SOCS1介导CT-1对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的保护作用

目的通过使用细胞因子信号抑制物1（SOCS1））反义寡核苷酸（ASODN）干预,从细胞和分子水平阐明SOCS1如何介导心肌营养素-1（CT-1）对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法用改良的方法培养出生1～3d的乳鼠心肌细胞,分为对照组：DMEM液培养6 h;缺氧复氧组;CT-1组：缺氧复氧＋CT-1;ASODN组1：缺氧复氧＋CT-1＋ASODN（终浓度为20μmol/L）;ASODN组2;SODN组：缺氧复氧＋CT-1＋SODN;ScODN组：缺氧复氧＋CT-1＋ScODN。测定心肌细胞的存活率、线粒体膜电位（Δψm）、细胞活性氧（ROS）、细胞凋亡率及SOCS1水平。结果缺氧复氧组较对照组心肌细胞凋亡率增加、ROS水平升高、心肌细胞存活率降低、Δψm下降,P均〈0.05;而CT-1组较缺氧复氧组心肌细胞存活率上升、凋亡率减少、Δψm增加。SOCS1 ASODN干预后,心肌细胞凋亡率和ROS水平明显升高,Δψm水平下降。缺氧复氧组SOCS1 mRNA和蛋白较对照组有所增加;CT-1组SOCS1 mRNA和蛋白均较缺氧复氧组升高,SOCS1 ASODN干预后下降。结论 SOCS1介导了CT-1减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤。     

ERK1/2信号通路介导心肌营养素1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的探讨心肌营养素1对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及其信号通路。方法用改良的方法培养出生1～3天的乳鼠心肌细胞,分为五组:对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧+心肌营养素1组、缺氧复氧+心肌营养素1+PD98059(ERK阻断剂)组及缺氧复氧+心肌营养素1+DMSO组。缺氧3 h,复氧3 h。MTS法测定心肌细胞存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位,二氯荧光磺双乙酸盐(DCFH-CA)检测细胞活性氧水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR检测心肌细胞促凋亡基因Bad mRNA表达,Western blot检测ERK1/2蛋白水平。结果缺氧复氧后心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平较对照组明显增加,分别是19.4%±2.3%比2.2%±0.2%及14.28±1.42比3.54±0.46(P<0.05),而心肌细胞存活率显著降低,心肌细胞线粒体膜电位下降。而心肌营养素1处理后,心肌细胞存活率明显高于缺氧复氧组,心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平显著减少,心肌细胞线粒体膜电位更高,ERK1/2磷酸化蛋白水平增加,Bad mRNA表达明显下调。心肌营养素1的这种作用能被ERK阻断剂PD9...     

心肌营养素1对心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及信号机制的研究

目的探讨心肌营养素1(CT-1)对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及信号通路所起的作用。方法用改良的方法培养出生1～3天的SD乳鼠心肌细胞,分为对照组、缺氧复氧组、阻断剂组、营养素组和助溶剂组。后4组进行缺氧3 h,加不同药物处理后,复氧3 h,MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物检测心肌细胞线粒体膜电位,二氯荧光黄双乙酸盐检测细胞内活性氧(ROS),用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。采用RT-PCR法检测心肌细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达,Western blot检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)蛋白水平。结果与对照组比较,缺氧复氧组心肌细胞凋亡率及ROS明显增加,而心肌细胞存活率明显降低,线粒体膜电位下降,eNOS mRNA表达明显下调(P0.05);与缺氧复氧组比较,营养素组心肌细胞存活率明显升高,心肌细胞凋亡率及细胞内ROS明显减少,线粒体膜电位水平更高,磷酸化PI3K蛋白水平增加,eNOS mRNA表达上调。与营养素组比较,阻断剂组抑制上述指标表达。结论 CT-1能减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤,其作用部分依赖PI3K/蛋白激酶B/eNOS信号通路的激活。     

内皮素-1对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响

目的探讨在缺氧/复氧过程中不同时期给予内皮素-1（ET-1）对缺氧/复氧所致心肌损伤与凋亡的影响。方法乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Hoechst 33258染色计算凋亡率,试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性。结果ET-1预处理组（EP）细胞生存率较缺氧复氧组（HR）提高,凋亡率下降,LDH活性下降;ET-1缺氧即刻处理组（EH）细胞生存率较HR组降低,凋亡率升高,LDH释放量增加;ET-1复氧处理组（ER）的细胞生存率、凋亡率及LDH活性与HR组均无统计学差异。结论ET-1预处理有心肌细胞保护作用,ET-1缺氧时有促进心肌细胞损伤和凋亡的作用。     

二甲双胍对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的　探讨二甲双胍对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响及其可能机制。方法　体外培养人脐静脉内皮细胞,建立缺氧/复氧模型,随机分为5组：正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+不同浓度（0.1、0.5、1.0　mmol/L）二甲双胍干预组。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,实时定量聚合酶链反应检测各组核因子κB/P65　mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测各组上清液中细胞间黏附分子1和肿瘤坏死因子α的浓度。结果　与对照组相比,缺氧/复氧组细胞凋亡增加（P<0.05）,核因子κB/P65　mRNA增加,同时细胞间黏附分子1和肿瘤坏死因子α的浓度均升高（P<0.05）;与缺氧/复氧组比较,二甲双胍预处理能减少缺氧/复氧所致人脐静脉细胞凋亡（P<0.05）,减少核因子κB/P65的mRNA的表达,同时细胞间黏附分子1和肿瘤坏死因子α的浓度均降低（P<0.05）,其中0.5　mmol/L浓度组保护作用最佳。结论　二甲双胍对缺氧/复氧损伤引起的人脐静脉内皮细胞损伤有保护作用,其机制可能与下调核因子κB/P65表达及抑制了细胞间黏附分子1和肿瘤坏死因子α的释放有关。     

HMGB1 siRNA对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响及机制

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)siRNA对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响及机制。方法将体外培养的人胃黏膜上皮GES-1细胞随机分为对照组(正常培养)、A/R组(缺氧复氧培养)、A/R+si NC组(转染Control siRNA后,缺氧复氧培养)和A/R+si HMGB1组(转染HMGB1 siRNA后,缺氧复氧培养),MTT法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Western blotting检测细胞中HMGB1、NF-κB p65和IκB-α、Bcl-2和Bax蛋白表达,ELISA法检测LDH含量。结果 A/R处理能够引起GES-1细胞存活率降低,细胞凋亡率和LDH含量升高,Bcl-2和IκB-α蛋白表达下降,HMGB1、Bax和NF-κB p65蛋白表达上调;HMGB1siRNA则能够抑制A/R的作用,升高GES-1细胞存活率,降低细胞凋亡率和LDH含量,上调Bcl-2和IκB-α蛋白表达,下调HMGB1、Bax和NF-κB p65蛋白表达。结论缺氧复氧可引起胃黏膜上皮GES-1细胞中HMGB1表达升高,下调HMGB1表达可明显抑制缺氧复氧诱导的细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

脑神康胶囊对培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的 观察益气补肾中药脑神康胶囊对体外培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,随机分为对照组,损伤组,脑神康胶囊高、中、低浓度组.对照组正常培养,损伤组及脑神康胶囊各浓度组建立缺氧复氧损伤模型,其中脑神康胶囊各浓度组于复氧时换以不同浓度(5%、10%、20%)含药血清的培养液,检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力及丙二醛(MDA)含量,测定细胞存活率及凋亡率,RT-PCR法检测bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达及两者比值.结果 与对照组比较,损伤组SOD活性及细胞存活率均明显下降(P＜0.01),MDA含量、LDH活力及细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达升高,bcl-2/bax降低(均P＜0.01);脑神康胶囊各浓度组均较损伤组SOD活性及细胞存活率均升高(P＜0.01),MDA含量及细胞凋亡率均降低(P＜0.01),LDH活力及bax mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),bcl-2 mRNA表达升高,bcl-2/bax增加(均P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性.结论 脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其提高神经元抗氧化能力、调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关.     

二甲双胍对缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的通过建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,观察二甲双胍对乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法选用原代培养72 h的乳鼠心肌细胞,随机分为4组:空白对照组、二甲双胍组、缺氧/复氧组、二甲双胍+缺氧/复氧组。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,荧光定量PCR检测各组细胞caspase-3 mRNA表达,酶联免疫法检测各组细胞胞浆内细胞色素C(CytC)的含量。结果与空白对照组相比,缺氧/复氧组细胞凋亡、caspase-3 mRNA表达、胞浆CytC的含量均明显增高(P0.05)。与缺氧/复氧组相比,二甲双胍+缺氧/复氧组细胞凋亡率、caspase-3 mRNA表达、CytC含量均明显降低(P0.05)。结论二甲双胍可以抑制caspase-3表达,进而减轻缺氧/复氧所致的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制mPTP的开放,减少线粒体内CytC的释放有关。     

microRNA-1对心肌缺氧复氧中细胞凋亡的影响

目的明确心肌缺氧复氧(H/R)时miR-1的表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法建立乳大鼠心肌细胞H/R模型,TUNEL检测细胞凋亡、Western-Blot检测凋亡蛋白表达和实时荧光定量PCR检测miR-1表达。重组miR-1慢病毒感染乳大鼠心肌细胞,Western-Blot检测各组相关凋亡蛋白的表达。重组miR-1慢病毒感染乳大鼠心肌细胞后H/R处理,通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,软件分析和计算心肌细胞凋亡率。结果心肌细胞H/R后,细胞凋亡率明显增加,同时促凋亡蛋白(Bax和Caspase-3)表达水平增加和抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降。在成功构建心肌细胞缺氧复氧细胞模型后,检测到心肌细胞miR-1表达水平下降。与对照组相比,感染LV-rno-miR-1组促凋亡蛋白(Bax和Caspase-3)明显增加和抗凋亡蛋白Bcl-2降低,而感染LV-rno-miR-1 sponge凋亡蛋白的结果相反。相对于感染LV-rnomiR-1组和缺氧复氧组,感染LV-rno-miR-1病毒后缺氧4小时复氧12小时,细胞凋亡率进一步增加。结论 miR-1具有促进细胞凋亡的作用。miR-1表达下降可能是心肌细胞缺氧复氧时维持稳态的一种自我调节机制。     

GLP-1类似物利拉鲁肽对高糖诱导胰岛细胞凋亡及HSP72表达、ERK1/2通路活性的影响

目的 探讨胰高血糖素样多肽(GLP)-1类似物利拉鲁肽对高糖诱导胰岛细胞凋亡及热休克蛋白(HSP)72表达、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2通路的影响。方法 体外培养大鼠胰岛INS-1细胞，分为对照组、高糖组、利拉鲁肽低剂量组(1 nmol/L)、利拉鲁肽中剂量组(3 nmol/L)和利拉鲁肽高剂量组(5 nmol/L)。检测各组INS-1细胞凋亡、HSP72、ERK1、ERK2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达和HSP72、p-ERK1/2、ERK1/2、Bax蛋白表达情况。结果 与对照组相比，高糖组INS-1细胞凋亡率、HSP72、ERK1/2、Bax mRNA及HSP72、p-ERK1/2/ERK1/2、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与高糖组相比，利拉鲁肽低、中、高剂量组INS-1细胞凋亡率、HSP72、ERK1/2、Bax mRNA及HSP72、p-ERK1/2/ERK1/2、Bax蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);随着利拉鲁肽使用剂量升高，INS-1细胞凋亡率、HSP72、ERK1/2、Bax mRNA及HSP72、p-ERK1/2...     

氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞紧密连结蛋白ZO-1表达的影响

目的 探讨氯吡格雷（Clopidogrel）对人胃黏膜上皮细胞（GES-1）的损伤机制.方法 建立GES-1单层细胞模型,将细胞分为阴性对照组、U0126干预组、氯吡格雷干预组、U0126预处理后氯吡格雷干预组（联合组）,采用MTT比色法和流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;免疫细胞化学检测各组p-ERK1/2的表达情况;采用Western blotting检测各细胞组p-ERK1/2和紧密连接蛋白ZO-1的表达量.结果 与阴性对照组比较,U0126干预组、氯吡格雷干预组、U0126预处理后氯吡格雷干预组的细胞增殖明显受到抑制（P＜0.05）;Western blotting结果显示：与阴性对照组比较,后3组的p-ERK1/2表达下降,与免疫细胞化学的趋势一致;ZO-1表达趋势亦与p-ERK1/2表达一致.结论 在GES-1细胞模型中,氯吡格雷可能通过抑制p-ERK1/2的表达来降低ZO-1的表达,从而损伤GES-1细胞.     

ERK通路在缺血后处理保护缺血再灌注大鼠心肌间质中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）通路在缺血后处理减轻大鼠缺血／再灌注心肌间质损伤中的作用。方法32只健康雄性SD大鼠随机分为4组,假手术组（SC组）、缺血再灌注组（1／R组）、缺血后处理组（IPTC组）、ERK1／2抑制剂PD98059组（PD组）。记求各组在室血流动力学变化,观察心肌胶原含量,测定血浆中肌酸激酶（CK）和乳酸脱氧酶（LDH）浓度。以Western blot法测定心肌组织中ERK1／2、p-ERK1／2和心肌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白表达水平,以RT—PCR法从转录水平检测MMP-2的表达水平。结果与I／R组相比,IPTC组心肌p-ERK1／2水平、心肌胶原含量和左室舒缩功能明显升高,而心肌MMP-2蛋白表达及mRNA水平、血浆CK、LDH活力明显降低;使用ERK1／2抑制剂PD98059后,心肌p-ERK1／2表达水平下降,同时心肌MMP－2蛋白及表达、血浆CK、LDH活力明显增高,心肌胶原含量、左室舒缩功能明显降低。结论缺血后处理通过激活ERK1／2信号通路、改变MMP－2活性发挥保护缺血再灌注心肌间质的作用。     

转化生长因子β1对不同阶段支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞外信号调节激酶通道的影响

目的本文旨在探讨转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）对不同阶段（急性和慢性）支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells,ASMC）上细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）1／2 mRNA、磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）表达水平的影响。方法建立2周、6周哮喘大鼠模型,用TGF-β1和ERK的特异性抑制剂PD98059干预哮喘大鼠ASMC的培养。用RT-PCR检测不同阶段哮喘大鼠模型ASMC上ERK 1／2mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测P—ERK1／2蛋白的表达及定位。结果与正常对照组ASMC比较,2周、6周哮喘组ERKmRNA、ERK1／2蛋白、p-ERK 1／2蛋白的表达量以及ERK活化率显著增高。经PD98059干预之后,2周、6周哮喘组ASMC的ERKmRNA、p-ERK 1／2蛋白的表达量以及ERK活化率均显著降低。经TGF-β1,干预后,2周、6周哮喘组ASMC的ERK mRNA、p-ERK 1／2蛋白的表达量较各自哮喘组显著增高,而这一作用可以被PD98059部分抑制。但以上结果2周和6周哮喘模型组之间差异无统计学意义。结论TGF-β1可上调不同阶段哮喘大鼠ASMC上ERK1／2mRNA及p-ERK1／2表达。在哮喘的不同阶段,TGF-β1可能持续通过促进ERK信号转导通道的活性对ASMC的增殖进行调控。     

三磷酸腺苷后处理对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的观察ATP后处理对再灌注损伤挽救激酶信号通路中的蛋白激酶B(Akt)及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响,探讨ATP后处理的心血管保护效应及可能机制。方法选择48只健康新西兰白兔,随机分为缺血再灌注组(再灌注组)、ATP后处理组(后处理组)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin+ATP后处理组(Wortmannin+ATP组)、ERK1/2抑制剂PD98059+ATP后处理组(PD98059+ATP组),每组12只。建立兔急性心肌缺血再灌注模型。实验终点检测各组心肌梗死面积、细胞凋亡指数,Western blot法检测心肌p Akt,p ERK1/2蛋白表达。结果后处理组心肌梗死面积、细胞凋亡指数明显低于再灌注组(P<0.01)。Western blot检测显示,后处理组p-Akt、p-ERK1/2表达水平明显高于再灌注组(P<0.05)。结论 ATP后处理可以减轻兔缺血再灌注心肌的梗死面积,降低细胞凋亡指数,同时上调p Akt和p-ERK1/2的表达,提示PI3K/Akt及ERK1/2信号通路参与了ATP后处理对兔缺血再灌注心肌的保护作用。     

冬凌草甲素对脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究冬凌草甲素（oridonin）对高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用机制.方法 体外培养HUVECs,噻唑蓝法（MTT）确定oridonin作用的最佳浓度;将细胞分为空白对照组、高糖高脂＋oridonin预处理组（以下简称为oridonin预处理组,oridonin预处理细胞24 h）、高糖高脂组（高糖高脂的浓度为33.3 mmol/L葡萄糖＋500 μmol/L棕榈酸,处理48 h）,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察各组细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子仅（TNF-α）、白介素6（IL-6）的浓度,以观察细胞的炎症情况;实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）分析HUVECs内TAp63、沉默信息调节因子1（Sirt1）mRNA的表达水平;Western blotting分析TAp63、Sirt1及凋亡相关基因磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）的蛋白表达水平.两组间比较采用￡检验,多组间采用单因素方差分析.结果 Oridonin作用于HUVECs细胞24 h的最佳浓度为5 μmol/L.高糖高脂组HUVECs细胞内TAp63（mRNA及蛋白）、Sirt1 （mRNA及蛋白）、Bcl-2蛋白水平明显低于空白对照组（t=-22.50、-6.02、-16.22、-6.72、-7.71,均P＜0.05）,HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α、IL-6浓度明显高于空白对照组（t=14.34、12.59、17.37、17.90,均P＜0.05）.与高糖高脂组相比,oridonin预处理组HUVECs内TAp63 mRNA和蛋白、Sirt1mRNA和蛋白、Bcl-2蛋白表达明显升高（t=5.85、5.06、4.55、3.04、5.81,均P＜0.05）,HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α及IL-6的浓度明显下降（t=-7.11、-7.81、-10.51、-10.36,均P＜0.05）.结论 冬凌草甲素能够抑制高糖高脂诱导的HUVECs的凋亡,可能与其抑制高糖高脂诱导的炎症反应和（或）增加TAp63、Sirt1、Bcl-2的表达,且降低p-ERK的表达有关.     

鼻咽癌组织中 ERK1／2、p-ERK1／2和 MMP-9蛋白的表达变化及其相关性

目的：观察细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在鼻咽癌（NPC）组织中的表达及相关性,并探讨其意义。方法采用免疫组织化学染色SP法检测75份NPC组织（ NPC组）和27份鼻咽黏膜慢性炎组织（炎性组）中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白的表达,分析三者在NPC组织中表达的相关性。结果 NPC组ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白阳性表达率均显著高于炎性组（P均＜0．01）,χ2值依次为19．8、17．1、21．3;NPC组织中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白三者间的表达呈正相关（P均＜0．01）,其中ERK1/2与p-ERK1/2、MMP-9蛋白的r值分别为0．58、0．34,p-ERK1/2、MMP-9蛋白的r值为0．34。结论 ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白在NPC组织中呈高表达且三者间呈正相关,p-ERK1/2可能通过调节MMP-9表达参与NPC侵袭、转移。     

5-aza—dC和丁酸钠对人胃癌细胞株MKN28细胞周期、凋亡以及抑癌基因表达的影响

背景：表遗传修饰的主要方式DNA甲基化和组蛋白乙酰化是胃癌发生机制研究中的热点内容。目的：探讨表遗传学调控对人胃癌细胞株MKN28细胞周期、凋广以及抑癌基因Runx3、p21^WAF1表达的影响。方法：培养人胃癌细胞株MKN28,并分为5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza—dC）组、丁酸钠组、5-aza—dC＋丁酸钠组和对照组。以Annexin V—FITC／PI双染法检测细胞周期和凋亡,以逆转录聚合艏链反应（RT—PCR）检测Runx3、p21^WAF1 mRNA表达,以甲基化特异性PCR（MSP）检测Runx3基因启动于区甲基化状态。结果：与对照组相比,5-aza—dC对细胞周期无明显影响,丁酸钠可使细胞周期阻滞于G0／G1期（P〈0．05）;5-aza—dC组和丁酸钠组细胞凋亡率均显著增高（8．3％±1．3％、20．8％±2．4％对2．0％±0．5％,P〈0．05）5-aza—dC可诱导Runx3mRNA重新表达（P〈0．05）,但对p21^WAF1 mRNA表达无影响。丁酸钠可增强p21^WAF1 mRNA表达（P〈0．05）,但不能诱导Runx3 mRNA表达。联合5-aza—dC和丁酸钠可显著绣导细胞凋亡和增强抑癌基因Runx3、p21^WAF1Ⅲ mRNA表达（P〈0．05）．5-azgt—dC十预后,Runx3基因启动子区呈去甲基化状态：结论：去甲基化制剂5-aza-dC或组生白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠通过重新表达Runx3或增强p21^WAF1表达而诱导胃癌MKN28细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用。     

XAF1增强TRAIL诱导人结肠癌细胞株HCT116凋亡的实验研究

背景:肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体(TRAIL)可特异性诱导肿瘤细胞凋亡。X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是新型抑癌基因,在肿瘤细胞中呈低表达。目的:研究XAF1联合TRAIL诱导人结肠癌细胞株HCT116凋亡的作用。方法:构建重组腺病毒AdS/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null,分别以相同感染复数(MOI)感染人结肠癌细胞株HCT116,并设立空白对照组,感染4 h后加入重组人TRAIL(rhTRAIL)。以RT-PCR法检测XAF1 mRNA表达;以蛋白质印迹法检测XAF1、PARP、caspase-3、-8、-9蛋白表达;以Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;以MTT法检测细胞增殖抑制率。结果:Ad5/F35-XAF1组和TRAIL+Ad5/F35-XAF1组XAF1 mRNA和蛋白表达显著高于其余各组。TRAIL+Ad5/F35-XAF1组PARP、caspase-3、-8、-9蛋白可见明显凋亡裂解带,其余各组未见明显裂解带。AdS/F35-XAF1组、TRAIL组、TRAIL+Ad5/F35-Null组、TRAIL+Ad5/F35-XAF1组细胞凋亡率较空白对照组和Ad5/F35-Null组显著增加(P<0.05),以TRAIL+Ad5/F35-XAF1组增加最为显著。TRAIL+Ad5/F35-XAF1组HCT116细胞增殖抑制率显著高于TRAIL组和TRAIL+Ad5/F35-Null组(P<0.05),并呈浓度和时间依赖性。结论:XAF1可增强TRAIL诱导的HCT116细胞凋亡和抑制增殖的作用。     

心肌营养素-1对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的:研究心肌营养素-1(CT-1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响。方法:利用AngⅡ刺激心肌细胞,导致细胞肥大,应用CT-1反义脱氧寡核苷酸进行干预。检测心肌细胞大小及3H-亮氨酸掺入率的变化;以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CT-1 mRNA及β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达,免疫组织化学法检测心肌细胞CT-1蛋白的表达。结果:经AngⅡ刺激后,在相差显微镜下可见心肌细胞面积变大,3H-亮氨酸掺入率、CT-1蛋白的表达增高;CT-1和β-MHC mRNA水平的表达增加。利用Fugene6可将CT-1反义脱氧寡核苷酸转染入心肌细胞。CT-1反义脱氧寡核苷酸组心肌细胞面积较肥大组明显减小[(81.257±3.995)mm2∶(127.214±5.693)mm2],3H-亮氨酸掺入量[(1653.33±17.91)cpm∶(1971.50±42.16)cpm]及CT-1蛋白[(3.16±0.17)%∶(3.51±0.29)%]明显减少;CT-1[(0.2137±0.0227)∶(0.4023±0.0160)]和β-MHC mRNA[(0.5032±0.0261)∶(0.773 4±0.0486)]表达亦显著减少(P0.05~0.01)。各指标Fugene 6组、错义组与肥大组无明显差异。结论:AngⅡ致心肌细胞肥大过程中伴有CT-1表达增加,应用CT-1反义脱氧寡核苷酸后可使之下降,说明CT-1参与了心肌细胞的肥大机制。