应用突变引物延伸扩增技术快速前产诊断β地中海贫血基？…

目的 探讨综合应用突变引物延伸扩增（ＭＯＥＡ）及巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术进行β地中海贫血产前诊断的可行性。方法 行钐一对外侧引的扩增１．５Ｋｂβ株收 用ＭＯＥＡ技术检测β地中海贫血点突变。结果 完成了６例β地中海贫血高危胎儿的产前基因诊断,其中双重杂合子１例,杂合子３例,正常胎儿２例;经分娩或流产后基因分析验证,结果与产前诊断完全一致。结论ＭＯＥＡ技术适合于已知点突变的基因诊断和产前诊断,具     

2 171例地中海贫血产前基因诊断回顾性分析

目的：对广东省妇女儿童医院产前诊断中心1 506例α地中海贫血和665例β地中海贫血产前基因诊断进行回顾性分析。方法：对α地中海贫血产前基因诊断采取裂隙聚合酶链反应（gap-PCR）以及PCR结合反向点杂交（RDB）方法,β地中海贫血产前基因诊断采取PCR结合RDB方法,若夫妇一方携带少见突变则加用DNA测序方法。结果：1 506例α地中海贫血产前基因诊断病例中共检测出262例水肿胎,72例血红蛋白H病。665例β地中海贫血产前基因诊断病例中共检测出174例重型β地中海贫血。结论：地中海贫血产前基因诊断有效减少了水肿胎和重型β地贫患儿的出生,对于优生优育、减少围生期并发症具有重要意义。     

双胎及三胎妊娠地中海贫血产前基因诊断研究

目的:探讨双胎妊娠和三胎妊娠地中海贫血的产前基因诊断情况。方法:对27例双胎妊娠和三胎妊娠患者进行绒毛膜穿刺或羊膜囊穿刺胎儿取样,采取裂隙聚合酶链反应以及聚合酶链反应结合反向点杂交方法进行产前基因诊断。结果:在进行α地中海贫血产前基因诊断的20例双胎妊娠及1例三胎妊娠中,共对43个胎儿进行取材,共检测出6例Bart's水肿胎,3例血红蛋白H病。在进行β地中海贫血产前基因诊断的6例双胎妊娠中,共对9个胎儿进行取材,共检测到3例中重型β地中海贫血。结论:地中海贫血的多胎妊娠孕妇产前基因诊断能较有效检出Bart's水肿胎和中重型β地中海贫血患儿,可预防重型地中海贫血患儿的出生。     

应用突变引物延伸扩增技术快速产前诊断β地中海贫血基因突变

目的 探讨综合应用突变引物延伸扩增(MOEA)及巢式聚合酶链反应(PCR)技术进行β地中海贫血产前诊断的可行性.方法 先用一对外侧引物扩增1.5 Kb β珠蛋白基因片段,再用MOEA技术检测β地中海贫血点突变.结果 完成了6例β地中海贫血高危胎儿的产前基因诊断,其中双重杂合子1例,杂合子3例,正常胎儿2例;经分娩或流产后基因分析验证,结果与产前诊断完全一致.结论 MOEA技术适合于已知点突变的基因诊断和产前诊断,具有快速、简便、安全、准确等优点,便于推广应用.     

海南地区地中海贫血产前基因诊断的临床研究

目的:研究检测α-地中海贫血及β-地中海贫血在产前基因诊断中的临床应用价值。方法:对孕妇夫妇携带地中海贫血的48例风险胎儿的羊水(或脐血)应用单管多重PCR体系和反向点杂交法,进行α-地中海贫血和β-地中海贫血基因诊断。结果:共检测出地中海贫血胎儿38例。其中α-地中海贫血14例,包括东南亚缺失型杂合子(--SEA/αα)2例,东南亚缺失型纯合子(--SEA/--SEA)8例,左缺失型杂合子(-α4.2/αα)1例,右缺失型杂合子(-α3.7/αα)2例,非缺失型点突变(ααT/αα)1例;β-地中海贫血24例,包括CD41-42杂合子16例,CD41-42纯合子2例,-28(A-G)杂合子3例,双重杂合子(IVS2nt654/CD41-42,-28(A-G)/CD71-72(+A),CD41-42/-α3.7)3例。其中10例重型地贫儿引产,1例重型地贫儿产后新生儿死亡,其余均足月分娩存活。所有病例经引产或正常分娩后留取脐带血,作地贫基因诊断,与产前诊断结果一致。结论:应用单管多重PCR体系及反向点杂交法能快速、准确进行α-和β-地中海贫血产前基因检测,这对于有效预防重型地中海贫血胎儿出生具有重大临床意义。     

反向点杂交法用于产前诊断β—地中海贫血60例分析

探讨反向点杂交法快速诊断β－地中海贫血的价值。方法：应用ＲＤＢ技术对５９个家系的６０例β－地中海贫血高风险胎儿进行产前诊断。结果：６０例被检胎儿中，１例基因未确定，在基因确定的５９例中，其中正常１５例；单一突变杂合子３４例；纯合子或双重杂合子１０例。     

深圳市孕妇地中海贫血产前筛查及产前诊断

目的：调查深圳市孕妇地中海贫血发病率、基因突变类型，对高风险胎儿进行产前诊断。方法：1998年1月至2002年12月采用二步法对产前检查的4136例孕妇进行地中海贫血筛查。结果：检出地中海贫血阳性病例297例，发病率7．18％，其中。地中海贫血阳性病例172例，发病率4．16％；β地中海贫血阳性病例125例，发病率3．02％。229例被确定了基因型。对19对夫妇均为地中海贫血携带者胎儿进行产前基因诊断，确定正常胎儿3例，α1地中海贫血杂合子4例，β地中海贫血杂合子8例，Bart‘S水肿胎儿2例，β地中海贫血双重杂合子2例。结论：通过产前筛查地中海贫血，确诊重症患儿及时终止妊娠，可有效地避免重症患儿的出生。     

子宫内膜异位症患者谷胱甘肽S-转移酶M1和T1基因缺失的检测

某些毒物代谢酶如谷胱甘肽Ｓ 转移酶Ｍ1(ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＭ1,ＧＳＴＭ1)、Ｎ 乙酰基转移酶 2 (Ｎ ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ,ＮＡＴ2 )的特定等位基因和基因型 ,可增加个体对子宫内膜异位症 (内异症 )发病的易患性[1] 。但在汉族人群中 ,ＧＳＴＭ1、ＧＳＴＴ1基因型与内异症发病易患性的关系尚未见报道。本研究应用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术对内异症患者ＧＳＴＭ1、ＧＳＴＴ1基因型进行检测 ,探讨其与发病易患性的关系 ,为内异症的预防和早期诊断提供临床依据。一、资料与方法1 研究对象 :选择…     

酶标寡核苷酸探针进行β地中海贫血的产前诊断

使用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记７对寡核苷酸探针对血液学常规筛查中检出的夫妇双方均为β地中海贫血的家系实行产前诊断，对２５例高风险胎儿的产前诊断显示，７例为纯合子或双重杂合子，１３例为单一突变的杂合子，说明用基因诊断技术筛查本病准确可靠，有利于优生优育，本文提示目前血液学筛查方法有一定的局限性。     

应用PCR-RDB技术对β地中海贫血进行快速产前基因诊断

目的　为了降低 β地中海贫血重症患儿的出生率 ,达到优生的目的。　方法　对 5 2 7对孕妇及其配偶进行血液学筛查 ,用 PCR- RDB法对夫妇双方均为 β地中海贫血携带者的孕期夫妇进行产前基因诊断 ,并取脐血验证结果。　结果　共筛出 β地中海贫血阳性患者 2 8例 ,轻型 β地中海贫血阳性率为 2 .6 6 %。男女阳性率为 1∶ 1.15 ,4例产前基因诊断中 ,确定正常胎儿 1例 ,重症胎儿 3例(纯合子 1例 ,双重杂合子 2例 ) ,重型 β地中海贫血胎儿于诊断后两周内终止妊娠。　结论　 PCR-RDB技术可有效减少 β地中海贫血重症患儿的出生 ,具有重要的优生学意义。     

α和β地中海贫血双重杂合子的基因诊断

目的 :探讨α和β地中海贫血双重杂合子的基因诊断。方法 :采用跨越缺失区断裂点的PCR方法检测α 地中海贫血 1基因。采用等位基因特异寡核苷酸探针 /反向点杂交 (ASO/RDB)技术检测 β 地中海贫血基因。 结果 :对地中海贫血筛查中发现的 3例疑为α和β地中海贫血双重杂合子进行基因诊断 ,均属于东南亚缺失型α 地中海贫血 1和β 地中海贫血双重杂合子 ,其中 1例为α 地中海贫血 1和β 2 8(A→G) ,1例为α 地中海贫血 1和βIVS Ⅱ 6 5 4 (C→T) ,1例为α 地中海贫血 1和HbE。结论 :α和 β地中海贫血双重杂合子的检出对临床准确进行地中海贫血的产前诊断有重要意义。     

引物延伸预扩增在β-地中海贫血产前基因诊断中的应用研究

目的探讨孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞(NRBC)经引物延伸预扩增(PEP)后在β-地中海贫血产前基因诊断中应用的可行性。方法以2004年7月至2005年6月在广西医科大学第一附属医院行产前诊断,夫妇均为轻型β-地中海贫血,孕龄9～34周的28例孕妇为研究对象。显微操作获取母血中NRBC,PEP对单个NRBC进行全基因组扩增,短串联重复序列(STR)鉴定所取细胞的来源。证实为胎儿细胞的PEP产物作为模板进行β-珠蛋白基因扩增,反向点杂交确定胎儿β-珠蛋白基因型。结果每例发现NRBC4～13个,约43.6%的NRBC来源于胎儿。单个NRBC经PEP后STR及β-珠蛋白基因扩增成功率分别为100.0%和90.8%。经反向点杂交可鉴定胎儿β-珠蛋白基因点突变类型,与传统的产前诊断结果相比较,符合率为85.7%,误诊率14.3%。结论母血中单个胎儿NRBC经PEP后可以进行产前基因诊断,不仅可以应用于β-地中海贫血,也可应用于其它遗传病,是一条可供尝试的无创性产前诊断途径。     

睾丸非损伤精子抽吸术结合卵母细胞单精子注射治疗无精症3例分析

1992年[1] 首次用卵胞浆内精子注射 (ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｓｐｅｒｍｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ,ＩＣＳＩ)技术于严重男性因素不育的体外受精 ,获得了较高的受精率和妊娠率 ,传统方法是通过附睾穿刺或睾丸活检获得精子再做ＩＣＳＩ治疗无精症 ,1996年Ｓｈｅｒｉｎｓ等[2 ] 非损伤性睾丸内抽吸精子 (ｎｏｎｓｕｒｇｉｃａｌａｓｐｉｒａｔｉｏｎ ,ＮＳＡ)方法 ,获得精子后行ＩＣＳＩ,此法简便 ,损伤小 ,可反复穿刺。我们应用ＮＳＡ结合ＩＣＳＩ治疗无精症 3例 ,报告如下。1　资料与方法1 1　临床资料　以 2 0 0 0年 4月至 2 0 0 0年 1…     

地中海贫血高风险胎儿的产前基因诊断

目的　探讨地中海贫血 (简称地贫 )高风险胎儿宫内基因诊断的价值。　方法　 12 8例地中海贫血高风险胎儿于妊娠中期抽取羊水 10～ 2 0 ml或脐血 1m l进行基因诊断。　结果　 12 8例被检胎儿中基因正常 32例 ,α地贫缺失杂合子 38例 ,纯合子 2 7例 ;β地贫单一突变杂合子 18例 ,纯合子 4例 ,双重杂合子 9例 ;β地贫基因突变类型及频率依次为 :CD41- 42 (47.5 % ) ,IVS- - 6 5 4(42 .5 % ) ,CD17(A- T) (7.5 % )及 - 2 8(A- G) (2 .5 % )。无一例发生严重母胎并发症 ,重型地贫胎儿 40例均在知情同意前提下及时终止妊娠。　结论　筛查地贫高风险胎儿并及时进行产前基因诊断安全、有效、准确。在地贫高发区域 ,应作为常规产科检测方法。     

被动吸烟致宫内生长受限胎鼠脑组织细胞凋亡相关基因的表达

孕鼠被动吸烟可致胎鼠宫内生长受限并影响其脑的发育[1] 。我们应用快速竞争性逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,检测被动吸烟致宫内生长受限胎鼠脑细胞凋亡相关基因ＢａｘｍＲＮＡ及ｂｃｌ 2ｍＲＮＡ的相对表达量 ,从而探讨细胞凋亡在宫内生长受限胎鼠发病中的作用。一、材料与方法1.宫内生长受限胎鼠动物模型的建立及标本的获取 :Ｓ Ｄ(ｓｐｒａｇｕｅ ｄａｗｌｅｙ)雌鼠 2 8只 ,自交配后第 2天分为对照组、低浓度 [烟雾中ＣＯ(Ｌ) /总烟雾 (Ｌ) =5～ 10ｐｐｍ ,1ｐｐｍ代表的体积之比为 1/百万 ]被动吸烟组、中浓度 [烟雾中ＣＯ(…     

应用多重巢式及荧光聚合酶链反应技术对β地中海贫血进行植入前遗传学诊断

目前，国外对β地中海贫血的植入前遗传学诊断，主要应用巢式PCR结合突变检测技术”。但由于β地中海贫血基因的高度异质性，我国β地中海贫血突变基因类型与国外报道的不同。本研究根据我国常见的β地中海贫血突变基因类型，应用多重巢式PCR及荧光PCR技术，于2003年对4例β地中海贫血患者进行了临床植入前遗传学诊断，获得1例临床妊娠。现将结果报道如下。     

69例αβ复合型地中海贫血的血液学和基因型研究

目的:分析69例αβ复合型地中海贫血患者基因型、血液学与临床表现的关系,探索和指导这类复杂基因型组合方式的临床诊断.方法:采用标准的血液学分析技术测量红细胞参数和血红蛋白组分.反向点杂交技术诊断β地中海贫血和α地中海贫血基因点突变,缺口聚合酶链反应技术检测α-地中海贫血缺失突变.结果:45例轻型β地中海贫血合并α地中海贫血(轻型复合型)患者的临床表现与β地中海贫血携带者无异;24例重型β地中海贫血合并α地中海贫血(重型复合型)则从重度贫血到轻度贫血均有,差异较大,但多数表型为中间型地中海贫血.69例患者中,β地中海贫血的突变基因类型共检出8种,α地中海贫血的突变基因类型共检出5种.结论:轻型复合型的临床表现以轻型β地中海贫血的表现为主,α地中海贫血被掩盖;重型复合型则多表现为中间型地中海贫血.这一结果提示我们进行地中海贫血的临床检测时,尤其对β地中海贫血携带者,建议常规同时进行α地中海贫血致病基因的筛查,防止误诊、漏诊发生,进而确保地中海贫血产前诊断的准确性.     

产前诊断泰国缺失型α地中海贫血1引起的胎儿巴氏水肿

地中海贫血(地贫)是由于珠蛋白基因缺失或突变导致珠蛋白链合成减少或缺乏,所致的一种遗传性溶血性贫血,是我国南方地区最常见、危害最大的遗传病,临床上主要分为α地贫和β地贫两种,以α地贫更为常见.目前,国内报道的α地贫产前基因诊断主要是针对常见的3种α地贫缺失型和非缺失型基因突变类型的胎儿产前基因诊断.本研究报道2例极为少见的泰国缺失型α地贫1和东南亚缺失型α地贫1双重杂合的产前诊断.     

多色探针荧光原位杂交技术用于染色体疾病的诊断

荧光原位杂交 (ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ,ＦＩＳＨ)技术是近几年来由细胞遗传学、分子生物学及免疫学技术相结合而产生的一种新技术 ,克服了使用单一细胞遗传学技术的局限性 ,故在产前诊断、基因定位、肿瘤细胞学、临床遗传病检测等领域中显示出重要应用价值[1,2 ] 。我们将多色探针ＦＩＳＨ用于染色体疾病的诊断 ,取得了良好效果 ,现报告如下。一、资料与方法1.标本来源 :1996年 3月至 1998年 3月 ,在我院行人工流产术者 5 5例 ,身体健康 ,于术前冲洗宫腔收集滋养细胞 ;分娩过畸形胎儿要求行产前…     

卵巢上皮性癌生长抑素受体2表达的研究

生长抑素 (ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｏｎ ,ＳＳＴ)是一种环状多肽类激素 ,具有强大的生物学活性 ,在多种内分泌和外分泌激素分泌过程中发挥重要作用。其生物学活性是通过靶细胞膜上的生长抑素受体 (ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＳＳＴＲ)介导的 ,其中以其亚型 2(ＳＳＴＲ2 )的作用最为重要[1 ,2 ] 。目前已经发现在多种肿瘤细胞中有ＳＳＴＲ2 的表达[3] ,体内外研究均发现生长抑素类似物(ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎａｎａｌｏｇｕｅ ,ＳＳＡ)可通过ＳＳＴＲ抑制肿瘤细胞增殖 ,并发生细胞凋亡。近年来 ,ＳＳＴ抗肿瘤细胞增殖效应…