白介素-4和白介素-13促进人肺成纤维细胞 ADAM33基因的表达

目的探讨白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)对人肺成纤维细胞ADAM33(a disintegrin and a metalloproteinase 33, ADAM33) mRNA表达的影响.方法以不同浓度的IL-4或/和IL-13刺激培养的人肺成纤维细胞(MRC-5),然后用实时定量反转录多聚酶链反应(real-time RT-PCR)法测定ADAM33 mRNA表达的变化.结果人肺成纤维细胞上存在着ADAM33 mRNA的表达,当分别以10 ng/mL的IL-4或IL-13刺激时, ADAM33 mRNA的表达增加呈现时间依赖性,至24 h达到高峰.随着IL-4和IL-13刺激浓度的增加,ADAM33 mRNA的表达也明显增加以100 ng/mL的IL-4和100 ng/mL的IL-13刺激时,ADAM33 mRNA的表达较未刺激细胞分别增加了(9.49±2.83)倍和(14.21±3.35)倍(P<0.01);而以10 ng/mL的IL-4和10 ng/mL的IL-13联合刺激时,ADAM33 mRNA的表达较未刺激细胞增加了(15.06±4.57)倍(P<0.01).结论 IL-4和IL-13能明显促进肺成纤维细胞ADAM33 mRNA的表达.     

应用短发卡RNA慢病毒质粒载体抑制去整合素金属蛋白酶33的表达

去整合素金属蛋白酶33(a disintegrin and met-alloproteinase33,ADAM33)是最近发现的ADAM家族成员,与支气管哮喘和气道高反应性有关。本研究旨在通过构建ADAM33小发卡RNA(smallhairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,抑制AD-AM33基因在小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)中的表达,为进一步研究     

IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达及其受体IL-22R1在人气道细胞中的表达

\[摘要\]目的检测IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达,检测IL-22R1在人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞中的表达,寻找IL-22作用的靶细胞。方法应用ELISA法检测36例支气管哮喘患者及20例正常对照者血清IL-22及IL-17的表达,同时检测36例患者肺通气功能,根据1秒率(FEV1/FVC)及FEV1占预计值的百分比将支气管哮喘患者分为支气管激发试验阳性组(17例)和支气管舒张试验阳性组(19例)。应用实时定量PCR检测人气道平滑肌细胞、人肺成纤维细胞、人气道上皮细胞IL-22R1 mRNA的表达,用免疫荧光以及蛋白质印迹法检测IL-22R1蛋白在上述3种细胞中的表达。结果支气管哮喘患者血清IL-22及IL-17水平与正常对照组相比差异无统计学意义,但支气管舒张试验阳性组患者血清IL-22和IL-17水平高于支气管激发试验阳性组(P<0.05)。IL-22R1 mRNA及蛋白在上述3种细胞均有表达。结论IL-22可能涉及支气管哮喘的发生发展过程,气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞、人气道上皮细胞可能均是IL-22发挥作用的靶细胞。     

ADAM33新认识

定位于20p13ADAM33基因已被认为是哮喘易感基因。ADAM33在间质细胞限制性表达,参与气道结构的改变,与支气管高反应性和加速肺功能下降有关。ADAM33影响疾病的表型,可作为一个主要的形态形成修复基因,可能与慢性阻塞性肺疾病和银屑病相关。越来越多的研究发现,对ADAM33的认识不再局限于哮喘,该基因变异对疾病表型的的影响尚须探索。     

ADAM15在支气管哮喘表达及意义

目的：研究整合素金属蛋白酶15（a disintegrin and metalloproteinase 15,ADAM15）在支气管哮喘中表达及可能机制。方法：收集本院32例哮喘患者及同期16例健康对照的临床资料及血清标本,酶联免疫吸附法检测血清ADAM15水平,分析其与外周血嗜酸性粒细胞数、血清总IgE相关性。构建OVA诱导的过敏性哮喘小鼠模型,免疫组化观察小鼠肺组织ADAM15表达部位和变化。不同细胞因子刺激人支气管上皮细胞系（16HBE）,分别用实时定量PCR法和蛋白质免疫印迹法检测细胞ADAM15 mRNA和蛋白表达。结果：与对照组［（398.90±22.13）pg/mL］相比,哮喘患者血清ADAM15水平明显增高［（749.5±132.3）pg/mL,P=0.023］,与血清总IgE水平呈正相关（P=0.001 6,r=0.542 5）。ADAM15主要表达于过敏性哮喘小鼠肺组织支气管上皮细胞,其表达量较对照组小鼠升高。IL?13可上调支气管上皮细胞ADAM15 mRNA及蛋白水平。结论：哮喘中ADAM15表达增加,可能与IL?13介导的哮喘气道炎症有关。     

综 述白介素-33及其介导的哮喘发病机制新进展

支气管哮喘（简称哮喘）是由多种细胞,包括炎性细胞（嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞等）、气道结构细胞（气道平滑肌细胞及上皮细胞等）和细胞组分共同参与的气道慢性炎症性疾病。自2005年研究发现IL-33为IL-1家族中的新成员,通过IL-33/ST2信号途径介导哮喘的发病机制,对深入探索哮喘的发病机制迈出新的台阶,并为哮喘的临床治疗带来一番新的生机。本文就IL-33及其参与哮喘的发病机制及近几年研究新进展,特别是在介导气道炎症、气道重塑方面作一综述。     

ADAM33基因多态性对慢性阻塞性肺疾病肺功能影响的研究进展

慢性阻塞性肺疾病的发病机制是炎性细胞参与的多因素过程,其发病原因与个体因素、环境因素及遗传因素有关。ADAM33基因能够选择性表达于间质细胞,参与气道重构过程,是首次确定的支气管哮喘和气道高反应性相关基因。ADAM33基因的单核苷酸多态性(SNPs)通过生物体对某种致病因素易感来改变气道炎性反应发展过程,使气道的炎性细胞数量增多、肺功能下降。因此,为明确ADAM33基因对COPD中肺功能下降的作用,有助于此类疾病的治疗,文章对ADAM33基因多态性对COPD肺功能的影响进行综述。     

白细胞介素-33及其介导的哮喘发病机制新进展

<正>支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞,包括炎性细胞(嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞等)、气道结构细胞(气道平滑肌细胞及上皮细胞等)和细胞组分共同参与的气道慢性炎症性疾病。自2005年研究发现白细胞介素-33(IL-33)为IL-1家族中的新成员,通过IL-33/ST2信号途径介导哮喘的发病机制,对深入探索哮喘的发病机制迈出新的台阶,并为哮喘的临床治疗带来一番新的生     

IL-25通过nuocyte细胞诱导哮喘小鼠气道重塑

目的 探索白细胞介素-25(IL-25)通过nuocyte细胞对哮喘小鼠气道重塑的作用。 方法 30只SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为对照小鼠组、哮喘小鼠组、抗IL-25小鼠组,每组10只,鸡清卵蛋白(OVA)诱导哮喘模型。分离培养哮喘小鼠组nuocyte细胞,并分为对照细胞组、IL-25细胞组、抗IL-25细胞组。HE染色观察肺组织变化,流式细胞法计数肺泡灌洗液(BALF)中nuocyte细胞,ELISA法检测BALF及细胞上清液中IL-4、IL-13含量,免疫组化、Western blotting及RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ胶原蛋白(collagen-Ⅰ)在肺组织中的表达。 结果 与对照小鼠组相比,哮喘小鼠组BALF中IL-4、IL-13表达升高,nuocyte细胞增多,α-SMA和collagen-Ⅰ表达升高(P<0.05),而抗IL-25小鼠组表达无明显变化(P>0.05);与对照细胞组相比,IL-25细胞组上清液IL-4、IL-13表达增高(P<0.05),抗IL-25细胞组上清液IL-4、IL-13表达无明显变化(P>0.05)。 结论 IL-25可能通过nuocyte细胞促使TH2型细胞因子分泌,导致哮喘小鼠气道重塑。     

麻黄-甘草药对抑制过敏性哮喘的效应及机制初探

目的 研究麻黄-甘草药对对过敏性哮喘的影响,并初步探讨其作用机制。方法 建立屋尘螨（HDM）诱导的过敏性哮喘模型,造模同时给予麻黄-甘草药对提取物（MG）。使用无创肺功能仪检测小鼠气道反应性,HE染色观察小鼠肺组织病理学变化,Masson染色观察小鼠肺组织的胶原沉积情况,进行血液嗜酸性粒细胞（EOS）计数,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1及血清IgE的表达,免疫组化检测肺组织E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和TGF-β1蛋白表达情况。结果 MG可显著降低气道高反应性,抑制BALF及肺组织IL-4、IL-5和IL-13的表达,降低血液EOS及血清IgE的表达,并且减轻肺组织的炎症浸润及胶原沉积。进一步结果表明MG可抑制肺组织TGF-β1的表达,上调E-cadherin以及下调N-cadherin、Vimentin、α-SMA的表达。结论 MG能够通过抑制支气管上皮间质转化,从而缓解气道的炎症状态以及改善哮喘的气道重塑,进而发挥对过敏性哮喘的治疗作用。      

竞争性逆转录-聚合酶链反应对哮喘患者诱导痰白细胞介素-10基因表达的定量分析

目的：建立竞争性逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）定量方法，监测哮喘患者白细胞介素-10（IL—10）基因的表达水平，探讨IL-10在哮喘气道炎症中的作用和临床意义。方法：用酶切法构建IL-10内标分子。用已知量的该内标分子，通过竞争性RT—PCR对哮喘组（30例）和对照组（29例）的诱导痰和外周血IL-10mRNA进行定量分析。结果：哮喘发作期患者的诱导痰和外周血绝大多数未检测到IL-10mRNA，部分缓解期患者有少量IL-10mRNA表达。健康对照者外周血和诱导痰均有IL-10mRNA表达。结论：哮喘患者的气道炎症过程与IL-10基因表达有关，且存在IL—10转录水平的合成障碍。     

γ-氨基丁酸A受体与哮喘关系的研究进展

支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,随着病情的进展可产生不可逆的气道狭窄和气道重塑[1]。目前支气管哮喘的病理生理变化还不十分清楚。研究发现支气管上皮细胞存在γ-氨基丁酸（GABA）合成酶GAD65/67及γ-氨基丁酸受体（GABAR）,构成完整的GABA系统,与肺生理功能如气道黏液过度分泌、气道平滑肌的收缩、气道重塑等有密切关系。     

白细胞介素-4对支气管上皮细胞表达嗜酸性粒细胞趋化因子-3的影响

目的:研究嗜酸性粒细胞趋化因子-3(eotaxin-3)在支气管上皮细胞的表达以及Th2细胞因子白细胞介素-4(IL-4)对其表达的调节,探讨支气管上皮细胞和IL-4在气道变态反应性炎症中的作用.方法:以BEAS-2B细胞和NHBE细胞为研究对象,用IL-4刺激细胞24 h,RT-PCR法检测eotaxin-3在mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中eotaxin-3蛋白的表达.结果:未经处理的支气管上皮细胞不表达eotaxin-3,用IL-4刺激细胞24 h后,可见mRNA和蛋白水平的eotaxin-3的明显表达,IL-4的这种诱导作用呈浓度依赖性增强.结论:支气管上皮细胞不仅是一种屏障细胞,也是一种效应细胞,在炎症介质IL-4的刺激下能表达eotaxin-3,可能是其参与支气管哮喘嗜酸性粒细胞炎症的机制之一.     

TGF-β1对支气管哮喘病人肺成纤维细胞的作用

目的通过观察转化生长因子β1(TGF-β1)对支气管哮喘病人肺成纤维细胞增殖和分泌的影响,探讨二者在支气管哮喘气道重塑中的作用。方法采用组织块贴壁培养方法,分离和原代培养哮喘病人肺成纤维细胞,免疫荧光法鉴定。以0、1、5、10μg/L TGF-β1分别作用肺成纤维细胞48h,MTT法测定成纤维细胞增殖情况,RT-PCR法测定肺成纤维细胞Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)mRNA表达水平。结果组织块贴壁法成功地培养出了肺成纤维细胞。免疫荧光法鉴定证明,原代培养出的细胞为肺成纤维细胞。不同浓度的TGF-β1均可促进哮喘病人肺成纤维细胞增殖,诱导哮喘病人肺成纤维细胞CollagenⅠmRNA的表达水平上调,呈浓度依赖性(F=44.723、24.704,P<0.05)。结论在哮喘发病机制中,TGF-β1可促进肺成纤维细胞的增殖,合成和分泌CollagenⅠ,从而引起气道黏膜下纤维化和胶原沉积,导致哮喘病人气道重塑。     

白细胞介素33与哮喘关系的研究进展

白细胞介素(IL)33属IL-1家族成员,可通过结合到ST2和IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAc P)异二聚体复合物产生激活信号。IL-33组成性或诱导性地表达于体内多种组织或免疫细胞。其一方面可诱导表达ST2的T细胞增殖、分化,分泌辅助型T细胞(Th)2型细胞因子,另一方面可激活固有淋巴细胞分泌IL-13,从而导致气道炎症和气道高反应性的形成。因此,IL-33可通过激活适应性免疫或固有性免疫在哮喘的发病中起到重要作用。     

欧前胡素对哮喘气道慢性炎症及气道重塑的抑制作用

[目的]探讨欧前胡素对哮喘模型小鼠气道炎症及气道重塑的抑制作用.[方法]取40只雄性BALB/C小鼠,随机分为5个组,利用卵清蛋白(OVA)诱导制作小鼠哮喘气道重塑模型,分别给予10,30mg/kg欧前胡素及0.5mg/kg地塞米松治疗.在最后1次激发结束24h后处死小鼠,取肺泡灌洗液(BALF)及肺组织备用.取肺组织行包埋切片后行HE,PAS,Masson染色,观察肺组织病理学变化,行Diff-Quick染色对BALF中的细胞进行分类和计数,利用ELISA法检测BALF中IL-4,IL-5,IL-13和IFN-γ含量,利用Western blot法对肺组织中的!-SMA表达水平进行定量分析.[结果]欧前胡素可明显抑制哮喘模型小鼠肺组织中炎性细胞浸润、杯状细胞增生,减少黏液分泌及胶原沉积;亦可减少BALF中炎症细胞数量,降低BALF中IL-4,IL-5,IL-13水平,升高IFN-γ水平,抑制!-SMA表达水平,与OVA哮喘组比较差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]欧前胡素可抑制哮喘模型小鼠气道炎症反应及气道重塑.     

白杨素对哮喘模型小鼠肺组织核因子-κB表达的影响

目的:观察白杨素对急性哮喘模型小鼠肺组织核因子(nuclear factor,NF)-κB表达的影响?方法:24只雌性BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组?哮喘组?白杨素组?布地奈德组,每组6只?使用卵白蛋白腹腔注射致敏,气道激发制备哮喘模型,白杨素组小鼠给予白杨素50 mg/kg灌胃,布地奈德组小鼠给予布地奈德雾化液雾化吸入?肺功能测定评价小鼠气道阻力,HE染色评价小鼠气道炎症,酶联免疫吸附(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素(IL)-4?IL-13和血清总IgE的水平,Western blot检测肺组织NF-κB蛋白表达?结果:哮喘组小鼠气道炎症和气道高反应性明显加重,白杨素能够显著抑制哮喘模型小鼠的气道炎症和气道高反应性,白杨素能够抑制哮喘小鼠 BALF中IL-4?IL-13和血清总IgE水平?哮喘组小鼠肺组织高表达的NF-κB水平,经白杨素治疗后显著降低?结论:白杨素能够抑制哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应性,其机制可能与抑制肺组织NF-κB的表达有关?     

脂氧素A4通过ERK1/2通路调控气道上皮细胞上皮间质转化

目的：研究脂氧素A4(LXA4)对气道上皮细胞上皮间质转化（EMT）和卵清蛋白（OVA）诱导的哮喘小鼠模型气道重塑的影响及其可能机制。方法：将BALB/c小鼠分为4组：对照组、OVA组、LXA4组和OVA+LXA4组,HE和PAS染色观察肺组织病理改变。将BEAS-2B细胞分为6组：对照组、白介素（IL）-4组、IL-13组、转化生长因子β1(TGF-β1)组、IL-4/IL-13/TGF-β1联合刺激组和LXA4预处理组。实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏附蛋白（E-cadherin）mRNA水平;Western blot检测α-SMA、E-cadherin及ERK1/2、pERK1/2蛋白表达水平。结果：小鼠体内实验中,与对照组相比,OVA诱导哮喘小鼠模型出现肺泡壁增厚、间质水肿、炎性细胞浸润和肺组织破坏,肺组织PAS染色强阳性,提示杯状细胞化生和气道黏液分泌增加,而LXA4预处理可以明显改善上述OVA诱导的小鼠气道病变。BEAS-2B细胞实验中,TGF-β1组与对照组相比,细胞连接变得松散,细胞间隙增加,形态呈长梭形;IL-4/I...     

转化生长因子-β1体外诱导气道上皮细胞向肌纤维母细胞转分化

目的探讨TGF-β1体外诱导气道上皮细胞表型向肌纤维母细胞转分化的可能性。方法TGF-β1（10μg/L）处理气道上皮细胞株16HBE-14o，显微镜下实时观察形态学变化，免疫染色方法检测E-cadherin，α-SMA和F-actin的表达，RT-PCR方法检测E-cadherin，α-SMA mRNA的表达。结果TGF-β1 10μg／L作用3d，气道上皮细胞株16HBE-14o失去正常的立方形，变得肥大，胞体拉长；上皮细胞特征性标志E-cadherin表达减弱，胞浆中出现肌纤维母细胞表型标志物α-SMA，F-actin聚合形成张力纤维沿着细胞长轴分布。结论本研究提示，气道上皮细胞在TGF-β1的作用下经历了表型改变向肌纤维母细胞转分化，可能作为肺肌纤维母细胞的一个新的来源，从而参与哮喘气道重塑、气道高反应性的发生发展。     

纤溶酶原激活物抑制物-1在哮喘小鼠气道炎症反应中的作用

目的：探讨纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)在支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症反应中的作用。方法：将野生型(WT)和PAI-1基因敲除(PAI-1^-/-)小鼠随机分为野生型对照组(NS/WT组)、基因敲除对照组(NS/PAI-1^-/-组)、野生型哮喘组(OVA/WT组)和基因敲除哮喘组(OVA/PAI-1^-/-组)。通过腹腔注射和雾化吸入卵白蛋白(OVA)建立哮喘模型。肺泡灌洗液(BALF)行细胞分类计数；肺组织行HE染色和免疫组化。Luminex?法检测血浆中IL-4、IL-13、IL-10、IL-2、INF-γ的含量。结果：PAI-1基因敲除使哮喘小鼠BALF中的中性粒细胞数量显著升高(P<0.01),对总炎症细胞数、嗜酸性粒细胞数、淋巴细胞数的改变不明显；PAI-1基因敲除使哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润加重、CD68表达量增加、血浆IL-10和INF-γ水平显著降低(P<0.05或P<0.01),IL-4、IL-13、IL-2水平无显著变化。结论：PAI-1基因缺失促进哮喘小鼠肺部炎症细胞募集...