肿瘤特异性凋亡基因对人黑色素瘤细胞A375凋亡诱导作用

为观察肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)对人黑色素瘤细胞A375的凋亡诱导作用，用含有凋亡基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375，采用台盼蓝染色法、RT—PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明，凋亡基因瞬间转染的人黑色素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡；而且滴亡细胞的数量与转染时间有关。结论：凋亡基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用。     

肿瘤特异性凋亡基因对人黑素瘤细胞凋亡诱导作用的机制研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin gene)在诱导人黑素瘤细胞A375发生凋亡时，c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用，用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑素瘤细胞A375；采用流式细胞仪、蛋白印迹法(Western blot)、锥虫蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间对人黑素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明，apoptin基因瞬间转染的人黑素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡；而且凋亡细胞的数量与apoptin的转染时间有关；凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多，而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论：JNK信号通路的活化可能在apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。     

Apoptin基因活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡

为研究肿瘤细胞凋亡基因（apoptingene）诱导人黑素瘤细胞系A375凋亡时是否通过活化easpase-3发挥作用，用含有apoptin基因的真核表达载体短时转染体外培养的人黑素瘤细胞A375；采用RT-PER、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡；以比色法检测easpase-3的相对活性。结果表明，apoptin基因短时转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带；流式细胞术显示实验组细胞凋亡率明显高于其它各组（P〈0．01）；转染后24h实验组caspase-3的活性开始升高，72h达高峰，明显高于其它各组（P〈0．01）。结论：apoptin基因可活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。     

肿瘤特异性凋亡基因对人淋巴瘤细胞U937的凋亡诱导作用

为观察肿瘤特异性凋亡基因（apoptin gene）对人淋巴瘤细胞U937的调亡诱导作用，用含有apoptin基因的真核表达载体短时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937；采用台盼蓝染色法、RT-PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人淋巴瘤细胞U937诱导凋亡的作用。结果表明，apoptin基因短时转染的人淋巴瘤细胞U937可出现明显的细胞凋亡；而且凋亡细胞的数量与apoptin的转染时间有关。结论：apoptin基因具有诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡的作用。     

肿瘤特异性凋亡基因对荷瘤小鼠基因治疗的实验研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因对肿瘤的基因治疗作用，以S-180肉瘤细胞的荷瘤小鼠为模型，用克隆了肿瘤特异性凋亡基因的真核表达载体直接进行基因治疗。同时以生理盐水、真核载体为对照。结果表明。与对照组相比，基因治疗组小鼠一般生长状态良好，体内肿瘤生长明显减缓(P&;lt;0．01)。生存期延长。体重增加，在肿瘤组织中可检测到肿瘤特异性凋亡基因mRNA的表达。结沦：肿瘤特异性凋亡基因在体内具有明显的抗肿瘤作用，对开展肿瘤的基因治疗有一定的临床意义。     

异甘草素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡研究

目的研究异甘草素诱导人黑色素瘤(A375)细胞凋亡及其初步机制。方法采用硫氰酸盐B(SRB)法测定异甘草素对A375细胞生长的抑制效应,AO/EB和Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态,流式细胞技术检测A375细胞凋亡率;荧光染料二乙酸-2’,7’-二氯荧光素(DCFH-DA)测定A375细胞内活性氧的变化。5,5',6,6'-四氯-1,1',3,3'-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物(JC-1)测定线粒体膜电势的变化,利用试剂盒检测异甘草素处理后的A375细胞内ATP和培养液中的乳酸、葡萄糖含量。结果异甘草素能抑制A375细胞的增殖,并呈浓度依赖性;在荧光显微镜下发现,异甘草素处理后的A375细胞出现明显的凋亡形态;细胞凋亡率随异甘草素浓度的增加而升高;异甘草素处理后的细胞内活性氧有明显上升趋势,细胞线粒体膜电位明显下降;异甘草素作用后胞内ATP含量下降(P<0.05或P<0.01),培养液中的乳酸含量下降,葡萄糖含量上升(P<0.05或P<0.01)。结论异甘草素能够抑制A375细胞的恶性增殖,最终诱导细胞凋亡。推测异甘草素通过活性氧升高,引起线粒体膜电势下降,从而影响A375细胞的糖酵解途径而导致细胞凋亡。     

腺病毒介导的FasL基因诱导肺癌细胞凋亡

目的研究外源性FasL基因对人肺癌细胞凋亡的影响以及FasL基因治疗肺癌的可能性.方法构建腺病毒载体介导FasL基因转移到低水平表达FasL的人肺腺癌细胞系A549,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术(FCM)检测FasL基因的表达,并观察A549肺癌细胞凋亡和生长,对肿瘤生长模型的治疗效果进行分析.结果外源性FasL基因在A549肺癌细胞获得高水平的表达,FasL能显著抑制A549的生长和集落形成,流式细胞仪检测显示细胞G1期阻滞并发生了凋亡.瘤内注射Ad-FasL对裸鼠体内移植瘤有较强的抑瘤作用.结论FasL基因参与了肺癌细胞凋亡的诱导,能抑制肺腺癌细胞的生长,因此该基因在肿瘤的基因治疗上有广泛的应用前景.     

紫草素诱导A375-S2细胞凋亡的分子机制研究

目的　研究紫草素诱导人黑色素瘤A375 S2细胞凋亡的分子机制。方法　MTT法、Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、Westernblot、流式细胞分析以及caspase活力分析等。结果　10μmol·L-1紫草素可明显地抑制A375 S2细胞的生长,其半数有效抑制浓度IC50为 (10 9±1 8)μmol·L-1。10μmol·L-1紫草素可诱导A375 S2细胞凋亡,并经历了caspase 9和caspase 3的激活。紫草素促进p53蛋白的积聚,Bax蛋白表达的上调和Bcl xL蛋白表达的下调,进而导致细胞色素C的释放,致使细胞凋亡。紫草素可使细胞周期停止在G1 期。结论　紫草素可诱导A375 S2细胞周期停止在G1 期,其诱导细胞凋亡的途径经过p53介导的Bax和caspase 9的激活。     

姜黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的 探讨姜黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测人胃癌SGC-7901细胞生长活力;Hoechst 33258核染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;比色法检测Caspase-3、8、9活性.结果 姜黄素(5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L)明显抑制SGC-7901细胞牛长并呈剂量依赖关系,48 h的IC50值为(23.65±3.15)μmol/L,细胞核经Hoechst 33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光.与对照组相比,姜黄素处理后凋亡细胞比例增加;姜黄素处理SGC-7901细胞48 h后Caspase-3、8、9的活性明显增强.结论 姜黄素可通过激活Caspase级联活化而抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并诱导其凋亡.     

体外转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响

目的 探讨转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响,筛选出有意义的肿瘤治疗的生物学靶标.方法 在人黑色素瘤细胞A375中转染Kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.Western blot方法 检测Kiss-1蛋白以证实转染成功.流式细胞术检测Kiss-1基因对A375生长增殖的影响.结果 稳定转染Kiss-1基因的A375细胞中不仅Kiss-1蛋白稳定表达（1.20±0.21）高于对照组（0.60±0.41）,Kiss-1基因转染A375细胞48 h后对其具有凋亡的作用（凋亡率为28.42%）高于对照组（2.12%）.结论 外源性Kiss-1基因导入A375细胞后,可诱导A375细胞其凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖.     

金喜素诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase活化

目的　探讨金喜素诱导急性白血病细胞凋亡的生化机制。方法　采用MTT法测定金喜素对HL 6 0细胞的杀伤作用 ;通过形态学、DNA凝胶电泳及AnnexinVFITC染色 ,研究金喜素对靶细胞的促凋亡活性 ;采用caspase 8、3特异性抑制剂IETD fmk、DEVD CHO ,分析金喜素介导的靶细胞凋亡与caspase活化的关系。结果　经 0 1μmol·L-1金喜素处理至 8、12及 16h时 ,HL 6 0细胞的存活率依次降至6 2 %± 12 %、、43%± 15 %及 32 %± 10 % ,低于对照 (P <0 0 5 ) ,同时 ,靶细胞逐渐出现磷脂酰丝氨酸外化 ,并产生梯状DNA及凋亡小体 ;经caspase抑制剂与金喜素联合处理12、16h时 ,HL 6 0细胞的存活率高于单用金喜素组 ,分别为77%± 14%、6 5 %± 16 % (IETD fmk组 )与 74%± 12 %、6 0 %± 11% (DEVD CHO组 ) ,同时 ,靶细胞的梯状DNA与凋亡小体的诱生也明显受抑。结论　金喜素对HL 6 0细胞具有较强的促凋亡作用 ,该过程可能依赖caspase 8、caspase 3的活化     

细胞凋亡基因调控机制研究进展

近年来，某些基因在细胞凋亡发生发展过程中的作用得到普遍重视。它们既具有单一的调节作用，又具有复杂的协同效应。研究这些基因在细胞凋亡中的调控机制，对利用基因治疗技术治疗恶性肿瘤和退变性疾病具有重要意义。本论述了调控细胞凋亡的基因及其在细胞凋亡中的作用机制。     

细胞凋亡与肿瘤的关系

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)在 1972年由Ｋｅｒｒ等病理学家首先提出 ,近年来越来越引起医学界的重视 ,尤其在令人棘手的肿瘤防治过程中 ,使人们看见了新的曙光 ,试图从此找到制服肿瘤的突破口。引起人们极大兴趣的是细胞凋亡与肿瘤的关系 ,当细胞的增殖数量与细胞的凋亡数量大致相等时 ,机体的器官总细胞数才维持一个恒量 ,如果细胞的凋亡数量大于细胞的增殖数量则器官就逐渐萎缩 ,反之如果细胞的凋亡数量小于细胞的增殖数量则形成肿瘤 ,如何使已形成的肿瘤细胞发生凋亡正是目前临床研究的一大热点。施作霖[1 ]在“细胞凋亡的基本概念和…     

去甲斑蝥素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡

目的:研究去甲斑蝥素(NCTD)诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制.方法:采用MTT法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Western blot检测法.结果:去甲斑蝥素可诱导A375-S2细胞发生凋亡.半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-3,-9抑制剂可以部分的抑制NCTD诱导的细胞死亡.细胞凋亡时caspase-3,8,-9酶活力升高,caspase-3底物-caspase-3激活的DNA酶抑制物(ICAD)蛋白表达下降,同时Bcl-2/Bax、Bcl-xL/Bax蛋白表达比率明显降低.结论:去甲斑蝥素通过激活caspase和Bcl-2家族诱导A375-S2细胞凋亡.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体在不同级别胶质瘤中的表达及TRAIL对原代培养的胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。方法应用原位杂交的方法检测TRAIL受体在45例胶质瘤和5例正常脑组织中的转录表达；分别对其中22例和3例进行原代培养，用流式细胞仪检测TRAIL作用后细胞的凋亡率。结果在45例胶质瘤中，DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA的表达例数分别为38例、41例、40例、2例。成功培养出18例胶质瘤细胞和3例正常胶质细胞，TRAIL作用后凋亡率在80％以上、50％～80％、50％以下的例数分别为5例、9例、4例，正常胶质细胞无明显凋亡发生。结论TRAIL受体的表达与肿瘤的恶性程度无关；TRAIL能有效地选择性杀死胶质瘤细胞。     

氧化苦参碱诱导人胃癌细胞凋亡及其机制

目的探讨氧化苦参碱(OM)诱导人胃癌细胞SGC-7901的细胞凋亡及其机制。方法应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、荧光显微镜及流式细胞仪(FCM)检测不同浓度的OM在不同的时间对SGC-7901细胞的抑制,免疫组织化学法检测胃癌细胞中Bcl-2蛋白表达。结果 MTT法显示,随着OM浓度的梯增及时间的延长,细胞的抑制率亦逐渐增强,呈时间、剂量依赖性。荧光显微镜下可见到细胞调亡形态。流失细胞仪分析,OM可阻滞SGC-7901细胞在G0/G1期。免疫组化结果显示,不同药物浓度可明显阻滞Bcl-2蛋白的表达,Bcl-2蛋白的表达下调。结论氧化苦参碱(OM)对人胃癌细胞SGC-7901有显著的抑制作用,其机制可能与Bcl-2蛋白表达下调有关。     

细胞凋亡的基因调控和抗神经细胞凋亡剂的研究

细胞凋亡的基因调控和抗神经细胞凋亡剂的研究张均田段文贞吴俊芳（中国医学科学院，中国协和医科大学药物研究所）英国科学家于７０年代早期提出：正常细胞的死亡是一种主动自杀过程。这一惊人的发现是划时代的，它吸引全世界科学工作者试图解开细胞自杀死亡之谜，探索细...     

T细胞淋巴瘤细胞凋亡的基因调控

凋亡（Apoptosis）是细胞坏死之外的一种细胞死亡方式，即所谓细胞程序化死亡（Programmedcelldeath），是指正常细胞的“生理性”死亡过程。它是一个有序的过程，是以细胞内源性内切酶活性增加为代表的一系列生化代谢的变化[1]。细胞先是接收、识别某些特殊的生理或病理性刺激信号，然后启动细胞特有的基因或基因群，通过mRNA的转录，合成一组有致死效应的蛋白质，从而导致细胞的解体死亡[1]。这是一种细胞的“自杀”行为，与细胞的增殖和分化一样，对维持组织的自身稳定具有重要的积极作用。一、调亡的基因调控细胞的调亡受到多种因素的…     

灵芝多糖诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的：研究灵芝多糖（GLPS）与化疗药氟尿嘧啶联合使用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法：MTT法测定细胞毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定Caspase-3、Caspase-8酶活性,Western—Blotting法检测细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达情况。结果：灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用具有显著的细胞毒作用;流式细胞术检测,随着GLPS浓度增加,细胞凋亡率升高,Caspase-3、Caspase-8酶活性亦增强;Western-Blotting检测发现GLPS作用后细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达不同程度增加。结论：灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用可通过引起细胞色素C的释放,活化Caspase诱导肝癌细胞凋亡。