广西巴马长寿乡壮族长寿老人永生细胞库的建立

目的：建立广西巴马长寿乡壮族长寿老人永生细胞库。方法：使用EB病毒转化外周血B淋巴细胞方法。结果：建立了长寿者外周血细胞转化永生细胞株的方法，转化成功率77．4％。建立了65株长寿老人、直系亲属永生细胞株及长寿老人资料库和完整的细胞株档案。结论：广西巴马长寿乡壮族长寿老人永生细胞库的建立为永久保存细胞系及后续研究提供了必要的基础。     

2型糖尿病遗传家系永生细胞株的建立

目的体外建立2型糖尿病家系永生化B淋巴母细胞系。方法应用EB病毒（EBV）转化技术,将2型糖尿病家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系（LCL）。结果成功地为一个2型糖尿病家系的10名成员建立了永生细胞株,其中4名为患者。 结论2 型糖尿病家系永生细胞株成功建立,该细胞株保存了原来个体完整的基因组,为以后的深入研究提供随时可取的实验材料。     

新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞株的建立

目的通过用EB病毒转化外周血B淋巴细胞使之成为永生细胞株的方法,建立新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞株,为永久保存新疆长寿老人的基因遗传资源及后续研究奠定基础。方法常规制备EB病毒上清,用环孢素法和冻存全血法转化外周血B淋巴细胞。结果以环孢素法成功建立了5株新疆和田维吾尔族长寿老人永生细胞,其中百岁2人,90～99岁3人,建系成功率为100%(5/5),以冻存全血法建系成功1例(1/5)。HLA基因分型结果在建系前后完全一致。结论与冻存全血法相比,环孢素法能更有效地转化长寿老人永生细胞株,可为长寿的分子遗传机制研究以及某些细胞生物学性状的检测提供充足的实验材料。     

家族性腺瘤性息肉病永生细胞株的建立及意义

目的：建立家族性腺瘤性息肉病（FAP）家系永生细胞株,为FAP的深入研究提供永久的研究材料．方法：应用EB病毒（EBV）加入环孢霉素A转化技术,将FAP家系成员外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系．结果：成功为两个FAP家系25个个体建立了永生细胞株,转化率为100％．对已建株保存的永生细胞进行复苏培养,复苏成功率为100％．结论：FAP永生细胞株保存了原来个体完整的基因组,为在分子水平上揭示FAP的发病机制提供了宝贵的材料．     

Mir-99a在宫颈癌细胞中的表达及相关功能的研究

目的探讨在宫颈癌细胞株中的表达及相关功能的研究。方法培养HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞(H8细胞株)和宫颈癌细胞通过Real-time Quantitative PCR Detecting System(QPCR)检测mi R-99a在这两株细胞中的表达水平。运用脂质体介导的转染方法,转染mi R-99a抑制物(mi R-99a inhibitors)以及相应对照mi R-99a(Control)转染方法,通过Transwel迁移实验检测细胞的迁移能力。结果和结论 mi R-99a在宫颈癌细胞株(Cas Ki)中表达水平明显下调,并且mi R-99a可以抑制宫颈癌细胞株的转移。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结果：成功地将重组野性型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，在ｇｐｔ选择培养基中培养两周后，分离生长出阳性细胞克隆；经ＰＣＲ证实外源性ｐ５３基因在瘤细胞内稳定存在并可随瘤细胞分裂而传给子代；当向培养液中加入１μｍｏｌ／Ｌ地塞松（Ｄｅｘ）后，８ｈ即可用免疫组化方法检测到ｐ５３蛋白的表达并可观察到瘤细胞出现凋亡的一系列形态学改变，转染后的瘤细胞凋亡率高达９０％。结论：当人骨肉瘤细胞株中重组野生型ｐ５３基因诱导过表达时，瘤细胞呈现凋亡，本实验为骨肉瘤的基因治疗提供了理论依据。     

瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株的建立及其染色体分析

目的建立瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株,并对该细胞株进行染色体核型分析,探讨用这种方法建立瘢痕疙瘩永生细胞库的可行性和可靠性。方法采用EB病毒转化技术,把瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。分别对建株前和建株后10、20、30、35代的细胞株进行染色体核型分析。结果成功地对瘢痕疙瘩家系27个个体建立了永生细胞株,建株后10代、20代的细胞株染色体未发现明显异常;而培养30代、35代的细胞株染色体发生数目和结构的异常。结论瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株可以为以后的研究提供随时可取的实验材料,在用做遗传学分析时宜在转化早期进行。     

用强化接种后的特殊PBMC和改良永生化技术制备人源抗HBs

目的 建立乙肝表面抗体(抗HBs)阳性者EBV永生化的B淋巴母细胞系(B-LCLs),筛选、获得人源抗HBs及其分泌细胞.方法 常规技术获得乙肝疫苗强化免疫后志愿者的特异性外周血单核细胞(PBMC),EBV转染,加入CpGDNA免疫调节基序诱导B淋巴细胞增殖,环孢菌素A(CyA)抑制T淋巴细胞活性.雅培法定量动态检测水生化细胞培养上清中的抗HBs滴度,取高滴度抗HBs孔的B-LCLs细胞有限稀释法培养.用免疫组化SP法观察细胞分化状况及抗HBs表达.结果 成功构建了分泌抗HBs的永生化.B-LCLs;培养上清抗HBs滴度维持较高水平3周左右,之后逐渐降低;免疫组化鉴定B-LCLs细胞培养3个月时,永生化细胞仍然为抗HBs合成细胞.结论 采用改进的EBV永生化技术转化强化接种后获得的特殊PBMC,可高效获得永生化的B-LCLs,并有效表达抗HBs.     

HSF1基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞的永生化

目的：建立HSF1^-/-，HSF1^＋/＋两种基因型小鼠胚胎成纤维永生化细胞系，为HSF1的功能研究提供实验模型。方法：用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入HSF1^-/-，HSF1^＋/＋两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞，经G418筛选，抗性克隆扩大培养，建立永生化细胞系；用PCR检测两种细胞株中目的基因的整合，用RT—PCR法鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达；用Western blot检测所建细胞株的诱导型热休克蛋白70的表达情况。结果：有3个细胞克隆已扩大培养稳定传代达6个月，经鉴定SV40T抗原已整合到两种细胞中且稳定表达，HSF1^-/-胚胎成纤维细胞热休克蛋白70的诱导表达消失。结论：成功建立永生化HSF1^-/-，HSF1^＋/＋两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞。     

转染野生型p53基因对肝癌细胞生长的影响

目的：通过转染野生型p53基因致肝癌细胞株BEL-7404，研究其对肝癌细胞的生长及凋亡作用。方法：野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞株BEL-7404。用四甲基偶氮唑（MTT）法测定细胞生长曲线，用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果：肝癌细胞BEK-7404转染野生型p53基因后，其生长作用明显受到抑制．细胞生长抑制率在第4天可达50．8％。流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为1．7％，转染pUHD10-3组为3．2％．转染pUHD10-3-p53组为40．7％。结论：野生型p53基因可诱导肝癌细胞BEL-7404的生长抑制及发生凋亡。     

苦杏仁甙对小鼠肝、肾细胞增生的影响

本文以苦杏仁甙4mg/20g 体重及7mg/20g 体重经皮下给予小鼠,给药6次后参入(~3H)胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR),经放射自显影计数肝细胞、枯否细胞、肾小管上皮细胞之标记细胞以及分裂期细胞,算出标记指数(LI)及分裂指数(MI))与对照组比较,肝细胞、枯否细胞之两个用药组与对照组间差异均为非常显著(P<0.01)本实验显示苦杏仁甙对小鼠肝细胞及枯否细胞增生有明显促进作用。     

人胎盘细胞滋养细胞的超微结构观察——明细胞与暗细胞

虽然应用电镜研究人胎盘滋养细胞的超微结构早有报道,但对细胞滋养细胞的电子致密度描述不一。本文对5周至41周人胎盘标本进行了动态观察,发现人胎盘细胞滋养细胞有明细胞与暗细胞之分,并对暗细胞型细胞滋养细胞的意义略加讨论。     

淋巴管内皮细胞培养技术的改进

①目的改进淋巴管内皮细胞的培养方法,为该方面的基础和临床研究提供良好的平台。②方法本研究采用的研究方法包括细胞培养、免疫组织化学、光镜观察、透射电镜观察、扫描电镜观察等。③结果猪胸导管内皮细胞具有一般淋巴管内皮细胞的特征。在所培养的细胞中,经第Ⅷ因子鉴定的内皮细胞约占95％。在细胞消化过程中,一次消化法比传统的方法更为简便。明胶喷涂培养皿更有利于细胞生长。综合法纯化淋巴管内皮细胞可获得较纯的内皮细胞。④结论猪胸导管是淋巴管内皮细胞培养的较理想来源;在细胞培养过程中,采用一次消化法、明胶喷涂堵养皿、综合法纯化培养淋巴管内皮细胞可得到更好的效果。     

肿瘤细胞分裂、分化的调控

正常动物细胞的增殖是一个可控的过程,而恶性肿瘤细胞则可不受控制地生长。多肽类生长因子、致癌基因和致癌蛋白关系的新发现有助于阐明这些过程。本文基于这些研完成果,提出了通过促进细胞生长和抑制细胞生长的两大类物质调控细胞增殖的假设。已有的实验结果初步证实假设的合理性,这预示着可设计一些实验来寻找未知的调控细胞增殖的物质。这一假设的提出,为治疗癌症提供了新途径。     

细菌脂多糖对人外周血单核细胞来源的树突状细胞发育和功能的影响

目的 :探讨细菌脂多糖 (LPS)对正常成人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (Dendritic cell,DC)表面分子表达及免疫功能的影响。方法 :分离正常人 (n=5 )外周血单个核细胞 (PBMC)以 GM-CSF、IL-4联合诱生 DC,实验组在培养的第 2天加入LPS,正常对照组不加。于第 4、8天 FACS检测 DC表面分子 CD1a、CD14、CD83、CD80、HL A-DR的表达。同期检测 DC的增殖和刺激同种异体 T淋巴细胞的增殖情况。结果 :经 LPS刺激后 ,正常人 DC早期、晚期表面分子 CD1a、CD83、CD80表达增高 ,CD14表达降低 (P<0 .0 5 )。DC数量的增加及刺激同种异体 T细胞能力明显增强。结论 :GM-SF、IL-4和 L PS联合刺激能促进正常人 DC的成熟和免疫功能的提高     

SOME OF THE IMMUNOLOGICAL PARAMETERS OF GASTRIC CARCINOMA

In patients with gastric carcinoma the determination of the activities of some cellular and humoral factors may reflect the immunological state of the patient, the stage and extent of the disease, and help estimate the effects of treatment and prognosis. Moreover, experimental studies and preliminary clinical trials of some of these cellular elements and humoral factors in the treatment of gastric carcinoma have opened a new field of adoptive immunotherapy.     

内皮细胞在定向造血干细胞归巢中的作用

血管内皮细胞因其特殊的解剖学定位,成为构成髓血屏障的主要结构,是造血细胞出髓与归巢的“门户”。内皮细胞通过分泌多种造血调控因子,将定向造血干细胞定居于“壁龛”中,从而调控其增殖和分化。本文就近年来内皮细胞与定向造血干细胞归巢的关系作一综述。     

HISTOMORPHOMETRICAL STUDY OF MULTINUCLEATED GIANT CELLS OF GIANT CELL TUMOR OF BON BY AUTOMATIC IMAGE ANALYSIS SYSTEM

The histomorphometry of ten cases of giant cell tumor of bone was studied using an automatic image analysis system and eight criteria of measurements were analysed. The study showed that this system provided a new technique in medical research and that similar multinucleated giant cells in various lesions of bone may be distinguished with bone histomorphometry. This method will form the basis for the reconstruction of three demensional structure of cells.     

Forskolin抑制成骨肉瘤细胞增殖的作用

Forskolin系天然植物中提取到的二萜类化合物，为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现它能下调成骨肉瘤细胞的EGF受体，抑制酪氨酸蛋白激酶活性，抑制转化生长因子α（TGFα）的基因表达，抑制3H－TdR参入DNA以及抑制细胞周期的S期，这均支持Forskolin对成骨肉瘤细胞具有抑制增殖的作用。     

乳腺癌细胞DNA定量分析

应用流式细胞术检测了乳腺良恶性病变的DNA含量及倍体水平.20例乳腺良性病变均为二倍体,90例乳腺癌中异倍体肿瘤75例(83.3%),二倍体肿瘤15例(16.7%);Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,各级不同恶性程度肿瘤的DNA指数(DI)分别为1.23±0.14,1.32±0.18和1.61±0.30;5年存活组与死亡组DI值分别为1.21±0.19和1.53±0.28.细胞增殖周期分析表明二倍体肿瘤和异倍体肿瘤分别以G_0/G_1期细胞和S+G_2 M期细胞占的比例较高.本文未发现肿瘤体积及组织类型(WHO)与DI值的相关性.提示检测DNA含量和细胞增殖周期,对评估乳腺癌的恶性程度及其生物学行为有重要价值.