姜黄素对人肾癌Caki-2细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的:观察姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法:应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞12、24、36、48、72、96 h,采用MTT法评价姜黄素对Caki-2细胞的生长抑制作用;应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞36、48、72、96 h,采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒评价姜黄素对Caki-2细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测姜黄素对Caki-2细胞H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,β-actin作为内参蛋白。结果:不同浓度的姜黄素能显著抑制Caki-2细胞生长,36、48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;不同浓度的姜黄素能显著诱导Caki-2细胞凋亡,48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;姜黄素作用后,Caki-2细胞中H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达显著增加,ERK1/2、β-actin蛋白表达与空白组相比无统计学差异。结论:姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞有显著的生长抑制作用,其机制可能与通过抑制H-Ras蛋白表达、直接或间接下调ERK信号通路蛋白表达相关;同时,姜黄素对Caki-2细胞有显著的凋亡诱导作用,其机制可能与上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达相关。     

蝎毒抗癌多肽对卵巢癌细胞株生长抑制及凋亡的影响

目的:研究蝎毒抗癌多肽体外能否抑制卵巢癌细胞株3AO的生长及诱导其发生凋亡.方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测蝎毒抗癌多肽体外对卵巢癌细胞株3AO的生长与增殖的影响、流式细胞仪的方法进行凋亡峰的检测.结果:蝎毒抗癌多肽体外作用于卵巢癌细胞株3AO后,能明显抑制其生长,并呈剂量效应关系.流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰,且峰值也呈剂量效应关系.结论:蝎毒抗癌多肽体外能抑制卵巢癌细胞株3AO的生长,并能诱导其发生凋亡.     

芦荟大黄素对人结肠癌细胞SW480增殖周期及凋亡的影响

目的:探讨芦荟大黄素对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响.方法:采用甲基噻唑(MTT)比色法和生长曲线测定不同浓度芦荟大黄素在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化.结果:芦荟大黄素可在G0/G1期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖,使S期细胞比率降低;在一定范围内,芦荟大黄素的浓度越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高.结论:芦荟大黄素能抑制人结肠癌细胞SW480细胞生长,并诱导细胞凋亡而阻断细胞周期.     

漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2增殖、生长周期和细胞凋亡的影响

目的 观察漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制.方法 采用 MTT比色法研究漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布.结果 MTT实验结果表明较高浓度的漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,200 μmol·L-1 的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2细胞72 h后,对细胞生长的抑制率最高可达53.78%,同对照组相比(P<0.01);流式细胞术实验结果表明,不同浓度的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2 12 h后,可使G1期肿瘤细胞增多,引起G1期阻滞,作用时间为24 h、48 h时,则可引起S期阻滞;同时,不同浓度的漆树黄酮在不同的时间点都可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰.结论 漆树黄酮具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,其机制可能与引起细胞周期阻滞和诱导凋亡有关.     

吴茱萸碱和盐酸小檗碱对HT29细胞生长抑制及凋亡的影响

目的探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞的生长抑制及其诱导细胞凋亡的作用。为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法采用活细胞计数试剂盒（CCK-8），AnnexinV—FITC／PI双染色流式细胞术，检测不同浓度的盐酸小檗碱和吴茱萸碱作用后HT29细胞增殖活性和细胞凋亡的变化。结果吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后，增殖明显受到抑制，呈剂量和时间依赖性；流式细胞仪检测表明吴茱萸碱和盐酸小檗碱能够诱导细胞凋亡，呈剂量依赖性。倒置显微镜观察细胞呈现缩小、变圆、皱缩、脱壁等增殖变慢的形态学特征。结论吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用。该抑制作用与诱导细胞凋亡相关。     

益气化瘀法对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡相关蛋白表达影响的研究

目的:研究具有益气化瘀功效的中药复方化瘤方对体外培养子宫肌瘤细胞增殖相关蛋白(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Fas/Fas-L)表达的影响。方法:制备化瘤方、宫瘤宁、米非司酮药物血清,采用免疫细胞化学方法检测药物作用后增殖细胞核抗原(PCNA),凋亡相关基因(Bcl-2)蛋白、Fas及其配体Fas-L变化。结果:3种药物血清均能明显下调PCNA、Bcl-2、Fas及其配体Fas-L蛋白在肌瘤细胞中的表达(P<0.001)。结论:中药复方化瘤方通过降低PCNA蛋白表达,直接抑制子宫肌瘤细胞增殖;调节Bcl-2、Fas-L蛋白表达诱导子宫肌瘤细胞凋亡。     

姜黄素对人肾透明细胞癌细胞株786-O作用的实验研究

目的探讨姜黄素对人肾透明细胞癌细胞786-O体外增殖及其诱导细胞凋亡的影响。方法 MTT法观察对癌细胞生长的影响,DAPI凋亡染色检测姜黄素对细胞凋亡的诱导作用,Western Blot检测抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果MTT结果表明姜黄素对细胞786-O具有较好抑制作用,25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度的姜黄素处理48h对细胞增殖抑制率分别为(45.90±1.78)%、(79.76±1.49)%、(91.11±1.38)%,并呈现一定剂量依赖关系;凋亡染色显示细胞在作用48h后,有典型的凋亡形态出现,且随着浓度的增大作用更为明显;Western Blot显示姜黄素可下调Bcl-2蛋白表达,50μmol/L和100μmol/L浓度作用较为明显。结论姜黄素可抑制人肾透明细胞癌细胞786-O的生长,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。     

克瘤丸对结肠癌细胞HT-29细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 观察克瘤丸对人结肠癌细胞生长的影响及其作用机制.方法 将4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml浓度克瘤丸作用于HT-29细胞24～48h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测克瘤丸对HT-29细胞增殖的影响,AnnexinV单染法检测克瘤丸对HT-29细胞凋亡的影响,流式细胞仪检测细胞周期的分布情况. 结果 与对照组比较,浓度为4、2、1、0.5mg/ml克瘤丸作用HT-29细胞48h,OD值、48h抑制率差异均有统计学意义(P＜0.01);4、2、1mg/ml浓度克瘤丸作用HT-29细胞48h,OD值、48h抑制率均明显优于0.25mg/ml及0.5mg/ml浓度克瘤丸(P＜0.01).与1mg/ml浓度比较,2mg/ml、4mg/ml组凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05).4mg/ml时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区,与1mg/ml、2mg/ml组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 克瘤丸对人结肠癌细胞HT-29的增殖具有抑制作用并能够引起该细胞的凋亡.     

姜黄素逆转人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT-116/L-OHP的耐药性

目的:构建人结肠癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株HCT-116/L-OHP,观察姜黄素(curcumin,Cur)对其耐药的逆转作用,并探讨其可能的耐药机制。方法:采用浓度梯度递增法,逐步提高作用于亲代人结肠癌细胞HCT-116的L-OHP浓度,建立耐L-OHP的细胞株HCT-116/L-OHP;通过cell counting kit-8(CCK-8)法检测L-OHP和Cur对HCT-116以及HCT-116/L-OHP细胞的细胞毒性,观察Cur能否逆转耐药;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测耐药相关蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测相关mRNA的改变。结果:成功建立了耐L-OHP的人结肠癌耐药细胞株并命名为HCT-116/L-OHP,其耐药指数为12. 6。与HCT-116细胞株比较,HCT-116/L-OHP细胞株中切除修复交叉互补基因1(ERCC1)蛋白及mRNA表达水平显著上升(P 0. 01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),谷胱甘肽-巯基-转移酶-π(glutathione-s-transferase-π,GST-π),多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein, MRP),P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),凋亡抑制基因(Survivin)的表达亦显著上升(P 0. 01);不同浓度姜黄素(5,10,20,30,40μmol·L-1)作用后,ERCC1表达下降(P 0. 01),Bcl-2,GST-π,MRP,P-gp,Survivin表达也有不同程度下降(P 0. 05)。结论:HCT-116/L-OHP细胞株具有稳定的耐药性,其耐药机制可能为ERCC1的表达上调,而导致Bcl-2,GST-π,MRP,P-gp,Survivin等相关蛋白表达上调,使肿瘤细胞获得耐药性。姜黄素对HCT-116/L-OHP的耐药性具有逆转作用,其作用机制可能是通过降低ERCC1的表达,从而下调Bcl-2,GST-π,MRP,P-gp,Survivin等耐药相关mRNA及蛋白的表达,增加肿瘤对L-OHP的敏感性,从而逆转肿瘤细胞的耐药。     

基于原子力显微镜对华蟾素和姜黄素联合诱导Hela细胞凋亡的初步研究

目的:探讨华蟾素和姜黄素联合对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡率,原子力显微镜(AFM)探测细胞形貌、细胞表面超微结构及粗糙度变化。结果:MTT实验显示,华蟾素和姜黄素联合对Hela细胞的增殖抑制率(64.04%±1.29%～75.07%±2.19%)较华蟾素单独用药(11.30%±0.6%～22.04%±0.96%)明显增加。流式细胞术结果表明,华蟾素和姜黄素联合诱导Hela细胞早期凋亡率(11.97%±1.36%～49.2%±2.36%)显著大于华蟾素单独用药(8.05%±0.21%～16.43%±0.29%),并且呈剂量依赖性。原子力显微镜(AFM)成像表明,随着联合用药浓度增大,细胞逐渐坍塌,核染色质浓缩和边集,最后核膜破裂,核基质结构虽然存在但遭破坏,呈现凋亡现象;膜表面颗粒粒径增大,平均粗糙度增加。结论:华蟾素和姜黄素联合能够增强诱导Hela细胞凋亡作用,两者联用为协同效应,这为宫颈癌治疗的药物选择提供了新的思路。     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

姜黄素对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素诱导人骨肉瘤细胞株MG63凋亡的机制。方法不同浓度(0、25、50和75μM)姜黄素作用MG63细胞24 h后,CCK8法检测细胞体外增殖,TUNEL染色法检测细胞凋亡,Western blotting检测AKT/Bax-Bcl-2/Caspase 3等内源性凋亡途径相关蛋白表达水平。结果 CCK8实验结果显示在0~75μM范围内,50μM以上浓度的姜黄素能显著抑制MG63增殖,诱导细胞凋亡、p-AKT蛋白水平明显降低,而Bax蛋白及剪切的Caspase 3蛋白水平则显著增高。结论姜黄素通过影响AKT/BaxBcl-2/Caspase 3途径诱导MG63细胞凋亡。     

姜黄素对体外培养异位内膜细胞生长及凋亡的影响

目的 观察体外培养的异位子宫内膜细胞(异位内膜细胞)加入姜黄素后的生长情况及形态学变化,并检测其凋亡率及caspase-3基因表达,探讨子宫内膜异位症(内异症)的药物治疗.方法 22例内异症患者的异位内膜离体组织分离为单细胞后进行培养,在相同的生长期加入不同剂量(0、10、50μmol/L)的姜黄素后,观察其生长状况;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;S-P免疫组化测定异位内膜细胞caspase-3基因的表达.结果 加入姜黄素后,细胞生长速度减慢,其凋亡率较未用药组增加,且呈时间剂量依赖性,caspase-3表达较未用药组增加,具有显著差异.结论 姜黄索能明显抑制异位内膜细胞的体外生长;上调caspase-3基因蛋白的表达、诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

姜黄素对膀胱癌EJ细胞的作用研究

目的:观察姜黄素对膀胱癌系细胞EJ的体外作用,并探讨其可能的作用机制.方法:应用光镜形态学,MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察了5、10、20 mg/L姜黄素在体外对膀胱癌EJ细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,以及对细胞DNA含量,对NF-κB、Cyclin D1表达的影响.结果:所有浓度组姜黄素均对膀胱癌EJ细胞有明显的生长抑制作用,抑制率≥(27.5±3.1)%(P＜0.05).10 mg/L以上浓度均可出现显著的诱导调亡作用,凋亡率≥4.6%±1.8%(P＜0.05),下调NF-κΒ(表达率≤35.8%±4.2%,P＜0.05),下调Cyclin D1的表达(表达率≤29.7%±3.2%,P＜0.05).姜黄素导致的细胞周期阻滞以G1期为主,使S期细胞比例显著减少(P＜0.05).结论:姜黄素对膀胱癌细胞系EJ有明显的生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制与其影响细胞周期和下调NF-κB、Cyclin D1的表达相关,显示了姜黄素用于治疗膀胱癌的可能性.