三株小鼠白血病和恶性淋巴瘤的免疫组织化学的研究

本文通过ABC免疫组织化学的方法标记ALS,Thy和Anti IgG三种抗血清,研究了L6565,SRS和L783的免疫学分型。实验结果提示这三株瘤细胞均系小鼠T淋巴细胞来源的肿瘤。本文还列举了支持这一论点的其他工作。     

LAC-1克隆细胞与L783白血病细胞肿瘤抗原性的研究

本文对小鼠白血病克隆细胞株LAC-1及其母系L783白血病细胞的抗原性进行研究,证实LAC-1瘤细胞表面存在着正常同系SW-1小鼠所不具有的肿瘤抗原(TSA)成份表达,并可被同系宿主免疫系统识别,产生特异性免疫应答反应,包括对相应肿瘤特异的移植排斥作用,细胞介导的特异性杀伤效应和产生高滴度的特异性结合抗体。同时还证明LAC-1细胞与其母系L783白血病细胞具有高度的TSA交叉反应。     

淋巴瘤细胞（系）克隆和白血病病毒感染细胞系的建立及其分化诱导研究

为了进行白血病病毒病因学研究,本室已先后建成了小鼠L6565病毒性白血病、SRS淋巴瘤和L783移植性白血病等瘤株,对它们的生物学特性已进行了详细的研究。近年来,在动物模型基础上,在体外建立了小鼠SRS-82细胞系及其SAC系列克隆,并应用分离的白     

转输肿瘤特异性T杀伤细胞对L783白血病小鼠的继承性免疫治疗作用

以小鼠L783淋巴细胞性白血病瘤株为模型,通过静脉转输对L783白血病细胞特异的Tc细胞,观察对白血病小鼠的继承性免疫治疗作用。结果表明,在接种L783白血病细胞后6、24小时转输特异Tc细胞对早期白血病小鼠呈现明显的洽疗效果,实验组小鼠均得到保护而长期存活(>6O天)。在接种L783白血病细胞后第5天单纯转输特异Tc细胞对晚期白血病小鼠进行治疗未观察到明显的疗效;联合化疗(三尖杉酯碱)转输Tc细胞使晚期白血病小鼠的存活时间显著延长,与对照组及单纯化疗组小鼠存活时间相比均有显著性差异(P<0.01)。     

同基因型肿瘤特异性T杀伤细胞系的建立及其生物学特性

用自行建立的一株小鼠T淋巴细胞性白血病克隆细胞株(LAC—1),经腹腔免疫同系SW—1小鼠,诱导出表型为Thy1~+、Lyt2~+的T杀伤细胞(Tc).在含TCGF的完全培养液中,建立了体外长期存活和扩增的Tc细胞系,它仅对LAc—1及其母系L783白血病细胞呈现特异性杀伤活性,这一杀伤作用受到MHC的限制.     

感染小鼠白血病病毒的L783V／3T3细胞系的建立及鉴定

L783是上海医科大学病理生理教研室七十年代建立的一株小鼠可移植性淋巴细胞型白血病。用L783发病小鼠的血液、脾脏等组织的无细胞提取液,分别感染NIH-3T3培养细胞,建立了L783小鼠白血病病毒感染的NIH-3T3细胞系(L783V/3T3)。实验结果表明:L783V/3T3细胞的XC合胞形成试验阳性,电镜下可观察到典型的A型和C型病毒颗粒。制备L783V/3T3细胞无细胞提取液,接种新生昆明种乳鼠,能诱发淋巴细胞型白血病。     

病毒性L6565白血病细胞克隆株的建立及其特性研究进展

Ｔ638和Ｌ6565模型是目前国内仅有的两株ＲＮＡ病毒诱发的白血病 ,均属于我国天津 (Ｔ) -上海 (Ｓ) -遵义 (Ｚ)小鼠白血病系统之内[1 ,2 ] 。近年来未见Ｔ638白血病研究的进一步报道 ,情况不详。Ｌ6565病毒性淋巴细胞白血病是由程立等于 1 965年建立的瘤株[3～ 6] 。 1 986年张雷等[7] 应用Ｌ6565白血病小鼠外周血液无细胞提取液感染ＮＩＨ/3Ｔ3细胞 ,在体外建成了Ｌ6565-Ｂ1 细胞系 ,惜已失传。最近 ,殷莲华等[8] 将Ｌ6565白血病小鼠脾脏在灭菌条件下制成细胞悬液后 ,用ＲＰＭＩ 1 640液和 1 0 %小牛血清中培养 2 0代后 ,再用有限稀释法置…     

可移植性小鼠淋巴肉瘤白血病(L7710)的实验研究

可移植性小鼠淋巴肉瘤白血病(L7710)是在615系小鼠上建立的一个新瘤株,现已传至107代,其生长特性已基本稳定,在615系小鼠中用瘤细胞移植,发病率为100％,无自行消退,平均存活时间为21.2±5.2天,为国内迄今所报导的细胞移植性小鼠白血病瘤株中平均存活期最长的。于局部皮下接种L7710白血病细胞后能长出较大的实体瘤,并向全身播散,逐渐发展为典型的白血病,故属肉瘤白血病。根据其病理形态特征、细胞化学和某些膜标志的观察,似乎可以将它初步定为T细胞性淋巴肉瘤白血病。L7710对抗癌药的敏感谱较广,     

逆转录病毒介导的反义C-MYC的抗小鼠L6565白血病作用

目的和方法 :Ｌ6565白血病是我国特有的Ｔ -Ｓ -Ｚ淋巴瘤 /白血病系统中的实验系统的瘤株之一 ,经检测ｃ -ｍｙｃ基因高表达。本文针对ｃ-ｍｙｃ基因构建一个含有小鼠反义ｃ -ｍｙｃ基因片段的逆转录表达载体ｐＧＡＭ ,用磷酸钙沉淀法将ｐＧＡＭ导入表达包装细胞ＰＡ31 7,经筛选获得病毒效价 5× 1 0 5ｃｆｕ/ｍＬ的病毒包装细胞 ,利用ｐＧＡＭ病毒成功的感染了Ｌ6565细胞 ,得到了Ｇ41 8抗性细胞Ｌ6565-ａｓ ,经ＰＣＲ分析病毒载体序列稳定地整合到ＰＡ31 7和Ｌ6565-ａｓ中 ,能够长期表达。结果 :Ｌ6565-ａｓ和对照细胞光镜下形态均为圆形或…     

L783白血病小鼠体内的免疫活性细胞和免疫球蛋白的变化

本文报道沪白 1号(SW1)近交系小鼠腹腔接种L783白血病小鼠脾脏细胞悬液后,胸腺、脾脏和淋巴结中T和B淋巴细胞百分率以及血清中 IgG和 IgM含量的变化。结果表明,淋巴器官除胸腺外,脾脏和淋巴结中的T淋巴细胞百分率明显增高,而B淋巴细胞显著下降。血清中Ig 含量未见明显变化。上述免疫活性细胞有规律性的变化为进一步研究白血病发病机理提供线索,并有可能作为考核抗白血病药物疗效的指标之一。     

小鼠IL-18基因修饰瘤苗的抗白血病作用研究

我们在前期工作中成功制备了IL-18基因修饰的白血病疫苗,为了探讨IL-18基因修饰瘤苗的体内抗白血病作用,实验采用L1210小鼠淋巴细胞白血病模型,在小鼠体内接种IL-18基因修饰瘤苗,观察瘤苗对L1210细胞致瘤性的影响及免疫保护作用,并进一步对其抗白血病作用机制进行了探索。结果显示,IL-18基因修饰瘤苗能够明显延长荷瘤小鼠存活时间,大部分小鼠达到长期生存,且长生存小鼠用野生型L1210细胞二次攻击后大多数仍能长期生存,表明IL-18基因修饰瘤苗有显著的抗白血病作用,并可诱导小鼠产生免疫记忆和免疫保护。机制探讨发现,接种IL-18基因修饰瘤苗后,小鼠脾脏淋巴细胞对L1210肿瘤细胞的CTL及NK细胞杀伤活性明显高于对照组(P<0.05),提示IL-18基因修饰瘤苗能够显著增强抗肿瘤CTL和NK细胞反应。接种瘤苗可使小鼠IFN-γ水平升高,但与对照相比无统计学意义,提示IFN-γ可能在IL-18基因修饰瘤苗诱导的抗肿瘤免疫应答中作用不大。     

免疫重建小鼠抗红白血病的作用研究

目的:观察在免疫重建过程中应用白血病瘤苗对C57BL/6小鼠一般状况、抵御FBL-3细胞攻击及小鼠保护性免疫功能的作用.方法:用同系小鼠脾脏淋巴细胞对照射后的免疫缺陷鼠进行免疫重建,同时用灭活FBL-3细胞皮下注射免疫C57BL/6小鼠,7天后用FBL-3细胞皮下攻击小鼠,观察小鼠的一般状况、成瘤率、瘤块生长情况;通过ELISA法测定外周血IFN-γ含量,以评估细胞免疫作用的强弱;通过病理切片了解瘤块中心及周围细胞浸润情况.结果:免疫重建 瘤苗可以有效提高单纯应用瘤苗所产生的保护性免疫功能,IFN-γ含量明显升高;用FBL-3细胞攻击,成瘤小鼠瘤块生长缓慢,瘤周单个核细胞浸润明显,瘤块内肿瘤细胞坏死明显,生存期明显延长.结论:在免疫重建的同时应用瘤苗,可以加强瘤苗的保护性免疫作用,为临床应用瘤苗治疗时机提供实验依据.     

小鼠β-防御素2肿瘤疫苗的抗白血病作用研究

目的：探讨小鼠β-防御素2（MBD2）肿瘤疫苗的体内抗白血病作用及其机制。方法：小鼠体内接种转染MBD2的L1210小鼠白血病细胞（L1210-MBD2），观察细胞的致瘤性改变；对长期存活的小鼠用野生型L1210细胞进行二次攻击，探讨瘤苗的免疫保护作用；用照射L1210-MBD2瘤苗注射荷瘤小鼠，检测瘤苗的治疗效果。采用乳酸脱氢酶活性法测定接种瘤苗后小鼠脾脏细胞CTL及NK细胞毒活性，ELISA法检测脾细胞产生IFN-γ及IL-12含量。结果：转染MBD2使L1210细胞致瘤性明显降低（P〈0．05），80％小鼠长期生存；对照组小鼠全部死亡。用野生型L1210细胞二次攻击后100％dx鼠仍能长期生存。照射瘤苗能使50％的荷瘤小鼠长期生存，而对照组小鼠则全部死亡，两者之间具有显著性差异（P〈0．05）。接种MBD2瘤苗后，小鼠脾细胞对L1210的CTL及NK杀伤活性明显增强（P〈0．05），产生IFN-γ、IL-12水平显著升高（P〈0．05）。结论：L1210-MBD2瘤苗通过调节机体细胞免疫反应显示出较强的体内抗白血病作用，为淋巴细胞性白血病的免疫治疗提供了新策略。     

瘤苗免疫的实验研究

我们在进行莪术抗癌作用原理的实验研究中,发现用莪术处理的艾氏腹水癌瘤苗免疫昆明种小鼠,与碘乙酸瘤苗一样,均能使动物获得明显的免疫保护效应,进一步用615近交系小鼠的L615白血病作模型,同样发现,用莪术L615瘤苗与X线照射L615瘤苗主动免疫后,均     

抗同系小鼠白血病细胞单克隆抗体的研究

用可移植性小鼠淋巴细胞性白血病腹水瘤细胞克隆株(LAC-1)细胞免疫同系小鼠,常规方法融合、筛选获得四株分泌特异抗体杂交瘤株。所得McAb能特异地与LAC—1细胞结合,但不能与正常或经ConA转化的小鼠胸腺细胞以及其它多种小鼠瘤细胞起结合反应。ELISA检测显示,McAb与LAC—1细胞培养上清液中提取的病毒作用时未发现阳性反应。细胞介导的细胞毒实验表明,将McAb预先与LAC—1细胞孵育后能显著抑制T杀伤细胞对靶细胞的特异性杀伤作用,免疫印迹试验分析发现McAb识别的LAC—1细胞靶抗原分子量为41KD。     

榄香烯处理瘤苗抗原致敏的树突状细胞的抗肿瘤效应研究

本文采用 β 榄香烯处理小鼠H2 2肝癌亚系HCa F ,提取榄香烯瘤苗可溶性上清作为粗制肿瘤抗原 ,制备抗原冲击(pulsed)的树突状细胞 ,研究其抗瘤作用及机制。结果表明榄香烯瘤苗抗原冲击的树突状细胞可诱导对HCa F瘤株的MHC非限制性免疫应答 ,继承性转输后对HCa F瘤株攻击有免疫保护效应 ;体外可激发脾不粘附细胞活化增殖和加强杀瘤细胞活性。     

表达HPV-16结构蛋白的重组痘苗病毒疫苗免疫效果研究

目的研究表达HPV—16结构蛋白L1和12的重组痘苗病毒（rVVL1L2）的免疫效果。方法以重组痘苗病毒rVVL1L2免疫C57BIJ6小鼠，用酶联免疫（ELISA）和酶联免疫斑点（ELISPOT）方法检测重组痘苗病毒诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平；利用C3肿瘤细胞在C57BIJ6小鼠中的成瘤模型，观察重组痘苗病毒在抗肿瘤移植实验和肿瘤生长抑制实验中对小鼠的免疫保护效果。结果重组痘苗病毒rVVL1L2免疫的小鼠，可以检测到针对L1和12特异的抗体、L1165-175肽特异性的、分泌IFN-的T细胞；同时可以观察到免疫后的C57BI/6小鼠，可以有效预防HPV．16相关肿瘤细胞（1．5×10^5C3细胞）的攻击；对已产生的肿瘤，可以延缓肿瘤细胞的生长速度。结论重组痘苗病毒rVVL1L2可以有效诱发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，为研究预防和治疗HPV-16感染的疫苗提供了实验资料。     

树突细胞对Lewis肺癌抗瘤作用的研究

目的：研究经体外骨髓细胞衍生的DC在Lewis肺癌中的抗瘤作用。方法：将肿瘤抗原MUT－1加载的DC（DC－MUT－1）经尾静脉免疫C57BL／6小鼠后，随后将肿瘤细胞接于小鼠皮下，观察DC能否诱发机体的免疫保护。同时检测DC－MUT－1免疫后小鼠脾脏T细胞的CTL活性。结果：经DC－MUT－1免疫后能诱发机体产生对相应肿瘤细胞的持久和特异性的免疫保护作用，体外检测CTL活性显示，免疫小鼠脾脏T细胞对相应肿瘤具有 特异性杀伤。结论：经DC－MUT－1免疫小鼠能诱发机体产生特异性抗肿瘤细胞免疫从而使宿主对随后的肿瘤细胞攻击产生特异性的免疫保护作用。     

一组抗胰腺癌单克隆抗体的制备与初步鉴定

以胰腺癌细胞株SW1990及其裸鼠移值瘤提取的粘液成分分别免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与P3×63g小鼠骨髓瘤进行融合,获得稳定分泌抗体的四株杂交瘤,分别命名为PS-1(细胞免疫获得),PS-2,PS-3,PS-7(提取粘液免疫获得),抗体均属IgM。其对应抗原经用胰酶消化,唾液酸酶消化,过碘酸氧化及氯化铯梯度离心等方法分析,表明PS-1及PS-3的抗原     

逆转录病毒载体介导的反义c-myc抗白血病作用的研究

目的：研究c-myc基因在L6565小鼠白血病发生中的作用以及抑制其表达所起的治疗作用。方法：用逆转录病毒载体pGNC构建一个含有小鼠反义c-myc基因的逆转录病毒表达系统pGNCas。用磷酸钙沉淀法将pGNCas导入包装细胞PA317,筛选获得病毒生产细胞。用pGNCas病毒感染L6565白血病克隆细胞,筛选后,获得抗G418阳性克隆细胞L6565as。PCR方法检测反义c-myc序列是否稳定整合入L6565as细胞中。最后从细胞生长、形态、周期、软琼脂集落形成能力以及c-myc基因表达方面观察其恶性和表型的改变。结果：L6565as细胞形态变圆,大小较一致。生长曲线显示:L6565as细胞生长被抑制;流式细胞仪检测细胞周期：L6565as阻滞于G₀/G₁期,S期细胞减少;软琼脂集落形成试验发现L6565as细胞形成克隆数明显减少。免疫组化检测：L6565as细胞c-myc蛋白表达呈弱阳性,而对照组细胞呈强阳性。结论：c-myc基因在L6565小鼠白血病的发生中起着重要的作用;抑制c-myc的表达,可部分逆转L6565白血病的恶性表型和恶性行为。