乳腺癌MRMT-1细胞局部骨转移大鼠模型的研究

目的 研究乳腺癌MRMT-1细胞局部骨转移大鼠模型在痛觉反应、影像学、病理学和分子生物学等方面的表现,为进一步的发病机制和药理学研究提供资料.方法 将32只雌性SD大鼠用随机数字表法分为假手术组和模型组各16只,在模型组大鼠胫骨内注射乳腺癌MRMT-1细胞,引起局部骨转移.造模后19d测定痛觉反应,21d处死大鼠取材,测定肿瘤体积,用X线对骨质损伤进行评分并测定骨密度（BMD）,HE染色观察病理形态改变,抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）法染色观察破骨细胞,免疫组织化学法检测核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和骨保护素（OPG）水平,并计算比值;实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）水平.结果 与假手术组比较,模型组存在痛觉异常状态（P＜0.01）;胫骨在X线下损伤评分较高（P＜0.01）.模型组和假手术组大鼠左侧胫骨的BMD分别为（0.11 ±0.01）g/cm2和（0.13±0.02）g/cm2（P＜ 0.05）.模型组胫骨标本上肿瘤生长明显,体积为（1082.73±679.44）mm3,而假手术组无肿瘤生长（P＜0.01）,病理可见混合性骨转移,但以溶骨性病变为主;伴有破骨细胞数量明显增多,达到（40.84±25.59）个/高倍视野,而假手术组仅为（1.88±2.92）个/高倍视野（P＜0.01）.转移灶局部RANKL水平无明显变化,OPG水平下降（P＜0.05）,OPG/RANKL比值和PTHrP下降（P＜0.05）.结论 乳腺癌MRMT-1细胞局部骨转移大鼠模型存在癌痛、骨质破坏,甚至病理性骨折等表现.其发病机制可能是MRMT-1细胞在浸润生长过程中打破了OPG-RANKL-RANK系统的平衡,从而激活破骨细胞,引起骨吸收作用亢进,引起各种表现.     

抗ATPase F1α抗体MAb3D5AB1对荷A549肺腺癌小鼠的抑制作用

目的: 以乳腺癌细胞与成骨细胞共培养模拟乳腺癌骨转移微环境,观察在此微环境中降钙素基因相关肽( calcitonin generelated peptide,CGRP)对成骨细胞护骨素 （osteoprotegerin,OPG）及细胞核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factorkappa B ligand, RANKL;又称破骨细胞分化因子）表达的影响。方法：将转移性乳腺癌细胞MDAMB231或MDAMB435与成骨细胞MG63共培养,建立模拟乳腺癌骨转移微环境。行CGRP(1×108 mol/L)干预,应用RTPCR和Western Blotting技术检测干预后OPG和RANKL在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果：MG63与MDAMB231或MDAMB435共培养环境中,RANKL mRNA及蛋白水平升高,而OPG mRNA和蛋白水平表达下降;CGRP处理后,共培养环境中RANKL mRNA及蛋白水平降低,OPG mRNA和蛋白水平升高 (均P<0.05)。结论：乳腺癌细胞能调节成骨细胞OPG/RANKL轴的表达,进而可能促进破骨细胞的活性,造成溶骨性破坏;CGRP 干预可逆转此调节作用,在乳腺癌骨转移的治疗中有潜在应用价值。     

辛伐他汀在裸鼠模型中对乳腺癌骨转移的影响

目的 观察辛伐他汀在裸鼠模型中对乳腺癌骨转移的作用.方法采用完全随机分组方法 将60只裸鼠分为3组,每组20只,裸鼠左心腔注射乳腺癌骨转移细胞株(MDA-MB-231),7d后,分别皮下注射辛伐他汀、生理盐水及无任何处理(2次/周,19 d).应用图像分析软件评估骨转移瘤的面积.随后处死裸鼠,用放射免疫法检测骨转移癌髓腔内甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)浓度;应用骨密度检测软件进行组织形态学分析,计数骨转移灶每毫米癌组织与临近骨小梁之间破骨细胞的数量.计量资料比较采用方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与生理盐水组和无处理组相比,注射辛伐他汀的裸鼠骨转移癌面积明显减小(0.51±0.18 mm2 vs 2.13±1.24 mm2 vs 2.29±1.22 mm2;F=15.600,P=0.002; F=15.673,P=0.001),骨转移癌周围髓腔内PTHrP浓度明显降低(0.98±0.20 pmol/L vs 2.11±0.31 pmol/L vs 1.99±0.29 pmol/L;F=61.469,P＜0.001;F=58.274,P＜0.001),并且其转移灶破骨细胞的数量明显减少(4.00±1.73个/mm vs 11.40 ±4.93个/mm vs 10.91±3.87个/mm;F=17.820,P=0.001,F=17.184,P=0.002).结论 辛伐他汀能够降低乳腺癌细胞PTHrP的分泌,从而抑制乳腺癌细胞在骨内生长及其对骨质的破坏.     

治疗骨质疏松促进骨形成药物

一、OPG-OPGL-RANK系统与骨质 疏松新药物的开发 护骨素(osteoprotegrin,OPG)也称破骨细胞抑制因子(OCIF)是由成骨细胞与骨髓基质细胞产生的一种与肝素结合的分泌糖蛋白,属于TNF受体(TN-FR)家族的可溶性受体。护骨素配体(OPGL)又称RANKL或破骨细胞分化因子(ODF),是成骨细胞上     

BSP和PTHrP的联合检测对乳腺癌骨转移临床意义的研究

目的:探讨骨唾液蛋白(BSP)和甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)的联合检测对乳腺癌骨转移的临床意义.方法:乳腺癌87例患者,分为骨转移组40例和无骨转移组47例.应用免疫组织化学法检测石蜡包埋标本BSP和PTHrP的表达.结果:BSP和PTHrP在骨转移组的阳性表达均明显高于无骨转移组(x2值分别为8.47和10.49,P均<0.01),且强阳性表达也均高于后者(x2值分别为9.18和11.05,P均<0.05);同时两者在骨转移组的阳性表达与无转移组和骨外转移组之间比较,差异有统计学意义(P<0.01),而后两组间阳性表达差异无统计学意义(P>0.05).Cox比例风险回归模型分析结果发现,乳腺癌组织中BSP和PTHrP的高表达是预测骨转移的主要危险因素(P<0.01),其相对危险度分别为1.293和1.348.Log-rank生存曲线分析结果显示,在乳腺癌患者中BSP和PTHrP高表达者的累积生存概率均明显低于BSP和PTHrP阴性表达组,P<0.05.结论:BSP和PTHrP的过表达是早期预测乳腺癌骨转移的良好标志,并可作为评估乳腺患者的一项重要的预后因子.     

沙戈匹隆通过抑制肿瘤细胞生长和骨质吸收从而抑制乳腺癌骨转移和骨质破坏

乳腺癌最易发生骨转移（75％）,患者生存时间短,仅为2年。骨转移最常见的症状是骨并发症和骨痛,严重影响患者的生存质量。乳腺癌骨转移中存在着“邪恶循环”：肿瘤细胞释放甲状旁腺激素相关蛋白等促进破骨细胞活性,从而造成骨质破坏;而骨质吸收破坏后可释放出生长因子,又进一步促进肿瘤细胞的生长。因此,只有同时抑制肿瘤细胞生长以及破骨细胞活性才能有效抑制骨转移发生。紫杉醇类是目前治疗乳腺癌转移最常用的药物,但存在耐药性高、有效率低（0％～30%）等诸多不足。     

马钱子碱经皮给药对乳腺癌骨转移抑制机制的探讨

目的:探讨马钱子碱经皮给药对乳腺癌骨转移的抑制机制,为乳腺癌的治疗提供新的途径.方法:培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,取对数生长期细胞制成单细胞悬液.20只雌性Balb/c-nu/nu裸鼠麻醉后,无菌条件下,局部骨内注射乳腺癌单细胞悬液0.2 mL,复制乳腺癌骨转移模型.20只荷瘤裸鼠随机分为马钱子碱高剂量组、中剂量组、低剂量组和模型组4组,分别给予20％(0.2 mg/g)、10％(0.1 mg/g)和5％(0.05 mg/g)浓度的马钱子碱膏(每日总剂量≤腹腔给药的半数致死量)和凡士林经皮给药,涂抹裸鼠的整个腹部和造模的部位,1 g/次,4次/d(每次间隔3 h),连续15 d.影像学观察骨转移情况;RT-PCR检测并比较各组肿瘤组织中,骨转移相关因子VEGF、COX-2和PTHrP的表达量.结果:胫骨的X射线表现,马钱子碱高剂量组和中剂量组的骨质破坏不明显,低剂量组和模型组的骨质破坏明显,甚至出现病理性骨折.RT-PCR结果显示,钱子碱高剂量组VEGF、COX-2和PTHrP mRNA的表达分别为25.30±0.90、20.63±0.73和25.56±0.54,马钱子碱中剂量组分别为24.10±0.73、20.49±0.76和25.74±0.48,马钱子碱低剂量组分别为25.27±0.75、21.02±0.65和25.65±0.44,模型组分别为24.09±0.74、21.14±0.66和25.75±0.39.与模型组比较,马钱子碱各剂量组VEGF、COX-2和PTHrP mRNA的表达量随着马钱子碱剂量的增加逐渐下降,差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:马钱子碱经皮给药能抑制裸鼠乳腺癌骨转移瘤的生长,减轻骨损伤,其机制可能是通过调控VEGF、COX-2和PTHrP的表达而抑制乳腺癌骨转移瘤的生长.     

地诺单抗用于骨转移癌治疗的研究

癌症转移是致死的主要原因,骨是排第三的好发转移部位。OPG／RANKL—RANK骨调节轴是影响破骨细胞发育及功能的唯一途径。地诺单抗（denosumab）是全人源化结合RANKL的中和抗体,由FDA于2010年11月批准用于实体瘤骨转移的治疗。本文就地诺单抗用于骨转移癌治疗的机制及临床实验研究作一综述,为临床医生更合理的选择骨改构药物用于骨转移癌的治疗做指导。     

大鼠骨癌痛模型的建立及组织学研究

目的建立一个有用的癌痛动物模型.方法将MRMT-1大鼠乳腺癌细胞接种到SD大鼠胫骨上段骨髓腔内,造成骨癌痛动物模型.用von Frey细丝刺激足底和后肢负重测量仪分别测量机械性痛觉超敏和痛觉过敏,放射学方法评估骨破坏,同时,组织切片镜下观察肿瘤和骨结构的破坏情况.结果造模动物在14天左右开始出现机械性痛觉超敏和痛觉过敏,胫骨X线摄片显示明显的骨破坏,组织学研究显示骨髓腔内肿瘤生长,向外侵蚀破坏骨皮质,同时伴有新生的编织骨形成.结论从疼痛行为学、放射学、组织学多方面研究的结果,表明大鼠骨癌痛模型已复制成功.该癌痛模型的建立,将为我国癌痛新药的评价,尤其是研究治疗癌痛中药的疗效及作用机制提供一个有用的工具.     

透骨草总生物碱对乳腺癌骨转移的抑制作用及其机制

目的：探讨透骨草总生物碱（TTAT）对乳腺癌骨转移的抑制作用及其机制。方法：提取透骨草中所含生物碱,通过碘化铋钾或改良碘化铋钾与碘化汞钾试剂显色反应进行鉴定。将42只裸鼠分为正常组（常规饲养）、模型组（仅造模）、TTAT低浓度组（100 mg/kg TTAT腹腔注射）、TTAT高浓度组（500 mg/kg TTAT腹腔注射）、盐酸多柔比星（DOX）组（5 mg/kg DOX腹腔注射）、唑来膦酸注射液（ZOL）组（0.4 mg/kg ZOL颈后皮下注射）,每组7只,除正常组外其他组裸鼠右后肢胫骨内注射人乳腺癌MDA-MB-231细胞建立乳腺癌骨转移模型,除正常组和模型组外,其余组造模1周成瘤后开始给药,隔日1次,连续给药6周。给药期间,每周定期测量各组裸鼠体质量及肿瘤体积,密切观察各组裸鼠生活状态。实验结束时颈椎脱臼法处死各组裸鼠,以右侧髋关节为界切除右后肢,采用影像学技术、HE染色法和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法评估TTAT对骨转移裸鼠的胫骨及肿瘤组织生长的影响;采用Western blot法检测肿瘤组织中核因子-κB配体（RANKL）、骨保护素（OPG）蛋白以及细胞外信号调节激酶（ERK）、p-ERK、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p-JNK蛋白的表达水平。结果：从500 g透骨草中提取得到3.28 g提取物,显色反应呈现阳性,表明提取物中含有生物碱;与模型组比较,100和500 mg/kg TTAT组瘤质量分别为（3.50±0.70）g和（2.63±0.59）g,较模型组瘤质量（5.01±1.03）g均明显下降（P < 0.01）;影像学评分均升高（P < 0.01）;HE染色结果显示100和500 mg/kg浓度组TTAT均能够显著抑制肿瘤癌巢形成,使核分裂像减少,并对乳腺癌胫骨骨转移裸鼠病变骨质具有保护作用;TRAP染色结果显示此2个TTAT组中破骨细胞数量明显减少（P < 0.05）;Western blot结果显示,TTAT显著降低肿瘤组织中RANKL/OPG比值（P < 0.05）,同时下调p-ERK、p-JNK的表达（P < 0.05）。结论：透骨草总生物碱能显著抑制乳腺癌胫骨骨转移裸鼠肿瘤生长和骨质病变,其抑制乳腺癌骨转移作用可能是通过OPG/RANK/RANKL信号通路实现的。     

芳香化酶抑制剂对胶原性关节炎大鼠血清中IL-17和RANKL／RANK／OPG的影响

目的探讨第三代芳香化酶抑制剂阿那曲唑对胶原诱导的关节炎（ClA）大鼠血清中自介素17（IL—17）、核因子-KB受体活化因子（RANK）及其配体（RANKL）和骨保护素（OPG）的作用,了解其加重骨关节病变作用及其机制。方法建立C1A大鼠模型,分为阿那曲唑组、卵巢切除组和假手术组,用排水法大鼠关节炎足体积变化,放射线分析大鼠关节病变情况,并用ELISA法分析C1A大鼠血清中IL-17、RANKL及RANK和OPG的表达情况。结果与卵巢切除组比较,阿那曲唑组大鼠关节病变加重（P〈0．05）,血清中IL－17、RANKL表达增加,OPG的表达显著降低,RANKL／OPG比值明显增加,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论在CIA大鼠模型中,阿那曲唑可增加大鼠衄清中IL－17、RANKL的表达,而抑制OPG的表达,导致大鼠关节病变加重。     

间皮素在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 研究间皮素（MSLN）在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 收集56例手术切除的乳腺癌组织及其相应的癌旁组织标本,应用免疫组化法分别检测乳腺癌组织和癌旁组织中MSLN的表达情况。结果 56例乳腺癌组织的MSLN阳性表达率为42.9％ （24／56）,高于癌旁组织的10.7％（6／56）,差异有统计学意义（P＜0.05）。MSLN的表达与乳腺癌患者的肿瘤分化程度、肿瘤大小及雌激素受体（ER）表达相关（P＜0.05）,肿瘤直径较大、中低分化及ER阴性者的MSLN阳性表达率高;MSLN的表达与年龄、有无淋巴结转移及人表皮生长因子受体（HER-2）表达情况均无关（P＞0.05）。 结论 检测MSLN在乳腺癌组织中的表达有助于乳腺癌的诊断,并可作为判断其恶性程度的重要指标。     

乳腺癌改良根治术后经动脉置泵区域性化疗的临床研究

目的探讨乳腺癌改良根治术后经内乳动脉置泵化疗的安全性。方法回顾性分析64例乳腺癌改良根治术患者的临床资料,其中区域性化疗32例(观察组),全身化疗32例(对照组)。比较两组患者化疗后不良反应及切口愈合情况。结果术后两周内两组患者血常规、肝肾功能、恶心呕吐、发热脱发等临床毒性反应等差异有统计学意义(P<0.05),而切口愈合等级,两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌术后即时采用动脉置泵施行区域性化疗不仅可行,且其化疗副作用明显较静脉化疗低。     

乳腺癌组织中褪黑素受体MT1和CUEDC2的表达及临床意义

目的 检测乳腺癌组织中褪黑素受体（MT1）与CUE结构域蛋白2（CUEDC2）的表达,探讨二者表达的相关性及临床意义。方法 采用Western blotting和免疫组化SP法检测80例乳腺浸润性导管癌、30例乳腺导管内癌和30例正常乳腺组织中MT1和CUEDC2的表达情况。结果MT1在乳腺浸润性导管癌、乳腺导管内癌、正常乳腺组织中的阳性表达率分别为788％、60.0％和16.7％,三者差异有统计学意义（P＜0.05）;CUEDC2在乳腺浸润性导管癌、乳腺导管内癌的阳性表达率分别为68.8％、53.3％,明显高于正常乳腺组织的13.3％,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western bloting半定量检测显示,乳腺浸润性导管癌MT1和CUEDC2表达分别为0.542±0.078和0.461±0.057,均高于正常乳腺组织（P＜0.05）。MT1和CUEDC2表达与乳腺浸润性导管癌患者有无淋巴结转移（P=0.034,P=0.027）和组织学分级（P=0.018,P=0.022）均有关, 但与年龄和肿瘤大小无关（P＞0.05）。乳腺浸润性导管癌中MT1表达与CUEDC2表达呈正相关（r=0.441,P＜0.05）。结论 MT1和CUEDC2高表达与乳腺癌的发生、发展及转移有关,联合检测二者表达可为乳腺癌基因治疗寻找新的干预靶点提供实验依据。     

三阴乳腺癌的临床特征及预后的研究

目的探讨三阴乳腺癌（ER、PR、Her-2均为阴性）的临床特征及预后。方法随机抽取山东省立医院1995年10月-2000年10月间的手术切除石蜡包埋标本116例,采用免疫组化技术,检测053、Her-2、VEGF、EGFR蛋白表达情况,并做三阴乳腺癌与临床特征及预后相关性分析。结果116例乳腺癌患者中三阴乳腺癌22例,占19．0％。三阴乳腺癌与肿瘤大小、淋巴结转移数目、组织学分级、p53、EGFR蛋白均相关（P〈0．05）,与年龄、月经状况、VEGF蛋白无相关性。中位随访96（32-123）个月,22例三阴乳腺癌患者中,有12例（54．5％）发生复发转移,而94例非三阴乳腺癌患者中,20例（21．3％）发生复发转移（P〈0．05）。三阴乳腺癌表达不同的患者间总生存时间（OS）有统计学差异（P〈0．05）,而无病生存时间差异无统计学意义（P=0．2877）。Cox模型多因素回归分析显示,肿瘤大小、淋巴结转移数、组织学分级、是否为三阴乳腺癌是预测总生存率的独立预后因素。结论三阴乳腺癌通过免疫组化方法确定,有特定的临床特征,预后明显差于对照。其临床较为有效的治疗方法尚不明确,有待进一步深入研究。     

三阴性乳腺癌中CK5/6表达的研究

目的：探讨CK5/6在三阴性乳腺癌中的表达特点及其与临床病理表现的相关性。方法：免疫组织化学方法检测374例乳腺癌标本（318例非三阴性乳腺癌,56例三阴性乳腺癌）中CK5/6的表达情况。探讨其在三阴性及非三阴性乳腺癌中的表达差异。结果：在三阴性乳腺癌病例中,CK5/6阳性表达率为62.50％（35/56）;在非三阴性乳腺癌病例中,CK5/6阳性表达率为12.89％（41/318）,两者相比较（ P＜0.01）,有统计学差异。在以组织学分级（组织学分级G1级和G2级之间比较）为指标进行的分组中CK5/6的表达有统计学差异（ P＜0.05）,以患者月经状况、肿瘤大小、肿瘤分期（ I-Ⅱ期与Ⅲ-Ⅳ期之间比较）和淋巴结转移情况作为指标进行的分组中表达均无统计学差异（P＞0.05）。结论：CK5/6在三阴型乳腺癌中过表达,是一个相对独立的反映乳腺肿瘤起源特点的免疫组化指标,与组织学分级有明显关系。     

TXNIP在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨硫氧还蛋白结合蛋白（TXNIP）在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法 收集2011年至2012年50例乳腺癌组织及对应癌旁组织,采用qRT-PCR、Western blotting及免疫组化法分别检测16例、7例和50例乳腺癌及对应癌旁组织中TXNIP mRNA表达量、蛋白水平及蛋白阳性表达情况,并分析TXNIP表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果 乳腺癌组织中TXNIP mRNA表达量为39.07±12.34,癌旁组织中为40.12±13.13（P＞0.05）;乳腺癌组织中TXNIP蛋白水平和阳性表达率分别为0.43±0.11和52.0％,均低于癌旁组织的0.85±0.01和72.0％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。TXNIP蛋白表达与乳腺癌TNM分期和分化程度有关（P＜0.05）,Ⅲ、Ⅳ期及低分化乳腺癌组织中TXNIP蛋白阳性表达率低于其对应癌旁组织（P＜0.05）。结论 TXNIP在乳腺癌组织及癌旁组织中表达存在差异,其可能成为乳腺癌诊断和治疗的参考指标。     

Osteoprotegerin overexpression by breast cancer cells enhances orthotopic and osseous tumor growth and contrasts with that delivered therapeutically

Osteoprotegerin (OPG) acts as a decoy receptor for receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL), which is a pivotal molecule required for osteoclast formation. In vitro OPG inhibits osteoclast formation and in vivo (administered as Fc-OPG) it reduces hypercalcemia and the establishment of osteolytic lesions in mouse models of tumor cell growth in bone. Osteolysis can be induced by parathyroid hormone-related protein (PTHrP) produced by breast cancer cells that results in an increased osteoblastic RANKL/OPG ratio. We examined the effect of local tumor production of OPG on the ability of breast cancer cells to establish and grow in bone and mammary fat pad. MCF-7 cells or MCF-7 cells overexpressing PTHrP were transfected with full-length OPG and inoculated into the proximal tibiae of athymic nude mice. Mice injected with cells overexpressing PTHrP and OPG showed enhanced tumor growth, increased osteolysis (2-fold compared with MCF-7 cells overexpressing PTHrP), and altered histology that was reflective of a less differentiated (more aggressive) phenotype compared with MCF-7 cells. In contrast, administration of recombinant Fc-OPG reduced tumor growth and limited osteolysis even in mice inoculated with OPG overexpressing cells. Similarly, OPG overexpression by breast cancer cells enhanced tumor growth following orthotopic inoculation. These results indicate that OPG overexpression by breast cancer cells increases tumor growth in vivo and that there are strikingly different responses between therapeutically administered Fc-OPG and full-length OPG produced by tumor cells.