哈蟆油对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响

目的 建立卵巢颗粒细胞的原代培养体系,探讨哈蟆油含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖及分泌的影响,并分析和选择哈蟆油含药血清对颗粒细胞的最佳作用浓度,为进一步体外实验奠定基础.方法 采用SD雌性大鼠,皮下注射孕马血清促性腺激素,剖取双侧卵巢,采用机械分离方法释放卵巢颗粒细胞,分离培养.将体积分数为15％,30％,60％,120％,240％(大鼠灌胃浓度4.5 g/kg)的含药血清5个终浓度分别加入培养体系中,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖情况及药物的最大无毒浓度(TD0),观察其对卵巢颗粒细胞生长的影响.采用电化学发光法测定培养基中雌二醇(E2)的含量,分析哈蟆油合药血清对颗粒细胞雌激素分泌的影响.运用流式细胞术检测活细胞及凋亡细胞所占的比率.结果 含药血清作用颗粒细胞后,呈现出不同程度的促增殖作用,含药血清最佳的作用浓度体积分数为15％ ～30％(大鼠灌胃哈蟆油剂量为4.5 g/kg)之间;哈蟆油含药血清可促进卵巢颗粒细胞分泌雌二醇,雌二醇含量分析显示雌二醇的分泌与细胞增殖情况存在正相关关系(Person r=0.406,P=0.01);流式细胞结果显示与空白含药血清比较,哈蟆油含药血清均能显著增加活细胞数目,抑制细胞无血清饥饿引发的凋亡(P值均小于0.01),起到细胞保护作用,其中体积分数为25％的含药血清作用效果更佳(P＜0.01).结论 哈蟆油含药血清对离体培养的卵巢颗粒细胞增殖具有显著的促进作用,并存在一个最佳作用浓度范围,其调节机体性激素生成作用与促进卵巢颗粒细胞生长效应相关.     

宁心红杞含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞超微结构及雌激素分泌的影响

目的:探讨宁心红杞含药血清对离体大鼠卵巢颗粒细胞超微结构及雌激素分泌的影响.方法:体外培养的卵巢颗粒细胞用氯化镉造模,加入宁心红杞舍药血清作用24h后,在电镜下观察颗粒细胞超微结构的变化,放射免疫法测定培养液中雌激素的浓度.结果:宁心红杞舍药血清可明显增加雌二醇(B)的分泌,能明显改善离体大鼠卵巢颗粒细胞超微结构,电镜下表现为分泌颗粒增多,滑面内质网增多等.结论:宁心红杞胶囊可通过增加雌二醇的分泌及超微结构的改变来改善卵巢功能,延缓卵巢衰老.     

宁心红杞含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

目的探讨宁心红杞含药血清对离体大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养的卵巢颗粒细胞中用氯化镉造模,加入宁心红杞含药血清共同作用24 h后收集颗粒细胞,通过流式细胞仪观察其凋亡现象和用酶标法检测caspases-3蛋白的表达。结果流式细胞仪结果显示宁心红杞含药血清可明显改善氯化镉导致的颗粒细胞凋亡,凋亡峰较模型组明显降低;含药血清组明显降低caspases-3的表达,与模型组相比有显著性差异（P〈0.01）。结论宁心红杞可通过降低caspases-3蛋白的表达来改善颗粒细胞的凋亡,延缓卵巢衰老。     

四物汤及其组成药对对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响

目的:探讨四物汤及其组成药对对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响,以期阐明配伍因素对于四物汤干预卵巢功能的作用。方法:体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,在培养体系中加入终浓度为2,20,200 mg·L-1四物汤及其各药对的样品,通过MTT法检测细胞增殖情况,观察其对卵巢颗粒细胞生长的影响。结果:四物汤对于卵巢颗粒细胞增殖具有显著促进作用,与溶剂对照组比较上升了36.73%;各药对亦具有显著促进作用,其强弱顺序为:当归-川芎(66.86%)>当归-白芍(58.52%)>白芍-川芎(47.03%)>白芍-熟地黄(41.43%)>当归-熟地黄(23.67%);对归芎药对的进一步研究表明,其水提物中当归-川芎1∶2配比,50%醇提物中1∶1配比和先水提再醇提物中1∶1.5配比药对对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响较为显著。结论:四物汤及其5个药对均有促进卵巢颗粒细胞增殖的作用,其中归芎药对在四物汤调节卵巢功能起着重要作用,并且不同的配伍比例、不同的提取方法对于促进卵巢颗粒细胞增殖具有各自的特点和贡献。     

二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响。方法采用血清药理学方法，以不同含药量的初老小鼠血清，与体外培养的颗粒细胞共同培养48h，观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞雌激素（E2）、孕酮（P）分泌量（化学发光免疫测定法）以及抑制素B（INHB）分泌量（ELISA法）的影响。结果二至天癸颗粒含药血清可明显增加颗粒细胞E2、P、INHB的分泌量。结论二至天癸颗粒可通过调节颗粒细胞的分泌功能进而改善初老小鼠卵巢功能。     

毓麟合剂及其拆方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响

目的:探讨毓麟合剂及其拆方对离体大鼠卵巢颗粒细胞(GC)增殖及雌、孕激素分泌的影响。方法:体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,加入毓麟合剂及其拆方汤剂作用24h后,在显微镜下观察卵巢颗粒细胞数量的变化,MTT法测定卵巢颗粒细胞增殖数量,ELISA法测定培养液中雌、孕激素的浓度。结果:毓麟合剂可明显增加卵巢颗粒细胞数量,并增加雌二醇(E2)和孕酮(P)的分泌。HE染色显微镜下观察可表现为卵巢颗粒细胞增多等。结论:毓麟合剂能够增加离体大鼠卵巢颗粒细胞数量并能够促进雌二醇和孕酮的分泌。     

补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌和mRNA表达的影响

目的 运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌功能以及抑制素B (INHB)、胰岛素样生长因子-1 (1GF-1) mRNA表达的影响.方法向培养的SD大鼠卵巢颗粒细胞中分别加入10％空白血清(对照组)、人转基因重组促卵泡激素(hFSH)含药血清(阳性对照组)、补肾调冲方含药血清(补肾调冲方组),培养48 h,以闪烁计数器测定3H-TdR掺入DNA的量,流式细胞仪测定细胞周期分布,放射免疫法测定培养液中雌二醇(E2)和孕激素(P)水平,并采用RT-PCR法测定1NHB、IGF-1 mRNA的表达量.结果补肾调冲方含药血清可剂量相关地促进3H-TdR掺入颗粒细胞DNA的量.与对照组相比,补肾调冲方各含药血清组G0/G1期细胞均明显减少,而S期细胞则明显增多;E2、P的量明显升高;颗粒细胞INHB、IGF-1 mRNA表达量均明显增多,且呈剂量相关性.结论补肾调冲方含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖、增强甾体激素的分泌功能,该作用可能通过增强INHB、IGF-1基因的表达,从内分泌和自分泌两条途径调节卵巢功能而实现的.     

不同浓度补肾健脾方对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响

目的:观察不同浓度补肾健脾方含药血清对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响以及不同浓度补肾健脾方对小鼠卵巢组织卵泡颗粒细胞层增殖的影响。方法:采用机械分离法结合胰蛋白酶消化法体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,通过HE染色法进行细胞形态鉴定。采用MTT法检测,分别观察含质量分数5%、10%、20%补肾健脾方含药血清对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。体内实验通过给雌性小鼠灌胃不同浓度的补肾健脾方,连续灌胃4周,取卵巢组织做病理形态学观察。结果:质量分数20%、10%、5%的补肾健脾方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖作用各不相同,质量分数20%、10%的含药血清、20%的空白血清对卵巢颗粒细胞的增殖作用最明显,与正常组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。补肾健脾方大剂量、中剂量、小剂量对卵巢卵泡颗粒细胞层的厚度呈现一定的增高趋势。结论:补肾健脾方对小鼠的卵巢颗粒细胞具有一定的增殖作用。     

育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察育泡饮对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。方法以不同剂量的育泡饮作用于体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,并设立空白和西药促卵泡激素FSH(50ng/mL)对照组。用MTT法检测各组颗粒细胞24、48、和72 h增殖情况。流式细胞技术分析细胞周期各时相的变化。结果 (1)育泡饮显著增加了颗粒细胞的增殖能力,并且呈一定的量效和时效关系,随着育泡饮浓度的增加,其促增殖能力逐渐增强,在作用48 h后,育泡饮高剂量组最为显著(P0.05)。(2)各剂量组育泡饮及FSH组均能使S期的细胞显著增多及增殖指数升高,G0/G1期细胞相对比例减少(P0.05),其中育泡饮高剂量组的作用优于FSH组(P0.05)。结论育泡饮对卵巢颗粒细胞增殖有显著促进作用,其作用机制可能是通过促进颗粒细胞从G0期向S期转化,增加S期细胞比率来实现的。     

逍遥散加减方对高催乳激素血症大鼠卵巢颗粒细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨以肝脾为核心,运用逍遥散加减方治疗高催乳素血症(HPRL)模型大鼠,观察逍遥散加减方对体外培养HPRL大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。方法:选用SD雌性大鼠120只,随机分为正常组、模型组、阳性药溴隐亭组(1 mg·kg^-1)、逍遥散加减方高、中、低剂量组(55,22.5,13.75 g·kg^-1)。采用ip甲氧氯普胺,制作HPRL大鼠模型。给药30 d后,采用MTT检测各组细胞培养24,48,72,96 h细胞增殖情况;采用流式细胞仪分析细胞周期各时相的变化及细胞凋亡指数。结果:与正常组比较,模型组24,48,72,96 h大鼠卵巢颗粒细胞增殖明显降低,细胞凋亡指数显著增高,S期的细胞增殖明显降低,G₀/G₁期细胞相对比例明显增加(P<0.05);与模型组比较,溴隐亭组、逍遥散加减方高、中、低剂量组明显增加大鼠卵巢颗粒细胞增殖(P<0.05),逍遥散加减方高剂量组降低卵巢细胞凋亡指数,使S期的细胞增殖显著增多,G₀/G₁期细胞相对比例减少(P<0.05),其中加味逍遥散高剂量组的作用与溴隐亭组相近。结论:逍遥散加减方促进卵巢颗粒细胞增殖,降低细胞凋亡指数,其作用机制可能是通过促进颗粒细胞从G₀期向S期转化,増加S期细胞比例完成。     

人参多糖对HCG诱导黄体与颗粒细胞功能的影响

目的研究人参多糖对大鼠卵巢功能的作用。方法采用体外细胞培养观察人参多糖对HCG诱导的黄体与颗粒细胞分泌孕酮与cAMP的影响,并检测了卵母细胞的存活率。分离培养黄体、颗粒与卵母细胞,设对照组与不同浓度人参多糖实验组,采用放免分析方法测定孕酮与cAMP生成含量,细胞存活率检测采用MTT法。结果与对照组比较,孕酮含量:黄体细胞为(6573.46±185.14)与(4509.55±126.82)pmol,颗粒细胞为(197.16±42.87)与(320.42±12.46)pmol。cAMP:黄体细胞为(31.20±17.13)与(65.26±15.93)fmol,颗粒细胞为(121.15±19.96)与(296.42±27.28)fmol。结论人参多糖抑制HCG诱导黄体细胞孕酮分泌,促进HCG诱导颗粒细胞孕酮分泌。而协同黄体细胞与颗粒细胞cAMP生成,人参多糖使卵母细胞生长抑制率降低,呈区间剂量依赖关系。     

新疆雪莲总黄酮对多种癌细胞增殖抑制的研究

目的：研究雪莲总黄酮对Hela、KYSE150、LS180细胞增殖的抑制效果。方法：采用CCK-8检测雪莲总黄酮对Hela、KYSE150、LS180细胞增殖能力的影响,293T细胞为正常细胞对照,观察雪莲总黄酮处理6d后Hela细胞数量形态的变化。结果：雪莲总黄酮0．1mg／mL和0．2mg/mL处理3种癌细胞,与对照组比较,24h和48h后能够不同程度抑制细胞增殖。结论：雪莲总黄酮能够抑制多种癌细胞增殖,具有剂量和时间依赖性。     

黄芪抑制大鼠肝星状细胞增殖及胶原分泌的研究

目的：观察黄芪抑制大鼠肝星状细胞增殖及胶原分泌。方法：分离培养大鼠肝星状细胞,传一代后加入不同浓度的黄芪48h后,以MTT比色法检测对细胞增殖的作用,传一代细胞以2mg/ml作用48h后,以ELISA法检测I,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白分泌的变化。结果：0．75－50mg/ml黄芪（经0．45um滤膜过滤）可使MTT转化率下降,细胞增殖受抑,呈明显的剂量依赖性,2mg/ml黄芪可使Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原分泌量下降,结论：黄芪抗纤维化的部分机理在于抑制了活化肝星状细胞的增殖及胶原蛋白的合成,从而减少了胶原纤维在肝脏内的沉积。     

雷公藤内酯醇抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡作用初探

目的：初步探讨雷公藤内酯醇诱导人卵巢癌细胞株Caov-3细胞的凋亡作用及其分子机制。方法：采用MTT法检测雷公藤内酯醇对人卵巢癌细胞株Caov-3的生长抑制作用；用透射电镜观察细胞超微结构的变化；以AnnexinV—FITC标记法定量检测细胞凋亡；以蛋白印迹分析雷公藤内酯醇对Caspase3蛋白表达的影响。结果：雷公藤内酯醇能够抑制Caov-3细胞的增殖，且抑制率具有浓度和时间依赖性；雷公藤内酯醇处理Caov-3细胞后，光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞；Annexin V—FITC标记法的定量检测进一步证实了雷公藤内酯醇诱导细胞调亡的作用；蛋白印迹检测表明雷公藤内酯醇可使Caspase3表达变化。结论：雷公藤内酯醇对人Caov-3细胞系具有较强的直接抑制作用，可以诱导癌细胞凋亡，可能与其调节癌细胞Caspase-3蛋白活化有密切的关系。     

雷公藤内酯醇抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡作用初探

目的:初步探讨雷公藤内酯醇诱导人卵巢癌细胞株Caov-3细胞的凋亡作用及其分子机制。方法:采用MTT法检测雷公藤内酯醇对人卵巢癌细胞株Caov-3的生长抑制作用;用透射电镜观察细胞超微结构的变化;以AnnexinⅤ-FITC标记法定量检测细胞凋亡;以蛋白印迹分析雷公藤内酯醇对Caspase 3蛋白表达的影响。结果:雷公藤内酯醇能够抑制Caov-3细胞的增殖,且抑制率具有浓度和时间依赖性;雷公藤内酯醇处理Caov-3细胞后,光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞;AnnexinⅤ-FITC标记法的定量检测进一步证实了雷公藤内酯醇诱导细胞凋亡的作用;蛋白印迹检测表明雷公藤内酯醇可使Caspase 3表达变化。结论:雷公藤内酯醇对人Caov-3细胞系具有较强的直接抑制作用,可以诱导癌细胞凋亡,可能与其调节癌细胞Caspase-3蛋白活化有密切的关系。     

桦褐孔菌醇诱导人卵巢癌SKOV3细胞株凋亡及其分子机制研究简

 目的 研究桦褐孔菌醇(inotodiol)诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡及其对相关蛋白Bcl-2、 Bax和caspase-3表达的影响。方法 选用人卵巢癌SKOV3细胞株进行体外培养, 四甲基偶氮唑蓝法检测桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响;应用透射电镜观察细胞形态学变化;通过TUNEL染色测定凋亡率;通过免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2, Bax和caspase-3的表达。结果 桦褐孔菌醇抑制人卵巢癌细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性;形态学检测出现典型的细胞凋亡改变。50 mg·L^-1桦褐孔菌醇作用人卵巢癌SKOV3细胞24、48 h的凋亡率分别为(21.91±2.84)%和(43.83±3.22)%, 肿瘤细胞凋亡率(AR)随药物作用时间的延长而上升, 显示明显的时效关系(P<0.05)。免疫细胞化学法染色显示, 桦褐孔菌醇组人卵巢癌SKOV₃细胞Bcl-2基因蛋白的阳性表达率明显降低, 而Bax、caspase-3基因蛋白阳性表达率明显升高。结论 桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞株有抗增殖和诱导凋亡作用, 该药可能是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达和上调促进凋亡基因Bax的表达及启动caspase凋亡信号而发挥抗癌作用。     

羟基喜树碱对A549人肺腺癌细胞增殖的影响

目的观察羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞增殖的影响。方法采用细胞培养及MTT比色法检测羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞的抑制作用。结果低浓度羟基喜树碱作用24h对A549人肺腺癌细胞没有明显影响,当药物浓度达到50μg/mL时,抑制作用明显增强,抑制率达44.17%,药物浓度达到100μg/mL时抑制率达50.28%;随着药物作用时间的延长,抑制更明显,100μg/mL药物组作用48h抑制率达70.98%。结论羟基喜树碱具有抑制A549人肺腺癌细胞增殖的作用,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性。     

芍药苷对小鼠脾细胞增殖及分泌细胞因子的影响及机制

目的:研究芍药苷对体外小鼠脾细胞增殖及细胞因子的作用,探讨其对细胞免疫功能的影响及机制。方法:昆明种小鼠颈椎脱臼处死,体外培养小鼠脾细胞,不同质量浓度的芍药苷溶液(62.5,12.5,250,500,1 000 mg·L-1),另设空白组,分别于培养3,6,9 d时取出细胞培养板,采用血球计数板计数细胞数法测定不同浓度芍药苷对小鼠脾细胞增殖活性的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中白细胞介素-2(IL-2),干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;作用9 d后取细胞,Western blot方法测定IL-2,IFN-γ,TNF-α和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达;500 mg·L-1芍药苷溶液作用5 d后,流式细胞仪(FCM)检测细胞表型变化。结果:在3,6,9 d,不同浓度芍药苷给药组的脾淋巴细胞增殖活性均高于空白组(P0.01);各给药组IL-2,IFN-γ,TNF-α的含量较空白组明显升高(P0.05,P0.01),并随芍药苷浓度的增加而增加;淋巴细胞表型分析显示,芍药苷能够刺激T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖;不同质量浓度芍药苷能够升高IL-2,IFN-γ,TNF-α和NF-κB蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:芍药苷可通过激活NF-κB表达,促进细胞因子IL-2,IFN-γ和TNF-α的分泌和表达,促进细胞增殖,提高机体免疫功能。