抗人红细胞NADH－细胞色素b5还原酶单克隆抗体的建立

以重组人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；通过常规方法将小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出６株阳性克隆。其中两株分泌ＩｇＧ，其余均分泌ＩｇＭ。免疫印迹分析表明，两株ＩｇＧ单克隆抗体对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶有较高的特异性和亲和力。这一研究为开展对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶的研究和遗传性高铁血红蛋白血症的免疫诊断奠定了基础。     

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体的研制及鉴定

以人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）为抗原，采用脾内免疫法，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞与小鼠Ｓｐ２／０细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法筛选，三次克隆化后获得５株能稳定分泌抗ｃＴｎＴ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５和Ａ７。免疫球蛋白亚类鉴定其中１株为ＩｇＧ２ａ，４株为ＩｇＭ。染色体数目９２～１１０条。将Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５的单克隆抗体腹水做１：１００稀释与ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫＭＢ和ＧＯＴ等心肌酶均无交叉反应。５株ＭｃＡｂ的腹水效价为３．２×１０－６～１．６×１０－７。ＭｃＡｂ相加试验表明，Ａ５和Ｇ３可识别不同的抗原表位。     

抗人Ig轻链系列单抗的研制：Ⅲ抗人Ig游离λ型轻链共同抗原决定…

用多例提纯的ＢＪ－λ混合免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，获得３株稳定分泌抗人Ｉｇ游离λ链ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株（ＡＨλＤ８、ＡＨλ１Ｃ１和ＡＨλ２Ｃｌ）。它们分泌的ＭｃＡｂ均能与我室所有１７例ＢＪ－λ起强反应，但不与结合的λ型轻链及Ｋ型轻链反应，表明这３株ＭｃＡｂ可能是抗人Ｉｇ游离λ链共同抗原决定簇的。３株ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１亚类。添加ＥＬＩＳＡ表明它们识别相同的表位。     

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的 制备人ＩｇＧ检测用双特异性单克隆抗体诊断试制。方法 用人ＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与抗ＨＲＰＭｃＡｂ杂交瘤细胞ＨＡＴ敏感株进行第２次融合。结果 获得５株能稳定分泌抗人Ｉｇ－抗ＨＲＰ的双特异性单克隆抗体的杂交－杂交瘤细胞,分泌的抗体亚类其中１株为ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１,余为ＩｇＧ１／ＩｇＧ１。培养上清与腹水效价分别为２＾７、１０＾０４以上,经ＨＲＰ亲和层析有２个蛋白吸ＢｓＭｃＡｂ存在于第２     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能从复杂的淋球菌菌体崩解物中特异地识别分子量为３５ＫＤａ的ＰＩＡ抗原，与淋球菌ＰＩＢ无交叉反应。     

重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备

本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了４株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系ＢⅡ１Ｂ５、ＤⅡ６Ｂ９、ＭⅡ１Ｈ４和ＧＩ３Ｅ７。用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的类分别是ＩｇＭ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ。间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞上清的效价为１×１０－２～１．２５×１０－４，腹水效价为１×１０－２～１×１０－８。培养上清经ＥＬＩＳＡ鉴定，与ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α等细胞因子均无交叉反应，只与ｒＨｕＥＰＯ特异性结合。     

人醛缩酶A单克隆抗体的制备及应用

纯化并鉴定了人醛缩酶Ａ、Ｂ、Ｃ（ｈＡＬＤ－Ａ、Ｂ、Ｃ）。用ｈＡＬＤ－Ａ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，将免疫的脾细胞和Ｐ＿３－Ｘ＿（６３）－Ａｇ８．６５３骨髓瘤细胞用ＰＥＧ进行融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选，ｈＡＬＤ－Ｂ、Ｃ作阴性对照，将阳性反应的杂交瘤细胞进行克隆，获得３株杂交瘤细胞株。其ＭｃＡｂ的亚类分别为ＩｇＧ２ｂ，ＩｇＧ１、ＩｇＭ，亲合常数分别为７．５×１０￣（１０）、３．５×１０￣９、２．３×１０￣９。３株细胞株分泌的单抗通过Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ得到证实。用亲合层析法从人肝癌细胞中提纯了ＡＬＤ－Ａ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为单一区带，但其电泳迁移率较ｈＡＬＤ－Ａ滞后。     

抗人重组IL—1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株 ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定，抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ＩｇＧ１，免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带，ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α，ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无     

抗人Ig轻链系列单抗的研制Ⅲ抗人Ig游离λ型轻链共同抗原决定簇单克隆抗体的制备和初步鉴定

用多例提纯的ＢＪ－λ混合免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，获得３株稳定分泌抗人屹游离λ链ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株（ＡＨλＤ８、ＡＨλ１Ｃ１和ＡＨλ２Ｃ１）．它们分泌的ＭｃＡｂ均能与我室所有１７例ＢＪ－λ起强反应，但不与结合的λ型轻链及Ｋ型轻链反应，表明这３株ＭｃＡｂ可能是抗人Ｉｇ游离λ链共同抗原决定簇的．３株ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１亚类。添加ＥＬＩＳＡ表明它们识别相同的表位。用于检测正常人血清和尿中的游离λ链及多发性骨髓瘤患者的ＢＪ－λ均具有很好的特异性和敏感性．本文还讨论了有关的免疫问题．     

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能     

抗血型糖蛋白A非凝集型单克隆抗体的制备和鉴定

抗红细胞非凝集型抗体是建立“全血免疫分析系统”的必要条件。为此，我们采用小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０和纯化人红细胞膜血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）免疫的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的脾细胞融合，获得了一株分泌抗ＧＰＡ非凝集型单克隆抗体的杂交瘤细胞系－３Ｃ５。３Ｃ５分泌的ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１亚类，ｋａｐｐａ型轻链，能够识别和结合红细胞膜的血型糖蛋白Ａ和血型糖蛋白Ｂ（ＧＰＢ），说明其识别的是ＧＰＡ和ＧＰＢ分子所共有的抗原决定族     

抗人重组IL－1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定；抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ｌｇＧｌ；免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带；ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α、ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无交又反应；放射免疫测定结果证实，３株抗体分别识别ＩＬ－１分子上两个不同的抗原决定簇。     

先天性高铁血红蛋白血症——细胞色素b5还原酶缺乏症的分子发病机理

先天性高铁血红蛋白血症──细胞色素ｂ_５还原酶缺乏症的分子发病机理凌光鑫，程爽１红细胞内的还原系统红细胞的酶和非酶系统能使氧化生成的高铁血红蛋白（ＭＨｂ）还原。主要通过ＮＡＤＨ－ＭＨｂ还原酶，又称黄递酶，现证实为细胞色素ｂ５还原酶（ＮＡＤＨ－ｃｙｔｏ?..     

分泌抗登革病毒单抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

将纯化的登革３型病毒（ＤＥＮ－３）单克隆抗体３Ｄ３（ＡｂＩ）连结到载体分子ＫＬＨ上，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合。用ＥＬＩＳＡ夹心法检测阳性克隆，融合率达１００％，阳性率为５％，经２－３次克隆化，获得了６株分泌抗登革病毒单抗的独特型抗体（ＭｃＡｂ２）的杂交瘤细胞系。在进行阳性筛选及特异鉴定时，选择了以３－５μｇ／ｍｌ的最适Ａｂ１包被浓度，并用正常小鼠Ｉｇ及ＫＬＨ分     

HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的２株ＭｃＡｂ。此两株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＮＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中，对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。将此两株ＭｃＡｂ用于慢性丙型肝炎病人肝活检免疫组化研究，获得较为满意的结果。     

甲型肝炎病毒的纯化及其单抗的制备

应用不连续蔗糖／甘油密度梯度超速离心的方法，从培养细胞中纯化甲肝病毒（Ｈｅ－ｐａｔｉｔｉｓＡＶｉｒｕｓ，ＨＡＶ）。纯化的ＨＡＶ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，获得三条带：ＶＰ１（３４０００），ＶＰ２（３００００）和ＶＰ３（２６０００）。用纯化的ＨＡＶ抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，将已免疫小鼠的脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，获得６株分泌抗ＨＡＶ单克隆抗体的杂交瘤。它们的培养上清和腹水的抗体滴度分别是５０～１０００和１０００～４０００。Ｉｇ亚类５株为ＩｇＧ１，１株为ＩｇＧ２ａ。采用间接的ＥＬＩＳＡ法分析ＨＡＶ抗原的抗原位点，结果表明ＨＡＶ抗原至少存在４个抗原位点，两个存在于ＶＰ１蛋白带，另两个分别存在于ＶＰ２和ＶＰ３蛋白带     

重组人γ－干扰素单克隆抗体的制备及初步应用

应用常规方法制备了４株能稳定分泌抗人重组γ－干扰素单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系：３Ｄ３、３Ｄ１２、３Ｆ９和３Ｂ８．经免疫琼脂双扩散法鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的亚类分别为：ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ１和１ｇＧ１．相对亲和常数前两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１１、后两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１３．问接ＥＬＩＳＡ法测培养上清的效价为２×１０２～１．２８×１０５．由小鼠腹水提取的４株ＭｃＡｂ与天然γ－干扰素均产生交叉反应，对重组的人γ－干扰素均具有中和活性．其中３Ｆ９和３Ｄ３培养上清对重组人γ－干扰素亦有明显的中和活性。用３Ｆ９ＭｃＡｂ与溴化氢活化的ＳｅＰｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制备了亲和层析柱，用其纯化粗提的γ－干扰素纯度达到９５％以上，比活性达１．９×１０７ＩＵ／ｍｇ蛋白．     

抗口腔支原体、精氨酸支原体单克隆抗体的制备及其应用方法的初步研究

用口腔支原体、精氨酸支原体抗原免疫ＢＡＬＧ／ｃ小鼠，取其脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞（Ｓｐ２／０）融合，获得了７株稳定分泌抗口腔支原体单克隆抗体（ＭｃＡｂ），２株分泌抗精氨酸支原体ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。间接ＥＬＩＳＡ测定其抗体效价可达１：１０３～１：１０７；９株ＭｃＡｂ中１株为ＩｇＧ２ａ，其余均为ＩｇＧ１。初步建立了ＥＬＩＳＡ检测支原体的方法。     

抗口腔支原体,精氨酸支原体单克隆抗体的制备及其应用方法的初步研究

用口腔支原体，精氨酸支原体抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞（Ｓｐ２／０）融合，获得了７株稳定分泌抗口腔支原体单克隆抗体（ＭｃＡｂ），２株分泌抗精氨酸支原体ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。间接ＥＬＩＳＡ测定其抗体效价可达１：１０＾３～１：１０＾７，９株ＭｃＡｂ中１株为ＩｇＧ２ａ，其余均为ＩｇＧ１。初步建立了ＥＬＩＳＡ检测支原体的方法。