TGF-β诱导骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化

目的　通过研究转化生长因子 - β(TGF- β)对骺板软骨细胞分化的作用 ,揭示 TGF- β软骨内成骨的作用机制。方法　采用鸡胚股骨无血清培养、酶组化检测碱性磷酸酶 (AL P)、免疫组化检测 型胶原、纤维粘连蛋白 (FN)等方法 ,观察 TGF- β在不同作用时间和剂量时对骺板肥大区软骨细胞分化的作用。结果　 TGF- β可使肥大区软骨细胞表达 型胶原和 FN,使 AL P表达增加 ,并存在着量效和时效关系。结论　 TGF- β可以诱导鸡胚股骨骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化 ,与 TGF- β的作用剂量和时间密切相关。     

转化生长因子—β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用１４天鸡胚股骨无血清培养、５－溴尿嘧啶核苷（ＢｒｄＵ）掺入标记和细胞核增殖抗原（ＰＣＮＡ）免疫染色方法，研究转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对骺软骨细胞增殖的作用。结果显示：ＢｒｄＵ阳性软骨细胞数目与分布都位于ＴＧＦ－β作用剂量和时间密切相关，ＴＧＦ－β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖，与ＢｒｄＵ标记相比，ＰＣＮＡ阳性细胞分布区域和数目远多于前者，根据染色情况可以将ＰＣＮＡ阳性细胞分为Ｓ期和Ｓ期细胞两种。结论：ＴＧＦ－β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动，并能诱导非增殖软骨细胞表达ＰＣＮＡ，用ＰＣＮＡ作为细胞增殖的指标是不适宜的。     

TGF-β增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ, Ⅱ型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的 对β转化生长因子（TGF-β）增强人重组骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2)诱成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及碱性磷酸酶（ALP）的表达进行研究。方法 BALB/c小鼠110只随机分为2组，每组55只，设立rhBMP-2/TGF-β为实验组，rh-BMP-2为对照组，分别于3-21d共8个时间点取材，采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的Ⅰ，Ⅱ型胶原进行检测；对ALP活性进行定量分析。观察2组在诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达情况。结果 Ⅱ型胶原的出现是和成软骨，软骨细胞的出现相伴随的，但是，肥大，变性的软骨细胞并不表达Ⅱ型胶原，作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原，ALP在软骨形成期即有表达，但是随着成骨细胞的出现，骨组织的形成Ⅰ型胶原仍表现为高表达，而ALP的表达则呈下降趋势。实验组CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达早于对照组。结论 TGF-β增强了rhBMP-2诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达。     

rhBMP-2在体内诱导成骨中I，II型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的：对rhBMP－2在诱导成骨中CollagenI,II及碱性磷酸酶（ALP）的表达进行研究,方法：将含rhBMP-20.5mg的松质骨载体植入55只BALB／c小鼠的右侧股部股袋内,分别术后3－21d共8个时间点取材,采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的I,II型胶原进行检测,对ALP活性进行定量分析,观察rhBMP-2在诱导成骨中CollagenI,II及ALP的表达情况,结果：（1）II型胶原的出现是和成软骨,软骨细胞的出现相伴随的,但是,肥大,变性的软骨细胞并不表达II型胶原,（2）作为成骨细胞成熟标志物的I型胶原,ALP在软骨形成期即有表达,但是随着成骨细胞的出现,骨组织的形成I型胶原仍表现为高表达,而ALP的表达则呈下降趋势,结论：在诱导成骨中rhBMP－2促进了CollagenI,IIey ALP的表达。     

转化生长因子-β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用14天鸡胚股骨无血清培养、5-溴尿嘧啶核苷(BrdU)掺入标记和细胞核增殖抗原(PCNA)免疫染色方法,研究转化生长因子-β(TGF-β)对骺软骨细胞增殖的作用.结果显示:BrdU阳性软骨细胞数目与分布部位与TGF-β作用剂量和时间密切相关,TGF-β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖,与BrdU标记相比,PCNA阳性细胞分布区域和数目远多于前者,根据染色情况可以将PCNA阳性细胞分为S期和非S期细胞两种.结论:TGF-β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动,并能诱导非增殖软骨细胞表达PCNA,用PCNA作为细胞增殖的指标是不适宜的.     

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用及BMP蛋白表达影响的研究

目的 探讨TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用及BMP蛋白表达的影响。方法 采用ALP活性测定及骨结节计数方法观察TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外的成骨作用，BMP－McAb免疫组化染色及其定量分析观察TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞BMP蛋白表达的影响。结果 TGF－β（3－7d) 对ALP活性有促进作用，并呈一定的时效和量效关系。TGF－β对骨结节形成低剂量时有促进作用，高剂量时有较强的抑制作用；TGF－β对成骨细胞BMP蛋白表达表现为抑制作用；二者均有显著性差异。结论 TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨及BMP蛋白表达表现为双相作用。     

高生物活性复合人工骨修复骨缺损的实验研究

目的：探讨载有转化生长因子β1（TGF－β1），具有高生物活性复合人工骨修复骨缺损的价值。方法：建立SD大鼠下颌骨缺损模型。采用组织学和分子生物学Slot Blot杂交法，检测羟基磷灰石复合TGF－β1实验组，单纯羟基磷灰石对照组，无材料修复的空白对照组在骨缺损愈合过程中的组织学及Ⅰ型胶原mRNA的表达状况。结果：实验组的新骨形成及Ⅰ型胶原mRNA的表达水平最高。结论：提示栽有TGF－β1的高生物活性复合人工骨局部使用能促进骨愈合。     

Ⅰ型和Ⅱ型TGF—β受体在人增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中表达的研究

运用免疫组化技术检测增生性瘢痕（HTS）和瘢痕疙瘩（KS）中Ⅰ型（RⅠ）和Ⅱ型（RⅡ）TGF－β受体的表达和分布情况，了解TGF－β受体在人HTS和KS形成中的作用。结果发现，HTS成纤维细胞（Fb）表面RⅠ和RⅡ有阳性表达，而且随着病程的延长，受体表达逐渐减弱，直到消失；KS浸润部Fb表面RⅠ和RⅡ呈强阳性表达，中央部未见受体表达阳性的Fb；正常皮肤Fb表面受体表达阴性。提示在HTS形成过程中，不仅TGF－β增高，Fb表面Ⅰ型和Ⅱ型TGF－β受体也增高，使TGF－β作用放大；TGF－β及其受体可能与KS的浸润性生长有关。     

血管内皮生长因子在新生鼠胫骨生长板软骨细胞中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在鼠生长板软骨细胞增殖、分化和矿化过程中的自分泌作用。方法：新生鼠（1～2d）10只．切取干骺部软骨组织，采用免疫组织化学方法（5只）和RT—PCR方法（5只），检测VEGF及其受体Flt-1和KDR/Flk-1在胫骨生长板中的表达。结果：免疫组织化学染色VEGF、Fit-1和KDR／Flk-1在生长板的上肥大区、下肥大区和矿化区中的软骨细胞表达强阳性，在增殖区少数软骨细胞中呈阳性表达，在静止区软骨细胞中表达阴性。RT—PCR检测的5只鼠中除1只不表达Flt-1外，VEGF（251bp）、Flt-1（272bp）和KDR/Flk-1（252bp）在软骨组织中均清晰表达。结论：VEGF及受体Flt-1和KDR／Flk-1在生长板软骨中的表达具有高度一致性，并且随着软骨细胞的分化成熟表达逐渐增强。提示VEGF在生长板软骨细胞的增殖、分化和矿化过程中，可以自分泌作用方式起重要调节作用。     

TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：观察外源性TGF－β3对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）生长增殖的影响，为临床治疗提供理论依据。方法：用MTT比色法检测TGF－β3对HSFB增殖活性的影响，^3H-脯氨酸掺入法检测细胞内胶原合成，免疫组化检测I，Ⅲ型胶原及TGF－β3蛋白表达情况。结果：TGF－β3可抑制HSFB细胞增殖，下调TGF－β1蛋白及I型胶原蛋白表达。结论：TGF－β3具有抗瘢痕形成作用，有望在临床中应用。     

miRNA expression profile during fluid shear stress-induced osteogenic differentiation in MC3T3-E1 cells

Objective: To test the hypothesis that the short-term and appropriate fluid shear stress is expected to promote the terminal differentiation of pre-osteoblasts and detect the expression profile of microRNAs in the fluid shear stress-induced osteogenic differentiation in MC3T3-E1. Materials and Methods: MC3T3-E1 cells were subjected to 1 hour of FSS at 12 dyn/cm2 using a parallel plate flow system. After FSS treatment, cytoskeleton immunohistochemical staining and microRNAs were detected immediately, osteogenic genes expression and immunohistochemical staining for collagen type I were tested at the 24th hour, ALP activity assay was measured at the 24th, 48th and 72th hour, alizarin Red Staining was checked at day 12. Results: 1 hour of FSS at 12 dyn/cm2 induced actin stress fiber formation and rearrangement, up-regulated of osteogenic gene expression, increased ALP activity, promoted synthesis and secretion of collagen type I, enhanced nodule formation and promoted the terminal differentiation in MC3T3-E1 cells. During osteogenic differentiation, expression levels of miR-20a, -21, -19b, -34a, -34c, -140 and -200b in FSS-induced cells were significantly down-regulated. Conclusions: The short-term and appropriate fluid shear stress is sufficient to promote the terminal differentiation of pre-osteoblasts and that a group of miRNAs that may play an important role in the FSS-induced pre-osteoblast differentiation.     

积雪草苷对增生性瘢痕中转化生长因子-βmRNA及基质金属蛋白酶类表达的影响

目的探讨积雪草苷对人增生性瘢痕中转化生长因子β（TGF-β）mRNA和基质金属蛋白酶及其组织抑制剂（MMPS／TIMPS）表达的影响。方法临床上收集烧伤后5～8个月经积雪草苷治疗和非积雪草苷治疗的增生性瘢痕标本各9例。采用原位杂交和免疫组织化学方法,分别检测增生性瘢痕中TGF-β1 mRNA、TGF-β2 mRNA、TGF-β3 mRNA及MMP1、MMP2、TIMP1、TIMP2和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平,并利用图象分析方法进行结果分析。结果TGF-β mRNA在增生性瘢痕中主要表达于成纤维细胞胞质,经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TGF-β1 mRNA表达明显减少,胞质淡染,统计学上与非积雪草苷治疗组TGF-β1 mRNA表达有显著性差异（P〈0．01）;而TGF-β1,mRNA在积雪草苷治疗的增生性瘢痕中表达增多,明显高于非积雪草苷治疗组的TGF-β1 mRNA表达（P〈0．05）。MMPS／TIMPS在增生性瘢痕中也表达于成纤维细胞胞质,经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TIMP1。表达明显减少,与非积雪草苷治疗组TIMP1表达有显著性差异（P〈0．01）;而MMP1、MM2,及TIMP2在上述两组中表达无显著性差异（P〉0．05）。Ⅰ、Ⅲ型胶原在增生性瘢痕中表达．经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中Ⅰ型胶原排列整齐,含量较少,与非积雪草苷治疗组有显著差异（P〈0．05）;而Ⅲ型胶原在两组增生性瘢痕中表达无显著性差异（P〉0．05）。结论积雪草苷通过降低TGF-β1 mRNA表达和增加TGF-β3 mRNA的表达,引起TIMP1表达明显减少,从而MMP1／TIMP1相对比例增加,达到促进Ⅰ型胶原降解,减轻瘢痕增生的作用。     

四环素—哌嗪雌酚酮对小鼠骺板I型胶原表达的影响

目的：研究四环素－哌嗪雌酚酮（XW630）对胚胎小鼠骺板I型胶原的表达的影响。方法：采用胚胎小鼠体外培养模型，通过免疫组织化学手段，观察XW630对I型胶原蛋白表达水平的影响。结果：当培养基中XW630浓度为10^-7mol/L和10^-8mol/L时，各区I型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞面积与对照组相比均显著增加；与同浓度的雌酚酮组相比，106-7mol/L XW630组增殖区和肥大区阳性细胞面积增加。当浓度降至10^-9mol/L，只有肥大区阳性细胞面积增加。随浓度升高，各区阳性细胞面积呈增加趋势。结论：在体外培养条件下，XW630剂量依赖地上调小鼠骺板静止区、增殖区和肥大区I型胶原蛋白的表达水平。     

转化生长因子—β对骺软骨细胞增殖周期的作用

采用鸡胚有无血清培养和流式细胞仪,对经转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）后的骺软骨细胞检测。结果显示：２４小时时,０．１１、０．３３和１．００ｎｇ实验组的细胞增殖指数（ＰＩ）均低于对照组,而３．００ｎｇ组则大于对照组（Ｐ〈０．００１）;９６小时时,各实验组ＰＩ均大于对照组,其中０．３３ｎｇ组ＰＩ最大（Ｐ〈０．００１）。上述结果表明,不同剂量和不同作用时间的ＴＧＦ－β对骺软骨细胞增殖周期均有较大的影响,     

Bax蛋白在骺板软骨细胞中的表达

目的：研究凋亡相关基因Bax在正常骺板软骨细胞中的表达。方法：采用免疫组化ABC法。结果：Bax的免疫反应阳性物在正常骺板软骨的各个区中有不均衡的表达，在骺板软骨膜下的软骨细胞中没有Bax表达；在骺板的静止区Bax的免疫反应阳性物在软骨的细胞质中表达；在骺板的增殖区位于细胞质中的Bax免疫阳性反应增强；在骺板的肥大区Bax的免疫反应强度达到最大值，免疫反应阳性物位于软骨细胞的胞质和胞核中。结论：Bax可能通过数量的积累促使骺板软骨细胞凋亡。     

胰岛素样生长因子Ⅰ在骨赘发生过程中的基因表达

目的 研究胰岛素样生长因子I在骨关节炎骨赘软骨发生过程中的基因表达特点。方法25例接受全膝关节置换术的原发性骨关节炎骨赘标本为研究对象,3例正常成人股骨髁软骨标本作对照。制备石蜡切片,行HE和甲苯胺蓝染色及I型胶原、Ⅱ型胶原（IIa和IIb）、X型胶原分子的免疫组化染色。根据骨赘中主要组织的细胞形态学和各种胶原分子等的表达特点,共获得5种主要不同类型（I～V）的骨赘组织,然后分别进行胰岛素样生长因子I的免疫组化和原位杂交染色。结果定量分析后进行单因素方差分析。结果免疫组化和原位杂交方法均显示胰岛素样生长因子I主要在I和Ⅱ类骨赘表达明显高于Ⅳ和V类骨赘（14．6±3．8VS7．7±3．5;14．6±3．8VS6．0±1．9;14．2±4．6VS5．4±2．1;14．2±4．6VS2．2±1．5;P〈0．05）。I和Ⅱ类骨赘以及Ⅳ和V类骨赘之间差异无统计学意义。结论胰岛素样生长因子I-mRNA主要在骨赘形成的早期明显表达;其对骨关节炎骨赘的发生可能起着始动作用。     

Expression of transforming growth factor-beta1 in renal fibrosis of human mesengial proliferative glomerulonephritis]

OBJECTIVE: To explore the possible effect of transforming growth factor-beta(1) (TGF -beta(1)) on the development of renal fibrosis in human mesengial proliferative glomerulonephritis (MsPGN). METHODS: Immunohistochemistry method, sirius red staining polarization microscopy and the computer imaging analysis system were used to detect the expression of TGF-beta(1), the distribution of collagen I, collagen III and collagen IV. RESULT: In MsPGN with renal fibrosis, collagen IV was increased markedly,and collagen I and collagen III appeared in the expanded mesengial matrix abnormally. Collagen III and collagen IV were increased markedly in tubulointerstitium. TGF-beta(1) expression was positively correlated with the expression of collagen I, collagen III and collagen IV in tubulointerstitium (r=0.82 0.92,P<0.01), and negatively correlated with I/III, I/IV and III/IV (r=-0.83,-0.92, P<0.001). CONCLUSION: Abnormal increase of TGF-beta(1) may be one of the important factors associated with glomerular sclerosis and tubulointerstitial fibrosis through the increment and abnormal distribution of collagen I, collagen III and collagen IV.     

苦味酸—天狼星红偏振光法检测增生性瘢痕组织胶原

OBJECTIVE: To find a simple method to detect the collagens in human hypertrophic scars. METHODS: The content and distribution of collagen in human hypertrophic scars were observed with both conventional light and polarization microscopy combined with image analysis of hypertrophic scar sections stained with picrosiriusred. RESULTS: Polarization microscopy revealed closely packed thick fibrils of type I collagen fibers that showed either red or yellow intense birefringence in the hypertropic tissue, whereas type III collagen fibers consisted mainly of green thin fibril with weak greenish birefringence. The hypertrophic scar, as indicated by image analysis, contained (73.95+/-3.22)% type I collagen and (21.13+/-3.57)% type III collagen. CONCLUSION: Polarization microscopy and sirius red staining is an ideal method in analyzing the distribution and arrangement of the collagen in hypertrophic scars.