灵芝孢子在预防维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的探讨预先服用灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(cyclindependentproteinkinase4,Cdk4)表达的影响。方法于孕期小鼠E0d时给予灵芝孢子组的孕鼠胃饲灵芝孢子溶液,8g·kg-1·d-1。实验对照组的孕鼠胃饲等量溶剂。于E7.75d时,两组孕鼠一次性胃饲维甲酸,剂量为50mg/kg体重。正常对照组孕鼠胃饲等量灵芝孢子溶剂,但是在E7.75d时,仅给予维甲酸溶剂。空白对照组孕鼠常规饲养不作任何处理。在孕期E10.5d时取出4组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Westernblot检测胚胎神经管神经上皮Cdk4表达情况。结果实验对照组孕鼠胚胎神经管神经上皮细胞Cdk4的表达明显降低,而灵芝孢子组胚胎表达Cdk4的强度明显高于实验对照组。正常对照组与空白对照组相比Cdk4的表达无统计学意义(P>0.05)。结论灵芝孢子可能是通过增强神经管神经上皮细胞表达Cdk4降低维甲酸诱导胚胎小鼠神经管畸形的发生。     

灵芝孢子降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形的发生

目的 探讨灵芝孢子能否促进受维甲酸诱导,而停滞在G0/G1期的胚胎神经管神经上皮细胞重新进入细胞周期循环,继续增殖和分化,减少神经管畸形的发生.方法 于实验对照组和灵芝孢子组小鼠孕期胚胎E17.75d时一次性胃饲全反式维甲酸,造成这两组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出两组孕鼠的胚胎,分别计数胚胎的神经管畸形发生率.应用免疫荧光组织化学染色和流式细胞仪检测胚胎神经管神经上皮的巢蛋白(nestin)表达情况.应用DNA定量荧光染色和RT-PCR技术检测胚胎神经管依赖细胞周期蛋白激酶2(Cdk2) mRNA和Cdk4 mRNA的转录.结果 灵芝孢子组孕鼠胚胎的神经管畸形发生率显著低于实验对照组.神经管神经上皮细胞表达nestin的百分率也明显大于实验对照组.实验对照组孕鼠胚胎的神经管细胞在G0/G1期的比例则显著高于灵芝孢子组,但是实验对照组神经管细胞S期的比例低,低于灵芝孢子组形态正常的胚胎神经管细胞.RT-PCR检测发现,灵芝孢子组孕鼠胚胎神经管细胞能够正常转录Cdk4 mRNA,而实验对照组则低转录Cdk4 mRNA.结论 灵芝孢子能够减少维甲酸诱导的妊娠小鼠孕期E10.5d胚胎神经管畸形的发生.     

维甲酸诱导小鼠神经管畸形的剂量依赖性和时间特异性

目的探索不同的维甲酸（retinoic acid,RA）剂量对小鼠神经系统发育的影响以及在特异时间点作用于小鼠胚胎时对神经管闭合的影响。方法采用C57孕鼠于GD7．5分别腹部注射5mg／kg,7．5mg／kg,20mg／kgRA,于GD10．5腹部注射20mg／kgRA,观察胎鼠表型并称量胎鼠重量,胎脑重量,测量眼距和顶距（前囟到鼠喙的距离）。结果GD7．5腹部注射5mg／kgRA的胎鼠出现无眼畸形,7．5mg／kg的胎鼠出现脑膨出,20mg／kg的吸收胎率为1005,GD10．5腹部注射20mg／kgRA的胎鼠前肢短小其中,GD7．5给予7．5mg／kgRA处理后的胎鼠脑重显著低于正常组和其他实验组;GD7．5时给予7．5mg／kgRA处理组及GD10．5时20mg／kgRA处理组的胎鼠重量显著低于正常组;GD7．5时5mg／kgRA处理组的胎鼠顶距低于正常组。结论在胚胎发育的不同时期暴露于过量的RA会影响不同器官的发育,而且RA对颅面畸形的影响呈剂量依赖性。     

过量维甲酸对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体α表达的影响

目的:探讨过量维甲酸(RA)对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体α(RARα)基因和蛋白表达的影响。方法:采用原位杂交和免疫组织化学方法及图像分析,半定量分析金黄地鼠胚胎神经管正常发生及RA致神经管畸形过程中RARα转录和表达水平的变化。结果:正常对照组RARα表达水平随胚龄增加而逐渐下降。实验组在灌服过量RA后3 h,RARα表达水平明显低于正常对照组;6 h时其表达水平明显高于正常对照组;14、22、46 h其表达水平下降,与对照组相比无显著差异;96 h其表达增强,并显著高于对照组水平。结论:过量RA引起的RARα转录和表达水平的变化与RA致金黄地鼠神经管畸形有关。     

维甲酸受体α/β及β-连环素在维甲酸致小鼠神经管畸形中的表达变化

目的 探讨维甲酸受体α/β(RARα/β)及β-连环素(β-catenin)在维甲酸(RA)致小鼠胚胎神经管畸形发生过程中的表达变化及意义.方法 100只昆明小鼠随机分为实验组和对照组,分别通过半定量RT-PCR及Western blotting检测RARα/β及β-catenin的表达变化.结果 RARα及RARβ蛋...     

过量维甲酸对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体β表达的影响

目的探讨过量维甲酸(RA)对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体(RARβ)基因和蛋白表达的影响。方法采用原位杂交和免疫组织化学方法及图像分析,半定量分析金黄地鼠胚胎神经管正常发生及RA致神经管畸形过程中RARβ转录和表达水平的变化。结果正常对照组RARβ表达水平随胚龄增加呈先降低后升高并再次减弱的趋势。实验组在灌服过量RA后3、6h,RARβ表达水平明显低于正常对照组(P<0.01);14h时表达升高显著高于正常对照组(P<0.05);22h时其表达再次降低明显低于对照组(P<0.01);46、96h表达逐渐增强,96h时明显高于对照组(P<0.01)。结论过量RA引起的RARβ转录和表达水平的变化与RA致金黄地鼠神经管畸形相关。     

Dishevelled2 和Vangl2表达与过量维甲酸致昆明小鼠神经管畸形的相关性

目的 探讨Dishevelled2和Vangl 2蛋白与过量维甲酸致昆明小鼠神经管畸形发生的关系。 方法 50只昆明孕小鼠随机分为对照组和实验组。孕775d时,实验组一次性胃饲30mg/kg致畸量维甲酸（RA）,对照组胃饲等量溶剂,服药后4h、18h、42h、66h及90h分别取胚胎,常规石蜡切片,采用原位杂交和免疫组织化学技术,分别检测胚胎神经管组织中Dishevelled2蛋白和Vangl2 mRNA及蛋白的表达水平变化。 结果 两种蛋白均存在于对照组及实验组不同发育阶段的小鼠神经管上皮,且两者的表达变化趋势有所不同。与对照组相比,实验组Dishevelled2蛋白在RA处理18h、42h时表达水平明显降低(P≤0.05),66h时表达升高(P≤0.05),90h时两组表达水平无明显差异;Vangl2 mRNA在灌服RA 4h、18h时表达水平明显低于对照组(P≤0.05),42h时两组表达水平无明显差异,66h时表达显著高于对照组(P≤0.05)。Vangl2蛋白在RA处理18h、42h时表达显著降低(P≤0.05),66h时两组表达水平无明显差异,90h时表达显著高于对照组(P≤0.05)。 结论 过量RA可能通过调节Dishevelled2和Vangl2表达干扰正常胚胎神经管的闭合过程。     

P>维甲酸受体α/β及β-连环素在维甲酸致小鼠神经管畸形中的表达变化  /P>

目的 探讨维甲酸受体α/β(RARα/β)及β-连环素(β-catenin)在维甲酸(RA)致小鼠胚胎神经管畸形发生过程中的表达变化及意义.方法 100只昆明小鼠随机分为实验组和对照组,分别通过半定量RT-PCR及Western blotting检测RARα/β及β-catenin的表达变化.结果 RARα及RARβ蛋白表达水平在RA灌服后18h、42h时明显低于正常对照组(P＜0.01);66h、90h时RARα蛋白表达水平与对照组相比无显著性差异,RARβ蛋白表达水平则显著高于正常对照组(P＜0.05).β-catenin mRNA水平在RA灌服后4h和18h时明显低于正常对照组(P＜0.05),42h时与对照组相比无显著性差异,66h时其表达水平明显高于对照组(P＜0.05);β-catenin蛋白表达水平在RA灌服后18h和42h时显著低于正常对照组(P＜0.01),66h时与对照组相比无显著性差异,90h时其表达水平显著高于正常对照组(P＜0.01).结论 RA改变了小鼠胚胎神经管中RARα/β和β-catenin基因的正常时间表达模式,这种异常的基因表达模式可能参与了RA诱导的小鼠神经管畸形的发生.     

维甲酸诱导的小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因的表达情况分析

 摘要: 目的: 研究在全反式维甲酸诱导小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因（ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5）的表达变化。方法: 取8只E8.5的C57/BL6孕鼠随机分为两组：对照组（4只）,模型组（4只）。对照组腹腔注射橄榄油,模型组腹腔注射全反式维甲酸;E13.5取胚胎。采用Real-time PCR检测两组小鼠脑和脊髓中ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5的mRNA表达;采用Western Blotting技术检测两组小鼠脑和脊髓中ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5的蛋白表达情况。结果：全反式维甲酸可诱导小鼠出现典型神经管畸形;与对照组相比,全反式维甲酸处理组的致畸胚胎脑和脊髓中,ASH2L HDAC4, NSPC1和DOK5的mRNA表达有所下降（P<0.05）;同时这些基因的蛋白水平也显著下降 (P<0.05)。结论：ASH2L,HDAC4,NSPC1和DOK5可能是抑制全反式维甲酸致神经管畸形的潜在基因。     

桉叶油联合维甲酸对SD胎鼠脑组织Pax3和缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨桉叶油联合维甲酸(RA)对SD胎鼠脑组织转录因子Pax3、缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法 SD孕鼠42只,随机分为6组,每组7只,正常对照组,RA组,溶剂对照组(花生油+RA),3个实验组(桉叶油高、中、低剂量+RA)。正常对照组自由摄食饮水,溶剂对照组于孕第7~14天每只花生油2ml灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。桉叶油3个剂量组于孕第7~14天分别桉叶油300、200和100mg/kg灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。RA组于孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。各组于孕21天处死孕鼠取胚胎,Western blotting、免疫组织化学技术检测胎鼠脑组织的Pax3、Cx43蛋白的表达。Real-time PCR检测脑组织Pax3、Cx43 mRNA表达。阿利新蓝和茜素红进行骨骼染色,体视显微镜下观测椎骨发育,脊柱间隙。结果维甲酸灌胃各组胎鼠椎骨数量异常的胎鼠数与正常对照组比较差异无显著性,但在维甲酸灌胃各组中,胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最低值分别为55%(桉叶油高剂量+RA组)和45.8%(桉叶油低剂量+RA组),较正常对照组高(0)(P0.05)。在维甲酸灌胃各组中,桉叶油各组胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最高值分别为62.5%(桉叶油低剂量+RA组)和55.0%(桉叶油高剂量+RA组),较维甲酸组(73.7%,73.7%)和溶剂对照组低(68.2%,63.6%,P0.05)。与正常组胎鼠比较,维甲酸灌胃各组大脑组织的Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较正常组高(P0.05),在维甲酸灌胃各组中,桉叶油灌胃各组胎鼠脑组织Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较单纯RA灌胃组低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论桉叶油对维甲酸引起胎鼠神经管缺陷有一定的拮抗作用。其机制可能与桉叶油拮抗维甲酸上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白过度表达有关     

CKIs蛋白在视黄酸诱导HL-60细胞分化中的作用研究

从细胞周期调控这一途径探讨视黄酸抑制细胞增殖、诱导细胞分化的分子机制。结果显示：５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）及芳维甲（ＡＥ）处理的ＨＬ－６０细胞生长受抑,４ｄ后９０％细胞停滞于Ｇ０／Ｇ１期,Ｇ１→Ｓ期转换受阻,同时ＮＢＴ还原反应增强,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析及免疫细胞化学染色表明处理后的细胞ｐ１６、ｐ２１两种细胞周期素依赖激酶抑制物（ＣＫＩｓ）表达增加,而ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐＲｂ蛋白则降低,其中尤以ＡＴＲＡ作用为明显。结果提示,细胞周期调控相关蛋白可能在视黄酸及其衍生物抑制细胞增殖、诱导细胞分化过程中起重要作用。     

维甲酸诱导大鼠胚胎脑神经干细胞P450RAI基因的表达

目的 探索全反式维甲酸(RA)对神经干细胞和分化细胞P450RAI表达的影响。方法 从大鼠胚胎脑中分离神经干细胞，用EGF促进其增殖，再用不同浓度的RA单独处理，在不同时间用RT-PCR测定神经干细胞及分化细胞的P450RAI表达水平。结果1μmol／L RA处理神经干细胞，P450RAI mRNA水平最高。1μmol／L时2h就可检测到神经干细胞P450RAI mRNA的生成，4～12h达到高峰，随后迅速下降，24h几乎检测不到P450RAI mRNA。间断给予RA，P450RAI的表达随之下降。在EGF诱导生成的分化细胞中无P450RAI表达，而在RA处理的分化细胞中有少量表达。结论 神经干细胞表达P450RAI对RA有浓度依赖性并需要RA的持续存在，随着神经干细胞分化为神经细胞，其表达量下降。     

未折叠蛋白反应对维甲酸诱导鼠胚胎干细胞分化的作用

目的 研究未折叠蛋白反应(UPR)在神经分化过程中的作用。方法 应用全反式维甲酸(RA)诱导鼠胚胎干细胞(ES)，通过免疫细胞化学和RT-PCR方法检测神经组织特异性标志物的表达，建立以RA诱导ES细胞得到的神经分化的初步模型，再分别用RT-PCR和Westem blot方法检测模型中UPR分子的表达。结果 RA诱导后得到大量表达神经特异性标志物的细胞。UPR关键分子Irel α的表达在RA处理组和未经RA处理组中均下降，但未经RA处理组中Irel α的表达始终低于同一时间RA处理组细胞；Grp78的表达在RA处理组随诱导时间延长逐渐上升，但在未经RA处理组Grp78的表达未见上升。Irel α和Grp78的这种表达变化与RA诱导细胞中神经特异性标志物的表达情况相关。结论 以RA诱导ES细胞得到表达神经特异性标志物的细胞分化系统，可作为研究神经发育的初步模型，其模型中UPR分子的表达变化提示，UPR通路可能在神经发育过程中起一定作用。     

凝集素受体在叶酸,维生素C拮抗环磷酰胺致神经管畸形中的作用研究

为探讨凝集素受体在叶酸，维生素Ｃ防止歪磷酰酰胺致大鼠胚胎神经管畸形中的作用。方法：实验组和对照组孕鼠均于给环磷酰胺后２４小时剖腹取胎，常规石蜡包埋切片，用刀豆凝集素，花生凝集素和荆豆凝集素为分子探针作亲合组织杂色。对两组胚胎神经管的神经上皮，界膜及神经管周围间充质相应糖基进行定性，定位和半定一的比较观察。     

Nestin在高温致畸神经管的表达及多种维生素和微量元素对神经管畸形的保护作用

本研究旨在探讨高温致神经管畸形(NTD)中巢蛋白(nestin)的表达规律及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用。孕鼠随机分为实验组和对照组。实验组又进一步分为3组,A组:孕前第8d开始灌服多种维生素和微量元素;B组:孕后第1d开始灌服;C组:不灌服。孕鼠分别于孕第8d高温处理,对照组不灌服多种维生素和微量元素,也不进行高温处理。对以上各组胎鼠进行形态学观察,计算神经管畸形发生率;利用免疫荧光染色观察nestin在胚胎不同发育时期的神经上皮细胞中的表达规律。结果显示,在实验组中,C组神经管畸形发生率最高,为77.5%;各组鼠胚神经上皮细胞胞质中nestin呈阳性染色,实验C组的染色明显弱于其它组;不同发育阶段各组染色强度不同。结果提示,nestin低表达是神经管畸形发生的重要因素,多种维生素和微量元素对高温致神经管畸形有保护作用。     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶11在大鼠脊髓横断性损伤后的表达变化

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶11(CDK11)在横断性脊髓损伤(tSCI)后的表达变化以及定位情况.方法 将36只成年SD大鼠随机分为假手术组,T9断伤1d、3d、5d、7d和14d组,每组6只.采用Westem blotting测法损伤后各时间段CDK11蛋白水平在脊髓中的表达变化.采用免疫组织化学方法检测CDK11在假手术组以及损伤组脊髓中的分布和定位.结果 Western blotting显示,CDK11蛋白水平在SCI后呈现先升高后下降的趋势,CDK11p58的表达于损伤后3d开始显著升高,一直持续到第7d,之后逐渐下降.而CDK11p110也在3d、5d时高于假手术组,伤后7d则明显降低,至14d时有所回升.免疫组织化学表明,CDK11在假手术组脊髓中均匀分布,损伤后3d,CDK11在脊髓灰质和白质中表达明显增加;免疫荧光双标记表明,CDK11与神经元的标记物神经元核抗原(NeuN)、少突胶质细胞标记物环核苷酸-3'磷酸水解酶(CNPage)有明显共定位,与星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)也存在部分共定位.结论 脊髓损伤后CDK11蛋白水平呈现明显的时相变化,并且与神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞存在共定位,提示CDK11参与了脊髓损伤后的病理生理过程.     

INHIBITORY EFFECT OF RETINOIC ACID ON EXPRESSION OF INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE GENE IN L929 CELLS

Inflammation has been known to be associated with excess synthesis of nitric oxide (NO) by inducible NO synthase (iNOS). Retinoids have been reported to have anti-inflammatory activity, but the mechanism by which they can elicit this activity is poorly understood. The effects of retinoids on NO synthesis and iNOS gene expression in murine fibroblast L929 cells were examined. Treatment of the cells with interferon-γ resulted in excess NO synthesis and iNOS gene expression. All-trans-retinoic acid significantly inhibited NO synthesis and iNOS gene expression in a dose-dependent manner. Similarly, 9-cis-retinoic acid also inhibited NO synthesis, but retinol did not show any inhibitory effect on NO synthesis. These findings suggest that the modulation of iNOS gene expression is another possible pathway by which retinoids may function as anti-inflammatory agents.