平与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组相比均显著降低(P＜0.05),且Bcl-2 shRNA抑制Caco2细胞Bcl-2蛋白表达比BEL-7402细胞更为明显(P＜0.05).MTT测定显示转染Bcl-2 shRNA载体入BEL-7402、Caco2细胞在72、96 h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:Bcl-2 shRNA可特异性地抑制BEL-7402、Caco2细胞生长.     

Hepsin蛋白对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨Hepsin蛋白对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法:运用RT-PCR技术检测肝癌组织样品肝癌细胞系中Hepsin基因的表达水平,并从原发性肝癌患者的癌组织中扩增Hepsin基因编码区序列,该序列被克隆并构建pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞、Bel-7402细胞,观察Hepsin蛋白对肝癌细胞的增殖能力和细胞凋亡效应的影响。结果:Hepsin基因在临床肝癌组织和人正常肝细胞L-02细胞中高表达,在人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和临床肝癌癌旁组织不表达或低表达,Hepsin蛋白可以增强肝癌细胞系的增殖能力,同时抑制肝癌细胞凋亡。结论:Hepsin蛋白促进肝癌细胞生长并抑制肝癌细胞凋亡。     

蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用

[目的]观察蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用。[方法]肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法检测蜂毒素对其增殖抑制作用,流式细胞术测定蜂毒素对细胞增殖核抗原表达和细胞周期的影响。[结果]蜂毒素体外能够抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖活性;并抑制细胞增殖核抗原的表达,呈剂量依赖性;干扰细胞周期,使S期细胞增加,G2/M期细胞减少。[结论]蜂毒素具有抑制BEL-7402肝癌细胞增殖的作用,机制可能与抑制细胞增殖核抗原表达和干扰细胞周期有关。     

过表达apoA-Ⅰ对BEL-7402细胞内脂质堆积的影响

目的通过建立过表达载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,apoA-Ⅰ)的细胞模型,用不同浓度及不同类型的脂肪酸作用于细胞,检测过表达apoA-Ⅰ与正常细胞内脂质水平,来研究利用过表达apoA-Ⅰ促进ATP结合盒转运子A1(ATP-bindingcassette transporter A1,ABCA1)介导的脂质转运途径,降低脂质合成,进而影响非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)细胞的脂质堆积的分子机制,探索一种新方法,通过apoA-Ⅰ/ABCA1这一途径改变细胞内脂质代谢来预防NASH。方法①通过不同浓度和类型的脂肪酸处理人肝癌细胞系BEL-7402细胞,作用6、12、24 h后,经油红O染色,检测不同时间脂质在细胞内的定位,从而确定出适合的脂肪酸浓度及作用时间;②通过MTT法检测不同浓度及类型的脂肪酸作用细胞6、12、24 h后,细胞活性的变化情况;③分别转染空载体质粒pcDNA 3.0与质粒pcDNA3.0/apoA-Ⅰ,通过Western blotting的实验方法,检测细胞内、外apoA-Ⅰ的表达情况;④对正常或过表达apoA-Ⅰ的BEL-7402细胞模型,以最适的实验条件作用于正常(对照组)和过表达apoA-Ⅰ(实验组)的BEL-7402细胞,检测细胞内胆固醇、游离脂肪酸以及三酰甘油的含量。结果①200μmol/L或400μmol/L浓度脂肪酸作用6、12及24 h均可使脂质在BEL-7402细胞胞质中堆积,脂质的产生对脂肪酸呈剂量和时间依赖性;②饱和脂肪酸棕榈酸使细胞活性降低,且对细胞生长的抑制作用随棕榈酸的浓度及作用时间的增加而加强;③apoA-Ⅰ过表达于BEL-7402细胞内,且apoA-Ⅰ可以释放到细胞外,协助ABCA1转运胆固醇;④与正常的BEL-7402细胞相比,过表达apoA-Ⅰ组细胞内的三酰甘油、游离脂肪酸以及胆固醇均有显著减少。结论与正常组相比,过表达apoA-Ⅰ可以减少胆固醇、游离脂肪酸及三酰甘油在人肝细胞内的聚积,从而对于NASH的防治具有治疗作用。     

As2O3对正常免疫力小鼠移植性卵巢肿瘤作用的实验研究

目的：观察As2O3的体内抗卵巢癌效应。方法：采用人卵巢癌COC1细胞系，以正常免疫力的雌性近交系BalB/c小鼠为对象，建立了人卵巢癌的小鼠皮下移植瘤模型；小鼠移植瘤经病理组织学检查及免疫组化法鉴定肿瘤组织的性质及来源；筛选砷剂腹腔注射的剂量并取急性中毒死亡小鼠的脑、肝、肾做病理组织学检查；采用腹腔注射法给药，观察砷剂的体内抗卵巢癌作用；治疗组小鼠的脑、肝、肾做病理组织学检查。结果：经病理组织学及免疫组化法鉴定证实小鼠移植疡为人低分化性上皮性卵巢肿瘤；As2O3可以显著抑制小鼠移植瘤生长；大剂量的砷剂可引起小鼠脑组织及肝组织坏死；治疗剂量(1mg/kg.d和2mg/kg.d)的砷剂对小鼠脑、肝、肾等重要脏器未造成明显损害。结论：As2O3对卵巢癌具有良好的治疗作用。     

去甲斑蝥素诱导肝癌细胞凋亡的实验观察

目的 观察去甲斑蝥素(NCTD)诱导肝癌细胞凋亡的分子学机制,为合理应用NCTD治疗肝细胞肝癌提供理论基础.方法 对肝癌细胞株SMMC-7721,BEL-7402进行体外培养,应用不同浓度的NCTD(3、10、30μg/ml)处理肝癌细胞,采用MTT方法检测细胞生存率,锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western印迹检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(caspase)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白,以及Bcl-2家族蛋白的表达.结果 MTT检测显示NCTD处理24、48和72 h后SMMC-7721细胞IC50分别为12、6和1.6μg/ml,BEL-7402细胞IC50分别为10、4和2 μg/ml;锥虫蓝拒染法结果显示,浓度为3、10、30 μg/ml的NCTD处理24 h后,SMMC-7721细胞的死细胞率分别为16.89%、46.16%、72.13%,均显著高于未处理对照组的死细胞率3.34%(P＜0.01);BEL-7402细胞的死细胞率分别为19.59%、50.10%、90.31%,均显著高于未处理对照组的死细胞率2.88%(P＜0.01).流式细胞仪检测显示,NCTD 10 μg/ml处理12 h,SMMC-7721细胞凋亡率达到27%,较未处理对照组(7%)升高20%,BEL-7402细胞凋亡率达到30%,较未处理对照组(8%)升高22%;Western印迹结果显示,NCTD 10μg/ml处理8、14和24 h后,在两株肝癌细胞均检测到caspase-9,-3活化,PARP蛋白裂解,以及Bcl-2、Bcl-XL和Mcl-1蛋白的表达下调.结论 结果提示NCTD具有较强的抑制肝癌细胞生存和诱导肝癌细胞凋亡作用.NCTD的抗肝癌作用机理可能是通过诱导多个Bcl-2抑凋亡家族蛋白表达下调,激活内源性线粒体凋亡通路,诱导肝癌细胞发生凋亡.