PCR与单克隆抗体ELESA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶性反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测．ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｈｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性．ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳＡ检测的被感性为１５ｎｇ／ｍｌ．应用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ检测了９６份结核临床标本．ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＰＣＲ的检出率虽高于细菌培养的阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片、细菌培养和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．００１）．ＥＬＩＳＡ的假阳性率高于ＰＣＲ的假阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．研究表明，ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ均是特异、敏感、快速的诊断结核病的方法．但在使用中又各自有其特点．     

聚合酶链反应快速诊断结核病的应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立了扩增结核杆菌特异重复序列ＩＳ６１１０部分基因的方法。对９种抗酸分枝杆菌、３种普通菌进行检测，结果仅人型结核杆菌、牛型结核杆菌及ＢＣＧ扩增出１２３ｂｐ特异性条带，ＰＣＲ产物经ＳａｌⅠ酶切后产生７０ｂｐ与５３ｂｐ两个片段。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性达１０ｆｇＤＮＡ或５个菌体。应用ＰＣＲ检测了１０９份结核临床标本，其总阳性率为７２．５％，明显高于抗酸染色涂片（２．８％）与细菌培养（９．２％）的阳性率（Ｐ＜０．００１）。ＰＣＲ的检出率也较ＥＬＩＳＡ法检测抗ＰＰＤ－ＩｇＧ的阳性率（６３．３％）为高，但尚无统计学差异（ｐ＞０．０５），但是ＥＬＩＳＡ检测抗体有１９．０％的假阳性。研究表明，ＰＣＲ是一种特异、敏感、快速诊断结核病的方法。     

半巢式聚合酶链反应检测柯萨奇B组病毒方法的建立及其在病毒性心肌炎诊断中的应用

为确定聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）ＲＮＡ检测及临床常规诊断中的应用价值，从ＣＢＶ基因组５’非编码区（５’－ＮＣＲ）选择了ＣＢＶ间高度保守的三个寡核苷酸片段作为引物，建立了ＣＢＶ半巢式ＰＣＲ的检测方法。该方法对ＣＢＶ最低检出量为０．１ＴＣＩＤ５０，且对其他常见的相关病毒无扩增反应。在确定特异性和敏感性的基础上，对临床诊断或疑为病毒性心肌炎等疾病的患者进行了检测，１１１例心肌炎患者血清标本中有６２例为ＰＣＲ阳性。与ＥＬＩＳＡ检测结果相比，两种方法的阳性率分别为５６％和４５％，符合率为７７％。     

应用PCR技术诊断新生儿隐匿型先天性弓形虫病

本文报告用ＰＣＲ的体外基因扩增技术对１１６例弓形虫抗体检测阳性产妇的新生儿脐带血作ＰＣＲ检查，结果ＰＣＲ阳性２９例，阳性率为２５％；同时用ＥＬＩＳＡ法检测脐血中弓形虫特异性抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ，阳性率分别为２７．６％和１６．３％，提示应用ＰＣＲ技术检测脐血中弓形虫ＤＮＡ结合ＥＬＩＳＡ进行筛选，可早期诊断新生儿隐匿型先天性弓形虫病，以利于及时治疗，减少减轻隐匿型先天性弓形虫病的后发症，降低其危害。     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

比较两种检测麻风菌鼻携带的方法

目的选用简便、快速、经济的麻风菌鼻携带检测法，评价麻风病传播及防治效果。方法采用ＰＣＲ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ／ＥＣＬ平行检测鼻分泌物中麻风菌及其酚糖脂（ＰＧＬ－１）抗原。以５种分枝杆菌为对照，评价两试验的特异性；以４５例不同治疗状态的麻风患者和１４３名接触者的检测，比较两试验的敏感性。结果ＰＣＲ的阳性检出率略高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ／ＥＣＬ，经配对χ２检验，差异没有显著性。结论Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ／ＥＣＬ较ＰＣＲ简便、快速、经济，是一项适用于现场研究的麻风流行病学工具。此外，属聚氟乙烯类的ＧＶＨＰ膜是适合于检测粘膜分泌物抗原的载体     

人可溶性IL-6R及其突变体基因在COS7细胞中的表达及活性分析

目的 研究人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｈｓＩＬ－６Ｒ）的空间构效关系，为小分子拮抗设计提供理论依据。方法：首先利用ＰＣＲ技术扩增天然人ｓＩＬ－６Ｒ基因片段，然后将第２８０位Ｈｉｓ残基突变成Ｉｌｅ。天然基因和突变体基因分别转染ＣＯＳ７细胞，经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｂｌｏｔ检测证实转染细胞上清中的表达产物，并利用ＢｉｎｄｉｎｇａｓｓａｙＥＬＩＳＡ和生物学功能分析法检测表达产物与ＩＬ－６的结合能力以及它们所介     

PCR－ELISA在检测血清中丙型肝炎病毒上的应用

ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ在检测血清中丙型肝炎病毒上的应用中国科学院上海生物工程研究中心建立了一个替代目前使用的套式ＰＣＲ的血清中丙型肝炎病毒ＲＮＡ检测的新方法。该方法只需经过一次ＰＣＲ扩增，即可通过对掺入标记物的ＰＣＲ产物的ＥＬＩＳＡ检测得到与套式ＰＣＲ相...     

PCR和ELISA检测单纯疱疹病毒的比较

依据ＨＳＶ ＤＮＡ多聚酶基因核苷酸序列设计并合成一对引物，建立了ＰＣＲ方法。用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ平行检测ＨＳＶ－１，ＨＳＶ－２标准毒株感染的细胞，拟诊ＨＳＶ脑炎患者脑脊液（ＣＳＦ）及多种对照标本。结果表明，两方法特异性完全一致；ＰＣＲ检测阳性率高，比ＥＬＩＳＡ敏感近２０倍，更适用于ＨＳＶ脑炎的早期诊断。     

急性白血病患儿脑脊液PCR扩增HCMV－DNA的研究

应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增和洋地黄探针杂交的方法，对５３例急性白血病（ＡＬ）患儿脑脊液（ＣＳＦ）样本进行了检测。经过ＰＣＲ扩增，可见明显的人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）４００ｂｐ扩增带；经洋地黄探针特异性杂交鉴定，ＡＬ患儿ＣＳＦ标本ＰＣＲ扩增产物的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性检出率为８３．０２％。本实验为ＡＬ病人ＣＳＦ的ＨＣＭＶ检测提供了一个简便方法。     

B型肉毒神经毒素基因的PCR检测

本研究用一对Ｂ型肉毒神经毒素基因特异的寡核苷酸引物，扩增Ｂ型基因轻链区域一段２５３ｂｐ的ＤＮＡ片段，对２２株Ｂ型肉毒梭菌进行了鉴定，所试２２株Ｂ型肉毒梭菌其ＰＣＲ均为阳性。用Ｂ型肉毒梭菌ＣＭＣＣ（Ｂ）６４３５２对ＰＣＲ的检测灵敏度进行检查，可从６０个细菌中得到明显的扩增产物。用其它各型肉毒梭菌及其它梭状芽胞杆菌共５３株对ＰＣＲ的特异性进行了检测，除一株Ａ型肉毒梭菌（ＬＣＬ００１）ＰＣＲ为阳性外，其余菌株均为阴性。ＬＣＬ００１的扩增产物其分子量以及限制性内切酶消化产物和Ｂ型肉毒梭菌的扩增产物完全一致，认为该株菌中带有不表达的Ｂ型肉毒神经毒素基因，应为Ａ（Ｂ）型。由此可见，该ＰＣＲ扩增系统不仅具有灵敏度高，特异性强等特点，而且可检测出不表达的Ｂ型肉毒神经毒素基因，用于肉毒梭菌的鉴定具有其它方法不可比拟的优点。     

急性白血病患儿脑脊液PCR扩增HCMV—DNA的研究

应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增和洋地黄深针杂交的方法，对５３例急性白血病（ＡＬ）患儿脑脊液（ＣＳＦ）样本进行了检测，经过ＰＣＲ扩增，可见明显的人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）４００ｂｐ扩增带，经洋地黄探针特异性杂交鉴定，ＡＬ患儿ＣＳＦ标本ＰＣＲ扩增产生的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性检出率为８３．０２％。本实验为ＡＬ病人ＣＳＦ的ＨＣＭＶ检测提供了一个简便方法。     

生物素─链霉亲和素系统在检测巨细胞病毒抗体中的应用

本文用自制ＣＭＶ抗原和生物素－链霉亲和素系统试剂，通过最适条件的对比，建立了检测人血清中抗巨细胞病毒ＩｇＭ、ＩｇＡ类抗体的ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ，并与普通ＥＬＩＳＡ作比较，结果表明，ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ的非特异性吸附明显低于普通ＥＬＩＳＡ，与普通ＥＬＩＳＡ相比，抗体效价分别提高５和７倍，阳性率分别提高６８％和１５３．５％。在实际工作中曾用ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ检测临床样品１６５份，就所得结果进行分析。表明ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ检测ＣＭＶＩｇＭ和ＩｇＡ可提高特异性和灵敏度，值得推广应用。     

生物素─链霉亲和素系统在检测巨细胞病毒抗体中的应用

本文用自制ＣＭＶ抗原和生物素－链霉亲和素系统试剂，通过最适条件的对比，建立了检测人血清中抗巨细胞病毒ＩｇＭ、ＩｇＡ类抗体的ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ，并与普通ＥＬＩＳＡ作比较，结果表明，ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ的非特异性吸附明显低于普通ＥＬＩＳＡ，与普通ＥＬＩＳＡ相比，抗体效价分别提高５和７倍，阳性率分别提高６８％和１５３．５％。在实际工作中曾用ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ检测临床样品１６５份，就所得结果进行分析。表明ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ检测ＣＭＶＩｇＭ和ＩｇＡ可提高特异性和灵敏度，值得推广应用。     

肝细胞肝癌组织中丙型肝炎病毒核心区基因及其表达 …

目的 采用多种方法检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区基因和表达产物在肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组织中的分布及其在ＨＣＣ发生和发展中的作用。方法 对３９例ＨＣＣ患者进行免疫组化和原位杂匀的检测。ＩＳ－ＲＴ－ＰＣＲ法用于检测并定位ＨＣＶ－ＲＮＡ。微切组织的ＲＴ－ＰＣＲ法分别检测癌与癌旁组织中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,以便能够控制扩增产物的来源。同时还进行 血清学ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ的检测。结果 血清ＥＬＩＳＡ的阳     

用基因工程表达的抗原早期诊断鼻咽癌

目的为了建立鼻咽癌（ＮＰＣ）早期诊断方法。方法以基因工程表达的、经纯化的ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）早期抗原（ＥＡ）成分ＥＡ－Ｄ和ＥＡ－Ｒ作为诊断抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检查３０例ＮＰＣ病人及４９例正常人血清中的ＥＡ／ＩｇＡ抗体。结果用ＥＬＩＳＡ检测抗体较用细胞涂片免疫酶方法（ＩＥ）敏感。ＥＬＩＳＡ检测ＮＰＣ病人血清中ＥＡ／ｌｇＡ抗体，阳性率为１００％，ＥＡ／ｌｇＡ抗体效价均≥１∶１００。而用ＩＥ法，平行检测３０例ＮＰＣ病人血清中ＥＡ／ｌｇＡ抗体效价，结果６例为阴性（＜１∶１０），抗体阳性率为７０％。ＥＬＩＳＡ明显地提高了ＮＰＣ的检出率。以ｐ１３８（ＥＡ－Ｒ）和ｐ５４（ＥＡ－Ｄ）分别或混合包被，检测对ＥＢＶ特异的ＥＡ－Ｄ和ＥＡ－Ｒ的抗体。结论表明在ＮＰＣ病人血清中存在对ＥＡ两种抗原的抗体，对ＥＡ－Ｄ的抗体滴度高于对ＥＡ－Ｒ的抗体。因此，以两种抗原混合包被作为诊断抗原建立的ＥＬＩＳＡ方法，为ＮＰＣ的早期诊断提供更敏感、特异和简便的手段。     

聚合酶链反应鉴定丙型肝炎病毒母婴传播的状态及其意义

采用多种方法，动态检测了１１例丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的孕妇所生的婴儿血抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ。发现用合成肽酶联免疫吸附试验（ｓｐＥＬＩＳＡ）检测婴儿抗－ＨＣＶ阳性率（２３．５２％）显著低于第二代重组抗原ＥＬＩＳＡ（２ｎｄＥＬＩＳＡ）（４１．１８％）（Ｐ＜０．０５）；用２ｎｄＥＬＩＳＡ检测，６例婴儿脐血和静脉血抗－ＨＣＶ阳性，５例持续１～５月阴转，１例阳性持续１３个月。经重组免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）鉴定，４例阳性，２例可疑阳性。用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ，５例阳性，３例于生后１～６个月自然阴转，２例持续阳性分别达９个月和１３个月。提示检测抗－ＨＣＶ判断ＨＣＶ母婴传播的状态受到婴儿抗－ＨＣＶ产生水平低下、母体抗－ＨＣＶ的被动输入和不同检测方法的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ是判断母婴传播更可靠的指标。     

定量聚合酶链反应检测肝病患者血清中乙型肝炎病毒 …

目的 了解肝病患者血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的含量，以便观察临床抗病毒治疗效果及血清ＨＢＶ ＤＮＡ水平与病情及预后的关系。方法 应用荧光素标记的半巢式引物在扩增中能量转移的定量聚合酶 链反应（ＱＰＣＲ），对６３例肝功能异常的肝病患者血清进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定，并与普通ＰＣＲ及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行比较。结果 ＱＰＣＲ阳性率为８２。５４％，普通ＰＣＲ法为７１．４３％，ＥＬＩＳＡ     

乳腺癌细胞雌激素受体的检测和雌孕激素对MCF-7细胞活性的作用

目的：探讨乳腺癌细胞雌激素受体（ＥＲ）的检测方法和雌孕激素对ＭＣＦ－７乳腺癌细胞系活性的影响。方法：对２４例乳腺癌细胞悬液采用细胞酶联免疫吸附实验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附实验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测ＥＲ表达。并应用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定雌孕激素对ＭＣＦ－７细胞活性的作用。结果：（１）Ｃ－ＥＬＩＳＡ法实验组ＥＲ表达明显高于对照组，差异有显著性意义；Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测的１２例乳腺癌中，ＥＲ阳性１０例，阴性２例。（２）低浓度的雌激素对ＭＣＦ－７细胞的活性有加强作用，高浓度雌激素明显抑制其活性；低浓度的孕激素无明显的作用，高浓度孕激素则具有明显抑制作用，低浓度雌、孕激素共同作用时，对ＭＣＦ－７无明显抑制和加强作用，高浓度时其活性明显增加，增加程度低于单独雌激素，但稍高于孕激素对ＭＣＦ－７的作用。结论：在特异性和敏感性上，Ｃ－ＥＬＩＳＡ法检测ＥＲ优于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，是一种可行定量检测ＥＲ的方法，雌激素紊乱可以导致乳腺癌的发生。     

SLE患者自身抗体单链噬菌体抗体库构建及抗体活性检测

本文用ＳＬＥ病人外周血淋巴细胞抽提ＲＮＡ,采用ＲＴ ＰＣＲ反应以人的特异性ＨｕＶＨＢＡＣＫ、ＨｕＪＨＦＯＲ和ＨｕＶＬＢＡＣＫ、ＨｕＶＬＦＯＲ引物扩增人抗体的ＶＨ和ＶＬ基因片段,并将其与ｌｉｎｋｅｒ拼接成ＳｃＦｖ片段克隆于大肠杆菌,使其与噬菌体基因Ⅲ的产物以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达,从而构建了ＳＬＥ病人的单链噬菌体抗体库,ＥＬＩＳＡ检测证明ＳｃＦｖ基因产物具有抗体活性。ＳＬＥ噬菌体抗体库的构建为ＳＬＥ发病机理、诊断和治疗研究打下了良好的基础。