两种乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检验重复性与一致性比较

目的评估罗氏与国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检验重复性与一致性分析,为临床应用提供参考。方法采用原装进口罗氏与国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒检测滴度为60、170、1 700、17 000 IU/mL的WHO标准HBV DNA样本各20次,评估两种试剂的可溯源性和可重复性。再检测曾经或正在接受乙肝抗病毒治疗的患者9组(HBV DNA载量分别为50、50~200、~102、~103、~104、~105、~106、~107、~108IU/mL),每组20例,评估两种试剂的一致性。结果 WHO标准HBV DNA样本检测得到罗氏检测试剂ICC值为0.93(F=12.51,P0.0001),国产检测试剂为0.82(F=8.72,P0.0001),可得罗氏检测重复性优于国产组。通过两组临床血清检测的检测结果进行相关性分析结果得两者相关系数r=0.849,P0.0001,相关性良好。两组临床血清检测的Bland-Altman图,可见两种检测试剂结果差值90%的位点位于95%置信区间参考范围内,说明两种检验方法间一致性良好。结论罗氏乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检测结果与国产试剂相比,一致性良好,但罗氏乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的重复性优于国产试剂,是乙肝患者抗病毒治疗过程中病毒载量监控的金标准。     

一种国产HIV核酸定量试剂与进口试剂的对比研究

目的对比研究国产1型艾滋病病毒(HIV-1)核酸定量试剂与两个进口试剂的相关性和差异,以期应用国产核酸定量试剂评价中国抗病毒治疗患者病毒学效果的可行性。方法应用美国国家卫生研究院病毒学质量评价项目(VQA)发放的HIV-1核糖核酸(RNA)血清样品,比较一种国产核酸定量试剂与国内市场常规使用的两个进口试剂,在测定病毒载量上的相关性和一致性。对国产和进口核酸定量试剂检测HIV-1病毒载量的结果进行配对t检验,线性回归分析和Bland-Altman分析。结果国产试剂和两个进口试剂的检测结果的线性相关系数R2分别为0.94、0.93(P0.000 1);Bland-Altman分析三种试剂病毒载量的结果具有较高的一致性,国产试剂定量值与VQA病毒载量值线性相关系数R2=0.97,P0.000 1,定量单位转换系数为1IU/mL=0.79拷贝/mL。结论国产HIV-1核酸定量试剂与进口试剂在定量检测结果上有较好的相关性和一致性,而且国产试剂在价格上具有优势,在一定范围内可以应用于抗病毒治疗效果的评价。     

某国产HIV-1病毒载量检测试剂的检测性能评估

目的对1型艾滋病病毒(HIV-1)的国产病毒载量检测试剂进行检测性能评估。方法应用系列稀释的定值质控品分析某国产病毒载量检测试剂的检测线性度和精密度,应用81份HIV-1感染阳性样本和30份阴性样本比较该国产病毒载量检测试剂与进口TaqMan病毒载量检测试剂检测结果的相关性和一致性。结果国产病毒载量检测试剂对系列浓度定值质控品检测结果的线性相关系数为R2=0.997 0。对不同浓度定值质控品检测结果的批间和批内检测变异系数均10%。与进口TaqMan病毒载量检测试剂相比较,两种检测试剂对临床样本检测结果之间的相关性系数为R2=0.792 3。比较两种试剂检测结果偏差的Bland-Altman分析显示偏差均值为-0.01 Log(拷贝/mL)。两种试剂判定阳性和阴性样本的检测符合率为100%。以1 000拷贝/mL为检测线时,两种试剂检测结果的符合率为93.83%;以5 000拷贝/mL为检测线时,两种试剂检测结果的符合率为91.36%。结论某国产病毒载量检测试剂具有较好的检测线性和精密度,与进口TaqMan病毒载量检测试剂相比具有较好的相关性和一致性,整体检测性能良好可适用于大部分临床检测需求。     

不同HIV-1病毒载量定量检测方法的比较研究

目的 评价不同方法检测Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)病毒载量的相关性及一致性,探讨国产实时荧光核酸定量检测试剂盒用于临床检测HIV-1病毒载量的可行性.方法 收集61份未治疗的HIV感染者/艾滋病(AIDS)病人血浆标本及57份抗病毒治疗后的血浆标本,使用深圳匹基生物工程股份有限公司实时荧光聚合酶链反应(实时荧光-PCR...     

运用实时荧光定量RT-PCR和ELISA方法定量检测SHIV的对比分析

目的建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)的RNA载量检测方法,通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较,成为监测SHIV病毒体外复制过程的常用方法。方法体外转录制备RNA标准品,利用TaqMan EZ逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒的反应体系和针对SHIV gag保守区91个碱基的Taq-Man探针与引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR。三种SHIV感染性分子克隆体外转染293T细胞,在不同的时间点采样,通过实时荧光定量RT-PCR和ELISA两种方法监测SHIV病毒复制过程。结果两种方法监测的病毒复制过程基本一致,转染后2~48小时病毒复制出现明显的对数生长期,之后进入平台期,p24浓度大约103pg/ml,而RNA载量大约在108拷贝/ml。两者具有很好的相关性(r2=0.834;P<0.001)。实时荧光定量RT-PCR灵敏度更高,检测范围更广,费用更低。结论所建立的一步法检测SHIV病毒载量的实时荧光定量RT-PCR方法,可以作为监测SHIV体外扩增的常用方法。     

bDNA和NASBA法定量检测HIV-1病毒载量的比较研究

目的比较分支DNA杂交实验(branched DNA,bDNA)和核酸序列扩增实验(Nucleic acid sequence-based am-plification,NASBA)两种方法检测人类免疫缺陷病毒1型病毒(HIV-1)病毒载量间的一致性。方法对25例HIV感染者/艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)患者血浆标本同时用bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量,并用流式细胞术检测患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果bDNA法及NASBA法测得HIV-1病毒载量平均值分别为(4.398±0.580)log拷贝数/ml和(4.488±0.602)log拷贝数/ml,差异无统计学意义(t=1.210,P>0.05);两种方法检测出的病毒载量呈显著直线相关(r=0.8004,P<0.001),且与患者的CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值均呈显著直线负相关。结论bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量具有高度一致性,在实际工作中均可选用。     

两种国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检测效能评价

比较两种国产不同核酸提取方法定量检测乙型肝炎病毒（HBV）核酸试剂的检测效能。方法选择经抗病毒治疗且HBV DNA 载量在﹤1×10^4 IU/ml的乙型肝炎患者血清标本36份,采用两种国产HBV核酸定量检测试剂盒平行检测HBV DNA,对阳性血清进行梯度稀释后再检测,从定量线性范围、准确性、灵敏度、特异性等方面比较两种试剂的差异。结果在36例临床血清中,14份经科华试剂检测的结果为﹤500 IU/ml,而圣湘试剂检测的结果仍﹥1.00×10^3 IU/ml;对其中获得检测数据的31份标本进行两种试剂检测结果的相关性分析,发现一致性较好（r=0.817,P﹤0.05）;两种方法检测乙型肝炎患者血清HBV DNA的阳性率分别为55.6％和94.4％,差异具有统计学意义（x2=12.07,P=0.000）;对强阳性血清进行梯度稀释后定量检测显示,两种试剂检测水平的平均值与理论水平的线性相关性较好（湖南圣湘r=0.999,上海科华r=0.992）,但圣湘所有检测的相对偏差均在±0.3logIU/ml之内,而科华有两次检测的相对偏差超出了±0.3logIU/ml范围,提示圣湘试剂检测结果更稳定,使用纳米磁珠核酸提取法的检测结果较煮沸法更加准确。结论以纳米磁珠为提取核酸方法不仅具有更广的线性范围,同时可显著提高国产HBV DNA检测试剂的灵敏度和准确性。     

核酸定量检测应用于HIV-1感染诊断的研究

目的探讨核酸定量检测在1型艾滋病病毒(HIV-1)感染诊断中的应用。方法选取云南省德宏州216例样本,包括136例HIV-1阳性母亲所生活产婴儿和80例HIV-1阳性成人,分别用HIV-1核酸定性和定量方法进行检测,综合对比分析2种方法的检测结果。结果 216例样本的核酸定性和定量检测试验一致性极好,53例样本(50例成人样本和3例婴儿样本)核酸阳性,血浆病毒载量5 000拷贝/mL。随访50例成人样本的蛋白印迹试验(WB),均为确证HIV-1抗体阳性。163例阴性样本(30例成人样本和133例婴儿样本)核酸阴性,血浆病毒载量低于检测下限。结论当血浆病毒载量5 000拷贝/mL,核酸定量检测试验对于HIV-1感染阳性样本是一种有效的实验室诊断方法。     

HIV急性/早期感染者队列低病毒载量分布及对HIV核酸诊断的影响

目的明确低病毒载量在艾滋病病毒(HIV)感染后不同阶段的占比,低病毒载量的相关因素及对HIV感染诊断的潜在影响。方法 293例沈阳市男男性行为者HIV急性/早期感染队列2008-2019年随访获得的1 673人次病毒载量数据,分析5 000拷贝/mL的低病毒载量者在感染后不同阶段的构成比例;分析上述感染者的人口学资料、病毒基因型以及CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)计数等潜在影响因素与低病毒载量的关系,并评估低病毒载量对HIV感染诊断率的影响。结果在1 673人次病毒载量结果中,病毒载量5 000拷贝/mL者占比17.1%;感染后不同阶段低病毒载量者占比不同,感染0.5年内占比低于其他时期(14.1%vs. 26.8%,P0.001)。多因素Logistic回归分析显示,CD4细胞计数 500个/mm~3与低病毒载量有关(P 0.05)。137人次蛋白印迹试验(WB)不确定的早期感染者样本中,病毒载量 5 000拷贝/mL者占比85.4%;WB不确定联合核酸定量检测 5 000拷贝/mL以上判断为HIV感染者,诊断HIV感染的敏感性为85.4%,将2 000拷贝/mL或者1 000拷贝/mL作为诊断阈值时,诊断HIV感染的敏感性分别提高到92.7%(P=0.053)及96.4%(P=0.002)。结论低病毒载量在HIV感染自然进程中占比较高,但在感染早期占比相对低;降低核酸定量检测的诊断阈值,可进一步提高HIV感染早期的诊断率。     

男男性行为者HIV感染急性期筛查诊断和治疗工作模式探索

目的应用艾滋病病毒(HIV)核酸检测技术,对男男性行为者(MSM)中HIV初筛检测阳性,蛋白印迹试验(WB)确证结果为不确定者和HIV初筛检测阴性者进行筛查,及时诊断MSM中的HIV急性期感染者,尽快启动抗病毒治疗,探索我国MSM中HIV急性期感染筛查诊断和治疗的工作模式。方法 2015年7月至2016年6月,通过方便样本的招募方式,选取天津地区的MSM 2 000人,同时使用艾滋病第三代和第四代快速检测试剂进行平行检测,阴性样本统一进行集合核酸(HIV Pooled PCR)检测,对酶联免疫吸附试验(ELISA)结果为阴性、WB检测结果为阴性和不确定者接受扩增核酸检测(NAAT),结果为阳性者且检测值≤1 000拷贝/mL,进行1-2周随访,并在随后接受核酸和WB检测,阳性检测者检测值1 000拷贝/mL,则重复扩增核酸检测步骤,并最终按照检测结果判定HIV急性期感染者。结果共招募符合条件的调查对象1 914人,第三代和第四代快速检测试剂同时检测出阳性73人。4例WB不确定结果样本经过两次NAAT检测被诊断为HIV感染。通过集合核酸检测发现3例结果为阳性的样本。共6例HIV急性期样本接受抗病毒治疗,6例接受治疗样本的病毒载量分别降至46拷贝/mL、230拷贝/mL、72拷贝/mL、20拷贝/mL、622拷贝/mL和48拷贝/mL。结论使用第三代快速检测试剂开展HIV急性期检测工作仍具有较大实际意义和可行性,同时在日常HIV检测工作中应充分重视和发挥核酸检测,减少MSM在HIV检测过程中,从其WB确证结果不确定到随访至其WB检测结果阳性中间传播HIV的风险。