细胞凝聚区的形成在C57BL/6N系 小鼠下颌骨发育中的作用意义

目的：观察胚胎早期间充质细胞增殖、分化的改变,明确下颌骨在胚胎早期由细胞凝聚到定向分化成成骨细胞而发育形成的过程。方法：用免疫组化及ＴＵＮＥＬ染色等方法,检测了胚龄１３～１９ｄ及出生１ｄ的小鼠下颌骨中未分化间充质细胞增殖、细胞程序性死亡（ＰＣＤ）及表型转化的生物学改变。结果：胚龄１３～１５ｄ,间充质细胞开始凝聚形成下颌骨始基并迅速增殖。胚龄１６～１９ｄ,凝聚区细胞明显向成骨细胞表型转化并开始成骨。麦克尔软骨消失。结论：下颌骨的发育始于胚胎间充质细胞的局部凝聚,大部分细胞经历了快速增殖后逐渐分化成熟,少量细胞出现ＰＣＤ以清除病变或非必需细胞并与麦克尔软骨的发生及退化有密切关系     

哺乳动物外胚间充质细胞的表型和形态学研究

目的：探讨胚胎中外胚间充质细胞表型和形态鉴定。方法：取E12 SD大鼠胚胎颌突组织进行免疫组化鉴定和电镜观察。结果：免疫组化抗LNGFR、NF、NSE、S100、Vimentin呈阳性着色，抗GFAP呈阴性着色；细胞主要为间充质样细胞，形状不规则，呈多突起的星形或梭形，突起不规则；核、浆比例大；核仁明显，大、靠边；常染色质多，异染色质少；含有大量的线粒体及少量粗面内质网及核糖体。电镜结果显示细胞代谢旺盛，增殖活性高，处于未分化状态。结论：外胚间充质中存在表达神经嵴前体细胞标志LNGFR的细胞，而且这些细胞在形态上也明显处于未分化状态，说明在迁移后的神经嵴细胞中仍然含有未分化的多能前体细胞。     

白血病抑制因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖和分化的影响

目的：探讨白血病抑制因子LIF对小鼠下颌突外胚间充质细胞增殖和分化的影响。方法：用含10^6u／L LIF的DMEM／F12培养小鼠下颌突外胚间充质细胞，MTT法、Brdu检测、流式细胞仪分析进行增殖及生长曲线测定；免疫组化鉴定分化状况。结果：含LIF的培养液使细胞的增殖活性增加，细胞处于未分化状况。结论：10^6u／L的LIF对细胞增殖起促进作用，并能有效抑制分化。     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚问充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨人胚胎面突外胚间允质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。方法：采用体外细胞三维立体培养的方法，在转化生长因子B1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下，通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法，探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用。结果：人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好。培养4d，在TGFβ1 DNCP组中细胞出现核极化，有很长的突起，细胞平行排列。诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构。抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应。碱性磷酸酶活性增强。细胞在矿化液中能形成矿化结节。RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSFP)。结论：三维立体培养下，人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFB1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞。本结果将外胚间充质干细胞作为前体，诱导分化出成牙本质样细胞，为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据。     

维甲酸处理未分化间充质细胞后细胞增殖与凋亡的变化

目的：研究维甲酸处理未分化外胚间充质细胞后，细胞增殖和细胞凋亡的变化，探讨细胞增殖、凋亡与维甲酸之间的关系。方法：用５μｍｏｌ／Ｌ维甲酸处理未分化外胚间充质细胞，绘制维甲酸处理前后细胞的生长曲线，并用ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡数量的变化。结果：维甲酸处理未分化外胚间充质细胞后，细胞增殖受到抑制，细胞凋亡数量显著增加。结论：维甲酸可明显抑制未分化外胚间充质细胞的增殖，这种抑制作用可能是由于启动了细胞凋亡而引发的     

甲状旁腺激素对人牙乳头间充质细胞DNA合成细胞周期和 …

目的；观察和分析体外培养的人牙乳头间充质细胞经甲状旁腺激素作用后，ＤＮＡ合成，细胞周期和超微结构的变化情况，探讨ＰＴＨ对人牙乳头间充质细胞生长和分化的生物学特性的影响。方法：流式细胞仪分析，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验和透射电镜观察。结果：ＰＴＨ不影响体外培养的人牙乳头间充质细胞ＤＮＡ合成和细胞增殖；ＰＴＨ能促进人牙乳头间充质细胞向分化成熟，功能活跃的方向发展，且有浓度依赖性。     

氯通道阻断剂NPPB对鸡喙外胚间充质细胞增殖分化影响的研究

目的 氯离子通道阻断剂NPPB对鸡喙外胚间充质细胞(chicken mandibular mesenchymal cells,CMMC)增殖及分化能力的影响。方法 应用MTT、实时定量PCR的方法,观察NPPB阻断氯离子通道后,鸡喙外胚间充质细胞在AA-BGP诱导成骨过程中,细胞增殖及Sox9mRNA、Runx2mRNA及Col10mRNA的表达的变化。结果 在AA-BGP诱导组及无AA-BGP诱导组,NPPB均抑制了CMMC的增殖(P<0.05)。在AA-BGP诱导组及无AA-BGP诱导组,NPPB下调Col10mRNA及Runx2mRNA的表达水平均有显著性差异(P<0.05),Sox9mRNA的表达水平没有显著改变。结论 阻断氯离子通道可抑制鸡喙外胚间充质细胞增殖,并影响细胞向肥大化的软骨细胞分化,可能通过调节Runx2水平影响分化。     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的: 探讨人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程.方法:采用体外细胞三维立体培养的方法在转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用.结果:人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好.培养4 d在TGFβ1+DNCP组中细胞出现核极化有很长的突起细胞平行排列.诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构.抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应.碱性磷酸酶活性增强.细胞在矿化液中能形成矿化结节.RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP).结论:三维立体培养下人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFβ1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞.本结果将外胚间充质干细胞作为前体诱导分化出成牙本质样细胞为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据.     

甲状旁腺激素对人牙乳头间充质细胞DNA合成、细胞周期和超微结构的影响

目的：观察和分析体外培养的人牙乳头间充质细胞经甲状旁腺激素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＰＴＨ） 作用后,ＤＮＡ合成、细胞周期和超微结构的变化情况,探讨ＰＴＨ 对人牙乳头间充质细胞生长和分化的生物学特性的影响。方法：流式细胞仪（ＦＣＭ） 分析、３Ｈ－ ＴｄＲ 掺入试验和透射电镜（ＴＥＭ） 观察。结果：ＰＴＨ 不影响体外培养的人牙乳头间充质细胞ＤＮＡ合成和细胞增殖;ＰＴＨ 能促进人牙乳头间充质细胞向分化成熟、功能活跃的方向发展,且有浓度依赖性。结论：ＰＴＨ 可能不影响体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖,而仅促进细胞的分化和功能活跃。     

BALB／c胎鼠面突未分化外胚间充质细胞的外体培养

建立ＢＡＬＢ／ｃ近交系胎鼠面突的未分化外胚间充质细胞的体外培养模型。方法：处死妊娠１２ｄ的孕鼠，取胎鼠面突中的外胚间充质细胞，采用组织块原代培养法进行细胞培养，并进行生长曲线的测定和免疫组化的来源鉴定。     

MTHFR基因沉默对小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖和凋亡的影响

目的:应用RNA干扰技术,从细胞水平研究5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因突变导致腭裂发生的机制.方法:构建MTHFR基因沉默载体,对13天胚胎的腭突间充质细胞进行RNA干扰实验.MTT法检测MTHFR基因沉默后细胞增殖的改变.流式细胞仪检测MTHFR基因沉默后对胚胎腭突间充质细胞凋亡的影响.实验结果采用SPSS11.0软件包进行分析,细胞增殖的比较用重复测量方差分析,凋亡率检测应用U检验.结果:MTHFR基因表达下调后,在无叶酸存在的情况下,腭突间充质细胞的增殖速度明显减慢,与对照组相比有显著性差异(P<0.001);实验组的凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论:在外源性叶酸补充不足的情况下,腭突间充质细胞增殖减弱并发生凋亡,这可能是MTHFR基因突变与先天性唇腭裂发生相关的病理学基础.     

PCNA及cyclin D1蛋白在羊下颌骨牵张成骨过程中的检测

目的 观察在下颌骨牵张成骨过程中牵引区内细胞在增殖及细胞周期方面的变化特点。方法 用自制的牙支抗下颌骨牵引装置,对山羊下颌骨进行牵引,0.25mm/12h,共牵引16天,分别于开始牵引的8、16、32、48天取材,标本进行常规增殖细胞核抗原（PCNA）及 cyclin D1免疫组化染色,并对阳性细胞进行计数。结果 PCNA及cyclin D1阳性细胞主要见于骨膜下疏松结缔组织内的间充质细胞和成纤维样细胞,以及牵引区内的胶原纤维周围的间充质细胞和成纤维样细胞,随着时间延长,阳性细胞数逐渐减少。结论 牵张成骨过程中细胞的增殖分化具有一定的时间分布特点,cyclin D1可能在此过程中的细胞增殖周期中起一定的调节作用。?     

IGF-1促进大鼠上皮根鞘HERS细胞成牙骨质分化的研究

目的:研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对赫特维希上皮根鞘(HERS)细胞增殖和分化的影响。方法:取出生后8 d的SD大鼠,分离纯化HERS上皮细胞,分为对照组和IGF-1干预组;CCK8检测细胞生长曲线;免疫荧光染色检测上皮细胞标记物细胞角蛋白14(CK14)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和间充质细胞标记物波形蛋白(Vimentin)的表达;实时定量RTPCR检测上皮细胞标记物E-cadherin,间充质细胞标记物Vimentin、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Col1),成牙骨质分化相关基因骨涎蛋白(Bsp)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(Alp)等基因表达水平;茜素红染色检测细胞矿化情况。结果:HERS细胞能够同时表达上皮及间充质细胞标记物;IGF-1干预后,免疫荧光染色及实时定量RT-PCR结果显示HERS细胞上皮细胞标记物表达显著下降,间充质细胞标记物表达显著上调,并且明显促进细胞增殖(P<0.05)。矿化诱导环境下,IGF-1干预组7、14 d均显示成牙骨质分化相关基因表达显著上调,促进矿化结节形成(P<0.05)。结论:IGF-1诱导促进HERS细胞增殖、上皮-间充质转化和成牙骨质细胞向分化。     

腭发育不同时期维甲酸对腭突细胞增殖和凋亡的影响

目的研究维甲酸对小鼠腭突融合期细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法在SPF级C57BL/6J近交系母鼠妊娠10 d和12 d给予维甲酸（RA）建立小鼠腭裂模型,利用BrdU免疫组化方法和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测胚胎15 d（即腭突融合期）小鼠腭突中细胞增殖及细胞凋亡的表达和分布。结果10 d给药组腭胚间充质细胞及腭中嵴上皮细胞中BrdU阳性细胞率和TUNEL阳性细胞率均低于对照组,12 d给药组和对照组BrdU阳性细胞率和TUNEL阳性细胞差异无统计学意义。结论维甲酸作用于腭发育的不同时期对腭突细胞增殖及凋亡水平有不同的影响,作用于腭突发生前期可引起腭间充质细胞增殖抑制、凋亡过度而发生腭裂,作用于腭突快速生长期可能影响腭中嵴上皮细胞的上皮间充质转化和迁移等其他转归形式。     

几种胚胎干细胞标志在牙周膜细胞中的表达及意义

目的检测部分胚胎干细胞标志在牙周膜细胞中的表达。方法通过酶解组织块法分离牙周膜细胞,利用多向分化实验和流式细胞术分析表面标志对获得细胞进行鉴定。利用免疫荧光法和RT-PCR法检测牙周膜细胞中Oct4、Nanog、Sox2、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81这些胚胎干细胞标志的表达。结果牙周膜细胞为成纤维细胞样,可分化为成骨细胞和成软骨细胞,可均一表达间充质细胞标志CD44、CD90、CD105,异质性表达间充质标志CD146、Stro-1。细胞免疫荧光实验显示牙周膜细胞表达部分胚胎干细胞标志:Oct4、Nanog、SSEA-4、TRA-1-60阳性,Sox2、TRA-1-81阴性。半定量RTPCR结果显示P3和P8代牙周膜细胞表达Oct4和Nanog,表达量差异不大,Sox2则为阴性。结论牙周膜细胞除了表达常用间充质干细胞标志外,也可表达部分胚胎干细胞标志,这对牙周膜细胞的鉴定和进一步分选纯化有一定应用价值。     

尼古丁对牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨尼古丁对牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶的影响。方法：彩和酶动法用不同浓度尼古丁硫酸盐在不同时间内作用于牙乳头间充质细胞，观察细胞A值的改变。结果：尼古丁硫酸盐抑制了碱性磷缓酶活性，并且与浓度和时间呈正相关关系。结论：尼古丁可抑制牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶的活性，可能对牙乳头间充 细胞伯分化和矿化产影响进一步影响牙轮发育。     

骨改建中成骨细胞的调节机理

骨的细胞成分主要由成骨细胞（oeteobalast,OB）、骨细胞（oetocte）和破骨细胞（oeteoclast,OC）构成。在骨改建过程中，需要间充质细胞在一定的条件征分化成骨细胞，使新骨生成。正常的骨改建和部分骨病理性改变与成骨细胞的分化及功能有重要的关系，本文就成骨细胞细胞增殖、分化和活性调控的机制综述如下。     

Forskolin体外诱导Balb/c小鼠下颌外胚间充质细胞向神经胶质细胞分化

目的：探讨forskolin诱导小鼠下颌外胚间充质细胞向神经胶质细胞的分化过程。方法：取妊娠12.5d胎鼠第3代下颌外胚间充质细胞，分别在含5、25、50μmol/L forskolinr DMEM/F12培养基中培养。相差镜下观察细胞的形态变化，免疫组化鉴定细胞性质。结果：培养2d，细胞形态及排列发生明显变化，呈两突的长梭形；胸体中有空泡样改变，随时间的增加而明显。变化以25μmol/L组较明显，免疫组化鉴定：抗神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及S－100染色阳性；NSE及NF染色阴性。结论：forskolin可诱导外胚间充质细胞向神经胶质细胞分化。