大鼠釉原蛋白基因表达的载体构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 观察釉原蛋白（ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ,Ａｍ）基因聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）产物在大肠杆菌中的表达。方法 利用谷胱苷肽巯基转移酶表达载体４Ｔ－２型（ｐｔａｃ ｇｌｕｔａｈｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ,ＰＧＥＸ－４Ｔ－２）载化大肠杆菌ＤＨ５α,通过异丙基硫代半乳糖苷（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ,ＩＰＴＧ）诱导,收菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果 电泳分析表明,釉原蛋白基因ＰＣＲ产物在大肠杆菌中成功地获得了表达。结论 构建了ＰＧＥＸ－４Ｔ－２／Ａｍ融合表达载体,获得了融合表达的目的蛋白。     

人牙髓细胞Smad2基因MH2结构域的cDNA 克隆和序列测定

目的：从人牙髓细胞内克隆转化生长因子－β特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ２的功能性结构域———ＭＨ２结构域。方法：原代培养人牙髓细胞,从培养的细胞中提取总ＲＮＡ,逆转录合成ｃＤＮＡ第１条链;设计内、外侧两对引物,进行巢式ＰＣＲ,扩增Ｓｍａｄ２基因ＭＨ２结构域的基因片段;将所获得的基因片段定向插入ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ（＋）载体;转化大肠杆菌ＪＭ１０９,挑选阳性克隆并鉴定;用ＰＥ３１７－Ａ型自动测序仪进行核苷酸序列测定分析。结果：测序结果与国外从人肾ｃＤＮＡ文库中克隆的基因序列完全一致。结论：首次从人牙髓细胞中克隆成功Ｓｍａｄ２基因的ＭＨ２结构域,证实了Ｓｍａｄ２基因在人牙髓细胞中的表达;提示人牙髓细胞内存在Ｓｍａｄ２信号转导途径,ＴＧＦ－β对人牙髓细胞分化的调节可能是通过Ｓｍａｄ２信号转导途径实现的。     

抑癌基因p53基因克隆和表达

目的；本研究对抑癌基因ｐ５３进行基因克隆和表达以获得ｐ５３基因产物，方法：采用基因克隆重组技术将ｐ５３ｃＤＮＡ编码区重组到融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中，用免疫斑点杂交技术检测ｐ５３融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结果：我们获得了ｐ５３基因融合蛋白表达质粒ｐＧＥＸ－ｐ５３并在大肠杆菌中获得了表达。结论：ｐＧＥＸ－２Ｔ是一个有效的融合基因表达载体，适合于ｐ５３基因的表达，用ｐＧＥＸ－ｐ５３可以很方便地     

抑癌基因p53基因克隆和表达

目的：本研究对抑癌基因ｐ５３进行基因克隆和表达以获得ｐ５３基因产物。方法：采用基因克隆和重组技术将Ｐ５３ｃ ＤＮＡ编码区重组到融合蛋白表达载体 ｐＧＥＸ－２Ｔ中,用免疫斑点杂交技术检测 ｐ５３融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结果：我们获得了ｐ３基因融合蛋白表达质粒ｐＧＥＸ－ｐ５３并在大肠杆菌中获得了表达。结论：ｐＧＥＸ－２Ｔ是一个有效的融合基因表达载体,适合于ｐ５３基因的表达。用ｐＧＥＸ－ｐ５３可以很方便地获得ｐ５３蛋白,对研究Ｐ５３基因在口腔癌发生中的作用具有应用价值。     

Smad2蛋白在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程

观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Ｓｍａｄ２蛋白的表达,以及Ｓｍａｄ２蛋白在转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β１,ＴＧＦ－β１）信号转导中的作用。方法原代培养工牙乳头细胞,用ＴＧＦ－β１和骨形成蛋白－２（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ,ＢＭＰ２）刺激培养的细胞,免疫化观察。结果：ＴＧＦ－β１和ＢＭＰ２刺激组均可见Ｓｍａｄ２蛋白表达,但与对照组相     

肿瘤转移抑制基因nm23—H1和nm23—H2特异性片段的体…

采用聚合酶链反应，从人基因组ＤＮＡ中扩增出ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２特异性ＤＮＡ片段，与载体ｐＧＥＭ－３ｚｆ平端连接，重组质粒分别转化宿主菌ＪＭ１０９，在含Ｘ－ｇａｌ和ＩＰＴＧ的平板上直接筛选阳性克隆，限制性内切酶谱分析及ＰＣＲ扩增鉴定，确定ｐＧＥＭ－Ｈ１和ｐＧＥＭ－Ｈ２重组体。     

肿瘤转移抑制基因nm23-H1和nm23-H2特异性片段的体外扩增、克隆和鉴定

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），从人基因组ＤＮＡ中扩增出ｎｍ２３－Ｈ１（１８５ｂｐ）和ｎｍ２３－Ｈ２（１４５ｂｐ）特异性ＤＮＡ片段，与载体ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）平端连接，重组质粒分别转化宿主菌ＪＭ１０９，在含Ｘ－ｇａｌ和ＩＰＴＧ的平板上直接筛选阳性克隆，限制性内切酶谱分析及ＰＣＲ扩增鉴定，确定ｐＧＥＭ－Ｈ１和ｐＧＥＭ－Ｈ２重组体。为ｎｍ２３基因与肿瘤转移研究打下基础。     

大鼠釉原蛋白基因的融合表达及其纯化

目的：观察釉原蛋白（Ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ,Ａｍ） 基因ＰＣＲ 产物在大肠杆菌中的表达。方法：利用原核表达载体ＰＲＳＥＴ,转化大肠杆菌ＪＭ１０９ ,通过ＩＰＴＧ 诱导,收菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳。过柱纯化。结果：电泳分析表明,釉原蛋白基因ＰＣＲ产物在大肠杆菌中成功的获得了表达。结论：表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在。利用Ｎｉ－ ＮＴＡ 金属螯合亲和层析在变性条件下对表达的蛋白进行纯化,获得纯化蛋白。     

变形链球菌表面蛋白DNA防龋疫苗的构建

旨在构建一种新型的表面蛋白防龋疫苗－ＤＮＡ防龋疫苗。方法从表面蛋白ｐａｃ基因上利用ＢａｍＨＩ和ＳａｃＩ双酶切，获得一个３２８１ｂｐ的片段。将该片段定向插入真核表达载体ｐＳＶＬ，再将连接后新构成的质ｐＳＶＬ／ｐａｃ转入氯化钙法制备的感受态大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α。     

人成骨蛋白—1成熟肽基因5‘端的修饰及其在大肠杆菌中的表达

目的：对人成骨蛋白－１（ＯＰ－１）成熟肽基因进行修饰、克隆并在大肠杆菌中表达、检测，为ＯＰ－１的进一步纯化、复性、诱骨活性的研究以及未来的临床应用奠定基础。方法：在不改变氨基酸的前提下，用ＰＣＲ的方法对ＯＰ－１的成熟肽Ｎ端序列加以修饰，将编码成熟肽的ｃＤＮＡ３’端０．４２ｋｂ基因片段克隆于温控型大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０，受控于ＰＬＰＲ启动子。重组子以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主细胞进行温度诱导表达。用鼠抗牛天然ＢＭＰｓ单抗对表达产物进行ＥＬＩＳＡ检测和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ确证。结果：工程菌经４２℃、５ｈ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新的蛋白带，分子量在１．６×１０４ｕ左右，约占菌体总蛋白的１９．８％。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后，可获得纯度较高的重组人成骨蛋白－１成熟肽（ｒｈＯＰ－１）。表达产物的ＥＬＩＳＡ检测和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｎｇ确证确均呈阳性反应。结论：表达产物即为目的蛋白，使ｈＯＰ－１成熟肽基因５’端的修饰及其在大肠杆菌中的表达在国内第一次获得成功。     

K2O-Na2O-Al2O3-SiO2系统牙科微晶玻璃匹配氧化铝陶瓷的初步研究

目的:研究 K₂O-Na₂O-Al₂O₃-SiO₂系统牙科微晶玻璃匹配氧化铝陶瓷的热处理温度制度。方法:根据氧化铝陶瓷的热膨胀系数调整K₂O-Na₂O-Al₂O₃-SiO₂系统牙科微晶玻璃的原材料配比,利用K₂O-Na₂O-Al₂O₃-SiO₂系统牙科微晶玻璃的热处理温度制度形成微晶玻璃-氧化铝陶瓷复合材料;利用偏振光显微镜和X射线衍射分析仪观察样品的形态及显微结构特性,利用材料试验机测试材料的抗压强度。结果:经过原材料组份的调整,白榴石晶粒约1.0 μm、在玻璃基质中分布均匀;微晶玻璃-氧化铝陶瓷复合材料的抗压强度为500 MPa。结论:K₂O-Na₂O-Al₂O₃-SiO₂系统牙科微晶玻璃的热处理温度制度适合匹配氧化铝陶瓷。     

Sjgren综合征的白细胞介素2及其受体系统的初步研究

目的 探讨白细胞介素2（IL-2）及其受体系统检测在Sjogren综合征发生发展中的作用。方法 采用放射免疫法（RIA）检测Sjogren综合征患者外周血的IL-2含量,双抗体夹心法测定可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）表达水平。结果 患者的IL-2含量明显低下,血清sIL-2R表达水平显著增高,与对照组相比有非常显著性差异;治疗后IL-2的水平有明显的上升,sIL-2R的表达水平有显著的下降,但与正常人相比还是有统计学上的差异;停药后症状复又加重者,其血清IL-2含量再趋下降,而sIL-2R水平又见回升,说明Sjogren综合征患者存在着明显的IL-2/sIL-2R系统紊乱,治疗后得以部分或完全纠正,患者的自觉症状明显好转。结论 对患者外周血IL-2及sIL-2R水平的研究有助于进一步探索Sjogren综合征免疫调节紊乱的发生机制,两者的检测有助于评价其免疫功能状态,动态观察对监察病情的发展及评价治疗效果有重要的临床意义。     

白榴石含量对K2O-Al2O3-SiO2系统牙科玻璃陶瓷的断裂韧性影响的实验研究

目的：确定白榴石含量与K2O-Al2O3-SiO2系统牙科玻璃陶瓷材料断裂韧性的关系,探讨白榴石含量影响K2O-Al2O3-SiO2系统牙科玻璃陶瓷断裂韧性的机理。方法：选择5组相同组分、不同比例的玻璃陶瓷原材料,经＂白榴石微晶化＂热处理工艺加工,制成含有不同白榴石含量的K2O-Al2O3-SiO2系统牙科玻璃陶瓷试件;用单边切口弯曲梁法测试样品的断裂韧性,计算断裂韧性值;分析样品的显微结构和测定白榴石含量;对5组样品的白榴石含量和断裂韧性值数据进行相关回归统计学分析。结果：白榴石晶粒约1.0μm、在玻璃基质中分布均匀;K2O-Al2O3-SiO2系统牙科玻璃陶瓷的断裂韧性与白榴石含量有相关关系。结论：白榴石含量对K2O-Al2O3-SiO2系统牙科玻璃陶瓷的断裂韧性有明显影响,在一定范围内,该陶瓷的断裂韧性随白榴石含量增高而增大。     

全口义齿初戴前后辅音第2共振峰频率与带宽的变化

目的：研究全口义齿韧戴前后的语音适应效果。方法：应用计算机语音分析系统，测量30例全牙列缺失患者在全口义齿初戴前、初戴时及初戴后1、2、4、8周，/zi/、/ci/、/si/、的第2共振峰及带宽。结果：辅音第2共振峰及其带宽值在义齿初戴时与义齿韧戴前相比，有显著性差异。结论：全口义齿初戴后的语音适应过程呈规律性。计算机语音分析系统可对全口义齿初戴前后患者语音变化特征进行定量分析．对临床修复有较好的指导意义。     

钾铝硅系统牙科玻璃陶瓷嵌体边缘适合性的实验研究

目的：研究双固化粘结剂粘结钾铝硅（K2O-Al2O3-SiO2）系统牙科玻璃陶瓷的微渗漏情况。方法：制备钾铝硅系统牙科玻璃陶瓷瓷锭;选择清理24颗离体牙,即刻完成根管充填;在每颗离体牙的颊舌面颈部各预备一个V类洞型;将离体牙随机分成两组,第1组离体牙不预备粘结间隙、第2组离体牙预备约100μm的粘结间隙;用＂热压铸入＂法制作牙科陶瓷嵌体,用VariolinkⅡ双固化粘结剂粘结;从每组样本中随机抽取6颗离体牙,浸入25℃的品红溶液中24h,测量染色剂在洞壁的染色深度;另外12颗离体牙浸入25℃的复方生理盐水中2个月,在SEM下观察样本粘结剂的丧失情况。结果：染色渗透实验和SEM分析显示,两组样本均在陶瓷/粘结剂界面产生较高的边缘封闭质量（组1样本中陶瓷/粘结剂界面裂隙量的平均值为（12.4±4.5）%,明显低于组1样本中粘结剂/牙体界面裂隙量的平均值（38.9±8.8）%;组2样本中陶瓷/粘结剂界面裂隙量的平均值为（32.6±15.8）%,明显低于组2样本中粘结剂/牙体界面裂隙量平均值（67.9±23.1）%;没有粘结间隙的样本比有粘结间隙的样本具有更好的边缘适合性能（组1样本粘结剂裂隙量的平均值（15.7±7.3）%,明显低于组2样本中者（57.4±19.5）%。结论：较大的粘结间隙不能完全补偿双固化粘结系统树脂的聚合收缩,在使用双固化粘结系统粘结K2O-Al2O3-SiO2系统牙科玻璃陶瓷嵌体时应该避免制备较大的粘结间隙。     

IGF2BP2的异常表达影响口腔鳞状细胞癌的增殖和侵袭

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)中异常表达的胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)对增殖和侵袭的影响.方法:将4对OSCC组织及癌旁组织进行mRNA高通量测序,筛选差异表达RNA结合蛋白;在OSCC细胞系中利用RNA干扰沉默技术降低IGF2BP2的表达;利用CCK-8和Transwell实验检测I...     

rhBMP-2/rhbFGF和rhBMP-2/rhIGF-I对牙种植体周围新骨形成的影响

目的 观察rhBMP-2/rhbFGF和rhBMP-2/rhIGF-I对种植体周围新骨形成的影响.方法 64枚种植体平分为四组,Ⅰ组应用rhBMP-2和rhbFGF;Ⅱ组rhBMP-2和rhIGF-Ⅰ;Ⅲ组仅rhBMP-2;Ⅳ组不应用任何生长因子.种植体植入动物体内后4周、8周,分别注射钙黄绿素和茜素红;12周,处死动物.组织块MMA包埋,激光共聚焦显微镜观察.结果 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组中标记物均多于Ⅳ组;Ⅰ和Ⅱ组未发现差异;Ⅱ组标记物均多于Ⅲ组;而Ⅰ组黄绿色与Ⅲ组无差别.结论 rhBMP-2可明显促进种植体周围新骨生成,与rhbFGF、rhIGF-Ⅰ复合,可促进骨结合.     

HER-2／neu和COX-2在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的：检测HER-2／neu和COx-2在涎腺腺样囊性癌（Salivaryadenoidcysticcarcinoma，SACC）中的表达情况，探讨其与SACC的发生的相关性。方法：采用免疫组织化学染色，分别检测HER-2／neu和c0X～2在42例正常的涎腺组织和42例SACC组织的表达情况。实验数据采用SPSSl6．0软件进行统计学分析。结果：SACC中HER-2／neu和c（）x一2的阳性表达率分别为42．9％（20／42）和64．3％（27／42）与对照组存在显著性差异（P〈0．05），在SACC中它们的表达呈显著相关性（P-0．001，R-0．611）。HER-2／neu的阳性率在不同分化程度的SACC中存在差异（P〈o．05）与临床TNM无关，cox-2高表达与临床TNM分期有关（P〈O．05）与组织分化程度无关。HER-2／neu和cox-2表达与是否存在淋巴结转移有显著性关系（P〈O．05）。结论：HER-2／neu和COX-2的表达与SACC的分化程度、临床TNM分期及是否存在淋巴结转移密切相关，HER-2／neu和COX-2可能会成为SACC的病理分级和预后判断的辅助指标。     

2-Hydroxyethyl methacrylate as an inhibitor of matrix metalloproteinase-2

This study evaluated the effect of different concentrations of 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA) on the inhibition of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) in vitro . Mouse gingival explants were cultured overnight in Dulbecco's modified Eagle's minimal essential medium, following which the expression of secreted enzymes was analyzed by gelatin zymography and the effects of different amounts of HEMA on enzyme activity were investigated. The gelatinolytic proteinases present in the conditioned media were characterized as being matrix metalloproteinases (MMPs) by means of specific chemical inhibition. The MMPs present in the conditioned media were identified, using immunoprecipitation, as MMP-2. Three major bands were detected in the zymographic assays and were characterized, according to their respective molecular weights, into the following forms of MMP-2: zymogene (72 kDa), intermediate (66 kDa), and active (62 kDa). All forms of MMP-2 were inhibited by HEMA in a dose-dependent manner, implying that MMP-2 may be inhibited by HEMA in vivo .     

真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2的构建和鉴定

目的:构建并鉴定人hBMP2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2。方法:采用RT-PCR方法从人成骨肉瘤细胞中克隆hBMP2基因,连接T载体并测序正确后与真核表达载体pIRES2-EGFP连接,并进行酶切鉴定,最后将pIRES2-EGFP-hBMP2转染入HEK293细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定。结果:成功克隆了人BMP2基因,酶切鉴定和测序均正确,构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2能够正确表达hBMP2蛋白。结论:构建了hBMP2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP2,为研究该基因的功能奠定了基础。