在澳大利亚从Culex Annulirostris蚊中分离乙脑病毒

WallaceLine把东洋动物地理带与澳大拉西亚动物地理带分开，人们认为乙型脑炎只发生在WallaceLine的北部和西部，而与乙脑病毒最相近的黄病毒、墨累山谷脑炎（MVE）病毒是澳大利亚及巴布新肌内亚（在WallaceLine的南部和东部）的澳大利亚脑炎的主要病原。因此当1995年4月在澳大利亚TorresStrait的Badu岛发生乙脑暴发时，MVE病毒曾被怀疑是主要的致病原因。然而在此暴发期间，用CO2干冰及辛醇作诱饵的光法捕捉到包括12个种的蚊共13300只并对其进行了病毒分离。从CulexAnnulirostris蚊中分离到8株乙脑病毒，携带率为2．97：1000；从这…     

乙型脑炎病毒反向遗传技术研究进展

乙型脑炎病毒能够引起流行性乙型脑炎,该病可引起人类永久性中枢神经系统后遗症,且致死率较高。该病毒免疫逃逸、跨越血脑屏障及其跨种间传播与感染等机制尚不清楚,而反向遗传技术对于阐明乙脑病毒致病分子机理、研制重组病毒疫苗及开发基因工程载体是重要的技术手段。本文将就乙脑病毒反向遗传技术的研究状况、限制因素及应用加以综述。     

乙型脑炎病毒持续感染株在不同条件下病毒量的变化及分析

目的研究乙脑病毒持续感染株在不同条件下病毒量的变化及探讨影响病毒增殖的因素。方法乙脑病毒野生株JaGAr-01株和Nakayama株分别感染人肝癌细胞株KN73，建立乙脑病毒持续感染模型。采用空泡斑点实验进行病毒滴度测定。用持续感染病毒感染人神经纤维母细胞瘤细胞株IMR．32，在30℃和37℃下检测病毒的温度感受性；分别将两种野生株感染持续感染了病毒的KN73细胞，进行病毒重复感染实验；为探讨持续感染病毒的增殖性，将其感染KN73细胞和IMR．32细胞。结果两种持续感染病毒的增殖量均无温度差异性。重复感染实验结果：JaGAr-01株的病毒量是对照的1．3％和8．8％；Nakayama株的病毒量是对照的80．0％和1．7％。两种野生株及其持续感染株分别感染KN73和IMR．32细胞，前者中两种持续感染株的增殖性比野生株明显低下，而在后者中两株的增殖性与其野生株相近。结论两种持续感染的乙脑病毒均无温度变异株；乙脑病毒的持续感染系中可能存在含有DI粒子的变异病毒；在不同细胞中宿主因子对阻碍持续感染株的增殖存在差异。     

乙型脑炎病毒持续感染对模型中变异株部分性状及病毒抑制实验

我们利用人肝癌细胞株ＫＮ73 建立乙型脑炎 (乙脑 )病毒体外持续性感染模型 ,并探讨乙脑病毒变异株部分性状变异机理 ,通过病毒抑制实验和观察 ,提示该模型体系可为今后抗病毒药物的开发提供帮助。人肝癌细胞株ＫＮ73 与乙脑病毒野生株 (ＪａＧＡｒ 0 1)均由日本金泽医科大学惠赠。ＪａＧＡｒ 0 1变异株为ＪａＧＡｒ 0 1株在ＫＮ73 细胞中持续感染 3年所得。ＢＨＫ细胞空斑试验法用于病毒滴定。乙脑病毒野生株感染正常ＫＮ73 细胞 ,37℃吸附 90ｍｉｎ ,更换培养液直到 90 %细胞出现病变 ,继续培养残存细胞 ,待形成单层细胞后进行细胞传代 ,…     

2010年福建省流行性乙型脑炎病毒监测

目的掌握福建省自然界蚊虫中乙型脑炎病毒感染率及基因型别特征。方法2010年在福建省三明市、建阳市和福州市采集蚊虫标本,研磨处理后采用乙脑病毒特异性检测引物进行分子筛查。PCR产物直接进行双向测序,应用ATGC、ClustalX（1．83）、MegAlign、GeneDoc3．2和Mega4等生物学软件完成全基因组序列拼接、比对和核苷酸与氨基酸同源性分析、系统进化分析。结果共采集6987只蚊虫标本,主要是三带喙库蚊和中华按蚊。3个监测点均检测到乙脑病毒核酸序列,三明市、建阳市和福州市蚊虫中乙脑病毒带毒率分别为1．25％、1．76％和0．65％。从建阳市采集的三带喙库蚊中扩增出1株乙脑病毒全基因序列,经鉴定所有检测到的乙脑病毒序列均属于基因I型。结论福建省自然界蚊虫中以基因I型乙脑病毒为主。     

乙型脑炎病毒prM蛋白单克隆抗体的制备

目的 克隆日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)前膜蛋白(prM)编码基因,原核表达、纯化prM蛋白,以纯化产物为免疫原制备单克隆抗体(mAb);方法从感染JEV病毒的鼠脑中克隆编码JEV prM蛋白的基因并将其克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠埃希菌BL21(DE3)LvsS后以IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA纯化后进行SDS-PAGE分析.用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和亚克隆后筛选出能分泌识别prM蛋白的mAb的杂交瘤细胞株.用Western Blot和免疫组化方法检测单克隆抗体的特异性.结果 从鼠脑中克隆出约500 bp的JEV prM基因,将其克隆入原核表达载体中,在大肠埃希菌中获得了较好表达.纯化的prM蛋白免疫BALB/c小鼠,经传统细胞融合及筛选方法制备出单克隆抗体,抗体滴度为105.ELISA、Western Blot和免疫组化检测结果证实该株单抗具有较好的特异性.结论 成功的表达和纯化了日本乙型脑炎病毒的prM蛋白,并完成了单克隆抗体的制备,为乙型脑炎病毒感染的早期诊断及预防的研究奠定了良好的基础.     

从病毒性脑炎患者标本分离的基因I型乙脑病毒全基因组序列特征研究

目的通过现代分子生物学理论与技术测定和分析了从脑炎患者脑脊液标本分离的基因I型乙脑病毒（GZ56株）全基因组序列特征,以了解其致病性的分子基础。方法采用RT．PCR法和核酸序列测定法获得病毒基因组全序列,并利用DNASTAR、ClustalX version2．0．9及MEGAversion4．1等生物学软件分析该乙型脑炎病毒核苷酸序列、氨基酸序列及系统进化等。结果研究结果表明从病毒性脑炎患者脑脊液标本分离的基因I型乙脑病毒（GZ56株）基因组全长为10965nt,编码3432个氨基酸。病毒全基因组分子进化分析显示GZ56株全基因组与国际上第一株从蚊虫分离的基因I型乙脑病毒（M-28株）处于同一进化分支。GZ56株与其他基因I型乙脑病毒核昔酸和氨基酸序列同源性分别为96．2％～98．6％和98．2％～99．7％。病毒E基因与乙脑病毒灭活疫苗株P3相比存在11个氨基酸差异位点,而与乙脑病毒减毒活疫苗株SA14-14-2相比,在E蛋白上存在14个氨基酸差异位点。结论本研究提示,从病毒性脑炎患者标本分离的基因I型乙脑病毒全基因组未见明显变化,从基因组水平可以推测该病毒可以被现行的乙脑疫苗所保护。     

乙型脑炎病毒高株部分基因序列分析

乙型脑炎病毒 (ＪＥＶ)高顺生株 (高株 )是我国学者于 6 0年代从病人脑内分离到的乙脑病毒野毒株 ,其血凝活性的ｐＨ值较宽 ,与其他乙脑毒株不同 ,国内外对高株分子生物学研究尚未开展。我们对高株这两段基因保守区进行了ＤＮＡ序列分析 ,以初步了解高株与其他乙脑野毒株基因序列的不同 ,为进一步阐明高株基因组结构与功能的关系奠定基础。1　材料和方法1 1　病毒的培养　将中国预防医学科学院病毒学研究所虫媒病毒研究室冻存的感染高顺生野毒株的鼠脑在无菌状态下仔细研磨 ,离心取上清 ,10倍稀释后接种单层ＢＨＫ细胞 ,数天后出现典型细胞…     

我国乙脑病毒研究取得长足进展

流行性乙型脑炎又称日本脑炎(Japanese Encephalitis,JE),简称乙脑,是感染乙脑病毒引起的病毒性脑炎,该病主要由蚊虫传播,主要流行于亚洲和太平洋地区,是全世界最重要的病毒性脑炎[1,2].目前全世界大约30亿人生活在乙脑病毒流行区,乙脑已经成为全世界关注的重要公共卫生问题[2].     

流行性乙型脑炎病毒在自然界的保存与扩散及传播媒介

流行性乙型脑炎(简称乙脑)国际上称为日本脑炎(Japanese encephalitis),是由蚊虫等吸血昆虫叮咬感染乙脑病毒引发的急性传染病.病死率较高,而且后遗症严重,对人类健康危害较大.乙脑也是一种人兽共患的自然疫源性疾病.     

乙型脑炎病毒活疫苗生产株SA14-14-2的感染性克隆构建

目的　构建乙型脑炎病毒 (乙脑病毒 )活疫苗生产株SA1 4 14 2的感染性克隆。方法　在对SA1 4 14 2株全长基因组测序基础上 ,引入适当酶切位点和T7RNA聚合酶启动子 ,采用分部连接策略 ,获得全长基因组cDNA ,体外转录RNA后 ,转染细胞获得感染性克隆 ,病毒传代培养、抗体中和试验和乳鼠脑腔攻击试验鉴定病毒。结果　由疫苗株cDNA构建了病毒感染性克隆 ,经鉴定为乙脑病毒 ,且病毒毒力比野毒株弱。结论　获得了乙脑病毒活疫苗生产株SA1 4 14 2的感染性克隆 ,为进一步研究疫苗的减毒机理及开发新一代疫苗奠定了基础     

重组质粒DNA在小鼠诱导产生保护性免疫力和预防乙型脑炎

构建含有乙脑病毒外膜蛋白前体 (Prm)和包膜蛋白 (E)基因的质粒载体 ,在巨细胞病毒的早期基因启动子的控制下 ,表达 Prm和 E蛋白。用这种质粒载体(JE- 4 B克隆 )转化的 COS- 1细胞在培养基中分泌乙型脑炎病毒 (JEV)特异性细胞外颗粒。对小鼠注射 1至 2针的重组质粒 DNA或 2针商用疫苗 JEVAX。所有接受注射 1针至 2针的 DNA疫苗的鼠 ,在初始免疫的 18个月中保持分泌 JEV特异抗体。JEVAX疫苗对于 3周龄鼠 10 0 %诱导血清转化 ,但是对于 3天龄鼠抗体检查ELISA滴度均不超过 1∶ 4 0 0。用这种 DNA疫苗免疫过的母鼠经空斑减少中…     

日本脑炎病毒单克隆抗体的研究进展

近年来,抗各种不同日本脑炎病毒(JEV)株的McAb不断产生,并已在JEV的研究中广泛应用,取得了前所末有的进展。在分子病毒学中,McAb为进一步弄清JEV的抗原位点,不同位点之间的关系,不同位点与不同生物学功能之间的关系,以及选择保护性位点,制备亚单位疫苗提供了有力的工具。在乙脑检验诊断中,McAb为检出JEV,阐明JEV不同毒林之间的关系提供了条件。在乙脑实验性治疗以及对临床患者探索性治疗中,McAb为乙脑的特异性防治提供了依据,是一种很有希望的制剂。     

乙型脑炎病毒感染患儿血清中IL-12和IL-18的含量变化

多种细胞因子在病毒感染过程中的作用日益受到人们的重视.为探讨IL-12和IL-18在乙型脑炎病毒感染患儿血清中的表达水平及其相互关系, 了解患儿免疫功能状态, 以便为乙型脑炎病毒感染患儿的诊断和临床治疗提供参考, 本文对感染乙型脑炎病毒患儿血清中IL-12和IL-18的含量进行了检测, 现报道如下.     

四川省分离的基因1型乙型脑炎病毒分子特征分析

目的 从四川省巴中市采集的蚊虫标本中分离乙型脑炎(简称乙脑)病毒(JEV),确定其基因型别,并分析相关的基因1型乙脑病毒PrM和E基因区段氨基酸序列特征.方法 对2004年采集蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙脑病毒进行生物学、血清学及分子生物学鉴定.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X软件做碱基配对分析,MEGA4软件完成病毒进化分析,GENEDOC(3.2)软件完成氨基酸位点分析,根据蜱传脑炎病毒可溶性蛋白晶体结构为模板进行乙脑病毒E蛋白三维结构模拟预测分析.结果 共采集4668只蚊虫标本,主要是骚扰阿蚊和库蚊,分离到6株病毒,经鉴定均属于基因1型的乙脑病毒.将四川省分离的6个毒株结合我国新分离的基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株SA14-14-2株的PrM区段和E区段氨基酸比较,发现PrM区段在PrM2、64和65位存在基因1型乙脑病毒独有的氨基酸位点差异,E区段存在14处共同的氨基酸位点差异,其中在E129、222、327和366位点为中国目前分离到的基因1型乙脑病毒所特有的位点特征.结论 从四川省巴中市首次分离到基因1型的乙脑病毒,并发现基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株之间PrM、E基因区段存在氨基酸差异,但现行疫苗株理论上可以保护新分离的基因1型乙脑病毒.     

西尼罗病毒与乙型脑炎病毒生物学性状的比较与鉴别

目的对西尼罗病毒(WNV)和乙脑病毒(JEV)的致细胞病变效应(CPE)、致病性、形态学、免疫学和分子生物学性状进行比较,为WNV感染的鉴别诊断提供依据。方法通过给C6/36细胞和乳鼠接种WNV或JEV,观察两种病毒的CPE和致病性;制作组织切片的透射电镜标本进行病毒形态学观察;分别用间接免疫荧光试验(IFA)和RTPCR方法对两种病毒抗体阳性血清及病毒核酸进行检测。结果WNV和JEV所致C6/36细胞CPE分别以细胞融合和细胞脱落为主要特征;脑内接种两种病毒对乳鼠的致病性未见明显差别;电镜下,两种病毒体的形态与大小相似;WNV与JEV之间存在抗原交叉反应;用黄病毒通用引物可从WNV和JEV感染组织中检出病毒核酸,而用特异引物仅能扩增出相应病毒的核苷酸片段。结论病毒所致C6/36细胞CPE与病毒核酸检测可作为WNV与JEV有效的鉴别方法,对两种病毒抗体效价进行同时测定有助于病原体感染的诊断。     

四川省分离的基因1型乙型脑炎病毒分子特征分析

目的 从四川省巴中市采集的蚊虫标本中分离乙型脑炎(简称乙脑)病毒(JEV),确定其基因型别,并分析相关的基因1型乙脑病毒PrM和E基因区段氨基酸序列特征.方法 对2004年采集蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙脑病毒进行生物学、血清学及分子生物学鉴定.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X软件做碱基配对分析,MEGA4软件完成病毒进化分析,GENEDOC(3.2)软件完成氨基酸位点分析,根据蜱传脑炎病毒可溶性蛋白晶体结构为模板进行乙脑病毒E蛋白三维结构模拟预测分析.结果 共采集4668只蚊虫标本,主要是骚扰阿蚊和库蚊,分离到6株病毒,经鉴定均属于基因1型的乙脑病毒.将四川省分离的6个毒株结合我国新分离的基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株SA14-14-2株的PrM区段和E区段氨基酸比较,发现PrM区段在PrM2、64和65位存在基因1型乙脑病毒独有的氨基酸位点差异,E区段存在14处共同的氨基酸位点差异,其中在E129、222、327和366位点为中国目前分离到的基因1型乙脑病毒所特有的位点特征.结论 从四川省巴中市首次分离到基因1型的乙脑病毒,并发现基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株之间PrM、E基因区段存在氨基酸差异,但现行疫苗株理论上可以保护新分离的基因1型乙脑病毒.     

用DNA免疫筛选乙型脑炎病毒保护性抗原:一项与传统病毒疫苗比较的研究

在这项研究中 ,作者评估了乙型脑炎病毒 ( JEV)结构和非结构蛋白诱导保护性免疫反应的作用 ,并与用灭活 JEV疫苗免疫的结果相比较。用编码 JEV膜蛋白质粒 ( PE)免疫的一些近系杂交和远系杂交鼠能高度地保护致死性 JEV的攻击 ,其保护效果与用灭活疫苗获得的保护类似。然而所有其它测试基因 ,包括编码衣壳蛋白和非结构蛋白 NS1- 2 A,NS3和 NS5是没有这种效果的。而且 ,与用灭活 JEV疫苗免疫鼠获得的免疫力相比 ,通过肌内注射或基因枪注射质粒 PE的表达产生了更强和更长时间的 JEV包膜特异性抗体反应。有趣的是 ,用质粒 PE肌肉免…     

流行性乙型脑炎病毒活疫苗株SA14-14-2基因稳定性研究

目的 通过研究流行性乙型脑炎活疫苗减毒株基因稳定性，从分子水平证实流行性乙型脑炎活疫苗的遗传稳定性。方法分析流行性乙型脑炎活疫苗主种子、工作种子及其相应的疫苗病毒E蛋白基因核苷酸和氨基酸序列，并与其强毒株和基因库中乙脑病毒减毒株(AF15119)比较。结果乙脑活疫苗主种子、工作种子及其相应的疫苗病毒的E蛋白基因核苷酸序列完全相同。这些病毒E蛋白的氨基酸序列与基因库中乙脑病毒弱毒株(AF315119)比较显示第E447位点氨基酸有差异。结论乙脑病毒活疫苗减毒株遗传学特性稳定。     

被动免疫母鼠对乳鼠肾综合症出血热病毒致死感染的…

被动免疫母鼠（腹腔注射病毒抗血清或抗病毒ＩｇＧ）对不同途径感染ＨＦＲＳ病毒的乳鼠的保护作用不同，对腹腔感染病毒的乳鼠具有保护作用，保护率为９０％～１００％，而对脑内感染病毒的乳鼠没有保护作用或保护作用很低，保护率为０或９％～２２％。