多聚(ADP-核糖)聚合酶与电离辐射

多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)是广泛存在于细胞内的一种具有蛋白修饰和核苷酸聚合作用的聚合酶,参与细胞DNA损伤后的修复过程。已经证实,PARP具有多种生理、生化功能, 并与细胞的死亡相关,电离辐射等各种细胞损伤因素都可以影响PARP活性。     

γ-H2AX分析及其在监测电离辐射所致DNA双链断裂中的应用前景

近几年的研究表明,组蛋白H2AX在DNA损伤修复、细胞周期检查点调控、基因组稳定的维持和肿瘤抑制中起着重要作用,而且在放射生物学中具有应用前景。磷酸化的组蛋白H2AX (y-H2AX)对DNA双链断裂快速敏感的反应使其成为DNA双链损伤的标志。y-H2AX分析也将在监测电离辐射尤其是低剂量电离辐射所致的DNA双链损伤中拥有广阔的应用前景。     

镍和亚砷酸盐抑制辐射诱发DNA双链断裂的修复

目的 :研究环境有毒物质镍和亚砷酸盐对辐射引起的DNA双链断裂 (dsb)修复的影响。方法 :取 3× 10 5 中国地鼠卵细胞在 6 0 mm组织培养皿中 (5 m L Ham′s F- 12培养液 )于 37℃培养 4d,另取 1.5× 10 5细胞在 35 m m组织培养皿中加 2 m L培养液和 0 .74k Bq/ m L1 4 C-胸苷培养 2 4～ 2 8h,之后加 1m L新鲜培养液和 0 .1m L不同浓度的氯化镍或亚砷酸钠溶液 ,2 h后用 1 37　 Cs源照射 40 Gy(剂量率 10 .2 Gy/ min)。照射后未修复组立即用胰蛋白酶消化 1.5～ 2 min,用脉冲场凝胶电泳分析 DNA dsb;修复组继续在 37℃培养 30 m in使 ds…     

基于随机森林的电离辐射诱导DNA双链断裂分类模型的构建与应用

目的 构建预测电离辐射诱导DNA双链断裂（DSB）水平的随机森林分类模型,初步研究DSB在基因组中的分布规律。方法 将GRCh38参考基因组分为50 kb的片段,根据MCF-7细胞的测序数据把片段分为电离辐射诱导的DSB低水平和高水平区域,以8种表观遗传学特征作为输入,随机将数据集的2/3列为训练集,1/3列为测试集,构建含100棵决策树的随机森林分类模型。分析分类模型中表观遗传学的特征重要性,展示这些标记在不同DSB水平区域的富集差异。结果 随机森林分类模型在测试集上预测的准确率为99.4%,精准率为98.9%,召回率为99.9%,受试者操作特征曲线下面积为0.994。8个特征中H3K36me3和DNase标记的重要性最高,富集分析表明DSB高水平区域的这两类标记明显高于DSB低水平区域。结论 以表观遗传学数据作为特征输入,随机森林分类模型可在50 kb基因组区域上准确预测电离辐射诱导的DSB水平,分析表明这些DSB可能主要分布在基因组中转录活跃的部位。     

电离辐射增强雷帕霉素治疗毛细血管扩张性共济失调淋巴母细胞DNA双链断裂的修复能力

目的 :不像正常淋巴母细胞 ,电离辐射后纯合子毛细血管扩张性共济失调 (A- T)淋巴母细胞不显示 DNA双链断裂(dsb)正确修复的增强。由于 A- T突变在哺乳细胞对雷帕霉素的反应起作用 ,本研究观察雷帕霉素对电离辐射增强 dsb修复的效应。方法 :1选用正常淋巴母细胞株 GM6 0 7和 TK6及纯合子 A- T淋巴母细胞株 GMl5 2 6和 GM3189。 2穿梭载体p Z189和 p Z189kan用于分析 DNA修复 ,用碱裂解法制备其质粒 ,氯化铯梯度离心法纯化 ,限制性内切酶 Eco RI酶切导致p Z189dsb。 3正常和 A - T细胞分别与雷帕霉素孵育 40 min后 ,用 1 3 7　 C…     

γ-H2AX分析用于检测电离辐射致HepG2细胞DNA双链断裂的研究

目的 应用γ-H2AX分析检测电离辐射导致肝癌细胞株HepG2基因组DNA双链断裂的情况，并检测在不同细胞周期时相中的表达差异，从而了解不同时相HepG2细胞株的辐射敏感性。方法利用胸腺嘧啶核苷（TdR）阻断HepG2细胞于G1期末，于不同时间点分别得到同步化的S期和G2/M期细胞，用60Coγ射线照射细胞，建立DNA双链断裂模型，采用免疫荧光法和Westemblotting检测γ-H2AX的表达。结果TdR阻断后继续培养至34和40h，分别得到了较高同步化程度的S期和G2／M期HepG2细胞；受照后的HepG2细胞中Y-H2AX表达较照射前显著增高，处于S期的细胞γ-H2AX表达增加更为突出。结论不同周期时相的HepG2细胞受照后均检测出不同程度的DNA双链断裂，其中S期细胞尤为敏感。γ-H2AX对DNA双链断裂快速敏感的反应使γ-H2AX分析在检测早期DNA双链损伤中具有广泛的廊用前景。     

2-脱氧-D-葡萄糖抑制辐射致酵母DNA双链断裂的重接

利用放射性同位素示踪的蔗糖梯度离心技术测定辐射致酵母DNA双链断裂(DSB)的频率,研究2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)对其DSB重接的影响。实验采用具修复DSB能力的酵母呼吸缺欠突变株(211*B),该菌株在含4％葡萄糖、1.3％无氨基酸的酵母氮碱、0.4％酪蛋白水解物、7μg/ml的     

电离辐射和核酸内切酶诱发DNA双链断裂作为致癌致畸致突和细胞死亡的临界损

本语言综述了低传能线密度（LET）电离辐射、胰脱氧核糖核酸酶（DNaseI)和限制性内切酶（RE）引起DNA双链断裂（DSB）末端基团化学结构的改变，这些均为细胞毒因子，与细胞周期无关，可使体外哺乳动物细胞产生染色体畸变，也可引起基因突变和细胞癌变，核酸内切酶引起的染色体畸变可人微言轻低密度电离辐射引起染色体畸变的模型。     

电离辐射和核酸内切酶诱发DNA双链断裂作为致癌致畸致突和细胞死亡的临界损伤

本文综述了低传能线密度(LET)电离辐射、胰脱氧核糖核酸酶(DNase Ⅰ)和限制性内切酶(RE)引起DNA双链断裂(DSB)末端基团化学结构的改变。这些均为细胞毒因子,与细胞周期无关,可使体外哺乳动物细胞产生染色体畸变,也可引起基因突变和细胞癌变。核酸内切酶引起的染色体畸变可作为低密度电离辐射引起染色体畸变的模型。     

用嘌呤碱的卤化物——溴化咖啡因抑制哺乳动物细胞DNA单链断裂的再结合

高等有机体细胞的DNA单链断裂的再结合,目前已在大量的细胞株中得到证明。增强细胞放射敏感性的许多化合物同时也是DNA修复的抑制剂。早已证明卤化的嘌呤碱,尤其是8-溴化咖啡因对整体照射的腹水肿瘤细胞NKL表现出明显的辐射致敏作用。因此,研究此类型化合物的生物作用的分子机制是很重要的。本文研究了8-溴化咖啡因对LL株细胞照后DNA单链断裂再结合的破坏作用。     

RNA干涉抑制肺癌细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达

目的：通过抑制肺癌细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达，从而部分恢复抑癌基因的表达。方法：采用RNAi技术来抑制DNMT1的活性。应用体外转录的方法，共合成了5个针对DNMT1不同靶位的siRNA序列，并转染人肺癌细胞NCI-H157。采用MSP-PCR、COBRA等方法对抑癌基因RASSF1A进行甲基化分析，半定量RT-PCR检测DNMT1 mRNA的敲降与RASSF1A基因的表达。结果与结论：5个靶位的siRNA序列中有两个靶位能够有效地抑制DNMT1的表达，且呈剂量依赖效应。人肺癌细胞NCI-H157中抑癌基因RASSF1A发生了高度甲基化，在抑制DNMT1活性后，RASSF1A基因去甲基化而恢复表达。     

miR-375-3p抑制DNA双链断裂的同源重组修复增强结直肠癌细胞放射敏感性的研究

目的:探究miR-375-3p调控结直肠癌细胞放射敏感性的作用和机制。方法:在结直肠癌细胞HCT116及HT29中过表达miR-375-3p,利用CCK-8法检测细胞增殖能力,利用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,利用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡,利用流式细胞术检测细胞周期分布。过表达...     

DNA双链断裂-潜在的指标,用于判断心脏CT和常规冠状动脉造影电离辐射产生的生物学效应:一项随机、对照研究

摘要目的前瞻性比较由心脏CT检查和常规冠状动脉造影(CCA)诱导的DNA双链断裂。方法56例疑似为冠心病的病人随机接受CCA或者心脏CT检查。采用血液淋巴细胞荧光显微镜的方法评估DNA双链断裂,将其作为反映辐射暴露的生物学效应指标。辐射剂量用剂量长度乘积(DLP)和剂量面积乘积(DAP),以及CT和CCA各自的转换因子来估算。结果CT组和CCA组每个淋巴细胞平均有0.12±0.06和0.29±0.18个诱导的DNA双链断裂(P<0.001)。     

电离辐射和过氧化氢诱导中国仓鼠卵巢(CHO)细胞DNA损伤效应的比较

目的 :阐明在过氧化氢 (H2 O2 )和电离辐射的作用下 ,DNA损伤的诱导、修复和细胞失活之间的关系。方法 :1CHO- 10 A细胞在α基本培养基加胎牛血清培养 ,指数生长 ,用 3H -胸苷标记 (2 .2× 10 3Bq/ml)。 X线照射细胞 ,剂量率 4Gy/m in。用一定浓度 H2 O2 的培养基经 4℃、30min培养细胞后 ,多次冲洗。2细胞种植于培养皿中 ,8d后经乙醇固定并染色 ,大于 5 0个细胞的群落作为存活者。 3单链断裂 (ssb) :DNA培养液换 5 m l碱性溶液 ,避光 30 min,用2 ml HCl溶液阻止 DNA变性 ;2 ml DNA悬液进行超声波处理 ,再加 1.2 m l的 1%十二烷…     

低水平电离辐射与人的死亡率:多地区流行病学研究(初步报告)

对低水平电离辐射的卫生学意义的认识尚有重大分歧。提出的模型至少有两类。一类认为,任何水平的电高辐射,不论多低,都有损健康,而且损伤效应为剂量或暴露量的函数。另一类指出,人们一直且不断地受到环境低水平电离辐射的作用,已建立了应付环境辐射的适应机构。虽然高水平和大剂量率的电离辐射是有害的,但存在着某一照射水平,在此水平下,机体的影响是可忽略不计甚或是有益的。这两类模型所涉及的公共卫生政策是大不相同的。     

聚合酶链反应(PCR)检测水中钩体DNA方法的建立和初步应用

目的:为了建立一个检测水中钩体DNA的技术方法。方法:本研究采用了根据1993年C.Gravekamp设计的引物G_1G_2序列自行合成的引物G_1G_2建立了检测致病钩体DNA的PCR方法。运用此方法并结合“优筛法”对采自云南河口、蒙自等地区108份水样进行检测,并与分离培养后经中国药品生物制品检定所鉴定结果进行了比较。结果:两组方法检测所有水样呈阴性,其精确度和一致性达100％,但分离培养方法漏检率为8.3％(9/108)。结论:建立了PCR检测水中钩体DNA方法。此方法简单、快速、准确,适用于一般实验室及大规模水样钩体DNA的检测,值得推广应用。     

肿瘤多聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶活性正电子发射体层成像的临床前评价和首次在人类研究

正摘要目的探讨用~(18)F标记的FTT-PET显示活化聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶(PARP)的表达及其在临床实验评价中的可行性。材料与方法经当地动物研究委员会和机构伦     

靶向肽结合131I-PAMAM(G5.0) 抑制甲状腺髓样癌细胞增殖的研究

目的研究131I标记靶向肽丝氨酸-精氨酸-谷氨酸-丝氨酸-脯氨酸-组氮酸-脯氨酸（SRESPHP）（简称SR）修饰的第五代聚酰胺-胺（PAMAM（G5.0））的体外性质及其作为甲状腺髓样癌细胞靶向探针的可行性。方法用氯胺T法进行PAMAM（G5.0）-SR和PAMAM（G5.0）的131I标记,通过薄层层析法分别测定所制备的两种探针的标记率及稳定性,并考察131I标记物的脂水分配系数;通过阻断摄取实验分别考察两种探针的靶向性;计算两种探针对细胞的半数致死剂量并分析其对细胞生长的影响。采用GraphPad Prism 5.01分析软件对符合正态分布及方差齐性的数据进行样本t检验。结果 131I-PAMAM（G5.0）-SR和131I-PAMAM（G5.0）的标记率均大于70%,纯化后的放化纯度均大于90%。两种探针在体外PBS体系中的稳定性好,且均显示出良好的水溶性。细胞阻断实验结果显示,加入PAMAM（G5.0）-SR阻断的131I-PAMAM（G5.0）-SR细胞摄取率明显降低,差异均有统计学意义（t=7.315、22.590和22.570,均P < 0.01）,提示131I-PAMAM（G5.0）-SR对细胞具有较好的靶向性。131I-PAMAM（G5.0）-SR的细胞半数致死剂量为513.6 kBq/mL。细胞摄取实验结果显示,随着时间的延迟,细胞对半数致死剂量下的131I-PAMAM（G5.0）-SR的摄取逐渐降低,但在48 h细胞摄取出现上升的现象,随后细胞摄取再次下降。结论 131I-PAMAM（G5.0）-SR具有良好的生物学性质,可靶向甲状腺髓样癌细胞并抑制细胞增殖。     

抑制整合素连接激酶(ILK)表达对大鼠肾小球系膜细胞细胞问隙连接蛋白43表达的影响

目的 研究抑制整合素连接激酶(ILK)表达对大鼠肾小球系膜细胞(RMC)细胞问隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法 将大鼠肾小球系膜细胞分为RMC组(n=6)、ILK-con siRNA转染组(n=6)和ILK-siRNA转染组(n=6).合成抑制ILK基因的siRNA,待细胞长至60%融合后,ILK-siRNA转染组和ILK-con sLRNA转染组分别用脂质体转染ILK-siRNA或ILK-con siRNA,RMC组仅加入脂质体,24h后收集细胞,提取总蛋白和总RNA,用RT-PCR和Western blotting观察ILK和Cx43 mRNA和蛋白的表达.转染后继续培养24、48、72h,MTT法检测细胞活力.结果 与RMC组和ILK-con siRNA转染组比较,ILK-siRNA组ILK mR-NA和蛋白的表达均下降30%～50%(P<0.05,P<0.01),Cx43 mRNA水平增加30%～40%(P<0.05),Cx43蛋白水平增加60%～70%(P<0.01).应用ILK-siRNA转染系膜细胞后24、48、72h,细胞活力均显著高于RMC组和ILK-con siRNA转染组(P<0.05,P<0.01).结论 抑制ILK途径可上调肾小球系膜细胞Cx43的表达,增强细胞活力;Cx43的调节可能是部分通过ILK途径实现的.     

抑制素βA(INHβA)在胃癌中过表达的临床病理意义

目的 探讨抑制素βA(inhibinβA,INHβA)在胃癌中过表达的临床意义.方法 采用免疫组化检测146例胃癌组织芯片中INHβA的表达,采用免疫组化和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测HER2蛋白过表达和基因扩增,并结合患者的随访资料进行预后分析.结果 61.6％(90/146)的胃癌呈INHβA过表达,显著高于正常胃黏膜(P<0.01).胃癌中INHβA表达在不同肿瘤大小(P<0.05)、分化程度(P<0.01)、临床分期(P<0.05)以及有无淋巴结转移(P<0.01)之间差异有统计学意义.19.2％(28/146)和16.4％(24/146)的病例分别呈HER2蛋白表达和基因扩增,HER2蛋白表达/基因扩增在不同肿瘤部位、组织学类型之间表达差异有统计学意义(P<0.01).INHβA过表达与HER2蛋白表达及基因扩增均显著负相关(分别r=-0.224,P<0.01;r=-0.175,P<0.05).生存分析显示,INHβA+患者5年生存率显著低于INHβA-患者(P<0.05).根据INHβA和HER2的表达可以将胃癌分为INHβA/HER2双表达组(INHβA+/HER2+)、单表达组(INHβA-/HER2+和INHβA+/HER2-)和双阴性组(HER2-/INHβA-),生存分析显示INHβA/HER2双表达的患者预后最差(P<0.01).结论 INHβA过表达可以作为判断胃癌预后不良的一项重要指标,INHβA和HER2不同表达模式为胃癌的个体化治疗提供了新的思路.