双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测布氏菌抗原的实验研究

目的建立检测布氏菌抗原特异、敏感和快速的试验方法。方法在制备高滴度布氏菌抗体辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上，建立检测布氏菌抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAbS-ELISA)，包括常规DAbS—ELISA及快速DAbS-ELISA。用建立的两种DAbS-ELISA法对布氏菌菌体抗原及可溶性抗原进行有关其特异性及敏感性对比观察；同时对模拟的这些抗原污染的饮用水标本进行对比观察。结果常规DAbS—ELISA检测布氏菌544A、16M、133OS及104M的菌体抗原以及布氏菌16M可溶性抗原的敏感性分别为0．22万菌／ml、120万菌／ml、190万菌／ml、2万菌／ml和0．012μg／ml；用快速DAbS—ELISA法的敏感性分别为22万菌／ml、120万菌／ml、1900万菌／ml、20万菌／ml和1．2μg／ml；同时用这两种DAbS—ELISA检测上述抗原污染的饮用水标本其敏感性分别为0．22万菌／ml、1900万菌／ml、20万菌／ml和0．012μg／ml；以及22万菌／ml、120万菌／ml、1900万菌／ml、200万菌／ml和1．2μg／ml。而且这两种DAbS—ELISA法检测不含布氏菌抗原的所有对照均为阴性反应。结论双抗体夹心酶联免疫吸附试验是检测布氏菌抗原的特异、敏感、快速和适用的试验方法。     

ELISA双抗原夹心法检测内脏利什曼病抗体的研究

目的观察rK39抗原酶联免疫吸附试验双抗原夹心法(ELISA夹心法)检测内脏利什曼病抗体用于内脏利什曼病诊断与宿主动物感染调查的可行性。方法采用ELISA夹心法与rK39免疫层析试条法(ICT)同步检测内脏利什曼病抗体。结果 5种家畜血清229份,7种鼠类标本238份,ELISA夹心法和rK39 ICT法抗体检测均阴性;接种利什曼原虫灰仓鼠、草原兔尾鼠标本33份,13份阳性,阳性率39.4%;塔里木兔标本119份,阳性7份,阳性率5.9%;非疫区儿童血清29份,全部阴性;疫区无内脏利什曼病症状人血清250份,4份两种方法均阳性,阳性率均为1.6%;住院内脏利什曼病病人血清67份,两种方法的阳性率分别为68.7%和67.2%。共检测人和其他动物标本965份,两种方法的阳性符合率98.6%,阴性符合率99.9%。ICT相同显色等级的阳性标本,ELISA跨10个滴度。结论 ELISA夹心法可检测多种动物内脏利什曼病抗体,抗体滴度具有定量意义。该方法适用于内脏利什曼病诊断、疗效观察和流行病学调查。     

用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测阴道毛滴虫可溶性抗原的研究

用抗阴道毛滴虫的单克隆抗体ＩｇＧ（鼠）和兔抗阴道毛滴虫多克隆抗体进行ＥＬＩＳＡ试验（双抗体夹心法），检测阴道毛滴虫可溶性抗原。分别观察了单克隆和多克隆抗体的不同浓度、不同的封闭剂型、封闭时间及孵育时间等条件对本试验效果的影响。结果以单克隆抗体ＩｇＧ（鼠）２５μｇ／ｍｌ包被，用０．２５％脱脂奶粉１次性封闭０．５ｈ（３７℃），兔抗阴道毛滴虫多克隆抗体滴度１∶２００，孵育０．５ｈ为最佳条件。阴道毛滴虫可溶性抗原检出最低量为０．３μｇ。本试验与多种寄生虫的多克隆抗体均无交叉反应     

双抗体夹心斑点金免疫渗滤法检测血吸虫循环抗原的现场应用

目的 探讨双抗体夹心斑点金免疫渗滤法（S－DIGFA）在现场的应用价值。方法 在原已建立的以抗26kDaGST基因重组蛋白多克隆抗体为捕获抗体兼测示抗体的S－DIGFA的基础上，应用该法检测血吸虫病中度流行区和传播阻断地区人群的血清共1388份，并以双抗体夹心ELISA（S－ELISA）作对照。结果 用S－DIGFA和S－ELISA平行检测血吸虫病中度流行区人群血清300份，阳性检出率分别为15．7％和17．3％；两法检测血吸虫病传播阻断地区人群血清1088份，阳性检出率分别为3．9％和3．7％。结论 S－DIGFA检测循环抗原可在现场扩大和作血清流行病学调查。     

单克隆抗体JPG3双抗体夹心酶联免疫吸附试验用于血吸虫病疗效考核的探讨

以单克隆抗体(MAb)为探针，用ELISA检测血吸虫病人血清中的肠相关趋阴极抗原(CCA)，阳性率可达84．6％。有一定的疗效考核价值。傅奇等采用Sandwich-ELISA方法，检测日本血吸虫病患者血清中Sj70抗原，阳性率可达90％，吡喹酮治疗后6-12个月，94％病例转阴。1996年由卫生部地病司和血吸虫病专家咨询委员会主持的CAg检     

用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验检测人畜布氏菌抗体的研究

目的摸索建立用布氏菌乳环抗原的血清学试验,以用于人畜血清中布氏菌抗体的检测。方法在制备并标化布氏菌乳环抗原的基础上,用此抗原分别做PAT、SAT、CAT、CFT、及DAgS-ELISA,同时与这些试验的常规方法对部分布氏菌感染的人畜血清及正常血清进行对比检测。结果5种常规血清学试验即RBPT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA与用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验即PAT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA对部分布氏菌感染人畜血清进行对比检测,其阳性率分别为91.5%(65/71)、83.3%(60/72)、58.2%(39/67)、46.4%(26/56)、81.9%(59/72)以及94.4%(67/71)、83.3%(60/72)、56.7%(38/67)、54.5%(30/55)、80.6%(58/72)。并且对两种抗原的试验所得阳性率进行显著性差异检验,差异均无显著性。(χ2分别为0.220、0.000、0.950、0.360、0.005,P>0.05)。其所测抗体的几何平均滴度(GMT)分别为1∶121、1∶23、1∶6和1∶19以及1∶109、1∶23、1∶10和1∶19。结论用布氏菌乳环抗原不仅适用做MRT对布氏菌感染奶特异性抗体的检测,而且可用此种抗原PAT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA对人畜血清布氏菌抗体的检测。     

双抗体夹心酶联免疫吸附试验(S-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原的研究

应用从重感染兔血清中提取的γ-球蛋白为捕捉抗体、以酶标单克隆抗体为结合物进行双抗体夹心酶联免疫吸附试验(S-ELISA),检测日本血吸虫病人循环抗原.结果:69例急性血吸虫病人血清的阳性率为80.6%一90.9%;110例慢性血吸虫病人血清的阳性率为88.2%;40例华支睾吸虫病人血清有1例出现阳性,交叉反应率为2.5%,50例健康人血清亦有1例出现阳性反应,假阳性率为2%.提示该法具有较高的敏感性、特异性,判断结果较客观,可应用于现场.     

用于布鲁氏菌病酶联免疫吸附试验的三类抗原比较研究

应用布鲁氏菌超声波破碎抗原、脂多糖抗原和试管凝集反应抗原做ELISA分别对实验性布鲁氏菌感染豚鼠及慢性期布鲁氏菌病患者血清抗体的比较研究,初步结果表明,这三类抗原制剂均可做ELISA,用于布鲁氏菌病机体血清抗体的检测。并且与常规布鲁氏菌病血清学试验相比,不仅特异性较好,而且敏感性更高。在这三类抗原制剂中,以超抗的敏感性为最高,SAT抗原次之,而LPS抗原为最差。     

建立双抗原夹心酶免疫试验对人畜布鲁氏菌抗体检测的研究

目的为人畜布鲁氏菌病(布病)的血清学诊断、监测及流行病学调查提供特异、敏感、快速的试验方法。方法在制备高滴度的布鲁氏菌(布氏菌)抗原及其抗原辣根过氧化物酶结合物基础上。建立了检测人畜布氏菌抗体的双抗原夹心酶免疫试验(DAgS-EIA),包括常规双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)、双抗原夹心酶免疫斑点试验(DAgS-DIEA)以及快速双抗原夹心ELISA(快速DAgS-ELISA),并对影响本试验的主要因素因素进行了试验。结果制备了高滴度的布氏菌抗原及其抗原酶结合物和冻干制品。并在此基础上,建立了常规DAgS-ELISA及DAgS-DIEA以及快速DAgS-ELISA检测人畜布氏菌抗体方法。经对115份布病患者血清检测结果,阳性率以DAgS-ELISA为最高(61.7%),其余依次为RBPT(58.1%)I、-ELISA(55.6%)、DAgS-DIEA(53.7%)、及SAT(44.2%)且用DAgS-EIA检测布氏菌感染羊、牛、猪及实验动物家兔、豚鼠和小鼠均为强阳性反应,而对正常人、羊、牛、猪及实验动物血清均为阴性反应。结论双抗原夹心酶免疫试验检测人畜血清布氏菌抗体,不仅特异、敏感、快速、简便而且仅需制备单一的布氏菌抗原酶结合物就可对人及各类动物血清布氏菌抗体进行检测。     

组织蛋白酶B酶联免疫吸附测定方法的建立

组织蛋白酶B（CB）与恶性肿瘤的分期、转移和预后关系密切。目的：建立CB酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，以便评价肿瘤患者血清CB含量与预后的关系。方法：将含有CB cDNA的重组痘苗病毒转染Hela细胞，表达目的蛋白重组CB；经Western blot分析和制备型电泳纯化后，免疫新西兰大白兔，获得CB多克隆抗。纯体后的抗体一部分作为固化抗体，另一部分用辣根过氧化物酶标记；棋盘滴定法确定工作浓度。结果：痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白。制备型电泳能简单、有效地纯化蛋白。重组CB免疫动物后，可获得高效价的CB多克隆抗体，用以制备相应的固化抗体和酶标抗体检测CB。结论：用重组CB免疫动物后可获得相应抗体，以建立CB检测的ELISA方法。     

戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的　建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法　将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果　建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论　利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。     

检测唾液中特异性抗体诊断人体旋毛虫病的研究

目的探讨检测唾液特异性抗体对人体旋毛虫病的诊断价值。方法用ELISA测定57例旋毛虫病人唾液中旋毛虫IgG抗体,并与血清同种抗体检测结果进行比较。结果检测唾液中旋毛虫IgG抗体诊断旋毛虫病的敏感性为64.91%,特异性为100%;检测血清旋毛虫IgG抗体诊断旋毛虫病的敏感性和特异性分别为91.23%和95.83%;唾液旋毛虫IgG与血清旋毛虫IgG的OD值呈正相关(r=0.4011)。结论检测唾液中特异性抗体对于诊断人体旋毛虫病有一定的应用价值,在采集血清有困难时可将唾液作为血清的替代检测标本。     

Dot-ELISA检测人芽囊原虫血清抗体的研究

【提要】 分别收集本院大学生322份血清和粪便，将粪便用体外培养法作为金标准检测出人芽囊原虫阳性178例，阴性144例。用dot-ELISA分别对体外培养法阳性者和阴性者血清进行检测，敏感度为92.13％（164/178），特异度为97.92％（141/144）。表明dot-ELISA用于检测人芽囊原虫血清抗体较敏感、特异。     

用酶免疫法检测牛结核分枝杆菌的IgG抗体

目的　建立一种酶免疫法检测牛血清中牛结核分枝杆菌的IgG抗体。方法　从牛结核分枝杆菌中分离牛结核菌糖脂抗原 ,并固相在聚苯乙烯微量反应板上 ,将抗牛IgG单克隆抗体标记在辣根过氧化物酶。 结果　皮肤试验阳性 46头牛中 ,酶标阳性 30头牛。皮肤试验阴性 750头牛中 ,酶标阴性为 70 7头牛。结论　本法可作为皮肤试验的辅助试验     

电化学发光免疫测定与酶联免疫吸附试验检测抗环瓜氨酸多肽抗体比较

目的分析酶联免疫吸附试验(ELISA)和电化学发光免疫测定(ECLIA)检测抗环瓜氨酸多肽抗体(抗CCP抗体)的结果,并评价两种方法检测结果的一致性。方法应用ELISA和ECLIA同时检测145例类风湿关节炎(RA)患者(含25例早期RA患者)、155例其他风湿免疫性疾病患者(包括50例骨性关节炎、35例强直性脊柱炎、30例干燥综合征、20例系统性红斑狼疮、10例原发性胆汁性肝硬化和10例系统性硬化症)、50例其他疾病患者和50例健康对照者共400例血清样本的抗CCP抗体含量。用SPSS13.0统计软件对结果进行一致性、敏感性及特异性分析,并分别对3例ECLIA检测高浓度抗CCP抗体血清样本做1∶20、1∶30、1∶40、1∶80和1∶160稀释后进行线性分析。结果 ELISA和ECLIA检测400例血清样本抗CCP抗体的一致性极好;两种方法检测RA患者抗CCP抗体的敏感性和特异性近似,ECLIA分别为77.24%和98.00%,ELISA分别为76.55%和98.00%。3例ECLIA检测高浓度抗CCP抗体血清样本线性回归分析结果显示,样本浓度稀释至1∶160,线性R2值均>0.9。结论 ECLIA和ELISA检测抗CCP抗体具有较好的一致性,且ECLIA线性范围较宽,ECLIA检测抗CCP抗体具有良好的应用前景。     

酶联免疫吸附试验检测猪血清的乙型脑炎抗体的评价

本文报告用酶联免疫吸附试验捕获法和间接法分别检测猪血清乙型脑炎IgM和IgG抗体。酶标法测得的IgM和IgG滴度与血凝抑制试验滴度显著相关。但前者可测出70％的IgG型抗体和63.3％的IgM型抗体,而后者仅56.7％阳性。在乙脑流行季节,两种类型的乙脑抗体出现几乎同样快。IgG可持续终身。IgM仅在短期内检测到,当表示猪乙脑新感染。